Name: Orthotopic 마우스 뇌종양 모델의 조합 방사선 치료 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: 배우세요 마우스 뇌에 교모세포종 세포를 이식하여 종양 성장과 치료 반응을 연구하는 방법을. 이 모델은 새로운 항암 요법을 평가하는 데 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 연구는 NIH의 교내 프로그램에서 기금에 의해 지원됩니다.

I. 셀 준비 <ol><li> 세포 이식되는 매 5 생쥐 한 80% 합류 225cm 3 플라스크에 대해 10% FBS으로 DMEM의 합류로 성장하고 있습니다. </li><li> 세포의 미디어 벗어 대기음, 칼슘이나 마그네슘없이 PBS의 10 ML로 씻는다. 대기음 PBS 해제 세포. </li><li> 트립신 3 ML과 세포를 Trypsinize, 10-15 분 기다려야하고, 미디어의 15 ML에 트립신을 중화. </li><li> Pipet 50 ML 원추형으로 모든 세포와 미디어. 두 개의 커다란 flasks 한 50 ML 원추형으로 맞습니다. </li><li> 4 ° C.에서 7 분을위한 1,600 rpm으로 세포를 던가 완전히 뜨는 기음. 차가운 PBS의 10 ML에 세포를 Resuspend, 가볍게 아래로 pipetting 및하여 세포를 헹굴. 셀을 펠렛은 PBS로 균일하게 혼합되어 있는지 확인하십시오. 서스펜션은 구름이어야합니다. </li><li> 현재 셀 카운트는 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 카운터를 사용하여 수행됩니다. 세포는 4 ° C.에서 7 분을위한 1,600 rpm으로 다시 centrifuged있다 </li><li> 세포의 2 차 원심 분리 등 후PBS 1 ML의 해적 모든 PBS와 resuspend. </li><li> 세포는 4 ° C. 10 분 3,000 rpm으로 PBS의 1ml에 소용되는 PBS는 aspirated하고, PBS는 U87 세포를 5 μl 당 1x10 6으로 최종 농도를 조정하기 위해 추가됩니다, 다른 세포 라인은 최적의 종양 성장을위한 세포의 서로 다른 숫자와 집중을 필요로 할 수 있습니다. </li><li> 최종 볼륨과 집중을 얻은 후 전지 eppendorf 튜브의 얼음에 보관됩니다. </li></ol> II. 이종 이식 <ol class="ualpha"><li> 마우스를 준비 <ol><li> 마우스 케타민을 / Xylazine / 식염수의 주입 믹스를 사용하여 anesthetized 있습니다. 혼합물 120 케타민을, 16 밀리그램 / Rompun과 식염수와 Perl의 MG / kg이다. 생쥐는 개별적으로 무게와 자신의 체중을 기준으로 10g 당 0.1 ML 주어집니다. 마취는 1 ML의 주사기의 IP에 연결된 26G 바늘로 제공됩니다. 그것은 고통 응답을위한자는 단계에 도달하기 위해 생쥐에 대한 약 15 분 소요됩니다. 당신의 고통 응답을 확인하실 수 있습니다그들의 노상 강도를 곤란에 의한 생쥐. </li><li> 마우스가 완전히 anesthetized되면​​ 눈 연고가 말리는에서 그들을 방지하기 위해 그들의 눈에 관리합니다. </li><li> 마우스를 입 표시줄에서 노치의 앞에 윗니와 stereotaxic의 침대에 배치됩니다. 