Name: Craniofacial Mesenchyme의 Electroporation (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: 배우세요 Xenopus laevis 배아의 두개안면 중간엽에 전기천공법을 이용하여 대분자를 도입하는 방법을. 형광 현미경으로 조직 변화를 실시간 관찰하여 유전자 기능을 연구할 수 있습니다.

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우리는 낸시 Papalopulu 및 Xenopus의 electroporation과 지원 Boyan Bonev에 감사하고 있습니다. 우리는 또한 중요한 독서, 제레미 그린과 지원 리우 실험실의 도움이 토론과 회원에 대한 존 Wallingford에 대한 마크 Dionne 주셔서 감사합니다. 이 작품은 BBSRC (BB/E013872/1)와 Wellcome 트러스트 (081880/Z/06/Z)에서 KJL 부여하여 자금을했습니다.

부품 1A. 장비 현미경 : 낮은 전력 목적으로 직립 스테레오 - 해부 범위 <ul><li> 전압 / 펄스 발생기 : BTX ECM 830 스퀘어 웨이브 Electroporation 시스템 </li><li> 피펫 풀러 : P - 87 Micropipette 풀러 (셔터 악기 회사, CA) </li><li> 속이는 사람 : 거친, 또는 결합 굵고 좋은가 준비에 따라 다릅니다. </li><li> Micropipette 홀더 : 파인 과학 도구 </li><li> 전극 : 수제 </li><li> Electroporation 챔버 : 수제 </li></ul> L - 모양의 전극 : <ol><li> 고순도의 8cm 0.4 mm의 텅스텐 와이어 (Goodfellow)과 midpoint에 부착을 잘라 접착제를 (우리가 블루 - 압정을 사용)를 사용하여 1ml 주사기. L - 모양에 주사기 및 굽힘 팁의 끝부분에서 노출된 4cm의 텅스텐 와이어를 떠나 끝에서 1cm (그림 1A). </li><li> 팁 이렇게 끝이 길이가 0.​​5 mm를 측정하는 것을 낸다. 티그의 끝은 전극 종착역입니다. </li><li> 주사기에 여분의 텅스텐 와이어 병렬를 실행하고 전극 펄스 발생기를 연결하는 그것을 사용합니다. </li><li> 전극 한 켤레를 만드는 과정을 반복합니다. </li><li> DC 케이블을 통해 사각형 웨이브 펄스 발생기에 전극을 부착합니다. </li></ol> Electroporation 챔버 <ol><li> ~ 5mm 무독성 플라스티신와 90mm 접시의 바닥 선. </li><li> electroporation 미디어와 함께 요리를 입력합니다. </li><li> 사용 5 호 시계 제조인의 집게는 T - 모양 잘 (그림 2) 싶습니다. 오랜 우물 ~ 2mm X 2mm X 10mm와 짧은을 ~ 2mm X 2mm X 5mm를 측정한다. electroporation 요리 세탁해서 활용할 수 있습니다. </li></ol> 부품 1B. 시약 DNA 또는 유료 macromolecules <ul><li> Micropipettes : 1mm 폭 4 "길이 borosilicate 유리 모세관 (WPI, TW100 - F) </li><li> 문화 미디어 : 일반 수륙 양용 미디어 (NAM) </li><li> &gt; 10 X 재고 : 1100 MM NaCl, 20MM KCL, 10 MM 칼슘 (NO 3) 2 • 4H 2 O, 1 ㎜ EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산). <ul><li> 4 ° C.에 압력솥 및 저장 </li><li> 1 X NAM : 0.1 MM NaHCo 3 0.2 MM 나 3 PO 4 10X 주식, 버퍼에서 희석. </li></ul></li><li> Xenopus laevis tadpoles, 단계 28 </li></ul> DNA 준비 : <ol><li> 표준 프로토콜을 사용하여 표현 plasmids를 준비합니다. </li><li> nuclease 무료로 H 2 0 1 μg / μl의 최종 농도로 DNA를 Resuspend. </li></ol> * 우리는 같은 pCS2로 강한 CMV 프로 모터를 포함하는 벡터, 성공 있었 + [16]. 혈통 분석을 위해, 우리는 대개 0.1 μg / μl의 최종 농도에서 녹색 형광 단백질 (GFP pCS2 +)를 인코딩 DNA를 포함합니다. 0.1-3 μg / μl 사이 [DNA의 농도도 테스트했다. 우리는 발견 0.8 μg / μl inefficiently 표시 셀 아래의 농도, DNA의 농도 반면 이상 2 μg / &amp; MU; 난 electroporation 효율을 향상되지 않았]. Morpholino oligonucleotide 준비 : (참고 :. 수법의 살인인 걸 fluoresceinated해야합니다 (3' - carboxyfluorescein 수정)하거나 유료) <ol><li> Resuspend morpholino의 oligonucleotides (수법의 살인인) (Genetools, <a href="http://www.genetools.com" target="_blank">www.genetools.com</a> nuclease 무료로 H 2 0 2 mm의 농도에서). </li><li> 65 재고 솔루션의 열 나누어지는 ° C 5 분. </li><li> nuclease 무료 물에 0.5 mm의 최종 농도 희석. </li></ol> * 0.1 - 1mM MO 솔루션은 테스트되었습니다. 0.5 MM MO 솔루션은 많은 mesenchymal 세포 electroporation에 충분했다. Micropipettes <ol><li> borosilicate 유리 모세관 (폭 1mm, 4 "긴 WPI 안돼. TW100 - F)에서 micropipettes를 준비합니다. 8-12밀리미터 긴 테이퍼 및 고급 팁과 micropipettes를 준비하는 바늘 풀러를 사용합니다. </li><li> 호감 팁 ~ 2mm팁에서 집게를 사용하여 톱니 휴식을 만들 수 있습니다. </li></ol> 미디어 <ol><li> 부화 미디어 : 1X 주식 신선한 4분의 3 일반 수륙 양용 미디어 (NAM)를 준비합니다. 