Name: 이후 3D로 Intracranial 주입 VIVO에서 발광 생물 이미징 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: 학습하세요 생체 내 발광 이미징을 이용한 C57BL/6 마우스 뇌종양 모델링 방법입니다. GL261 세포를 이용한 정량적 종양 추적 기술로 신경종양학 연구에 활용됩니다.

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우리는 GL261 룩 세포의 준비에 도움이 제안에 대한 lentivirus 시스템뿐만 아니라 Mahil 라오에 대한 plasmids의 관대한 선물에 대한 박사 조슈아 B. 루빈을 인정하고 싶습니다. 우리는 뇌 종양 연구 (SSBTR), 배로우 신경 재단과 관대한 지원 월러스 재단을 지원하는 학생 주셔서 감사합니다. 동물 실험은 세인트 조셉 병원과 의료 센터의 기관 동물 케어 및 사용위원회에 의해 명시된 지침과 규정에 따라 수행되었다.

<ol><li>Candolfi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology%3A+neuropathological+characterization+and+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathological characterization and tumor progression.</a> J Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li>
<li>Stafford, P., Abdelwahab, M. G., do, K. im, Preul, Y., Rho, M. C., M, J., Scheck, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ketogenic+diet+reverses+gene+expression+patterns+and+redudes+reactive+oxygen+species+levels+when+used+as+an+adjuvant+therapy+for+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr+Metab%22%5BJournal%5D)">The ketogenic diet reverses gene expression patterns and redudes reactive oxygen species levels when used as an adjuvant therapy for glioma.</a> Nutr Metab. 7, (2010).</li>
<li>Caliper Life Sciences, Inc. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Living+Image+Software+Version+4.0.+VivoVision+Systems%22">Living Image Software Version 4.0. VivoVision Systems</a>. , (2010).</li>
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</ol>

