Xpert MTB / 리프 시험과 폐 결핵 진단

이 절차의 전반적인 목표는 객담 또는 농축된 객담 침전물 내의 mycobacterium, tuberculosis 및 rifampicin 내성을 2시간 이내에 동시에 검출하는 것입니다. 먼저 간단하고 매우 효율적인 시료 오염 제거 프로토콜을 시작하십시오. 그런 다음 처리된 각 시료를 PCR 시약이 포함되어 있고 PCR 과정이 진행되는 일회용 전문가용 M-T-B-R-I-F 카트리지로 옮기십시오.

카트리지를 gene expert DX 시스템에 장착하고 mycobacterium tuberculosis와 rifampicin 내성을 동시에 검출하기 위한 ultra sensitive HEMI nested PCR을 시작합니다. 최종적으로, 검사 결과를 판독하여 의사에게 보고합니다. expert MTPR 분석은 폐결핵이 임상적으로 의심되며 회사 지침서에 명시된 기준을 충족하는 환자의 검체에 사용하는 것을 목적으로 합니다.

약물 치료의 효과를 모니터링하는 용도로는 사용해서는 안 된다는 점에 유의하십시오. 결정. 이제 저희 실험실의 기술자가 결핵 관리 국제 표준의 표준 2에 따라 프로토콜을 시연하겠습니다. 폐결핵 의심 환자로부터 세균학적 검사를 위한 검체 두 개를 채취하십시오.

각 검체별로 GeneXpert DX 시스템 모듈을 하나씩 할당하고, 각 카트리지에 검체 ID를 표시하십시오. 이제 각 샘플 분석을 위해, 멸균된 다른 전송 피펫을 사용하여 객담 1 mL를 15 mL 원추형 스크류 캡 튜브로 옮깁니다. M-T-B-R-I-F 샘플 시약 2 mL를 추가하십시오.

뚜껑을 단단히 닫습니다. 튜브를 10~20회 흔들어 줍니다. 그 다음, 튜브를 강하게 흔든 후 상온에서 5분 동안 세워 둡니다.

다시 실온에서 10분 동안 평형화합니다. 모든 검체 표본이 ED 상태이며 가래 덩어리가 보이지 않는지 확인하십시오. 먼저 각 가래 침전물 검체의 ID를 카트리지에 표시합니다. 각 침전물 검체에 M-T-B-R-I-F 검체 시약 1.5 milliliters를 첨가하고, 0.5 milliliters를 15 milliliter 원추형 스크류 캡 튜브로 옮깁니다. 뚜껑을 닫고 30초 동안 볼텍싱한 후, 튜브를 세운 상태로 5분 동안 둡니다.

볼텍스로 혼합한 후, 튜브를 세운 상태로 10분 동안 방치합니다. 액상화된 시료를 검사하여 가래 덩어리가 없는지 확인합니다. 튜브의 라벨을 해당 카트리지와 대조하여 맞춥니다.

테스트를 수행할 준비가 될 때까지 카트리지를 개봉하지 마십시오. 카트리지 뚜껑을 연 후 30분 이내에 사용하십시오. 멸균 전송 피펫을 사용하여 액화된 검체를 메니스커스가 최소 표시선 위에 올 때까지 흡입하십시오. 샘플을 카트리지에 천천히 주입하십시오.

카트리지 덮개를 닫습니다. 카트리지에 샘플을 첨가한 후 30분 이내에 테스트를 시작하십시오. 먼저 컴퓨터를 켜고, 그다음 데스크톱에 있는 기기를 켭니다.

GeneXpert DX 아이콘을 더블 클릭합니다. 시스템 소프트웨어에 로그인합니다. '테스트 생성(create test)'을 선택하여 스캔 카트리지 바코드 대화 상자를 엽니다.

그런 다음 샘플 ID를 입력하고 카트리지의 바코드를 스캔하십시오. 테스트 생성 창이 나타나면 'start test'를 클릭하고 대화 상자에 비밀번호를 입력하십시오. 이제 기기 모듈 도어를 열고 카트리지를 로드하십시오.

도어를 닫아 테스트를 시작하십시오. 녹색 표시등이 꺼지면 테스트가 완료된 것입니다. 시스템이 도어 잠금을 해제하면, 모듈 도어를 열고 카트리지를 제거하십시오.

마지막으로, 사용한 카트리지는 적절한 폐기물 용기에 폐기하십시오. 각 테스트 카트리지에는 Mycobacterium tuberculosis complex의 리팜피신 내성 QPCR을 위한 시약과 적절한 실험 대조군이 포함되어 있습니다. 프로브 체크 대조군은 카트리지 내 시약 재수화, PCR 튜브 충전, 프로브 무결성 및 염료 안정성을 검증합니다.

시료 처리 곡선은 표적 박테리아의 적절한 처리를 확인하기 위한 양성 대조군 역할을 하며, PCR 억제제의 존재 여부 또한 나타냅니다. 프라이머는 보존된 야생형 서열과 RIF 내성과 관련된 RPOB 유전자의 핵심 영역 내 돌연변이를 구별하도록 설계되었습니다. CT 값은 시험 시료 내 표적 M-T-B-D-N-A 템플릿의 농도에 반비례합니다.

테스트 결과 대화 상자에서 이 환자 검체에서 MTB 표적 DNA는 검출되었으며 RIF 내성은 검출되지 않은 것으로 결론지었습니다. MTB 표적 DNA는 리팜피신 내성 징후와 함께 낮은 수준으로 검출되었습니다. SPC 및 PCC 두 대조군 모두 지정된 허용 기준을 충족합니다.

SPC가 음성이며 PCR 생성물이 검출되지 않았으므로, 이 분석 결과는 무효로 간주됩니다. 시료가 적절하게 처리되지 않았거나 PCR 억제제가 작용했을 가능성이 있습니다. 분석을 재수행하십시오.

비디오 테스트에서 확인하셨듯이, 이 방법은 표준화되어 있으며 적절한 수준의 실험실 인프라와 교육만으로 충분합니다. 따라서 저는 전문가용 M-T-B-R-F 분석법이 결핵과 리팜피신 내성 모두에 대해 표준화되고 민감하며 매우 특이적인 진단 검사를 보편적인 현장 진단 환경에 제공할 수 있는 잠재력을 가지고 있다고 믿습니다.