0.025 MG / ML gentamycin을 추가합니다. </li><li> Electroporation 미디어 : 위에서와 0.1 % Benzocaine (시그마, 06950). </li></ol> 2. Electroporation Micropipette 설정 <ol><li> ~ 1 μl 주입 솔루션 micropipette를 입력합니다. </li><li> micromanipulator에 micropipette를 확보하고 microinjector (Picospritzer II)에 첨부해 주시기 바랍니다. </li><li> 탁상에서 50 °의 각도 micropipette. </li><li> 20 PSI로 분사 압력을 설정합니다. </li><li> 펄스 30 NL를 삽입하는 micropipette를 보정합니다. </li></ol> 올챙이 준비 <ol><li> 5 분 electroporation 매체의 잠복기에 의해 무대 28 Xenopus의 애벌레를 마취. </li><li> electroporation 미디어 가득 electroporation 챔버에 anesthetized 올챙이를 전송합니다. 위치 배아긴 시간 잘 수 있도록 머리를 아래 지느러미 측면과 노출된 복부 측면과 함께 T - 교차점에 달려 것을. 머리는 약간 꼬리에 비해 상승한다. </li><li> 집게를 사용하면, 부드럽게 플라스티신 주변과 잘에서 올챙이을 확보. (참고 :.. 올챙이가 보안되지 않은 경우, 그것이 떨리는와 electroporation 동안 전극 연락을 얼굴 조직이 심각하게 손상될 수 있으므로이 경우에는 올챙이를 삭제 수 있습니다) </li></ol> Electroporation <ol><li> micropipette 팁 즉시 시멘트 선에 후부와 얼굴 mesenchyme에 넣습니다. </li><li> mesenchyme로 30 NL 솔루션을 주사. </li><li> micropipette를 철회. </li><li> 빠르게 배아의 머리 (그림 3) 병렬 전극 팁에 맞춥니다. </li><li> 8 50 MS, 20mV 사각형 펄스를 적용합니다. </li><li> 전극을 철회. </li><li> 집게를 이용하는 것은 신중하게 우물에서 올챙이 릴리스 3 / 4 NAM, 0.025 MG / ML gentamycin을 전송. </li><li> Tadpoles는 NAM, 0.025 MG / ML overn 4분의 3에 incubated 수 있습니다항공, 이상. </li><li> 24 시간 후에 형광 현미경에 의한 효율적인 electroporation을위한 화면 배아. </li></ol> 3. 대표 결과 : 형광 분자의 사용은 electroporated 배아 쉽게 검사 수 있습니다. 그림 4는 14.5에서 incubated MO electroporated tadpoles ~ 12, 48 electroporation 후 96시간의 전형적인 배치, ° C.를 보여줍니다 형광 현미경을 사용하여 수법의 살인인 즉시 electroporation 후 시각과 electroporation 후 며칠 동안 계속하실 수 있습니다. 우리의 경험에서 형광 무대 46 (~ 5 일 후)에 약하게 분명하다. 연골에는 형광은 차별화 (~ 스트리트 42)의 발병 이후 크게 감소하지만, MO 형광는 pharyngeal endoderm 등 다른 세포 유형에 더 강력하게 지속. 형광 현미경은 oligonucleotides는 연골 등 여러 craniofacial 조직에 통합됩니다 것을 보여줍니다. Oligonucleotide 형광 C은 종종 머리 양쪽에 조직에서 시각 수 있습니다. 이것은 가능성이 electroporation하기 전에 느슨한 craniofacial mesenchyme 내내 사출 솔루션의 빠른 확산에 의한 것입니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3381/3381fig1.jpg"> 1 집에서 만든 전극을 그림. L - 모양의 텅스텐 와이어는 무독성 점토 또는 퍼티를 사용하여 1 ML의 주사기에 첨부되어 있습니다. (A) 전극 말단은 5mm를 측정합니다. (B) 테르 병렬 실행 등, 전극의 쌍을 연결합니다. 전극 DC 케이블에 의해 펄스 발생기에 연결된 있습니다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3381/3381fig2.jpg"> 이 Electroporation 챔버 그림. (A) 플라스티신 줄지어 90mm 요리는 미디어와 시계 제조인 없음 5의 집게와 함께 새겨진 T - 모양의 챔버로 가득합니다. (B) 긴 쪽을 2mm X 2mm에게 X10 mm를 측정짧은 조치 2mm X 2mm X 5mm를 하다니. 배아의 머리가 T - 접합, 복부 측면에 달려있다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/3381/3381fig3.jpg"> 3 도식 보여주 electroporation 절차를 그림. 성 28 올챙이는 복부 측면은 최고, electroporation 챔버에 배치됩니다. Micropipette는 얼굴 mesenchyme 기본 시멘트 선에 삽입됩니다. 주입. Micropipette은 제거하고 L - 모양의 전극은 병렬로 머리를 측면 정렬됩니다. 팔 50 MS, 20 MV 사각형 펄스를 적용합니다. 전극을 철회. 원하는 단계로 tadpoles 성장. 수법의 살인인 또는 형광 현미경을 사용하여 GFP 발현을 Visualise. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/3381/3381fig4.jpg"> 사 대표 tadpoles 12 (A), 48 (B) 및 96 (C) 시간 게시 electroporation을 (단계 30, 34 각각 44) 그림. ( "- B") 형광등 MO는 사슴에 craniofacial mesenchyme 내에서 시각 수 있습니다초밖에 30 34. 형광은 스테이지 44 (화살촉, C' - C ")에 연골에서 발견하실 수 있습니다. 창자는 매우 autofluorescent입니다.

