자궁의 자동 이식하여 수술 유발 Endometriosis의 마우스 모델

이 절차의 전반적인 목표는 자궁 조직을 장간막의 동맥 캐스케이드로 자가 이식하여 마우스에서 자궁내막증을 외과적으로 유도하는 것입니다. 이는 먼저 자궁의 자궁내막을 결찰, 제거 및 노출시킴으로써 수행됩니다. 절차의 두 번째 단계는 2 mm 생검 펀치를 사용하여 노출된 자궁내막으로부터 세 개의 자궁내막양 임플란트를 생성하는 것입니다.

절차의 세 번째 단계는 세 개의 자궁내막증 유사 이식물을 장간막의 동맥 계통에 있는 동맥들에 봉합하는 것입니다. 절차의 마지막 단계는 복벽과 피부를 봉합하고 동물이 자궁내막증 병변을 회복하도록 하는 것입니다. 마우스에서 적출된 병변은 조직학적 분석과 유전자 및 단백질 발현 패턴으로 확인한 결과, 자궁내막증이 있는 여성의 병변과 유사합니다.

일반적으로 이 방법을 처음 접하는 연구자들은 세 가지 주요 이유로 어려움을 겪습니다. 첫째, 마우스 조직의 크기가 매우 작습니다. 둘째, 장간막은 손상되기 쉽습니다. 셋째, 봉합사를 너무 세게 조이면 장 괴사가 발생할 수 있습니다.

진통제와 마취제를 포함하여 무균 수술에 필요한 모든 수술 장비를 준비하는 것으로 시작합니다. 흡입 이소플루란을 사용하여 동물을 마취한 후, 발가락 꼬집기 자극에 반응이 없는 것을 확인하여 완전 마취 상태임을 확인합니다. 수술 중 안구 건조를 방지하기 위해 눈에 안연고를 바르고 소형 클리퍼를 사용하여 수술 부위의 털을 깎습니다. 클로르헥시딘 스크럽과 70% 에탄올을 번갈아 세 번 닦아 수술 부위를 소독한 후, 멸균 포로 동물을 덮습니다.

소형 가위 또는 메스 날을 사용하여 질 입구에서 앞쪽으로 0.5~1.0cm 떨어진 지점에서 끝나는 작은 정중선 절개를 실시합니다. 수술 부위의 봉합을 용이하게 하기 위해 둔성 박리를 통해 체벽과 복벽을 부드럽게 분리합니다. 둔성 박리 후, 복벽에 작은 정중선 절개를 실시합니다.

다음으로, 작은 핀셋을 사용하여 왼쪽 자궁각의 위치를 조심스럽게 찾습니다. 자궁은 절개 부위에 진입했을 때 일반적으로 먼저 보이는 장의 등쪽에 위치하므로, 자궁각을 부드럽게 들어 올린 후 그 아래로 벌어진 핀셋을 밀어 넣어 견인기로 사용합니다. 이때 난소와 자궁의 외관을 함께 관찰하는 것이 도움이 됩니다.

발정 주기 날짜 확인을 돕기 위해, 6~8cm 길이의 5-0 흑색 편조 실크 봉합사를 신장된 자궁각 아래로 밀어 넣습니다. 자궁관 접합부에서 자궁각을 단단히 결찰합니다.

수란관과 자궁경부 접합부를 각각 묶어줍니다. 각 위치에 평결절(square knot)을 사용하여 봉합사 끝을 자르지 않은 상태로 둡니다. 두 결찰 지점 사이의 자궁각 부분을 절제하여 penicillin과 streptomycin이 포함된 PBS 약 100 µL가 담긴 유리 페트리 접시에 조직을 넣습니다.

실크 봉합사의 끝부분을 마지막에 자릅니다. 봉합사가 풀리거나 출혈이 발생하는 경우, 절단부를 찾아 작은 가위로 다른 매듭을 묶거나 처리합니다. 자궁각에서 지방을 제거합니다.

작은 가위의 한쪽 날을 내강에 삽입하여 자궁각을 엽니다. 포셉으로 자궁각을 잡은 상태에서 가위를 자궁각 아래로 조심스럽게 미끄러뜨리며 이동시킵니다. 유리 페트리 접시에서 2mm 생검 펀치를 사용하여 동일한 크기의 임플란트 3개를 절단합니다. 이때 조직이 건조해지지 않도록 주의하십시오.

