Name: 늦은 배아 및 신생아 쥐의 측정 왼쪽 심실 압력 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: 배우세요 늦은 배아 및 신생아 쥐의 좌심실 압력 측정 방법을 초음파 유도 기술로. 이 기술은 심장 생리학 연구에 정확하고 재현 가능한 데이터를 제공합니다.

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이 작품은 NIH 보조금 HL087653 및 HL105314에 의해, 부분적으로 재정 지원되었다. 방법 중 일부는 의학의 워싱턴 대학 대학원에서 박사 로버트 Mecham의 연구실에서 개발되었습니다.

1. 초음파와 압력 시스템 <ol><li> 제조 업체 지침 (Vevo 770, Visualsonics)에 따라 초음파 시스템을 시작합니다. 증류수와 함께 초음파 시스템에 연결 - 적절한 프로브 (P7 = 모델 708, 연령&gt; P7 = 모델 707B 연령 E18)를 입력합니다. LV 꼭대기가 분사 암으로 지적되고 있도록 이미징 플랫폼에 탑재된 마우스 LV 긴 축보기를 취득하는 데 필요한 대략적인 방향에서 조절 가능한 스탠드에 프로브를 배치합니다. </li><li> 압력 시스템은 유체 가득한 압력 변환기, 브리지 증폭기, 데이터 수집 시스템 및 데이터 레코딩 소프트웨어 (LabChart)으로 구성되어 있습니다. 연결은 세 방향 stopcocks, 튜브, luer 잠금 및 호스 barbs 구성되어 있습니다. 20 ML의 주사기는 한쪽 끝에 홍조 10 % heparinized 염분으로 가득합니다. 다른 한쪽은 바늘에 연결하고 3 ML의 주사기 본체는 사출 팔 (그림 1)에 바늘 튜브를 개최하는 케이스로서 사용할 수 있도록 수정됩니다. </li><li&gt;는 혈압계와 압력 변환기 시스템을 보정. </li><li> 초음파 시스템의 분사 팔에 바늘 튜브와 케이스를 탑재합니다. 이미징 플랫폼의 대략적인 높이에서 링 스탠드에서 압력 변환기를 고정. 바늘 튜브로 - 마우스의 시대 (P3 = 30G, 연령&gt; P3 = 25G 세 E18)에 적합한 바늘을 첨부합니다. 작은 바늘은 쉽게, 가슴 벽을 통해 진행하고, 느린 응답 시간이 더 어렵습니다 막힌 얻을. 따라서 LV 루멘에 맞는 가​​장 큰 바늘 크기는 각각의 연령에 사용됩니다. </li><li> 이미징 플랫폼에서 초음파 젤의 마운드를 놓고 조심스럽게 바늘이 이미징 프로브 (그림 2)의 중심이 아래 겔에 직접 진출 할 수 있도록 조절 가능한 스탠드를 사용하여 프로브를 줄입니다. 바늘은 지금까지 충분히 프로브 이하이어야하지 펑크 프로브 커버하지만, 프로브 초점 심도 내에있을만큼 가까운 곳에 있습니다. 필요하다면 그것이 일에 남아 있도록, 주사 바늘을 손으로 구부 러 수그 여행 내내 전자 정확한 비행기. </li><li> 정렬을 유지하는 것은, 바늘을 접어야 및 이미징 플랫폼에 마우스를 배치 이미징 프로브를 올립니다. 제보를 입력 수있는 젤을 제거하기 위해 바늘을 플러시. </li></ol> 2. 마우스 준비 <ol><li> 이 프로토콜에 표시된 모든 메서드 기관 동물 케어 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 1.5 % isoflurane의 지속적인 흡입에 의해 - 시간 초과 임신 어머니 (E18) 또는 신생아 마우스를 (20 P1) 마취. 튜브는 초기 신생아 마우스 (- 15 P1)의 작은 머리를 수용하기 위해 표준 코 콘에 삽입하실 수 있습니다. </li><li> LV 꼭대기는 사출 팔을 향해 가리키고있는 지느러미 decubitus 위치에 초음파 시스템의 이미징 플랫폼에 마우스를 고정합니다. 