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셀 inoculum은 0.4 mm의 포켓을 만든 후 두뇌의 표면에서 2.6 mm의 깊이에 들어갈 수 있습니다. 바늘의 적절한 배치와 심도를 보장하기 위해 X - 레이는 C - 암 또는 이와 유사한 X - 선 이미지 가속화 장치를 사용 취할 수 있지만, 이것은 선택 사항입니다. 동물이 제대로 진정되지 않으면 수술의 합병증은 동물 세포 주입하는 동안 이동할 수있는 시점에서 발생할 수 있습니다. 이것은 바늘 트랙에서 셀 믹스 또는 출혈의 누출을 일으킬 수 있습니다. 세포의 누수는 종양 세포의 성장을 이소성됩니다. burrhole이 프로토콜 4 설명한 2.3 mm까지 중간 만든 경우에도 소중히 할 수있는 뇌실를 중요하지 않습니다. 바늘과 세포 확산의 적절한 배치는 2 μl 메틸렌 블루 염색와 마우스를 일으키는 및 주입 염료의 위치를​​ 확인하기 위해 뇌 조직을 해부하여 테스트되었습니다. 이 프로토콜에서 우리는 생체내 이미징 시스템 및 t의 IVIS 스펙트럼을 사용한그는이 악기와 함께 사용하도록 설계 이미지 소프트웨어 (V 4.0) 생활. (캘리퍼스 생명 과학). 생체내 이미징 시스템과 이미지 분석 도구의 모든 비교는 유사한 결과를 얻을하는 데 사용할 수 있습니다. 이러한 시스템은 실험 intracranial 종양의 성장에 따라 기존의 자기 공명 이미징 (MRI)을 통해 몇 가지 이점을 제공합니다. 가장 확실한는 2 악기의 상대적인 비용이다 - 동물 MRI 기계는 훨씬 더 비싼 있으며, 일반적으로 숙련된 기술자 MRI의 서비스를 필요로합니다. 이러한 여기에서 설명한 있었는지와 같은 생체내 이미징의 최종 사용자에 의해 할 수 있습니다. MRI의 데이터 quantitation는 많은 시간과 다소 엄밀하지 않은 상태에서 bioluminescence 데이터는 양적 있습니다. 또한, MRI 이미지는 부종과 종양 세포 이외에 염증을 표시하고 치료 효과에서 종양을 구분하기 어려울 수 있습니다. 이러한 이유로 성장하는 종양의 정확한 용적 측정을 획득하는 것은 도전이 될 수 있습니다. Bioluminescence는 ATP가 필요합니다그러므로 오직 살아있는 종양 세포는 종양의 크기 데이터에 기여하고 있습니다. 기계가 사용할 수있는 경우에도 불구하고, MRI를 몇 가지 이점이 있습니다. 세포는 MRI에 의해 시각이 될 수있는 발광 생물 마커로 표시 될 필요가 없습니다. 사망 시에 tumoral 부종을 시각화하는 능력은 몇 가지 실험 프로토콜에 대한 이점 수 있습니다. 두 기술을 사용할 때 두 기술의 강도가 하나를 사용하면 다른의 사용을 배제하지 않으므로 데이터는 종양의 성장뿐만 아니라 같은 동물의 사망 시에 tumoral 부종과 염증의 존재를 얻을 수 있습니다 연구원 수 있습니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약이나 공급의 명칭 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> GL261 - luc2 Bioware 울트라 </td><td> 캘리퍼스 생명 과학 </td><td> GL261 - luc2 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco의 수정 독수리 중간 (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 10313039 </td><td></td></tr><tr><td> Geneticin (G418) </td><td> Gibco (Invitrogen) </td><td> 11811-023 </td><td></td></tr><tr><td> 소태아 세럼 (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 26140079 </td><td></td></tr><tr><td> Phospate는 버​​퍼 식염수 (PBS) </td><td> Invitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr 마우스 </td><td> NCI - 프레드릭 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> AKWA의 눈물 윤활유 안과 연고 </td><td> Akorn Inc의 </td><td> 17478-062-35 </td><td></td></tr><tr><td> Ketaset (케타민을 하이드로 클로라이드) </td><td> Wyeth </td><td> 11570775 </td><td></td></tr><tr><td> Sedazine (xylazine 염산염) </td><td> Wyeth </td><td> 10031894 </td><td></td></tr><tr><td> 작은 동물 Stereotaxic 악기 </td><td> Kopf 인 스트 루먼트 </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> SYS - Micro4 컨트롤러 UltraMicroPump </td><td> 세계 정밀 계측기 </td><td> UMP3 - 1 </td><td> 사용할 수없는 경우 수동으로 달이다 수 있습니다 </td></tr><tr><td> 26 게이지와 10μl 주사기는 바늘 beveled </td><td> 세계 정밀 계측기 </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Adison 집게 </td><td> 세계 정밀 계측기 </td><td> 500,092 </td><td></td></tr><tr><td> Penfield 해부학자 </td><td> Codman </td><td> 65-1015 </td><td></td></tr><tr><td> 16g 1 ½ 정밀 글라이드 니들 </td><td> Beckton, 디킨슨과 회사 (BD) </td><td> 305,198 </td><td></td></tr><tr><td> 외과 블레이드 핸들 </td><td> BD </td><td> 371,030 </td><td></td></tr><tr><td> 15 사이즈 블레이드 </td><td> BD </td><td> 371,315 </td><td></td></tr><tr><td> 4-0 Vicryl 봉합사 </td><td> Ethicon </td><td> VCP496G </td><td></td></tr><tr><td> 뼈 왁스 </td><td> MEDLINE </td><td> DYNJBW25 </td><td></td></tr><tr><td> Povidine - 요오드 면봉 스틱 </td><td> MEDLINE </td><td> MD93901 </td><td></td></tr><tr><td> D - Luciferin의 칼륨 소금 </td><td> 캘리퍼스 생명 과학 </td><td> 122,796 </td><td></td></tr><tr><td> Forane (Isoflurane) </td><td> 벡스터 </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> OPMI Pentero 현미경 </td><td> 칼 자이스 혈구, 주식 회사 </td><td></td><td> 모든 수술 현미경은 충분 </td></tr><tr><td> 선택 마취 시스템과 Xenogen IVIS 스펙트럼 </td><td> 캘리퍼스 생명 과학 </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