<ol><li>Bonev, B., Pisco, A., Papalopulu, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-9+reveals+regional+diversity+of+neural+progenitors+along+the+anterior-posterior+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-9 reveals regional diversity of neural progenitors along the anterior-posterior axis.</a> Dev. Cell. 20, 19-32 (2011).</li>
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</ol>

저자는 이익의 갈등이 없습니다.

이 비디오에서는, 우리는 Xenopus tadpoles의 얼굴 mesenchyme에 electroporation - 중재 유전자 전달의 가능성을 증명하고있다. 이 방법을 사용하여, 우리는 나중에 시간 지점에서 특정 조직을 대상 있도록 유전자 기능을 조작의 조기 개발 효과를 무시할 수 있습니다. 우리의 연구는 우리 electroporated 세포뿐만 아니라 관심 단백질에 대한 세포 자율적인 요구 사항의 혈통을 조사 수 있도록, craniofacial mesenchymal 세포의 불일치 인구가 영향을받을 수있는 것으로 나타났습니다. 라이브 영상과 결합, 우리는 craniofacial 개발하는 동안, 시간이 지남에 따라, 유전자 기능을 연구하기 위해이 방법을 사용할 수 있습니다. 이 소설의 방법은 organogenesis의 연구 Xenopus의 tractability를 강조 표시합니다. 우리는이 방법이 널리뿐만 아니라 morphogenesis 및 기타 조직의 분화 연구를 적용할 수 있습니다 것으로 예상.