임신한 어머니의 경우 첨부된 ECG 검출기와 심장 박동을 모니터하고 체온의 피드백 제어를 위해 직장 온도계를 삽입하는 초음파 젤를 적용합니다. 신생아 생쥐는 너무 작아서 F입니다또는 이러한 감지기, 그래서 심장 박동 압력을 측정하는 동안 감시하고 있으며 체온은 외부 가열 램프로 유지됩니다. </li><li> depilatory 크림과 함께 젊은 마우스의 임신 어머니 가슴 복부에서 머리카락을 제거합니다. 신생아 생쥐 (P1 - 10)에 머리 제거를 요구하지 않습니다. </li><li> 임신 어머니, 해부 가위과 곡선 집게를 사용하여 복부를 엽니다 했네요. 거즈 한 자궁 나팔과 장소는 따뜻한 생리 식염수로 moistened 외면 화하다. 조심스럽게 초음파 프로브를 사용하여 LV의 parasternal 긴 축보기를 얻을 수있는 적절한 위치로 배아를 조작. 다른 자궁 경적을 externalizing 전에이 쪽에서 모든 배아의 압력을 측정합니다. 모든 배아 따뜻한 식염수의 정기 더불어 함께 촉촉한 엄마의 복부를 유지. </li></ol> 3. 압력 측정 <ol><li> 장소는 배아 또는 신생아 마우스, degassed 초음파 젤 prewarmed. D 적이 없어 신생아 쥐epilated 남은 초음파 젤이 커플링을 향상시키기 위해 적용되기 전에 자신의 가슴에 문질러 초음파 젤의 소량이 있어야합니다. 이미징 프로브를 낮추고 최적의 parasternal LV 긴 축보기를 얻기 위해 이미징 플랫폼의 각도를 조정합니다. 바늘 정렬이 손실되기 때문에 프로브의 각도를 조정하지 마십시오. </li><li> 초음파 화면에 LV 이미지를 모니터링하면서 그것이 프로브의 바닥 가까이 때까지 천천히 바늘을 전진. 정렬 교대를 해결하기 위해, 필요한 경우 바늘과 프로브 위치를 조정합니다. 부드럽게 식염수 주사를 플러시. 녹화 압력 데이터를 시작하고 LabChart 소프트웨어와 압력 변환기를 제로. 변환기는 온도와 위치와 드리프트 때문에 각 마우스의 압력을 측정하기 전에 그것을 비우는 것이 중요합니다. </li><li> 천천히가 초음파 이미지의 가장자리에 볼 수있을 때까지 바늘을 진행했지만 아직 LV 인치 바늘 위치를 조정, 필요한 경우에 LV를 입력하는 방법꼭대기. 바늘의 깨끗한 이미지를 유지하기위한 프로브 위치를 필요한 경우 조정합니다. 압력 데이터를 기록 및 초음파 이미지의 바늘 위치를 모니터링하면서 LV 루멘 (그림 3)에 바늘을 전진. 압력 변환기의 타악기 녹음의 시작 LV 루멘 (그림 4) 내부의 위치를​​ 확인. </li><li> 바늘은 LV 루멘 것으로 나타나지만, 압력 증가 (약 5-10 μL 볼륨) 발견하기 전에는 압력 녹음, 주사기 플런저에 가벼운 수돗물과 수세식 타악기가 아닌 경우. 이것은 정확한 결과를 방해할 수있는 나막신을 선택 취소해야합니다. 압력 수치가 여전히 타악기가 아닌 경우 바늘이 정확한 평면 위나 아래에있을 수도 있고 LV 루멘에 삽입되지 않습니다. 다시 식염수, 그리고 사전을 잔뜩 가지고, 바늘을 접어야합니다. 타악기 판독이 아직 취득하고 있지 않은 경우 다음 마우스로 이동합니다. 각각의 마우스에 대한 새 바늘을 사용합니다. </li><li> 성공적인 압력 판독 값은 75 %에서 구할 수 있습니다태아 및 신생아 마우스하려했습니다. 신호는 5 소요됩니다 - 심장 요금은 예상보다 훨씬 다를 경우 십분 각각의 마우스에 대한 압력 데이터는 포함하지 않아야합니다 (그림 5A). 심박 수는 심장 혈관 대책에 큰 효과를 가지고 있으며, 변경된 심장 요금은 심장 조난 지표입니다. 배아 고통은 보통 1 발생 - 1.5 시간 자궁 첫 externalization 후하므로 속도가 전체 쓰레기의 압력을 측정하는 것이 중요합니다. </li></ol> 4. 