이후 3d로 intracranial 주입 vivo에서</emmurine gliomas의> 발광 생물 이미징

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

마우스 glioma 261 (GL261)은 생체내 모델 시스템에으로 인식되고 인간 glioblastoma multiforme의 (GBM)의 기능 중 많은 recapitulates. 셀 라인은 원래 C57BL / 6 마우스 syngeneic 스트레인 하나에 3 - 메틸 - cholantrene의 intracranial 주입에 의해 유도되었다, 따라서 immunologically 유능한 C57BL / 6 생쥐를 사용할 수 있습니다. 우리가 GL261을 사용하는 동안 다음과 같은 프로토콜은 어떤 intracranial 마우스 종양 모델의 주입 모니터링에 사용할 수 있습니다. GL261 세포는 안정적으로 표현 반딧불 루시페라제 (GL261 룩)으로 설계되었습니다. 우리는 또한 CMV 프로 모터에서 표현 luc2 유전자의 안정적인 transfection하여 밝은 GL261 - luc2 세포주를 만들었습니다. 국립 암 연구소, 프레데릭, MD에서 C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr 마우스 (C57BL / 6의 흰둥이 변종)는 검은 피부와 모피로 인해 빛을 감쇠를 제거하는 데 사용되었습니다. 흰둥이 C57BL / 6 마우스의 사용을 통해, 생체내 이미징의 생체내 메신저에서 IVIS 스펙트럼을 사용하여시스템을 노화 것은 주입의 날 (캘리퍼스 생명 과학, Hopkinton, MA)에서 가능합니다. GL261 룩과 GL261 - luc2 셀 라인은 부모 GL261 세포로 생체내 행동 동일하게 나타났다. 인간 GBMs에있는 공유 histological 기능이 마우스 모델 중 일부는 다음과 같습니다 : 종양 괴사, pseudopalisades, neovascularization, 침공, hypercellularity과 염증 1. 이전 주입 동물 stereotactic기구와 절개에 배치 300ml의 intraperitoneal 주사 (50 MG / kg), xylazine (5 밀리그램 / kg)과 buprenorphine (0.05 밀리그램 / kg)에 의해 anesthetized되었다이 이상 메스로 만들어진 두개골 중간선. burrhole는 bregma과 중간선의 오른쪽에있는 2.3mm로 0.1mm 사후되었다. 바늘은 2.6mm의 깊이 3mm와 0.4mm 철회의 깊이로 삽입되었다. GL261 룩이나 GL261 - luc2 전지 (10 7 셀 / ML)의 두 μl는 삼분의 과정을 통해 주입했다. burrhole는 폐쇄되었습니다bonewax과 절개는 봉합했습니다와 함께. stereotactic 주입 따라 발광 생물 세포가 이식 당일부터 감지하고 종양이 IVIS 스펙트럼 악기의 3D 이미지 재구성 기능을 사용하여 분석하실 수 있습니다. 동물 150μg luciferin / 이전 이미지로 kg의 체중 20 분의 피하 주사를 받게됩니다. 종양 부담 시간이 지남에 따라 의미 종양의 bioluminescence를 사용하여 계량입니다. 종양 베어링 생쥐는 병적 상태를 평가하기 위해 매일 관찰되었으며 다음과 같은 현상이 하나 이상 존재하는 경우 euthanized되었습니다 혼수, ambulate에 실패, hunched 자세, 신랑에 실패, 거식증은 체중의&gt; 10 %의 손실 발생. 종양 검시에있는 동물의 모든 분명했다.

C57BL에 GL261 셀 / 6 마​​우스의 Intracranial 이식은 인간 glioblastoma multiforme의의 특징 중 많은 것들을 요점을 되풀이하다 악성 gliomas을 생산하고 있습니다. 우리는 우리가 사용할 수 있도록 안정 루시페라제 표현 GL261 세포를 사용<em&gt; 생체내에</em&gt; 영상은 종양 진행을 따르십시오. 수술 및 3D<em&gt; 생체내에</em&gt; 영상을 보여주 있습니다.

이후 3D로 Intracranial 주입 VIVO에서</emMurine Gliomas의> 발광 생물 이미징

마우스 신경교종 261(GL261)은 인간 다형성 교모세포종(GBM)의 많은 특징을 재현하는 인 비보(in vivo) 모델 시스템으로 인정받고 있습니다. ...