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Erratum: Electroporation of Craniofacial Mesenchyme

craniofacial mesenchyme의 electroporation

Electroporation of Craniofacial Mesenchyme

Electroporation은 정확한 시간 포인트에서 조직에 정확한 위치에 DNA 및 기타 유료 macromolecules을 전달하는 효율적인 방법입니다. 예를 들어, electroporation는 Xenopus의 신경 및 망막 개발 연구에 큰 성공과 함께 사용되었으며, 닭 및 마우스 1-10. 그러나 이러한 연구 모두, 조사관은 부드러운 조직을 타겟팅되지 않은 점에 유의하는 것이 중요합니다. 우리가 craniofacial 개발에 관심이 있기 때문에, 우리는 얼굴 mesenchyme를 대상으로하는 방법을 적응. 우리가 문헌을 검색하면, 우리는 놀랍게도, 연골 조직으로 성공적으로 유전자 전달의 거의 보고서를 발견했습니다. 이러한 연구의 대부분은 chondrogenic 셀 라인으로 siRNA 또는 단백질 전달, 또는 관절염 11-13의 동물 모델로 유전자 치료 연구했다. 같은 닭고기 드나 마우스와 같은 다른 시스템에서는 얼굴 mesenchyme의 electroporation 도전했습니다 (개인 communicat을이온, Craniofacial 개발 부서, KCL). 우리는 Xenopus의 procartilaginous 및 연골 조직에 electroporation 더 효과가있을 것을 가상. 우리의 연구에, 우리는 그 얼굴 연골에 유전자 전달의 얼굴 primordium가 여전히 이전의 연골 분화에 부드러운 조직으로 구성되어 있습니다 초기 단계 (28)에서 효율적으로 발생 보여줍니다. Xenopus은 craniofacial 개발 분석을 위해 매우 접근 척추 시스템입니다. Xenopus의 배아는 초기 단계의 분석을 수 있도록 외부 수정된, 그리고 라이브 단세포 해상도 이미징뿐만 아니라 어머니 14 재사용을 촉진하기 때문에 Craniofacial 구조는 더 쉽게 볼 수 Xenopus의 다른 척추 모델에 비해 주로하고 있습니다. Xenopus의 유충이 디로 크고 쉽게 외부로 개발 척추 모델 중에서 Xenopus은 zebrafish보다 craniofacial 분석에 더 유용합니다ssect 및 개발 얼굴 지방은 고기의 상응하는 영역보다 이미지에 더 액세스할 수 있습니다. 또한, Xenopus은 zebrafish (~ 100,000,000년 가까이) 15보다 인간 evolutionarily 가까이 있습니다. 마지막으로,이 단계에서 Xenopus의 tadpoles는 투명하고, 형광 단백질 또는 분자의 동시 표현이 개발 연골 쉽게 시각화를 허용합니다. 우리는이 접근법 우리가 신속하게 효율적으로 생체내 모델 시스템에서 후보 분자를 테스트할 수 것으로 기대하고 있습니다.

Craniofacial 연골은 다른 조직들과 긴밀한 접촉을 개발하고 살아있는 동물의 조작 어렵습니다. 우리는 초기 배아 효과를 우회하면서 craniofacial 골격의 성장하는 동안 분자 도구를 제공하는 electroporation을 사용하고 있습니다. 이러한 접근 방식은 우리가 효율적으로 후보 분자를 테스트하실 수 있습니다<em&gt; 생체내 인치</em

Craniofacial Mesenchyme의 Electroporation

전기천공법(Electroporation)은 DNA 및 기타 전하를 띤 거대 분자를 정확한 시점과 정확한 위치의 조직 내로 전달하는 효율적인 방법입니다.