대표 결과 표시된 모든 결과 C57BL6J 마우스위한 것입니다. 그림 3에서 P1 마우스에 대한 LV 루멘의 바늘의 이미지입니다. 바늘이 찔린 가슴 벽에 필요하고 작은 LV 루멘에 액세스할 수 있지만 그것은 크게 압력 시스템의 응답 시간을 증가시킵니다. 압력의 대략적인 단계 증가를 수동으로 시스템에 적용되면, 최대 압력의 67 %에 도달하는 시간은 0.067 SE입니다전용 (압력 단계를 적용하는 실시간 가능성이 높습니다 나타내는) 튜브와 C, 30 G 바늘로 25 G 바늘과 0.529 초와 0.105 초. 최대 압력에 도달의 지연은 그림 4A와 4C에 표시된 전체 tracings에서 볼 수 있습니다. 응답 시간은 30G 바늘로 느려질 수 있지만 심장 박동이 쥐를 5의 연령과 함께 증가하기 때문에 파형은 더, 배아 및 초기 신생아 단계에서 캡처됩니다. 이러한 제한에도 불구하고, 수축기 압력은 진정한 LV diastolic (최소) 압력이 제로임을 가정하고 계산하고, 수축기 (최고) LV 압력은 두 번 정상 상태에서의 수치 (그림 4B와 4D에서 결정된 평균 LV 압력은 수 ) 6. 이것은 일반적으로 수축기 LV과 동맥 압력이 동일하다고 가정합니다. E18과 P14 사이에 다양한 연령대의 심장 속도를 측정하고 계산 LV 압력은 그림 5에 표시됩니다. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig1.jpg" /> 그림 1. 첨부된 세 방향 stopcocks, 남성 (M)과 여성 (F) luer 잠금 장치 연결, 호스 barbs, 튜브, 주사기와 바늘로 압력 변환기의 이미지. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig2.jpg" /> 그림 2. 이미지 이미징 프로브 (A)로 바늘을 정렬하도록 설정합니다. 영상 플랫폼은 마우스의 LV 꼭대기는 사출 팔을 마주되도록 회전이다. 프로브 LV 긴 축 이미지를 얻기 위해 필요한 대략적인 방향으로 조절 가능한 스탠드에 마운트됩니다. 바늘 튜브 케이스가 사출 팔에 장착하고 있습니다. 바늘은 이미징 프로브 (B)와 관련하여 적절한 각도와 수직 및 수평 위치를 결정하기 위해 이미징 플랫폼에 초음파 젤의 마운드에 진출한다. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig3.jpg" /> 그림 3. 바늘 (N)의 이미지는 가슴 벽 (CW)를 통해 진출하고P1 마우스의 LV 루멘으로. 스케일 바는 = 0.1 mm. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig4.jpg" /> 그림 4. 바늘이 E18 ()과 P14 (C) 마우스의 LV에 들어가면서 예제 타악기 압력 판독 값. 바늘이 부착되어있는 시스템의 응답 시간에 따라 일정한 상태에 도달의 지연이있다. 안정된 상태에서 신호 줌 전망은 B와 최소 E18 LV 압력이 제로 근처에있는 것으로 D. 참고로 표시되지만, 제로에서 최대 압력의 전체 파형은 P14 생쥐의 높은 심장 속도로 기록되지 않을 수 있습니다. 평균 압력이 일정한 상태를 수치로 측정되고 그것은 LV 수축기 혈압 = 2는 x 측정된 압력을 의미하는 것으로 간주됩니다. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig5.jpg" /> 그림 5 측정 심장 속도 ()와 (B) E18에 대한 계산 수축기 LV 압력 -. P14 마우스. N P3에 대한 P1, 22를위한 E18, 5 = 7, P14을위한 P7 23 및 16 <suP&gt; 5-7.

