Name: 자궁의 자동 이식하여 수술 유발 Endometriosis의 마우스 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: 배우세요 자궁 자동 이식을 통한 수술적 자궁내막증 유도 방법으로, 생쥐에서 자궁 조직을 장간막 동맥에 봉합하는 기술입니다. 이 모델은 질병 기전 연구와 새로운 치료법 개발에 활용됩니다.

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최적화에서 지원 크리스 Kassotis이 원고의 중요한 검토 오드리 베일리와 박사 스콧 Korte, 요셉 Beeman, 앨리슨 Curfman, 폴 Kimball, 브리짓 Neibreggue, 야곱 Redel, 에이미 Schroder, Maija 스테인 버그, 그리고 스테이시 Winkeler 특별 감사 우리 연구실이 모델. 자금은 임상 Biodetectives 교육 그랜트 (NIH T90) (KEP), 미주리 생명 과학 대학 학부 연구 기회 프로그램, MU 연구위원회, 연구위원회 MU 부여와 NIH R21HD056441 (SCN)에 의해 제공되었다.

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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

생쥐에서 endometriosis의 수술 유도를 수행하는 동안 주목한다 몇 가지 중요한 매개 변수가 있습니다. 첫째, endometriosis는 에스 트로겐에 의존 질병 등이 수술로 손상 동물이나 또는 estrogens에 20 보충 ovariectomized 동물 수행해야합니다. 둘째, 동맥 폭포로 자궁 biopsies를 suturing 것은 극도의주의 수행해야합니다. 우리는 하나 두 비교적 느슨한 매듭을 사용하면 변의와 후속 조직 괴사 및 동물 죽음에 혈액 공급의 결합을 방지하면서 각 장소에서 생검을 계속 던져 것으로 나타났습니다. 우리는 강력하게 봉합 안전하게 충분히 조직이 손실되지 배치되는 것을 보장하기 위해 실제 실험을하기 전에 몇 가지 생쥐에서 연습하는 것이 좋지만 창자 괴사를 일으킬만큼 너무 세게하지 않습니다. 셋째, 그것은의 기간 동안 멸균 PBS가 들어있는 페니실린과 스트렙토 마이신과 대장 조직 수산화 유지하는 것이 매우 중요합니다urgery. 넷째, 노력 endometriotic 보형물 크기...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 / 장비의 명칭 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> 왁스 연필 </td><td> 어부 </td><td> NC9954135 </td></tr><tr><td> 유리 슬라이드 </td><td> 어부 </td><td> 12-550-433 </td></tr><tr><td> 스포이트 </td><td> 어부 </td><td> S79383 </td></tr><tr><td> 질 세포학 얼룩을 평가하기위한 표준 가벼운 현미경 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Buprenorphine HCL C3 (CARJET) 10X1ml </td><td> 버틀러 동물 건강 공급 </td><td> 022,891 </td></tr><tr><td> 멸균 인산은 버퍼링 식염수 (PBS) </td><td> Gibco </td><td> 14040-117 </td></tr><tr><td> 10,000 U / ML 페니실린, 0.85 % NaCl 10,000 μg / ML 스트렙토 마이신 </td><td> Hyclone </td><td> SV30010 </td></tr><tr><td> Isoflurane </td><td> 애보트동물 건강 </td><td> 05260-05 </td></tr><tr><td> Isoflurane 아닌 rebreathing 마취 시스템 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 순환 온수 난방 패드 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 30 ML 주사기의 드레스 </td><td> 어부 </td><td> 14-823 - 16G </td></tr><tr><td> 파우더 무료 무균 장갑 </td><td> Fisherbrand </td><td> 19020558 </td></tr><tr><td> 안과 연고 </td><td> 주요 제약 </td><td> 10033691 </td></tr><tr><td> 소형 전기 면도기 </td><td> Wahl </td><td> 9861-600 </td></tr><tr><td> Chlorhexidine 스크럽 </td><td> 어부 </td><td> NC9863042 </td></tr><tr><td> 70 % 에탄올 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Polylined 무균 분야 </td><td> Busse 병원 Disposables </td><td> 696 </td></tr><tr><td> 크기 3 메스 </td><td> 어부 </td><td> 22-079-657 </td></tr><tr><td> 10 번 메스 블레이드 </td><td> 어부 </td><td> 22-079-681 </td></tr><tr><td> 중소 외과 가위 </td><td> Roboz </td><td> RS - 5850 </td></tr><tr><td> 작은 톱니 모양의 세미 곡선 포셉 </td><td> Roboz </td><td> RS - 5135 </td></tr><tr><td> 5-0 검은 꼰 실크 봉합사 </td><td> Ethicon </td><td> K870H </td></tr><tr><td> 멸균 pyrex 유리 배양 접시 </td><td> 코닝 </td><td> 70160-101 </td></tr><tr><td> 2mm 생검 펀치 </td><td> Miltex </td><td> 33-31 </td></tr><tr><td> 멸균 거즈 </td><td> 켄달 </td><td> 1806 </td></tr><tr><td> 6-0 검은 monofilament의 ethilon 나일론 봉합 </td><td> Ethicon </td><td> 697G </td></tr><tr><td> 니들 드라이버 (옵션) </td><td> 세계 정밀 계측기 </td><td> 500,023 </td></tr><tr><td> 5-0 undyed 꼰 코팅 Vicryl 봉합사 </td><td> Ethicon </td><td> J490G </td></tr><tr><td> 9mm Autoclip이 클립을 상처 </td><td> Becton 디킨슨 </td><td> 427,631 </td></tr><tr><td> Autoclip applier 및 제거 </td><td> Becton 디킨슨 </td><td> 427,630 </td></tr><tr><td> 23G 바늘 </td><td> Becton 디킨슨 </td><td> 305,193 </td></tr><tr><td> 1cc 주사기 </td><td> Becton 딕슨 </td><td> 301,025 </td></tr><tr><td> 배 돋보기 스탠드 (옵션) </td><td> 어부 </td><td> 14-648-23 </td></tr><tr><td> 10 % 포르말린 버퍼 </td><td> 어부 </td><td> SF100 - 4 </td></tr><tr><td> 캘리퍼스 </td><td> Roboz </td><td> RS - 6466 </td></tr><tr><td> 카세트 처리 / 삽입 </td><td> 어부 </td><td> 15-197 - 700A </td></tr><tr><td> 생검 거품 패드 </td><td> 어부 </td><td> 22-038-222 </td></tr><tr><td> RNAqueous RNA 분리 키트 </td><td>Ambion </td><td> AM1912 </td></tr><tr><td> 액체 질소 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 스냅 캡 microcentrifuge 평면 상단 튜브 </td><td> 어부 </td><td> 02-681-240 </td></tr><tr><td> 케타민을 (옵션) </td><td> Simga </td><td> K4138 </td></tr><tr><td> Domitor (medetomidine 하이드로 클로라이드) (옵션) </td><td> Tocris </td><td> 2023 </td></tr><tr><td> Antisedan (atipamezole) (옵션) </td><td> 시그마 </td><td> A9611 </td></tr></tbody></table>

자궁의 자동 이식하여 수술 유발 endometriosis의 마우스 모델

Mouse Model of Surgically-induced Endometriosis by Auto-transplantation of Uterine Tissue