침대 후 stereotaxic에 배치됩니다. </li><li> 코 가드는 머리의 움직임을 방지하기 위해, 그리고 귀 바가 가볍게 생쥐의 귀 운하에 배치하고 마우스의 코 위에 배치됩니다. 두개골 골절 및 / 또는 호흡에서 마우스를 방지할 수 있으므로 코 표시줄이나 너무 꽉 귀 막대 중 하나 배치를하지 않도록주의하십시오. </li><li> 마우스의 머리가 stereotaxic에 진드기 부호를 사용하는 수준이 과정에서 도움이 있는지 확인합니다. </li><li> 준비하려면 마우스, 알코올 및 providine 요오드는 요오드의 알코올 및 3 애플 리케이션 3 응용 프로그램의 총 번갈아 마우스 머리에 후한 적용됩니다. 70%있는 알코올 패드 중 하나는 최종 응용 프로그램에 적용됩니다머리. </li></ol></li><li> 수술 <ol><li> 프로 시저에서 모든 악기 절차를 시작하기 전에 70 %의 에탄올에서 악기를 autoclaving 또는 소킹에 의해 어느 소독해야합니다. </li><li> 절개는 대각선으로 다시 두개골의 왼쪽 뒷부분에 오른쪽 눈 뒤에서 머리 위에 이루어집니다. 절개는 10mm ~ 15 mm 길이에 대해 여야합니다. </li><li> Q-팁을 사용하여 천천히 두개골을 노출하고 두개골과 피부 사이에 멤브레인 닦아 절개를 구분합니다. 과도한 출혈을 핏자국이 얼룩하고 시청 Q-팁을 사용하십시오. </li><li> bregma을 시각화하기 위해 두개골의 맨을 쉽게받을 수 있습니다. 해밀턴 주사기 포인트 사용 bregma 통해 위치를. 두개골을 뚫고되는 구멍의 정확한 위치는 2 밀리미터 권리와 bregma (그림 2)의 앞쪽에 1mm입니다. 멸균 구입 외과의 느낌 - 스쳐 마커는, 뚫고되는 구멍의 위치를​​ 표시하는 데 사용됩니다. 구멍이 가까이 위치하고있다는 점에 유의하십시오terior 봉합 라인. </li><li> 다음으로, 18G 바늘을 통해 핀 꽃병이나 수사관에 22G 바늘의 포인트를 사용하여 표시된 위치에서 두개골에 작은 구멍을 드릴 다운합니다. </li><li> 세포의 5 μl와 10 μl 유리 해밀턴 주사기를로드합니다. 해밀턴 주사기 그것에 부착된 고정 33G 바늘로 무딘 30G 갖춘 10 μl입니다. 그들을 pipetting 또는 부착된 25G 바늘로 1ml 주사기를 사용하여 중, 그들을로드하기 전에 세포를 섞어주십시오. 해밀턴 주사기가로드되면, 두개골에 구멍을 주선해 줄 수있는 팔을에 다시 넣습니다. </li><li> 바늘은 두개골과 수준되면 두개골의 표면에 바늘의 번트 엔드를 내려라, 그것이 두개골의 표면 아래 3 mm의 깊이에까지 바늘을 낮춥니다. </li><li> 바늘이 저하되면 그것은 두뇌에 영향을 미치는 바늘에서 어떤 큰 충격을 피하기 위해 2 분 동안 거기 남아있을 것이다. 세포를 이온 주입하면 6~8분의 총 분당 1 μl의 속도이며, 어떤 backflo주의w 세포의 마지막이 이식되고 나면, 모든 세포가 적응할 수 있도록 또 다른 2 분을 위치에 바늘을 떠나 </li><li> 두뇌에서 바늘을 제거하고, Q-팁을로 입구를 청소하십시오. 각 솔루션과 그 순서 배 50% Actone, 100 % EtOH, 그리고 PBS로 바늘과 주사기를 청소 진행합니다. </li><li> 두개골의 피부는이 시점에서 봉합받을 준비가되어 있습니다. 5-0를 사용하면 PBS는 약 3 바늘로 절개를 닫습니다. </li><li> 마우스가 열 패드에 깨어 있도록 허용하고, 필요한 경우 안과 연고를 다시 적용합니다. 