<ol><li>Ji, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Onset+of+cardiac+function+during+early+mouse+embryogenesis+coincides+with+entry+of+primitive+erythroblasts+into+the+embryo+proper%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Onset of cardiac function during early mouse embryogenesis coincides with entry of primitive erythroblasts into the embryo proper.</a> Circ. Res. 92 (2), 133-135 (2003).</li>
<li>Ishiwata, T., Nakazawa, M., Pu, W. T., Tevosian, S. G., Izumo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+changes+in+ventricular+diastolic+function+correlate+with+changes+in+ventricular+myoarchitecture+in+normal+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Developmental changes in ventricular diastolic function correlate with changes in ventricular myoarchitecture in normal mouse embryos.</a> Circ. Res. 93 (9), 857-865 (2003).</li>
<li>Huang, Y., Guo, X., Kassab, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axial+nonuniformity+of+geometric+and+mechanical+properties+of+mouse+aorta+is+increased+during+postnatal+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Axial nonuniformity of geometric and mechanical properties of mouse aorta is increased during postnatal growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 290 (2), H657-H664 (2006).</li>
<li>Ishii, T., Kuwaki, T., Masuda, Y., Fukuda, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+development+of+blood+pressure+and+baroreflex+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Auton.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Postnatal development of blood pressure and baroreflex in mice.</a> Auton. Neurosci. 94 (1-2), 34-41 (2001).</li>
<li>Le, V. P., Knutsen, R. H., Mecham, R. P., Wagenseil, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+aortic+diameter+and+compliance+precedes+blood+pressure+increases+in+postnatal+development+of+elastin-insufficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Decreased aortic diameter and compliance precedes blood pressure increases in postnatal development of elastin-insufficient mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. , (2011).</li>
<li>Wagenseil, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+vessel+elasticity+alters+cardiovascular+structure+and+function+in+newborn+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Reduced vessel elasticity alters cardiovascular structure and function in newborn mice.</a> Circ. Res. 104 (10), 1217-1224 (2009).</li>
<li>Wagenseil, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+elastin+to+aortic+development+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">The importance of elastin to aortic development in mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299 (2), H257-H264 (2010).</li>
<li>Ramirez, F., Sakai, L. Y., Rifkin, D. B., Dietz, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+microfibrils+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Mol.+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Extracellular microfibrils in development and disease.</a> Cell. Mol. Life Sci. 64 (18), 2437-2446 (2007).</li>
<li>Li, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastin+point+mutations+cause+an+obstructive+vascular+disease%2C+supravalvular+aortic+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">Elastin point mutations cause an obstructive vascular disease, supravalvular aortic stenosis.</a> Hum. Mol. Genet. 6 (7), 1021-1028 (1997).</li>
<li>Roth, D. M., Swaney, J. S., Dalton, N. D., Gilpin, E. A., Ross, J. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+anesthesia+on+cardiac+function+during+echocardiography+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Impact of anesthesia on cardiac function during echocardiography in mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282 (6), H2134-H2140 (2002).</li>
<li>Phoon, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+tools+for+the+developmental+biologist%3A+ultrasound+biomicroscopy+of+mouse+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr.+Res%22%5BJournal%5D)">Imaging tools for the developmental biologist: ultrasound biomicroscopy of mouse embryonic development.</a> Pediatr. Res. 60 (1), 14-21 (2006).</li>
</ol>

관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.