본 절차의 전반적인 목표는 전하를 띤 거대 분자를 두개안면 중간엽으로 전기 천공시키는 것입니다. 이를 위해 먼저 마취된 28단계 배아를 전기 천공 챔버 내에 배치합니다. 다음 단계는 전하를 띤 거대 분자가 포함된 용액을 두개안면 중간엽에 미세 주입하는 것입니다.이어서 즉시 전류를 가하여 전하를 띤 뉴클레오타이드를 세포 내로 도입합니다. 이 절차의 마지막 단계는 형광 현미경으로 전기천공된 조직을 시각화하는 것입니다. 최종적으로, 두개안면 조직의 변화를 나타내는 결과를 얻을 수 있습니다.이러한 결과는 형광, 현미경 또는 면역조직화학을 이용하여 인비보(in vivo) 또는 고정된 조직에서 분석할 수 있습니다. 미세주입 및 돌연변이와 같은 기존 방법과 비교하여 전기천공법의 주요 장점은 분자 도구의 조직 및 시간적 제어가 가능하다는 점입니다. 오늘 저희의 실험 절차를 시연할 사람은 제 연구실의 박사후 연구원인 Jackie Tabler입니다. 이 절차에 필요한 한 쌍의 L자형 전극은 고순도 0.4 millimeter 텅스텐 와이어로 제작하며, 우선 각 전극에 대해 와이어를 8 centimeters 길이로 8개 자릅니다.그런 다음 블루택(blue tack)과 같은 퍼티를 사용하여 텅스텐 와이어의 중간 지점에 1 mL 주사기를 고정하고, 주사기 팁으로부터 4 cm의 와이어가 노출되도록 합니다. 끝에서 1 cm 지점에서 팁을 L자 모양으로 구부립니다. 끝부분의 길이가 0.5 cm가 되도록 팁을 다듬습니다.이 팁은 주사기와 평행하게 뻗어 있는 엑세스 텅스텐 와이어의 전극 단자입니다. 이는 두 번째 전극을 제작한 후 전극 펄스 발생기를 연결하는 데 사용됩니다. 전극 단자가 서로 1cm 간격으로 평행하게 놓이도록 테이프를 사용하여 한 쌍의 전극을 서로 고정하십시오.마지막으로, DC 케이블을 통해 전극을 사각파 펄스 발생기에 연결합니다. 맞춤 제작된 전기천공 챔버를 준비하려면, 90 mm 디시 바닥에 독성이 없는 플라스터 씬 모델링 클레이를 약 5 mm 두께로 깝니다. 디시에 전기천공 배지를 채워 플라스터 씬이 잠기도록 합니다.그런 다음 5번 시계 제작용 핀셋을 사용하여 플라스터 씬(plaster scene)에 T자형 웰을 파내어 전기천공법을 위한 공간을 형성합니다. 웰의 긴 쪽은 약 2 mm × 2 mm × 10 mm가 되어야 하며, 짧은 쪽은 2 mm × 2 mm × 5 mm가 되어야 합니다. 이 절차에 사용되는 마이크로 피펫은 규산염 유리 모세관으로 제작됩니다.니들 풀러(needle puller)를 사용하여 테이퍼 길이가 8~12mm이며 팁이 가느다란 마이크로피펫을 준비하고, 핀셋으로 팁 끝에서 약 2mm 지점을 눌러 거칠게 파손시켜 마이크로피펫을 설정합니다. 먼저, 본 시연에서는 형광 표지된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 주입 용액 약 1µL를 피펫에 채웁니다. 그다음, 마이크로 조작기(micro manipulator)에 마이크로피펫을 고정하고 테이블 상판으로부터 50도 각도가 되도록 조절합니다.주입 압력을 20 PSI로 설정하고 마이크로피펫이 펄스당 30 liters를 주입하도록 교정합니다. 전기천공법을 준비하기 위해, 28단계의 제노(xeno) 유충을 5분 동안 배양하여 마취시킵니다. 0.1%Benzocaine이 포함된 일반 양서류 배지인 전기천공용 배지 내에서, 마취된 올챙이를 전기천공 챔버로 옮깁니다.이곳에는 전기천공법 배지가 채워져 있습니다. 이 절차에서 가장 까다로운 부분은 올챙이에 마이크로 피펫을 삽입하는 것입니다. 따라서 성공률을 높이려면 배아를 매우 단단히 고정하고, 마이크로 주입 직후에 신속하게 전류를 가해야 합니다.배아의 머리가 T-접합부에 위치하도록 긴 웰(well) 안에 배치합니다. 배아의 등쪽이 아래로 향하고 배쪽이 노출되게 한 상태에서, 핀셋을 사용하여 머리 부분을 꼬리보다 약간 높게 들어 올린 뒤 주변의 플라스터 씬(plaster scene)으로 올챙이를 웰에 부드럽게 고정합니다. 전기천공법(electroporation) 도중 올챙이가 경련을 일으키면 안면 조직에 심각한 손상을 줄 수 있으므로, 올챙이를 단단히 고정하는 것이 중요합니다.이 절차를 시작하려면, 마이크로 피펫 팁을 시멘트 선(cement gland) 바로 뒤쪽의 안면 중간엽(facial mesenchyme)에 삽입하십시오. 중간엽에 30 nanoliters의 용액을 주입한 후, 마이크로 피펫을 회수합니다. 신속하게 전극 팁을 배아의 머리와 평행하게 맞춘 다음, 20 millivolt의 50 millisecond 사각 펄스를 8회 가합니다.그런 다음 포셉을 사용하여 전극을 제거합니다. 우물에서 올챙이를 조심스럽게 꺼냅니다. 그다음 피펫을 사용하여 올챙이를 0.025 mg/mL 농도의 threequarter nom으로 옮깁니다.젠타마이신(Gentamycin) 처리된 올챙이는 이 배지에서 하룻밤 동안 또는 24시간 이후 더 오래 배양할 수 있습니다. 형광 현미경을 통해 올챙이를 스크리닝하여 전기천공이 효율적으로 이루어졌는지 확인하십시오. 형광 분자를 사용하면 전기천공된 배아를 쉽게 스크리닝할 수 있습니다.이 그림은 전기천공법으로 morph 올리고뉴클레오타이드를 주입한 올챙이의 전형적인 배치(batch)를 전기천공 후 각각 약 48시간과 96시간 후에 보여줍니다. 각각 단계 30, 34, 44 단계입니다. 형광 표지된 morph 올리고뉴클레오타이드는 단계 30과 34의 두개안면 부위에서 시각화할 수 있습니다.44단계에서 흰색 화살표 머리로 표시된 연골에서 형광이 검출될 수 있습니다. 강한 자가형광 영역은 장입니다. 이 절차를 통해 전기 천공 세포의 계보뿐만 아니라 관심 단백질에 대한 분자적 요구 사항을 추적할 수 있습니다.이 접근법은 라이브 이미징 기술과 결합하여 두개안면 발달 과정 동안 시간에 따른 유전자 기능을 연구하는 데 활용될 수 있습니다.