Endometriosis 누구의 병인 알려지지 않은 남아 만성, 고통스러운 질병입니다. 또한, endometriosis의 치료 복강경 병변의 제거, 및 / 또는 통증과 불임 현상 만성 제약 관리를 요구할 수 있습니다. endometriosis와 관련된 비용은 미국 1 연간 22,000,000,000 달러로 추산되었습니다. 이 수수께끼의 질병을 기본 메커니즘에 대한 우리의 이해를 더하기 위해 동물 모델은 고용되었습니다. 영장류는 자발적으로 endometriosis를 개발하기 때문에 영장류 모델은 가장 밀접하게 여성 질환과 유사. 설치류 모델은, 그러나, 효과적인 비용과 2 쉽게 사용할 수 있습니다. 우리가 여기서 설명하는 모델은 장의 장간막 (그림 1) 자궁 조직의 autologous 전송을 포함하고 먼저 쥐 3 개발하고 나중에 마우스 4 전송되었습니다. 수술 유도 endometriosis의 autologous 설치류 모델의 목적은 모방하는 것입니다여성의 질병. 우리와 다른 이전에 변경 유전자 발현 패턴이 마우스 또는 질병 5,6있는 여성에서 관찰 쥐의 미러에서 endometriotic 병변에서 관찰하는 것으로 나타났습니다. 마우스에서 수술을 집도할 중 하나 장점은 가능한 유전자 변형 마우스 종자의 풍부한은 설치 및 endometriosis의 성장에 중요한 특정 구성 요소의 역할을 결정하는 연구자 도움 수있다는 것입니다. excised 인간 자궁 내막 조각이 immunocompromised 생쥐의 복막을 소개하는 대안 모델도 널리 사용되고 있지만 endometriosis 2,7에서 중요한 것으로 생각되는 정상적인 면역 체계의 부족에 의해 제한됩니다. 중요한 것은 수술 유도 endometriosis의 마우스 모델은 면역 체계 8, 9,10 호르몬과 환경 요인 11,12가 fert에 endometriosis뿐만 아니라 endometriosis의 효과에 미치는 영향 연구하는 데 사용되었습니다 다재 다능한 모델입니다ility 13 고통 14.

장 장간막의 동맥 계단식으로 자궁 조직의 자동 이식에 의한 마우스 및 쥐에 endometriosis의 수술 유도의 설명입니다.

자궁의 자동 이식하여 수술 유발 Endometriosis의 마우스 모델

자궁내막증은 원인이 아직 밝혀지지 않은 만성 통증성 질환입니다. 또한, 자궁내막증의 치료를 위해 ...의 복강경 제거술이 필요할 수 있습니다.