여기에 제시된 프로토콜은 후반 배아와 초기 신생아 생쥐의 LV 압력을 측정하는 방법을 제공합니다. 이 프로토콜의 주요 한계는 압력 시스템의 시간적 해상도입니다. 그것이 변환기에 바늘을 통해 LV에서 여행, 오로지 압력 값이 기록될 수 의미로 압력 신호가 감쇠됩니다. 댐핑은 가능한 큰 바늘을 사용하여 최소화 할 수 있지만, 바늘은 다른 노인 생쥐에 대한 LV 루멘에 부합해야합니다. diastolic 압력이 제로로 approximated 수 있으므로, LV 및 결과적으로 동맥 수축기 혈압은 평균 LV 압력 측정으로부터 계산하실 수 있습니다. 추가 동맥 변수 (즉, 펄스 압력) 이상이 될 것이지만, 수축기 압력은 마우스 개발하는 동안 심장과 심장 혈관 시스템에 진력 세력에 대한 유용한 정보를 제공합니다. 이 프로토콜의 장점은 높은 throughpu의 용이성, 속도 측정 repeatability입니다다양한 마우스 genotypes이나 치료 프로토콜의 t 비교. 중요한 발달 단계에 수축기 혈압을 측정함으로써, 우리는 기계적인 세력과 인...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 / 장비의 명칭 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 고해상도의 초음파 시스템 </td><td> Visualsonics </td><td> Vevo 770 </td><td> 또는 기타 적합한 초음파 시스템 </td></tr><tr><td> 고주파 초음파 프로브 </td><td> Visualsonics </td><td> 708과 70​​7B </td><td></td></tr><tr><td> 이미징 플랫폼과 분사 암 </td><td> Visualsonics </td><td> 이미징 역이 </td><td> ECG와 플랫폼의 온도 피드백 제어로 </td></tr><tr><td> 압력 변환기 </td><td> 광고 인 스트 루먼트 </td><td> MLT 844 </td><td></td></tr><tr><td> 브리지 증폭기 </td><td> 광고 인 스트 루먼트 </td><td> ML221 </td><td></td></tr><tr><td> 데이터 수집 시스템 </tD&gt; <td> 광고 인 스트 루먼트 </td><td> ML866 </td><td></td></tr><tr><td> 데이터 레코딩 소프트웨어 </td><td> 광고 인 스트 루먼트 </td><td> LabChart </td><td></td></tr><tr><td> 반지는 서서 클램프 </td><td> 다양한 공급 업체 </td><td></td><td> 측정하는 동안 압력 변환기를 개최하려면 </td></tr><tr><td> luer 연결과 3 방향 stopcocks, 남성 잠금 </td><td> 콜 Parmer </td><td> 30600-02 </td><td></td></tr><tr><td> 16분의 1 &quot;아이디 Tygon 튜빙 </td><td> 콜 Parmer </td><td> 06,408 </td><td></td></tr><tr><td> 남성과 여성 luers W / 16분의 1 &quot;호스 미늘 </td><td> 콜 Parmer </td><td> 45510-50 45510-00 </td><td></td></tr><tr><td> 각 끝에 남성과 여성 luer 24 &quot;튜빙 </td><td> 콜 Parmer </td><td> 30600-60 </td><td></td></tr><tr><td> 세 및 10 ML의 주사기 </td><td> BD Biosciences </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 30 25G 바늘 </td><td> BD