자체의 움직임을 보여주는 이후 마우스는 새장에 반환됩니다 (즉 머리를 리프팅하거나 어깨를 이동). </li></ol></li></ol> III. 방사선 및 약물에 의한 IC 임플란트의 치료 <ol class="ualpha"><li> 방사선 치료 <ol><li> 세포주에 따라 생쥐의 치료 7 일 후 임플란트에 자리 5 소요될 수 있습니다. 우리 부서는 방사선 대접을 위해 orthovoltage 방사선 치료 장치를 사용하여, 표준. </li><li> 이러한 BLI (Bioluminescence 이미징), MRI 또는​​ 중부 표준시와 같은 이미징 전에 임의화 (그림 3A)에 종양을 시각화하는 데 사용할 수 있습니다. </li><li> 마우스는 이전과 케타민을 / Xylazine / 식염수 칵테일과 anesthetized이며, 눈 연고가 눈을에 적용됩니다. </li><li> 생쥐는 생쥐의 헤드 중심을 향해 가리 키도록하는 원형 바퀴처럼 구성된 맞춤 제작한 방사선 지그에 위치하고 있습니다. 생쥐의 신체는 리드와 방사선을 차단할 수 있습니다. </li><li> 약물 치료는 다른 배달 노선 즉, SQ, IP 및 IV를 통해 전이나 방사선 중 하나를 부여하실 수 있습니다. </li></ol></li></ol> IV. 결과 마우스가 마취 주사 후 45-60분 이내에 절차에서 깨어나한다. 마우스 difficultly 수술 후 깨어난했으며 시간이 1을 초과했습니다 ½ 시간을 수술 후 경우, 마우스는 복구할 수 없으며 안락사는 효과적인 대안이있을 수 있습니다. 만약 일오히려 과도한 출혈하거나 프로 시저 안락사 동안 시점에서 갈라진 두개골되어도 좋습니다. 모두 잘하고 세포주에 따라되면 절차가 이루어지는 후 종양 2-4 주 이내에 형성 시작합니다. intracranial 이종 이식 모델을 사용하면 치료 효능은 보통 생존 사후 주입 5로 측정됩니다. 그러나, 이것은 그대로 IC 모델 징후와 증상은 죽기 전에 발생합니다. 마우스가 발생할 수 있습니다 신체적 증상 중 일부는 hunched 자세, 체중 손실, 그리고 비활성입니다. 신경학적인 증상 중 일부는 압류 헤드 기울기와 균형의 손실있을 수 있습니다. 그림 3B는자가 사망률에서 종양의 얼룩 보여줍니다. 카플란 - 마이어의 줄거리는 데이터를 (그림 4) 평가하는 데 사용됩니다. 50 % 생존의 일 수를 계산 및 제어에 비해됩니다. 조합 그룹이 각각의 방사선 및 약물 무기의 추가보다 더 오래 살았다면 조합이 성공합니다. <img alt='"그림' files src="/files/ftp_upload/3397/3397fig1.jpg"> 그림 1. Stoelting Stereotaxic 장비. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3397/3397fig2.jpg"> 그림 2. 마우스 두개골에 드릴 구멍의 위치의 도표. <img alt="그림 3A" src="/files/ftp_upload/3397/3397fig3A.jpg"> GBM 주입 후 그림 3A. BLI 이미징. <img alt="그림 3B" src="/files/ftp_upload/3397/3397fig3B.jpg"> 그림 3B. 사망률에서 H와 GBM 종양의 E. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/3397/3397fig4.jpg"> 그림 4. PARP 억제제 7 일 게시물 수술과 주사 U87의 IC 이식의 결과.

