Murine 외면적인 림프절 외과

이 절차의 전반적인 목표는 마취된 마우스에서 림프절을 외과적으로 제거하는 것입니다. 이것은 먼저 림프절의 위치를 파악함으로써 이루어집니다. 림프절을 적출한 다음 절개 부위를 봉합합니다.

마지막으로, 실험 분석을 위해 단일 세포 현탁액을 얻을 수 있습니다. 궁극적으로 생존 가능한 림프구 집단은 유세포 분석으로 평가할 수 있습니다. 이 기술을 시각적으로 시연하는 것은 숙달하기 위해 림프절 위치 파악 및 제거를 확인해야 하기 때문에 매우 중요합니다.

마우스를 마취한 후 안연고를 바르고 부프레노르핀을 주입하고 발가락 꼬집음으로 진정을 확인한 다음 마우스를 옆으로 눕힙니다. 먼저 상완 림프절의 위치를 파악한 다음 절제할 부위를 면도합니다. 느슨한 털을 빗어낸 후 해당 부위에 소독제를 바르고 네 다리 뒤쪽을 약 5mm 정도 작게 절개합니다.

두 쌍의 집게를 사용하여 상완 림프절이 회색을 띠거나 주변 지방보다 더 어둡게 보일 수 있을 때까지 절개 부위를 늘립니다. 그런 다음 림프절을 덮고 있는 근막을 한 쌍의 집게로 꼬집습니다. 두 번째 겸자를 림프절 아래 가능한 한 멀리 놓고 주변 조직을 파괴하지 않고 막을 가볍게 당깁니다.

그런 다음 첫 번째 집게를 사용하여 근막을 부수고 림프절을 제거합니다. 림프절이 성공적으로 적출되면 림프절이 이전에 있던 자리에 핏자국이 나타납니다. 절제된 림프절을 등장성 용액에 넣고 가라앉으면 채취된 조직이 지방이 아닌 림프절임을 확인할 수 있습니다.

그런 다음 상처 부위에 털이 없는지 확인하고 절개 부위의 크기에 따라 피부 안쪽 2개를 붙인 후 1-2개의 클립으로 스테이플링하여 절개 부위를 봉합합니다. 이제 서혜부 림프절을 국소화하고 절제할 부위를 면도합니다. 느슨한 털을 빗어낸 후 해당 부위에 소독제를 바르고 복부 근처의 뒷발 위로 약 5mm 정도의 작은 절개를 만듭니다.

상완 림프절에 표시된 것처럼 두 쌍의 집게로 절개 부위를 연 후 주변 지방 조직에 자리 잡은 서혜부 림프절을 확인합니다. 그런 다음 방금 시연한 것처럼 두 쌍의 집게로 림프절을 제거합니다. 다시 말하지만, 림프절이 이전에 있던 곳에 나타나는 핏자국을 기록하여 림프절의 성공적인 적출을 확인한 다음 서혜부 림프절을 별도의 등장 용액 용기에 떨어뜨립니다.

모든 림프절을 채취한 후 쥐를 케이지에 넣고 쥐가 쉽게 먹을 수 있도록 젖은 음식을 추가합니다. 수술 후 약 6-8시간 후에 마우스에 통증이 없는지 확인합니다. 자세, 걸음걸이, 모피와의 상호 작용 및 털의 모양이 정상적인 건강한 쥐와 유사한지 주의 깊게 관찰하십시오.

마지막으로, 페트리 접시의 젖빛 슬라이드에 림프절을 눌러 림프절을 해리한 다음 튜브로 옮겨 단일 세포 현탁액을 얻습니다. 관심 세포 표면 항원에 대해 세포를 염색한 후 유세포 분석으로 세포를 분석합니다. 여기서, 표본 앞뒤로 산점도는 마취되거나 희생된 동물에서 채취한 림프절에 대해 표시됩니다.

두 산점도의 살아있는 림프구 게이트에 있는 세포의 프로필과 비율은 동일합니다. 림프절 수술이 세포를 채취하기에 적절한 기술임을 입증: 일단 숙달되면 림프절 수술은 제대로 수행될 경우 마우스 한 마리당 5분에서 10분 안에 완료될 수 있습니다.