Monitoring Kinase and Phosphatase Activities Through the Cell Cycle by Ratiometric FRET

Elvira Hukasova; Helena Silva Cascales; Shravan R. Kumar; Arne Lindqvist

doi:10.3791/3410

안달 Ratiometric하여 세포주기를 통해 키나제와 인산 가수 분해 효소 활동을 모니터링

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Biology

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Monitoring Kinase and Phosphatase Activities Through the Cell Cycle by Ratiometric FRET

안달 Ratiometric하여 세포주기를 통해 키나제와 인산 가수 분해 효소 활동을 모니터링

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13:38 min

January 27, 2012

DOI: 10.3791/3410-v

Elvira Hukasova¹, Helena Silva Cascales¹, Shravan R. Kumar¹, Arne Lindqvist¹

¹Department of Cell and Molecular Biology,Karolinska Institutet

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

안달 기반 기자 점점 라이브 세포 키나제와 인산 가수 분해 효소 활동을 모니터링하는 데 사용됩니다. 여기 대상 인산화에서 세포주기 종속 변화를 평가하기 위해 안달 기반의 기자를 사용하는 방법에 대한 방법을 설명합니다.

이 비디오에서는 Forrester Resonance Energy transfer 또는 fret을 사용하여 세포주기 전반에 걸쳐 kinase 및 phosphatase 활성을 모니터링합니다. 여기서 kinase one 또는 LK one activity probe와 같은 폴로는 한쪽 끝에 청록색 형광 단백질 CFP가 배치되고 다른 쪽 끝에 노란색 형광 단백질 YFP가 배치됩니다. 이 프로브는 U2 OS 셀로 형질 주입됩니다.

그런 다음 G two two M 전이 중 LK one 표적의 인산화 상태를 검사하기 위해 TRANSFECTED U2 OS 세포에 타임 랩스 형광 이미징을 실시합니다. CFP와 YFP가 가까이 있고 CFP가 여기되면 에너지가 YFP로 전달되고 YFP 입학을 감지할 수 있습니다. 그러나 프로브가 인산화되면 단백질의 확인 변화로 CFP와 YFP가 분리됩니다.

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