<ol><li>Bleau, A. M., Holland, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trapping+the+mouse+genome+to+hunt+human+alternations%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Nat.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Trapping the mouse genome to hunt human alternations.</a> Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 104, 7737-7738 (2007).</li>
<li>McGrady, B. J., McCormick, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+intracranial+invasion%3A+morphological+observations+on+central+nervous+system+invasion+by+melanoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">A murine model of intracranial invasion: morphological observations on central nervous system invasion by melanoma cells.</a> Clin. Exp. Metastasis. 10, 387-393 (1992).</li>
<li>Fei, X., Zhang, Q., Dong, J., Diao, y, Wang, Z., Li, R., Wu, Z., Wang, A., Lan, Q., Zhang, S., Huang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+clinically+relevant+orthotopic+xenograft+mouse+model+of+metastatic+lung+cancer+and+glioblastoma+through+surgical+tumor+tissues+injection+with+trocar%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+%26+Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Development of clinically relevant orthotopic xenograft mouse model of metastatic lung cancer and glioblastoma through surgical tumor tissues injection with trocar.</a> Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. 29, 84-84 (2010).</li>
<li>Fujita, M., Zhu, X., Sasaki, K., Ueda, R., Low, K., Pollack, I., Okada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+STAT3+Promotes+the+Efficacy+of+Adoptive+Transfer+Therapy+Using+Type-1+CTLs+by+Modulation+of+the+Immunological+Microenvironment+in+a+Murine+Intracranial+Glioma%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of STAT3 Promotes the Efficacy of Adoptive Transfer Therapy Using Type-1 CTLs by Modulation of the Immunological Microenvironment in a Murine Intracranial Glioma.</a> J. Immunol. 180, 2089-2098 (2008).</li>
<li>Candolfi, M., Curtin, J. F., Nichols, W. S., Muhammad, A. K. M. . G., King, G., Pluhar, G. D., McNiel, G. E., Ohlfest, E. A., Freese, J. R., Moore, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology%3A+neuropathlogical+characterization+and+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathlogical characterization and tumor progression.</a> J. Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li>
<li>Kaye, A., Morstyn, G., Gardner, I., Pyke, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+xenograft+glioma+model+in+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Development of a xenograft glioma model in mouse brain.</a> Cancer Research. 46, 1367-1373 (1986).</li>
<li>Zhao, Y., Xiao, A., diPierro, C., Carpenter, J., Abdel-Fattah, R., Redpath, G., Lopez, M., Hussaini, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Extensive+Invasive+Intracranial+Human+Glioblastoma+Xenograft+Model%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">An Extensive Invasive Intracranial Human Glioblastoma Xenograft Model.</a> American Journal of Pathology. 176, 3032-3049 (2010).</li>
<li>Learn, C., Grossi, P., Schmittling, R., Xie, W., Mitchell, D., Karikari, I., Wei, Z., Dressman, H., Sampson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+Analysis+of+Intracranial+Tumors+in+a+Murine+Model+of+Glioma+Demonstrate+a+Shift+in+Gene+Expression+in+Response+to+Host+Immunity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Genetic Analysis of Intracranial Tumors in a Murine Model of Glioma Demonstrate a Shift in Gene Expression in Response to Host Immunity.</a> J. Neuroimmunol. 182, 63-72 (2007).</li>
<li>Martens, T., Laabs, Y., Günther, H., Kemming, D., Zhu, Z., Witte, L., Hagel, C., Westphal, M., Lamszus, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+Glioblastoma+Growth+in+a+Highly+Invasive+Nude+Mouse+Model+Can+Be+Achieved+by+Targeting+Epidermal+Growth+Factor+Receptor+but+not+Vascular+Endothelial+Growth+Factor+Receptor-2%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Inhibition of Glioblastoma Growth in a Highly Invasive Nude Mouse Model Can Be Achieved by Targeting Epidermal Growth Factor Receptor but not Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2.</a> Clin. Cancer Res. 14, 5447-5458 (2008).</li>
<li>Purow, B., Schiff, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+genetics+of+glioblastoma%3A+are+we+reaching+critical+mass%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Advances in the genetics of glioblastoma: are we reaching critical mass.</a> Nat. Rev. Neurol. 5, 419-426 (2009).</li>
</ol>