절개 부위 바로 위에 멸균 거즈를 놓고 페니실린과 스트렙토마이신이 포함된 멸균 PBS로 충분히 적십니다. 이후 단계 전반에 걸쳐 작고 매끄러운 핀셋을 사용하여 수분을 유지하는 것이 중요합니다. 조심스럽게 맹장을 찾아 소장을 따라 천천히 이동시킵니다.

4~5cm 정도의 짧은 장 분절을 끌어내어, 장간막의 동맥 계통이 명확하게 보이도록 미리 적셔둔 거즈 위에 부채꼴 모양으로 펼칩니다. 이때 멸균 식염수를 사용하여 장이 항상 습윤한 상태를 유지하도록 하십시오. 임플란트 하나를 바늘에 끼운 다음, 6-0 aut black alon 봉합사를 사용하여 장에서 약 0.5cm 떨어진 동맥에 임플란트를 부드럽게 고정합니다.

하나만 사용하십시오. 포셉 위로 넘겨 묶되, 봉합사를 너무 세게 조이지 마십시오. 그렇게 하면 혈류가 차단되어 결과적으로 장 괴사가 발생할 수 있기 때문입니다.

한 번의 매듭으로 두 개의 매듭을 완성하고, 각각을 조인 후 봉합사를 임플란트에서 2 mm 이내로 절단하며, 장을 수화시킵니다. 그 다음 두측 방향으로 이동합니다. 장의 다음 3~4 cm 구간을 끌어낸 후, 이미 임플란트가 삽입된 부분을 조심스럽게 제자리에 놓습니다.

이전 임플란트 부위에서 한두 개의 동맥을 건너뛴 후 다음 임플란트를 봉합하고, 세 번째 임플란트에 대해서도 동일하게 반복합니다. 마지막으로 복벽을 봉합하고 상처 클립으로 피부를 닫습니다. 수술 부위를 닫고 진통제를 투여한 후, 동물이 회복될 때까지 케이지 내에서 복측이 아래로 향하게 하여 순환 가열 워터 패드 위에 일부 걸치게 배치합니다.

자궁내막종 병변을 회수하려면 장간막에 있는 검은색 봉합사를 찾으십시오. 캘리퍼스를 사용하여 각 자궁내막종 병변의 길이와 너비를 측정하십시오. 병변을 찌르지 않도록 주의하며 자궁내막종 병변을 박리해내십시오.

병변에서 엔도메트리오이드(endometrioid) 조직이 아닌 모든 조직을 제거하십시오. 봉합사를 제거하기 전, 액체가 채워진 세 개의 엔도메트리오이드 병변을 흔들어 줍니다. 봉합사를 조심스럽게 제거하고 두 개의 엔도메트리오이드 병변을 천자하십시오.

조직 처리 단계로 넘어가기 전, 이를 다시 측정하십시오. 다음으로 나머지 자궁각을 절제하여 무게를 측정합니다. 여성과 여기 제시된 마우스 모델 모두에서 자궁내막증의 조직학적 분석 결과, 자궁내막 유사 병변에 자궁내막 선과 기질이 포함되어 있음이 나타납니다. 마우스의 자궁내막증 병변에는 여성 자궁내막증의 일반적인 특징인 헤모시데린 함유 대식세포 또한 포함되어 있습니다. 유도 후 3일째에 마우스에서 제거된 자궁내막 유사 병변은 왼쪽에 표시된 것과 같이 염증 및 출혈 양상을 보이며, 2~4주 동안 성장하게 됩니다.

마우스 모델의 자궁내막증 병변은 유도 시의 병변 무게와 비교했을 때, 낭종 형태의 액체 충전 상태이며 복막 유착으로 둘러싸여 있었습니다. 액체 충전 병변은 유도 후 1개월 및 2개월 시점에 각각 306%와 862% 더 컸으며, lance 병변은 각각 51%와 172% 더 컸습니다. 액체 충전 및 lad 자궁내막양 병변.

이 절차를 따른 다섯 번의 서로 다른 실험에서, 유도 후 한 달째에 체중이 일정하게 유지되었습니다. 이 모델은 자궁내막증의 병태생리에 관한 의문에 답하고, 이 질환과 관련된 통증 및 불임 치료를 위한 새로운 치료법을 탐색하는 데 사용될 수 있습니다.