이 절차의 전반적인 목표는 자궁 조직을 장간막의 동맥 캐스케이드로 자가 이식하여 마우스에서 자궁내막증을 외과적으로 유도하는 것입니다. 이는 먼저 자궁의 자궁내막을 결찰, 제거 및 노출시킴으로써 수행됩니다. 절차의 두 번째 단계는 2 mm 생검 펀치를 사용하여 노출된 자궁내막으로부터 세 개의 자궁내막양 임플란트를 생성하는 것입니다.절차의 세 번째 단계는 세 개의 자궁내막증 유사 이식물을 장간막의 동맥 계통에 있는 동맥들에 봉합하는 것입니다. 절차의 마지막 단계는 복벽과 피부를 봉합하고 동물이 자궁내막증 병변을 회복하도록 하는 것입니다. 마우스에서 적출된 병변은 조직학적 분석과 유전자 및 단백질 발현 패턴으로 확인한 결과, 자궁내막증이 있는 여성의 병변과 유사합니다.일반적으로 이 방법을 처음 접하는 연구자들은 세 가지 주요 이유로 어려움을 겪습니다. 첫째, 마우스 조직의 크기가 매우 작습니다. 둘째, 장간막은 손상되기 쉽습니다. 셋째, 봉합사를 너무 세게 조이면 장 괴사가 발생할 수 있습니다.진통제와 마취제를 포함하여 무균 수술에 필요한 모든 수술 장비를 준비하는 것으로 시작합니다. 흡입 이소플루란을 사용하여 동물을 마취한 후, 발가락 꼬집기 자극에 반응이 없는 것을 확인하여 완전 마취 상태임을 확인합니다. 수술 중 안구 건조를 방지하기 위해 눈에 안연고를 바르고 소형 클리퍼를 사용하여 수술 부위의 털을 깎습니다. 클로르헥시딘 스크럽과 70% 에탄올을 번갈아 세 번 닦아 수술 부위를 소독한 후, 멸균 포로 동물을 덮습니다.소형 가위 또는 메스 날을 사용하여 질 입구에서 앞쪽으로 0.5~1.0cm 떨어진 지점에서 끝나는 작은 정중선 절개를 실시합니다. 수술 부위의 봉합을 용이하게 하기 위해 둔성 박리를 통해 체벽과 복벽을 부드럽게 분리합니다. 둔성 박리 후, 복벽에 작은 정중선 절개를 실시합니다.다음으로, 작은 핀셋을 사용하여 왼쪽 자궁각의 위치를 조심스럽게 찾습니다. 자궁은 절개 부위에 진입했을 때 일반적으로 먼저 보이는 장의 등쪽에 위치하므로, 자궁각을 부드럽게 들어 올린 후 그 아래로 벌어진 핀셋을 밀어 넣어 견인기로 사용합니다. 이때 난소와 자궁의 외관을 함께 관찰하는 것이 도움이 됩니다.발정 주기 날짜 확인을 돕기 위해, 6~8cm 길이의 5-0 흑색 편조 실크 봉합사를 신장된 자궁각 아래로 밀어 넣습니다. 자궁관 접합부에서 자궁각을 단단히 결찰합니다.수란관과 자궁경부 접합부를 각각 묶어줍니다. 각 위치에 평결절(square knot)을 사용하여 봉합사 끝을 자르지 않은 상태로 둡니다. 두 결찰 지점 사이의 자궁각 부분을 절제하여 penicillin과 streptomycin이 포함된 PBS 약 100 µL가 담긴 유리 페트리 접시에 조직을 넣습니다.실크 봉합사의 끝부분을 마지막에 자릅니다. 봉합사가 풀리거나 출혈이 발생하는 경우, 절단부를 찾아 작은 가위로 다른 매듭을 묶거나 처리합니다. 자궁각에서 지방을 제거합니다.작은 가위의 한쪽 날을 내강에 삽입하여 자궁각을 엽니다. 포셉으로 자궁각을 잡은 상태에서 가위를 자궁각 아래로 조심스럽게 미끄러뜨리며 이동시킵니다. 유리 페트리 접시에서 2mm 생검 펀치를 사용하여 동일한 크기의 임플란트 3개를 절단합니다. 이때 조직이 건조해지지 않도록 주의하십시오.절개 부위 바로 위에 멸균 거즈를 놓고 페니실린과 스트렙토마이신이 포함된 멸균 PBS로 충분히 적십니다. 이후 단계 전반에 걸쳐 작고 매끄러운 핀셋을 사용하여 수분을 유지하는 것이 중요합니다. 