우리는 공개 할게 없다.

이러한 glioblastoma multiforme와 같은 악성 프로그램 gliomas은 가장 일반적인 기본 뇌종양을 대표하고 음침한 예후에게 4 있습니다. GBM에 의해 영향을 환자의 생존은 수술, 방사선 및 화학 요법 5의 진보에도 불구하고 (9-12 즉, 몇 달 후 진단) 지난 10 년 동안 거의 변함없이 남아있다. 세포가 인간의 gliomas의 histological 기능에 최대한 가깝게 유사합니다; 예측 가능한 성장이 있어야 glioma 치료 연구를위한 적절한 모델의 특징은 재현할 종양의 위치와 성장 세포가 상대적으로 이산 종양 등이 포함되어야 종양의 비율은, 조직 문화 모델에서 종양 성장 능력 경비 6 줄이기 위해 작은 동물에 있어야합니다. 효과적인 치료가 밀접하게 새로운 치료를 테스트하고 widespr의 분자 기준의 정확한 이해를 제공하기 위해 인간 GBM의 특성과 유사한 실험 모델에 의존EAD glioma의 침략 7. 뇌 종양의 생물학에...

<table border="1"><tbody><tr><td> 연구실 표준 Stereotaxic Instrutment </td><td> 마우스 및 쥐 어댑터를 Stoelting </td></tr><tr><td> Betadine </td><td> 백퍼센트 EtOH </td></tr><tr><td> 70% EtOH </td><td> 50 % 아세톤 </td></tr><tr><td> 6 &quot;Q-팁 </td><td> 알코올 면봉 </td></tr><tr><td> 해밀턴 주사기 80,008 </td><td> Ethicon 5-0 PD </td></tr><tr><td> 1701 SN 31-33G / 1 &quot;/ PT3 바늘 </td><td> 한 ML의 주사기 </td></tr><tr><td> 25G 바늘 </td><td> 생리대 </td></tr><tr><td> 인공 눈물 연고 </td><td> 아주 좋은 스쳐 영구 마커 </td></tr></tbody></table>

orthotopic 마우스 뇌종양 모델의 조합 방사선 치료

Combination Radiotherapy in an Orthotopic Mouse Brain Tumor Model

Glioblastoma multiforme의 (GBM) 1 가장 일반적이고 공격적인 성인 뇌종양입니다. 최근에는 거기에 종양이 침략의 역학에 대한 이해에 상당한 진전되어, 그리고 종양의 직접 했습니다만 접종은 생리학적으로 적절한 환경 2의 침략 과정을 관찰의 기회를 제공하고있다. 마찬가지로 지금까지 인간의 뇌종양에 대해서라면 현재 사용 가능한 orthotopic 모델은 복잡한 craniotomy 절차 3을 통해 종양의 고체 부분의 세포 현탁액 또는 주입의 stereotaxic 주입에 의한 중 설립된다. 우리의 기술 우리는 두뇌에 직접 이식하는 데 사용되는 세포 현탁액을 만들 조직 배양에서 세포를 수확. 수술 시간은 약 30 분 정도이며, 마우스가 지속 외과 비행기에있을 필요로 주사용 마취제가 사용됩니다. 마우스 Stoetling (그림 1)에 의해 만들어진 stereotaxic 지그에 위치합니다. 고물에응급실은 외과 영역이 청소와 준비가되어 있습니다, 절개가 만들어졌다, 그리고 bregma는 craniotomy의 위치를​​ 결정하기 위해 위치하고 있습니다. craniotomy의 위치는 오른쪽으로 2mm와 bregma에 주동이의 1mm입니다. 깊이는 두개골의 표면에서 3mm이며, 세포, 2 μl 매 2 분 속도로 주입하고 있습니다. 피부는 5-0 PDS로 봉합하고, 마우스는 가열 패드에 깨워 허용됩니다. 우리의 경험에서 세포주에 따라 치료는 수술 후 7~10일에서 자리를 차지할 수 있습니다. 마약 배달은 약물 성분에 따라 좌우됩니다. 방사선 치료를 마우스 anesthetized 있으며, 지그 만든 사용자 정의에 투입. 리드는 마우스의 시체를 커버하고 마우스만을 두뇌를 제공합니다. tumorigenesis와 GBM에 대한 새로운 요법의 평가 연구는 정확하고 재현성 뇌종양 동물 모델을 필요로합니다. 따라서 우리는 effectiven을 테스트, 두뇌의 microenvironment과 종양의 상호 작용을 연구하기 위해이 orthotopic 뇌 모델을 사용방사선와의없이 다양한 치료 요원의 ESS.

이 문서의 목적은 chemoradiation 연구를위한 orthotopic glioblastoma 모델의 사용을 설명하는 것입니다. 이 문서에서는 이온 주입, 세포 가공 불구하고 이동하고 intracranial 모델을 사용하여 마우스의 방사선 치료합니다.

Orthotopic 마우스 뇌종양 모델의 조합 방사선 치료

교모세포종(Glioblastoma multiforme, GBM)은 성인에게 발생하는 가장 흔하고 공격적인 원발성 뇌종양입니다1. 최근 몇 년 동안 ...에 있어 상당한 진전이 있었습니다.