Biosciences </td><td></td><td> 길이 1.5 인치 </td></tr><tr><td> 빅 벤 압력계 </td><td> Riester </td><td> 1456-100 </td><td></td></tr><tr><td> 식염 </td><td> 다양한 공급 업체 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 헤파린 </td><td> 다양한 공급 업체 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 초음파 젤 </td><td> 파커 </td><td> Aquasonic 100 </td><td></td></tr><tr><td> 헤어 리무버 로션 </td><td> 나이르 </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

늦은 배아 및 신생아 쥐의 측정 왼쪽 심실 압력

Measuring Left Ventricular Pressure in Late Embryonic and Neonatal Mice

혈압은 척추 동물의 배아 및 출생 후의 발달 동안 대폭 증가합니다. 마우스에서 피가 흘러 배아 일 (E) 8.5 1 시경 첫번째 감지입니다. 수축기 왼쪽 심실 (LV) 압력 E9.5에서 2 mmHg와 E14.5 2시 11 mmHg이다. 갈비와 피부가 완전히 발달하지 않기 때문에 이러한 중간 배아 단계에서, LV는 침략 압력 측정을위한 가슴 벽을 통해 명확하게 볼 수 있습니다. E14.5과 출산 (약 E21) 사이 이미징 방법은 LV를 보려면 사용해야합니다. 35 3 - 출생 후의 날 (P) 2 70 mmHg - 출생 후 30 일부터 동맥 압력 증가를 의미. P20 이외에도, 동맥 압력은 고체 카테터 (예 : 밀라 나 Scisense)로 측정할 수 있습니다. 사용자는 유체 가득한 압력 트랜스 듀서 3 또는 유리 micropipettes AT &amp; T에 부착된 플라스틱 카테터를 뽑아와 P20 전에 이러한 카테터는 마우스 동맥과 동맥 압력을 개발하기에는 너무 크다는 측정되어야합니다서보 NULL 압력 트랜스 듀서에 4 ached. 우리의 최근 작품은 혈압의 가장 큰 증가 5-7 생쥐 초기 출생 후의 기간 후반 배아 동안 발생하는 것으로 나타났습니다. 혈압이 크게 증가 개발 동맥의 평활근 세포 (SMC) 표현형 영향을 미치는 중요한 mechanotransduction 이벤트를 트리 거할 수 있습니다. 개발 동맥의 기계적 성질이 세포외 기질 단백질 (즉, Marfan 증후군 8 Supravalvular 대동맥 협착증 9) 결함에 의해 훼손되는 인간의 질병에서,이 기간 동안 혈압의 급속한 변화 mechanotransduction의 변경을 통해 질병 표현형 및 심각도에 기여할 수있다 신호. 따라서 그것은 인간 질병의 생쥐 모델에서 후반 배아와 신생아 기간 동안의 혈압 변화를 측정할 수있을 것이 중요합니다. 우리는 후반에 측정 LV 압력에 대한 방법을 설명배아 (E18)와 초기 출생 후의 (P1 - 20) 생쥐. 유체 가득한 압력 변환기에 부착된 주사 바늘을 초음파지도하에 LV에 삽입됩니다. 케어는 특히 배아 쥐를 위해 실험 프로토콜 동안 정상적인 심장 기능을 유지하기 위해 가져옵니다. 대표적인 데이터가 제시되고 프로토콜의 제한 사항이 논의된다.

태아 및 신생아 생쥐의 측정 왼쪽 심실 압력 (LV)이 설명되어 있습니다. 압력은 초음파지도하에 LV로 유체 가득한 변환기에 연결된 바늘을 삽입하여 측정됩니다. 케어는 실험 프로토콜 동안 정상적인 심장 기능을 유지하기 위해 이동해야합니다.

척추동물의 배아 및 출생 후 발달 과정 동안 혈압은 유의미하게 상승합니다. 마우스의 경우, 혈류는 처음으로 ...