조심스럽게 맹장을 찾아 소장을 따라 천천히 이동시킵니다.4~5cm 정도의 짧은 장 분절을 끌어내어, 장간막의 동맥 계통이 명확하게 보이도록 미리 적셔둔 거즈 위에 부채꼴 모양으로 펼칩니다. 이때 멸균 식염수를 사용하여 장이 항상 습윤한 상태를 유지하도록 하십시오. 임플란트 하나를 바늘에 끼운 다음, 6-0 aut black alon 봉합사를 사용하여 장에서 약 0.5cm 떨어진 동맥에 임플란트를 부드럽게 고정합니다.하나만 사용하십시오. 포셉 위로 넘겨 묶되, 봉합사를 너무 세게 조이지 마십시오. 그렇게 하면 혈류가 차단되어 결과적으로 장 괴사가 발생할 수 있기 때문입니다.한 번의 매듭으로 두 개의 매듭을 완성하고, 각각을 조인 후 봉합사를 임플란트에서 2 mm 이내로 절단하며, 장을 수화시킵니다. 그 다음 두측 방향으로 이동합니다. 장의 다음 3~4 cm 구간을 끌어낸 후, 이미 임플란트가 삽입된 부분을 조심스럽게 제자리에 놓습니다.이전 임플란트 부위에서 한두 개의 동맥을 건너뛴 후 다음 임플란트를 봉합하고, 세 번째 임플란트에 대해서도 동일하게 반복합니다. 마지막으로 복벽을 봉합하고 상처 클립으로 피부를 닫습니다. 수술 부위를 닫고 진통제를 투여한 후, 동물이 회복될 때까지 케이지 내에서 복측이 아래로 향하게 하여 순환 가열 워터 패드 위에 일부 걸치게 배치합니다.자궁내막종 병변을 회수하려면 장간막에 있는 검은색 봉합사를 찾으십시오. 캘리퍼스를 사용하여 각 자궁내막종 병변의 길이와 너비를 측정하십시오. 병변을 찌르지 않도록 주의하며 자궁내막종 병변을 박리해내십시오.병변에서 엔도메트리오이드(endometrioid) 조직이 아닌 모든 조직을 제거하십시오. 봉합사를 제거하기 전, 액체가 채워진 세 개의 엔도메트리오이드 병변을 흔들어 줍니다. 봉합사를 조심스럽게 제거하고 두 개의 엔도메트리오이드 병변을 천자하십시오.조직 처리 단계로 넘어가기 전, 이를 다시 측정하십시오. 다음으로 나머지 자궁각을 절제하여 무게를 측정합니다. 여성과 여기 제시된 마우스 모델 모두에서 자궁내막증의 조직학적 분석 결과, 자궁내막 유사 병변에 자궁내막 선과 기질이 포함되어 있음이 나타납니다. 마우스의 자궁내막증 병변에는 여성 자궁내막증의 일반적인 특징인 헤모시데린 함유 대식세포 또한 포함되어 있습니다. 유도 후 3일째에 마우스에서 제거된 자궁내막 유사 병변은 왼쪽에 표시된 것과 같이 염증 및 출혈 양상을 보이며, 2~4주 동안 성장하게 됩니다.마우스 모델의 자궁내막증 병변은 유도 시의 병변 무게와 비교했을 때, 낭종 형태의 액체 충전 상태이며 복막 유착으로 둘러싸여 있었습니다. 액체 충전 병변은 유도 후 1개월 및 2개월 시점에 각각 306%와 862% 더 컸으며, lance 병변은 각각 51%와 172% 더 컸습니다. 액체 충전 및 lad 자궁내막양 병변.이 절차를 따른 다섯 번의 서로 다른 실험에서, 유도 후 한 달째에 체중이 일정하게 유지되었습니다. 이 모델은 자궁내막증의 병태생리에 관한 의문에 답하고, 이 질환과 관련된 통증 및 불임 치료를 위한 새로운 치료법을 탐색하는 데 사용될 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 비디오는 토끼의 봉합된 자궁 뿔에 고도로 전이된 VX2 세포 현탁액을 주입하여 자궁내막암의 토끼 모델을 생성하는 방법을 보여줍니다. 이는 후복막 림프절 전이를 동반한 원발성 자궁내막암의 발생으로 이어집니다.