이 프로시저의 전반적인 목표는 마우스 뇌의 두개내에 이식된 교모세포종 세포를 기술하고, 보여주며, 처리하는 것입니다. 이는 먼저 세포를 준비한 다음, 해당 세포를 마우스 뇌에 이식함으로써 수행됩니다. 수술 절차 이후 뇌 내에서 종양이 성장하며, 이를 통해 다양한 치료법으로 실험을 진행할 수 있습니다.최종적으로 생존 곡선을 통해 치료법의 효과 여부를 확인할 수 있습니다. 이 기술의 함의는 교모세포종 치료로 확장될 수 있는데, 이는 조직 배양에 비해 약물 및 방사선과 같은 새로운 치료법을 테스트하는 더 효과적인 방법이 될 수 있기 때문입니다. 우선 U 87 세포와 같이 관심 대상인 세포를 80% confluence까지 배양하십시오. 10% FBS가 포함된 DMEM 내에서 225 cm³ 플라스크 하나면 생쥐 5마리에 이식할 충분한 세포를 얻을 수 있습니다. 세포에서 배지를 흡입하여 제거하고, 10 mL의 calcium 및 magnesium-free PBS로 수동 쉐이킹을 통해 세포를 짧게 세척합니다.세척액을 흡입하여 제거한 후, 10~15분 후에 트립신을 처리하여 세포를 분리하고, 15 mL의 배지로 트립신을 중화합니다. 이제 모든 세포와 배지를 50 mL 원추형 튜브로 옮깁니다. 두 플라스크 분량의 세포를 하나의 튜브에 담을 수 있습니다.세포를 1600 RPM에서 7분 동안 원심 분리하고, 흡입법을 통해 상층액을 완전히 제거합니다. 펠릿을 10 mL의 차가운 PBS에 재부유시키고, 세포가 균일하고 뿌연 현탁액이 될 때까지 용액 내에서 부드럽게 피펫팅하여 세포를 세척합니다. 세포 계수기를 사용하여 세포 농도를 측정한 후, 최적의 종양 성장을 위해 PBS 세척 과정을 반복합니다.U 87 세포의 최종 농도를 마이크로리터당 200,000 cells로 조정합니다. 최적의 종양 성장을 위해 다른 세포주에는 다른 농도가 필요할 수 있습니다. 주입을 위해 세포 준비가 완료되면, 세포를 얼음 위에 보관하고 동물을 준비하십시오.수혜 마우스에게 마취제를 투여하여 준비를 시작합니다. 약 15분 후, 발가락 꼬집기 테스트를 통해 마우스가 통증에 무감각한지 확인합니다. 마취가 완료되면 안구 건조를 방지하기 위해 눈에 연고를 도포합니다.그런 다음 마우스를 정위 고정 장치의 베드 위에 놓습니다. 입 조절 바의 홈에 치아를 고정합니다. 그 후 베드를 프레임 내에 배치합니다.이제 머리를 고정하기 위해 마우스에 노즈 가드(nose guard)를 장착한 다음, 이어 바(ear bar)를 귀 관에 조심스럽게 삽입하십시오. 두 이어 바 모두 너무 세게 조이지 않도록 주의하십시오. 두개골이 골절되거나 마우스가 질식할 수 있기 때문입니다. 이 시점에서 머리 수평이 맞는지 확인하십시오.마지막 준비 단계로 머리를 알코올과 요오드로 각각 세 번씩 번갈아 닦아내고, 마지막으로 알코올을 네 번째로 도포합니다. 