이 절차의 전반적인 목적은 배아 후기 및 신생 마우스의 좌심실(LV) 압력을 측정하는 것입니다. 먼저, 장비를 준비합니다. 압력 트랜스듀서에 연결된 바늘을 초음파 프로브와 정렬시켜야 합니다.그런 다음 마우스를 준비하고 초음파를 통해 LV를 영상화합니다. 이어서 바늘을 LV 루멘 내부로 삽입하여 박동성 압력을 측정하고 기록합니다. 최종적으로, 이러한 초음파 유도하 액체 충전 카테터 삽입술을 사용하여 배아 후기 및 신생아 초기 마우스의 수축기 압력을 확인합니다.서보(servo), 무압력 측정 또는 고체 상태 카테터와 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 배아 후기 및 신생 마우스의 압력을 견고하고 반복 가능한 방식으로 측정할 수 있다는 점입니다. 일반적으로 이 기술을 처음 접하는 사용자는 배아가 회전하기 때문에 배아낭 내에서 배아의 방향을 유지하는 데 어려움을 겪을 수 있습니다. 초음파 프로브를 적용할 때, 연구 대상 마우스의 단계에 따라 적절한 프로브를 선택하고 증류수를 채웁니다.초음파 시스템의 조절 가능한 스탠드에 프로브를 배치합니다. 플랫폼에 고정된 마우스의 LV apex(좌심실 첨부)가 주입 암을 향하도록 스탠드를 조절하여 LV long axis view(좌심실 장축 뷰)가 확보되게 합니다. 압력 시스템은 액체가 채워진 압력 트랜스듀서, 브리지 앰플리파이어, 데이터 수집 시스템 및 랩 차트로 구성됩니다.소프트웨어 패키지와 10% 헤파린 식염수가 채워진 20 milliliter 주사기를 사용하여 튜빙을 세척합니다. 튜빙 내부나 트랜스듀서 위에 기포가 갇히지 않도록 주의하십시오. 트랜스듀서로 연결되는 튜빙은 3방향 스톱콕, 루어 락 및 호스 바브로 연결됩니다.마노미터를 사용하여 압력 트랜스듀서 시스템을 교정한 후, 니들 튜빙과 케이싱을 주입 암에 장착하십시오. 마노미터를 튜빙을 주입 암에 고정할 수 있는 케이싱으로 교체하십시오. 이 케이싱은 단순히 3 mL 시린지 몸체를 변형한 것입니다.압력 변환기를 링에 고정합니다. 폐쇄를 방지하기 위해 이미징 플랫폼과 대략 같은 높이에 둡니다. 바늘 튜브에 가능한 가장 큰 크기의 바늘을 부착하고, 몇 방울이 나올 때까지 헤파린 처리된 식염수를 더 주입합니다.바늘을 다시 뺍니다. 튜브 내부나 트랜스듀서 위에 기포가 갇혀 있지 않은지 확인하십시오. 이제 이미징 플랫폼 위에 초음파 젤을 듬뿍 바릅니다.3 mL 시린지 본체에서 바늘을 회전시켜 바늘의 경사면이 위를 향하게 합니다. 그런 다음 조절 가능한 스탠드를 사용하여 바늘이 젤 내부로 직접 진입할 수 있도록 프로브의 위치를 조심스럽게 맞춥니다. 이미징 프로브의 중심 아래에서, 바늘은 프로브 커버를 뚫지 않을 만큼 충분히 아래에 위치해야 하지만, 프로브의 초점 거리 내에 들어올 만큼 충분히 가까워야 합니다.필요한 경우, 바늘이 이동하는 동안 올바른 평면을 유지하도록 손으로 구부릴 수 있습니다. 정렬 상태를 유지하며 바늘을 후퇴시키고 이미징 프로브를 들어 올려 이미징 플랫폼 위에 마우스를 배치합니다. 마우스 마취를 진행하기 전에 바늘을 교체하십시오.1.5% Isofluorane을 지속적으로 흡입시켜 시기가 맞춘 임신한 어미 쥐 또는 신생 쥐를 마취합니다. 신생 쥐의 작은 머리에 맞추기 위해 표준 노즈콘에 튜브를 삽입할 수 있습니다. 신생 쥐의 경우, LV apex가 주입 암(injection arm)을 향하도록 하여 초음파 시스템의 영상 플랫폼에 배와 등 중 등이 바닥에 닿는 앙와위(dorsal decubitus position)로 고정합니다. 신생 쥐의 경우, 외부 가열 램프를 사용하여 체온을 유지합니다.임신한 마우스는 더 많은 준비 과정이 필요합니다. 부착된 ECG 검출기와의 결합을 위해 사지에 초음파 젤을 도포하고 심박수를 모니터링합니다. 