전이성 자궁내막암 모델 모델링: 토끼 모델에서 림프절 전이를 동반한 자궁내막암을 생성하는 기법

여기, 선물이 붙일 레이블된 인간의 자궁내 막 조각 쥐에 투입의 라이브 이미징에 대 한 프로토콜. 메서드를 모니터링을 통해 endometriotic 병 변 크기에 선택의 약의 효과 실시간으로 형광 기자에 의해 방출 되는 형광의 정량화를 공부 하 고 수 있습니다.

궁의 분리 마우스 모델에서 병 변 크기의 비 침 투 적인 모니터링

자궁내막증의 많은 설치류 모델은 기술적 복잡성, 재현성 및/또는 면역 손상된 동물 또는 특수 리포터 마우스에 대한 필요성에 의해 제한됩니다. 우리는 독립적으로 검증 가능하고 객관적인 점수 매기기 시스템을 갖춘 실험용 마우스를 사용하여 병변 유도의 단순화 된 시스템을 제시하며, 난소 절제술 이나 생존 수술에 대한 요구 사항이 없습니다.

자연적으로 사이클링 마우스를 사용하는 자궁내막증의 신제닉 뮤린 모델

이 연구는 임상적으로 중요한 자궁내막증의 하위 유형인 자궁내막종을 시뮬레이션하도록 특별히 설계된 새로운 마우스 모델을 소개합니다. 이 모델은 C57BL/6J 마우스를 활용하여 자궁내막종 관련 불임의 기저에 있는 병태생리학적 메커니즘을 밝히는 것을 목표로 하며, 현재 생식 의학의 지식 격차를 해소할 수 있는 정교한 도구를 제공합니다.

자궁내막종과 관련된 불임을 연구하기 위한 실험적 마우스 모델 수립

이 논문은 1-3분 이내에 95% 에탄올을 마우스 자궁에 주입하여 사망률이 매우 낮고 자궁 내 유착을 최소화하면서 신뢰할 수 있고 재현 가능한 얇은 자궁내막을 생산하기 위한 자세한 프로토콜에 대해 설명합니다.

얇은 자궁내막의 마우스 모델 구축

이 프로토콜은 마우스 모델에서 자궁 손상을 유도한 후 후속 임신 중에 다운스트림 분석을 수행하는 절차를 설명합니다.

외과적 자궁 손상과 후속 임신 결과에 대한 마우스 모델

쥐 intraluminal 중간 뇌성 가림 모델은 여기서 제공됩니다. 대뇌 경색의 범위는 neurologic 점수와 cresyl 보라색의 착색, TTC의 대안 얼룩, 병렬 많은 관심 마커에서 테스트 큰 이점을 제공함으로써 평가됩니다.

Intraluminal MCAO의 마우스 모델 : Cresyl 보라 착색에 의한 뇌 경색 평가

세포 및 분자 neotissue 형성에 대한 우리의 지식을 개선하기 위해, TEVG의 쥐 모델은 최근에 개발되었다. 이식은 C57BL / 6 마​​우스의 신동맥 대정맥 개재 이식으로 이식되었다. 이 모델은 우리의 임상 연구에서 달성 된 것과 유사한 결과를 얻을 수 있지만, 훨씬 단축 된 시간 과정을 통해.

마우스 모델에서 하대 정맥 끼어 이식의 주입

조직 공학 심장 판막에 neotissue 형성 및 협착증 개발을 기초 세포 및 분자 메커니즘을 이해하기 위해, 이소성 심장 판막 이식 뮤린 모델이 개발되었다. 폐동맥 판막은 이소성 심장 이식 기술을 사용하여 수신자에게 이식 하였다.

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여기에서는 생체 내 마우스의 체성 감각 피질에서 Rose Bengal 광혈전 혈전을 유도하기 위한 반침습적 광학 현미경 접근 방식을 설명합니다.  이미징 절차의 기술적 측면은 광혈전 이벤트의 유도에서 적용 및 데이터 수집에 이르기까지 설명됩니다.

공 초점 광학 이미징에 의해 로즈 벵갈 Photothrombosis<em&gt; 생체</em&gt; : 단일 선박 스트로크의 모델

배우세요 자궁 자동 이식을 통한 수술적 자궁내막증 유도 방법으로, 생쥐에서 자궁 조직을 장간막 동맥에 봉합하는 기술입니다. 이 모델은 질병 기전 연구와 새로운 치료법 개발에 활용됩니다.

자궁의 자동 이식하여 수술 유발 Endometriosis의 마우스 모델

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