본 실험 절차의 전반적인 목표는 생체 내(in vivo) 영상 촬영을 통해 시간에 따라 정량적으로 추적할 수 있는 신경교종의 두개내 모델을 구축하는 것입니다. 이를 위해 먼저 발광 표지된 신경교종 세포를 배양 및 수확하여 1~2 × 10⁷ cells/mL 농도의 세포 현탁액을 준비합니다. 절차의 두 번째 단계는 수확한 세포를 마우스 뇌의 우측 전두엽에 정위법으로 이식하는 것입니다.이어서 동물에게 Luciferian을 피하 주사하고 Luciferian 발현에 대한 역학 곡선을 생성합니다. IVUS spectrum 생체 내 이미징 시스템을 사용하여, 절차의 마지막 단계로 동물을 연속적으로 촬영하고 종양 성장을 추적합니다. 최종적으로, IVUS spectrum 생체 내 이미징 시스템으로 검출 가능한 생물 발광 신호를 통해 종양 세포의 성장과 종양의 3D 위치를 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.MRI와 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 생물 발광 이미징이 살아있는 종양 세포만을 식별하며, 특별히 훈련된 MRI 기술자가 필요하지 않다는 점입니다. 또한 더 짧은 시간 내에 여러 마리의 동물을 동시에 이미징할 수 있습니다. 이 방법은 뇌종양에 대한 새로운 치료법의 효능이 무엇인지와 같은 신경종양학 분야의 핵심적인 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다.in vivo에서, 이 방법은 뇌종양에 대한 통찰을 제공할 수 있을 뿐만 아니라 폐암, 전립선암, 간암과 같은 다른 장기 시스템에도 적용될 수 있습니다. 이 절차를 준비하려면, 26게이지 베벨 바늘이 장착된 10 µL, 50 mm 주사기에 신경교종 세포 접종물을 최소 3 µL 로드하십시오.세포가 뭉쳐 있지 않은지 확인하십시오. 세포가 뭉쳐 있다면 시린지를 다시 채워야 할 수도 있습니다. 마취된 마우스는 정위 고정 장치에 배치하며, 이 사진에 표시된 것처럼 마우스 입 클램프를 사용하여 머리를 고정합니다. 채워진 시린지를 마이크로 인젝터에 장착하십시오.수술 절차를 시작하려면, 15번 메스 날과 치과용 핀셋을 사용하여 피부 절개를 실시합니다. 동물의 양 눈 사이에서 귀 방향으로 10~15mm 정도 절개하여 bgma를 노출시킵니다. bgma를 정확하게 식별하십시오.이는 bma의 원위쪽에 위치한 정맥동 부위와 쉽게 혼동될 수 있습니다. 16게이지 1.5인치 바늘을 사용하여, 바늘을 비틀면서 약간의 압력을 가해 두개골을 관통하고 뇌가 노출될 때까지 관상봉합에서 후방으로 0.1mm, 정중선에서 우측으로 2.3mm 지점에 천공을 만듭니다. 그 후 마이크로 인젝터를 사용하여 주입 바늘을 뇌 표면에 닿을 때까지 이동시킵니다. 이 위치에서 바늘을 3mm 깊이까지 삽입합니다.바늘을 3분 동안 그대로 둡니다. 다음으로, 바늘을 0.4 mm 후퇴시켜 뇌 표면으로부터 총 2.6 mm 깊이가 되도록 합니다. 이는 세포가 주입될 작은 포켓을 형성하여 정확한 위치와 깊이에 배치되도록 하기 위함입니다.C-arm을 사용하여 바늘 깊이의 X선 영상을 촬영할 수 있습니다. 마이크로 인젝터를 2000 nanoliters의 부피와 분당 667 NANOLITERS의 주입 속도로 설정하여 3분 동안 세포 현탁액을 주입하십시오. 