오른쪽 눈 뒤쪽에서 시작하여 두개골의 왼쪽 후방으로 대각선 방향으로 절개하여 이식 수술을 시작합니다. 절개 부위의 길이는 약 10 내지 15 mm여야 합니다.면봉을 사용하여 절개 부위를 천천히 벌려 두개골을 노출시키고, 두개골과 피부 사이에 있는 막을 닦아낸 후 혈액이나 과도한 출혈 부위를 흡수시킵니다. 이제 bgma를 확인하고 펠트 팁 마커를 사용하여 그 위에 10 µL 유리 해밀턴 주사기를 배치합니다. 전두 봉합선에 가까운 bgma의 오른쪽으로 2 mm, 앞쪽으로 1 mm 지점에 표시를 합니다.이제 주사기를 제거하고 표시된 위치의 두개골에 작은 구멍을 뚫습니다. 드릴 비트는 22 gauge 바늘 크기입니다. 드릴 비트가 두개골을 천공하도록 둡니다.추가적인 압력은 필요하지 않습니다. 30~33 gauge 바늘 주사기를 사용하여, 잘 혼합된 세포 5 µL를 주사기에 채운 다음 다시 프레임에 부착합니다. 바늘을 두개골의 구멍에 맞추고 두개골 표면으로부터 표면까지 내립니다.바늘을 3 mm 내린 후 2분 동안 기다립니다. 이 일시 정지는 외상의 가능성을 줄여줍니다. 플런저를 천천히 눌러 약 1 µL/min의 속도로 세포를 이식합니다.마지막 세포가 이식된 후 역류가 발생하지 않도록 주의하십시오. 모든 세포가 안정적으로 안착될 수 있도록 바늘을 2분 더 그대로 둡니다. 대기 후, 뇌에서 바늘을 조심스럽게 뽑고 면봉으로 구멍 부위를 깨끗이 닦아냅니다.이제 5-0 PBS 봉합사를 사용하여 약 3바늘로 절개 부위를 봉합합니다. 마우스를 가열 패드 위에 올리고, 필요한 경우 안연고를 다시 도포합니다.마우스가 머리를 들거나 어깨를 움직이면 홈 케이지로 돌려보냅니다. 마취제 주사 시점부터 이 과정은 30분에서 60분 정도 소요됩니다. 90분이 지나도 마우스가 움직이지 않는 경우, 회복되지 않을 가능성이 있으므로 안락사가 효과적인 대안이 될 수 있습니다.또한, 실험 절차 중 어느 시점에서라도 과도한 출혈이 발생하거나 두개골에 균열이 생기는 경우, 안락사를 권장합니다. 세포주에 따라, 마우스의 방사선 치료는 이식 후 5~7일 후에 수행될 수 있습니다. 예를 들어, 방사선 치료를 위해 ortho voltage 방사선 치료 장치를 사용할 수 있습니다.마우스를 실험군으로 무작위 배정하기 전에 B-L-I-M-R-I 또는 CT와 같은 영상 기술을 사용하여 종양을 시각화하십시오. 세포 이식 후, 종양은 세포주에 따라 보통 2~4주 이내에 형성되었습니다. 폐사 후, 종양을 검사하기 위해 뇌 조직에 염색을 수행하였습니다.치료 효능의 중요한 평가는 Kaplan-Meier 생존 곡선을 그리는 것입니다. 이를 통해 약물 치료, 방사선 치료 또는 병용 요법을 받은 동물의 주입 후 평균 수명을 비교합니다. 이러한 발전 이후, 이 기술은 종양학 분야의 연구가 뇌종양 및 생쥐의 치료법을 탐구할 수 있는 길을 열어주었습니다.