electroporation-of-craniofacial-mesenchyme

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

단일 셀 electroporation (SCE)는 생체내 준비를 포함한 그대로 조직 내의 개별 세포로 DNA 또는 기타 macromolecules의 전달을 허용하는 전문 기술입니다. Xenopus laevis 올챙이의 손상 뇌 내의 뉴런에 형광 염료 또는 플라스미드 DNA의 SCE에 대해 우리가 세부 절차를.

완전한 개발 두뇌 속에 생체내에서 단일 세포 Electroporation

이 절차 또는 나선 limbus 및 나선 신경절의 뉴런없이 Corti의 murine 기관의 격리와 문화에 대한 방법을 설명합니다. 우리는 또한 electroporation에 의해 Corti explant의 기관에서 외인성 리포터 유전자의 표현 방법을 보여줍니다.

차 문화와 Corti의 Murine 오르간의 플라스미드 Electroporation.

utero의 electroporation에서 개발 중추 신경계 (CNS)에서 공간과 temporally 제어 방식으로 신속한 유전자 전달 수 있습니다. 여기서 우리는 telencephalon, diencephalon 및 망막을 포함한 여러 배아 CNS의 도메인으로 표현 구조를 제공하는 데 사용할 수있는 utero의 electroporation 프로토콜에 매우 적응을 설명합니다.