주입 후에는 주입 부위에서 용액이 누출되는 것을 방지하기 위해 바늘을 2분 동안 그대로 둡니다. 그런 다음 바늘을 천천히 완전히 뽑아냅니다.바늘을 제거한 후, Penfield dissector를 사용하여 골편 결손 부위(bur hole)를 bone wax로 덮습니다. 마지막으로 4-0 Vicryl 봉합사를 사용하여 피부에 큰 틈이 남지 않도록 절개 부위를 봉합합니다. In vivo.생물 발광 이미징은 IVIS Spectrum 이미징 시스템을 사용하여 수행합니다. living image 소프트웨어를 실행하고, 제어 패널 우측 하단의 initialize IVIS system 버튼을 클릭하여 IVIS Spectrum 이미징 시스템을 초기화합니다. 제어 패널 좌측 상단의 luminescent 이미징 모드를 선택하여 생물 발광 이미징의 최적 시간을 결정합니다.동물에게 Lucifer를 주입한 후, 먼저 진정된 동물을 이미징 챔버에 넣고 키네틱 연구를 수행해야 합니다. Lucifer 발현의 키네틱 곡선을 생성하기 위해 Lucifer 주입 후 약 5분 뒤에 첫 번째 이미지를 촬영하십시오. 최대 1시간 동안 3분 간격으로 이미지를 촬영하도록 시퀀스를 설정하십시오.제어 패널에서 시퀀스 설정 버튼을 클릭하십시오. 제어 패널에서 중간 빈닝(medium binning)과 자동 노출(auto exposure)부터 시작하여, 시퀀스의 첫 번째 생물 발광 이미지에 대한 설정을 지정하십시오.최적의 노출 정도를 결정하기 위해 시간 간격을 두는 것이 권장됩니다. 시퀀스 에디터에서 지연(delay) 버튼을 선택하고 각 획득 단계 사이에 3분으로 지연 시간을 지정하십시오. 시퀀스 에디터에서 추가(add)를 클릭하면 획득 파라미터가 표에 추가됩니다.곡선이 설정되면 시퀀스의 각 이미지에 대해 이 단계를 반복하십시오. 신호 강도와 시간의 관계를 그래프로 그려 가장 강력하고 정확한 신호를 얻어 최적의 이미징 시간을 결정할 수 있습니다. 동물은 이 곡선에서 나타난 바와 같이 Luciferian 주입 후 약 25분 뒤인, in vivo 광자 수가 가장 높은 시점에 이미징해야 합니다.실험 동물의 이미지를 획득하려면 획득 시간(acquisition time)의 자동(auto) 옵션을 사용하십시오. 이를 통해 소프트웨어가 bin 및 이미지 획득을 위한 최적의 시간을 결정할 수 있습니다. 프로그램 파일과 이후의 이미지 코멘트를 사용자 컴퓨터 디렉토리에 저장하십시오.3D 이미징을 시작하려면, 이미징 마법사를 사용하여 반딧불이(firefly) 리포터 프로브를 선택하십시오. 생물발광(bioluminescence) 딜릿 창에서 다음을 선택하면 획득할 6가지 스펙트럼 선택 항목이 화면에 나타납니다. 획득 시퀀스를 선택하면 표면 지형(surface topography) 탭의 각 설정에 따라 이미지가 촬영됩니다. 도구 팔레트에서 사진을 동물의 외곽선에 맞게 마스킹하십시오.동물의 표면 지형에 대한 재구성된 메쉬를 생성하려면, 도구 팔레트에서 DLI 3D reconstruction 탭으로 이동하여 신호 재구성에 적합한 이미지 획득 데이터를 선택하십시오. 조직 특성(tissue properties)에 muscle이, 광원 스펙트럼(source spectrum)에 firefly가 지정되어 있는지 확인하십시오. analyze 탭에서 reconstruct를 클릭하면 동물의 표면에 대한 3D 재구성과 그에 해당하는 신호원 재구성 결과가 나타납니다.