combination-radiotherapy-in-an-orthotopic-mouse-brain-tumor-model

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

뇌종양 환자는 정기적으로 두개골 방사선 치료를 받아야하고, 쇠약인지 장애에 도움이 치료는 종종 결과를하면서. 이 심각한 해결되지 않은 문제는, 현재도 임상을 일으키하지 않으며 방사선 유발인지 감소의 복구를 위해 줄기 세포 기반 요법을 고안하기 위해 노력을 주도하고 있습니다.

두개골 방사선 치료에 의한인지 기능 장애의 회복을위한 세포 이식 전략을 줄기

우리는 누드 마우스 및 이후 일련의 뇌에 인간 glioblastoma multiforme의 세포의 정확한, stereotactic 주입을위한 통합 방법을...

Stereotactic Intracranial 주입 및<em&gt; 생체에</emGlioblastoma의 Multiforme의 마우스 모델 시스템에서 종양 Xenografts의&gt; 발광 생물 이미징

이 비디오는 마우스 모델에서 유방암 정소성 접종 기술을 보여줍니다. 이 기술은 피하 또는 비수술적 주사에 비해 종양 크기와 모양의 변동성이 적고 높은 종양 형성률을 생성합니다.

정소주사: 성체 마우스에 조직 특이적 암세포 이식

이 비디오는 두개내 주사를 수행하여 쥐의 뇌에 종양 세포를 이식하는 방법을 보여줍니다.

두개내 정소성 모델: 마우스 뇌에 암세포를 이식하는 절차

과거에 작은 동물 조사 대상 잘 delineated 종양 볼륨 수 없이 일반적으로 수행 되었다. 목표는 쥐에서 인간 세포종의 치료를 모방 했다. 작은 동물 조사 플랫폼을 사용 하 여, 우리는 MRI 기반 3D 등각 방사선 조사 전 임상 설정에서 애완 동물 기반 하위 볼륨 증폭을 수행.

애완 동물 및 MRI 유도 세포종 쥐 모델의 방사선 마이크로 irradiator를 사용 하 여

여기, 선물이 orthotopic 인간의 기본 뇌 종양을 들고 immunodeficient 마우스에 준비 및 수용자 인간 림프 톨의 stereotaxic 관리에 대 한 프로토콜. 이 연구는 타당성과 세포 immunotherapies intrabrain 전달의 antitumor 효능에 대 한-의 증거-개념을 제공합니다.

정위 적 입양 전송 Orthotopic 인간 세포종 님 Xenografts Murine 모델에서 세포 독성 면역 세포의

만능 줄기 세포 유래 teratomas 위한 치료 전략에 대 한 연구는 줄기 세포 치료의 임상 번역 중요 합니다. 여기, 우리 첫째, 쥐에서 그리고, 선택적으로 대상 줄기 세포 유래 teratomas를 생성 하 고 생체 조건 작은 동물 irradiator를 사용 하 여 이러한 종양을 치료 하는 프로토콜을 설명 합니다.

만능 줄기 세포 유래 Teratomas 외부 빔 방사선을 사용 하 여 작은 동물 모델에서의 타겟 및 선택적 치료

두개 내 뇌 전이 모델링은 정확하고 시기 좋은 방법으로 치료에 종양 크기와 반응을 모니터링할 수 없다는 것에 의해 복잡합니다. 제시된 방법론은 자기 공명 화상 진찰 분석과 두개 내 종양 주입을 결합할 때, 정확하고 일관된 주사, 향상된 동물 감시 및 정확한 종양 부피 측정을 육성합니다.

두개 내 주입 및 자기 공명 이미징을 통해 뇌 전이를 모델링

여기서는 정확성과 효율성을 최적화하기 위해 사내에서 개발한 알고리즘을 사용하여 쥐 교모세포종 모델에서 전임상 양전자 방출 단층 촬영 기반 방사선 요법을 수행하는 프로토콜을 제시합니다.

작은 동물 방사선 연구 플랫폼을 사용하여 교모 세포종 쥐 모델에서 양전자 방출 단층 촬영 기반 용량 페인팅 방사선 요법

여기에서 우리는 유전자 조작 마우스 모델 종양에서 파생된 세포의 두개내 주입에 의해 확립된 GBM에 대한 전임상 동소 마우스 모델을 설명합니다. 이 모델은 인간 GBM의 질병 특징을 표시합니다. 중개 연구를 위해 마우스 뇌종양은 생체 내 MRI 및 조직병리학에 의해 추적됩니다.

다형성 교모세포종의 번역 동소 모델

정형소 소아 뇌종양 모델의 개발에는 암세포를 정밀하게 이식하기 위해 입체 장치를 사용하는 세심한 정밀도가 필요합니다. 여기에 제시된 방법론은 뇌종양 세포를 준비하고, 두개내 주사를 수행하고, 뇌종양 생착을 평가하기 위한 수술 후 모니터링 시스템을 구현하는 것과 관련된 단계를 간략하게 설명합니다.

Stereotaxic Device를 이용한 뇌종양에 대한 Orthotopic Patient-derived Xenograft Models 구축

배우세요 마우스 뇌에 교모세포종 세포를 이식하여 종양 성장과 치료 반응을 연구하는 방법을. 이 모델은 새로운 항암 요법을 평가하는 데 활용됩니다.

Orthotopic 마우스 뇌종양 모델의 조합 방사선 치료

더 많은 동영상 탐색