사용하여 여러 개의 CNS 준주로 효율적인 유전자 전달 Utero에서 Electroporation

개발 뇌 마우스로 유전자 전송 방법은 고유한 수술 방법과 전극의 특별한 모양을 사용하여 설명합니다. 이 독특한 기술은 두뇌 개발을 공부에 많은 도움이됩니다 neuroscientists temporally과 공간 플라스미드 DNA의 transfection 수 있습니다.

마우스 Utero에 Electroporation : 통제 Spatiotemporal 진 Transfection

대뇌 피질의 발달에서 유전자의 기능의 신속한 평가를 실시하기 위해, 우리는 관련된 방법을...

의 연결을 Morphogenesis의 연구를위한 방법 :<em&gt; 예 생체내</em배아 Murine 대뇌 피질에서&gt; RNAi의 Electroporation

발달 신경 생물학의 근본적인 문제는 어떻게 신경 네트워크가 배아 뇌에 설립되어있다. 여기에서 우리는 크레 / 훈제 연어 - 플라스미드와 지느러미의 interneurons 레이블을 다양한 발달 단계에서 자신의 축삭 돌기 시냅스 목표를 추적하는 조류 후뇌의 PiggyBac 매개 DNA 전위 시스템과 같은 새로운 유전 도구와의 electroporation 기술을 결합했다.

병아리 배아에서 축삭 궤적과 시냅스 대상을 추적하는 후뇌의 일렉트로

pial 표면은 증가 주목을 받고 CNS에서 독특한 전구 영역입니다. 여기서, 세부 사항보기 개질 전기 천공 법을 사용하여이 시조 존의 급격한 유전자 조작 방법을 우리. 이 절차는 세포 계통 및 세포 분화에 관련된 신호 전달 경로의 세포 및 분자 연구에 사용할 수 있습니다와 딸 세포의 운명과 특성을 설명하기 위하여.

신생아 Pial 표면 에레

우리는 배아 쥐 내이에서 달팽이관 이식의 격리 및 배양을 설명하는 방법을 제시합니다.  또한 구형파 전기천공법을 통해 달팽이관 이식으로 유전자를 전달하는 방법을 보여줍니다. 유전자 전달 기술과 결합된 체외 이식 배양을 통해 연구자들은 발달 중 유전자 발현 변경의 영향을 연구할 수 있습니다.

Electroporation에 의한 배아 마우스 달팽이의 Explants의 문화 유전자 전송

자궁 전기기화의 이중은 공간적으로 그리고 일시적으로 분리되는 세포 집단을 표적으로 할 수 있습니다. 이 기술은 정상 조건에서 형광 단백질을 사용하여 그 세포 인구 사이 상호 작용을 구상하는 데 유용하지만 기능적 실험 후 관심의 유전자를 어지니로 조정합니다.

자궁에서 두 배의 자궁 전기화는 시간적으로 그리고 공간적으로 분리된 세포 인구를 표적으로 합니다

여기에서는 두개골 거근 장뇨근(LAL)의 생체 내 전기천공법(in vivo electroporation)과 탈질법(denervation)을 결합한 프로토콜을 제시합니다. 이 절차를 통해 신경근 시냅스의 재생에서 근육 유래 단백질의 잠재적 역할을 연구할 수 있습니다.

In Vivo Electroporation과 Cranial Levator Auris Longus Skeletal Muscle의 단기 신경 재생이 결합되었습니다.

여기에서는 전기천공법에 의한 절쇄된 인간 피질 오가노이드의 급성 유전자 조작을 제시합니다. 이러한 피질 오가노이드 모델은 절단 후 심실과 같은 구조를 쉽게 식별할 수 있기 때문에 특히 주입이 용이하여 인간의 피질 발달, 신경 발달 장애 및 피질 진화에 대한 기능적 연구를 가능하게 합니다.

유전자 기능 연구를 위한 sliced human cortical organoids의 Electroporation

배우세요 Xenopus laevis 배아의 두개안면 중간엽에 전기천공법을 이용하여 대분자를 도입하는 방법을. 형광 현미경으로 조직 변화를 실시간 관찰하여 유전자 기능을 연구할 수 있습니다.

Craniofacial Mesenchyme의 Electroporation

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