이미지를 획득하고 저장한 후 데이터 분석을 시작할 수 있습니다. 찾아보기 버튼을 클릭하고 파일을 선택하여 프로그램 파일에 액세스하십시오. 이미지 정보는 이미지 정보 보기 항목에서 확인할 수 있습니다. 관심 영역 또는 ROI 도구 버튼을 선택하여 신호 강도를 정량화하십시오.photon을 선택하여 이미지가 photon 모드에서 분석되고 있는지 확인하십시오. 이미지 제어 패널의 왼쪽 상단에 있는 드롭다운 목록에서 유형 드롭다운 목록의 measurement ROI 버튼을 선택하고, 원하는 ROI 모양을 선택하십시오. 옵션에는 원, 사각형 또는 그리드가 포함됩니다.ROI 도형 선택 영역을 생물발광 신호가 포함된 영역으로 드래그하여 ROI 위치를 설정하십시오. 획득한 이미지에서 강도가 나타나는 모든 영역이 포함되었는지 확인하십시오. 마지막으로, 측정 버튼을 클릭하여 ROI의 신호 강도를 계산합니다.ROI 레이블이 표시됩니다. 세포가 luck 또는 luck two 유전자로 형질전환되었는지 여부와 관계없이, 수술 당일 생체 발광 영상을 통해 이식된 세포가 검출되면 성공적인 세포 이식이 이루어진 것으로 판단할 수 있습니다. 이 그래프는 albino C 57 black six 마우스 내에서의 GL 2 6 1 luck 종양 세포 성장을 추적한 것입니다. 생체 발광은 3일마다 측정되었으며, 이식 후 경과 일수 대비 in vivo 광자 수로 도식화되었습니다.사진은 다양한 시점에서의 생물 발광을 보여줍니다. 색상은 종양 세포 수에 상대적인 생물 발광 정도를 나타냅니다. 동물은 질환이 발생하거나 복지 상태가 악화될 경우 안락사시킵니다.이러한 분석의 표준 과정은 아니지만, 뇌를 적출한 후 Lucifer를 국소적으로 처리하여 ex vivo 이미지를 얻을 수 있습니다. 생체 발광 반응에는 TP가 필요하므로, 이는 동물을 희생시킨 직후에 수행해야 합니다. 이 그래프는 GL 2 6 1 lux 세포와 GL 2 6 1 L two 세포에서 유래한 종양으로부터 얻은 광자 수를 비교한 것입니다. 평균 5마리의 동물에서 얻은 결과는 L two 유전자가 더 높은 수준의 생체 발광을 제공함을 보여줍니다.다음 그림은 마우스의 골격 및 뇌와 공동 등록된 GL 2 6 1 L 2 세포의 두개 내 이식 3차원 재구성의 여러 뷰를 보여줍니다. 피하 주사와 복강 내 주사의 동역학적 비교 또한 수행되었습니다. Lucifer 주입 3분 후 마우스를 진정시켰으며, 생체 발광 동역학 곡선을 생성하기 위해 처음 한 시간 동안은 3분 간격으로, 그 이후에는 6분 간격으로 영상을 촬영하였습니다. 여기에서 보시는 바와 같이, 빨간색으로 표시된 피하 Lucifer 투여 경로가 검은색으로 표시된 복강 내 주사보다 우수하며, 동물을 촬영하기 위한 최적의 시간은 Lucifer 주입 후 약 25분입니다.숙련된 후에는 적절하게 수행될 경우 해당 수술 기법을 1시간 이내에 완료할 수 있습니다. 이 절차에 이어, 추가적인 의문을 해결하기 위해 MRI 또는 형광 이미징과 같은 다른 방법들을 수행할 수 있습니다. 예를 들어, 종양 주변에 부종이 있는지, 또는 종양 내부와 주변에서 어떤 다른 분자적 또는 생화학적 변화가 일어나고 있는지 등을 확인할 수 있습니다.이 영상을 시청한 후, 여러분은 마우스 신경교종 세포의 두개내 이식 및 3D 생체 내 영상 촬영 방법을 충분히 이해하게 될 것입니다.

intracranial-implantation-with-subsequent-3d-vivo-bioluminescent

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

루시페라제 - 수정된 인간의 뇌 종양의 xenografts은 종양 성장과 bioluminescence 이미징을 사용하여 치료에 대한 응답의 후속 모니터링과 athymic 생쥐에 intracranially 설정할 수 있습니다. 생존 분석과 함께, bioluminescence 모니터링 뇌 종양 치료를위한 고려되는 요법의 사전 임상 시험을위한 필수적인 연구 도구입니다.

Bioluminescence 이미징을 사용하여 종양 성장과 치료에 반응 이후 분석 Intracranial 뇌종양의 Xenografts 구축

hypoxia inducible 인자 - 1α 활동 Bioluminescence 이미징은 유방암 뇌 전이의 마우스 모델에서 종양 intracranial hypoxia 개발을 모니터에 적용됩니다.

유방암 뇌 전이의 종양 Hypoxia 역학 생체내의 Bioluminescence 이미징에서는 마우스 모델에서

우리는 누드 마우스 및 이후 일련의 뇌에 인간 glioblastoma multiforme의 세포의 정확한, stereotactic 주입을위한 통합 방법을...

Stereotactic Intracranial 주입 및<em&gt; 생체에</emGlioblastoma의 Multiforme의 마우스 모델 시스템에서 종양 Xenografts의&gt; 발광 생물 이미징

출처: Clark, AJ, et al. 교모세포종에 대한 면역적격 동물 모델의 생물발광 영상. J. Vis. 경험. (2016년)이 비디오는 루시페라아제 발현 종양 세포와 루시페린을 사용하여 종양 성장을 비침습적으로 정량화하는 면역 적격 마우스 모델에서 교모세포종 진행을 추적하기 위한 생물 발광 이미징을 보여줍니다.

교모세포종에 대한 면역적격 마우스 모델의 생물발광 이미징

우리는 종양의 성장하는 동안 재생에 일반적으로 생물 물리학 적 제약 조건을 되풀이되었습니다의 intravital 두 광자 현미경을위한 마우스에서 대뇌 피질의 소성을 glioblastoma의 모델을 설립했다. 종양 위의 두개골을 대체 만성 유리 창에는 두 개의 광자 현미경에 의해 시간이 지남에 따라 종양의 진행을 추적 할 수 있습니다.

소성을 Glioblastoma의 마우스 모델은 뇌 실질 물리적 제약 조건을 유지하고의 intravital 두 광자 현미경에 적합

GL261 신경교종 세포는 교모세포종의 유용한 면역 역량 동물 모델을 제공합니다. 이 프로토콜의 목표는 생체 내 생물 발광 이미징을 사용하여 두개내 종양 성장을 모니터링하기 위한 적절한 기술을 시연하고, 종양 면역학 연구를 위한 루시페라제 변형 GL261 세포의 유용성 및 교모세포종 치료를 위한 면역 요법 접근법을 검증하는 것입니다.

교 모세포종에 대한 면역 적격 동물 모델의 생물 발광 영상

종양 세포의 Orthotopic intracranial 주사 공부 뇌 종양 생물학, 진행, 진화, 그리고 치료 응답을 암 연구에 사용 되었습니다. 여기 선물이 형광 분자의 단층 촬영 종양 xenografts 실시간 intravital 이미징 및 종양의 정량화 임상 세포종 모델에서 대량 제공.

Vivo에서 이미징 세포종 Xenografts의 형광 분자 단층 촬영

레이저 미세 해부 (LMD)는 신경교종 이질성과 침략을 중재하는 통로를 밝히기 위하여 이용될 수 있는 민감하고 높게 재현가능한 기술입니다. 여기에서, 우리는 전사성 분석에 선행된 레이저 LMD를 사용하여 신경교종 조직에서 이산 지역을 격리하기 위하여 최적화된 프로토콜을 기술합니다.

종양 내 이질성, 온코스트림 및 침략의 공간 및 분자 특성화를 위한 신경교종 소구역의 레이저 캡처 미세 분해

우리는 마우스 뇌에서 루시페라아제-녹색 형광 단백질 (GFP)을 발현하는 이중 리포터 벡터로 형질도입된 인간 신경 전구 세포의 사다리꼴 이식을 기술한다. 이식 후, 루시퍼라아제 신호는 형광 현미경을 사용하여 뇌 절편에서 확인된 생체 내 생체 발광 및 GFP 발현 이식된 세포를 사용하여 반복적으로 측정된다.

Intracerebral 이식 및 마우스 뇌에서 인간 신경 전구 세포의 생체 내 생체 발광 추적

우리는 마우스 모델에서 형광 표지된 산화철 나노입자를 교모세포종에 전달하는 종양 전달에 대한 이광자 현미경에 대한 새로운 접근 방식을 제시합니다.

쥐 모델에서 교모세포종의 Two-Photon Intravital Microscopy

이 프로토콜의 목표는 연구자들에게 두개내 이식에 대한 고재현 기술을 제공하는 것입니다.

쥐에서 교모세포종 환자 유래 이종이식 세포주의 입체정위 두개내 이식

학습하세요 생체 내 발광 이미징을 이용한 C57BL/6 마우스 뇌종양 모델링 방법입니다. GL261 세포를 이용한 정량적 종양 추적 기술로 신경종양학 연구에 활용됩니다.

이후 3D로 Intracranial 주입 VIVO에서 발광 생물 이미징

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