피드백을 위해 직장 온도계를 삽입합니다.체온 조절. 제모 크림을 사용하여 복부의 털을 제거하고 물로 헹굽니다. 해부 가위와 곡선 핀셋을 사용하여 복부를 절개합니다.자궁각 하나를 외부로 노출시켜 따뜻한 식염수를 적신 거즈 패드 위에 놓습니다. 이 절차 전반에 걸쳐 모든 배아와 모체 복부를 습윤하게 유지하십시오. 따뜻한 식염수를 주기적으로 보충하면서, 초음파 프로브를 사용하여 LV의 흉골 옆 장축 뷰(parasternal long axis view)를 얻을 수 있도록 배아를 적절한 위치로 조심스럽게 조작합니다. 이때 거즈 롤을 사용하여 배아의 방향을 유지하는 데 도움을 받을 수 있습니다.한쪽 자궁각에 있는 모든 배아의 압력 측정을 마친 후, 다른 쪽 자궁각에서 동일한 과정을 반복하십시오. 먼저 미리 데워둔 Degas 초음파 젤을 배아 또는 신생 마우스 위에 도포합니다. 이미징 프로브를 내리고 이미징 플랫폼의 각도를 조절하여 최적의 흉골 옆 좌심실(LV) 장축 뷰를 확보하십시오.바늘의 정렬이 흐트러질 수 있으므로 프로브의 각도를 조정하지 마십시오. 초음파 화면으로 LV 영상을 모니터링하면서 바늘이 프로브 하단에 가까워질 때까지 천천히 전진시킵니다. 정렬이 어긋난 경우, 필요에 따라 바늘과 프로브의 위치를 조정하여 이를 수정하십시오.신생 생쥐의 이미지는 배아로는 달성하기 어려운 lv의 이상적인 방향을 보여줍니다. 압력 데이터 기록을 시작하십시오. 바늘을 생리식염수로 부드럽게 세척하고, 20 milliliter 주사기 및 대기로 연결되는 스톱콕을 닫으십시오.압력을 관찰하십시오. 바늘에 가해지는 압력을 최소화할 수 있도록 프로그램 설정을 높이십시오. 바늘이 초음파 영상의 가장자리에 보이지만, 아직 lv 내에는 들어가지 않을 때까지 천천히 전진시키십시오.필요한 경우, 바늘의 위치를 조정하여 심첨부(apex)를 통해 LV로 진입하십시오. 바늘의 이미지를 선명하게 유지하기 위해 필요한 경우 프로브의 위치를 조정하십시오. 압력 데이터를 기록하고 초음파 이미지로 바늘의 위치를 모니터링하면서 바늘을 LV 루멘 내부로 전진시키십시오.압력 변환기에서 박동성 기록이 시작되면 좌심실(LV) 내강 내에 위치했음이 확인됩니다. 바늘이 좌심실 내강에 있는 것으로 보이지만 압력 기록이 박동성으로 나타나지 않는 경우, 압력 증가가 감지될 때까지만 시린지 플런저를 가볍게 두드려 바늘을 세척하십시오. 압력 측정 중 심장의 상태가 변하는 것을 방지하기 위해 액체 세척량은 최소한으로 유지해야 합니다.압력 측정값이 여전히 맥동성으로 나타나지 않는다면, 바늘이 적절한 평면보다 높거나 낮게 위치하여 LV 루멘 내로 삽입되지 않았을 수 있습니다. 바늘을 후퇴시킨 후 식염수로 세척하고 다시 전진시키십시오.맥동성 측정값이 여전히 얻어지지 않는 경우, 다음 마우스로 이동하며 매번 새로운 마우스에는 항상 새 바늘을 사용하십시오. 실험 기간 동안 배아와 신생 마우스의 스트레스를 최소화하기 위해 전체 과정은 가능한 한 신속하게 수행해야 합니다. C 57 Black six J 마우스의 심실압은 E 18 마우스에서 측정되었습니다.예상한 바와 같이, 바늘이 좌심실(LV) 외부에 있을 때는 압력이 0에 가까웠으며, P 14 단계의 고령 마우스의 경우 바늘이 좌심실(LV) 내부에 있을 때 맥동성 압력이 측정되었습니다. 압력 크기가 더 커지고 심박수가 높아짐에 따라 압력 읽기 값이 감쇄되었습니다. 심박수는 E 18에서 P 14 사이의 다양한 연령대에서 측정된 맥동성 압력 읽기의 빈도를 통해 결정되었습니다.심박수를 측정하고 좌심실(LV) 수축기 혈압을 계산했습니다. 이 과정을 수행하는 동안, 주기적으로 배아에 수분을 공급하고 모체의 상태를 확인하는 것이 중요합니다. 이 기술은 심혈관 생리학 연구자들이 성장 중인 생쥐의 혈압 변화를 탐구할 수 있는 길을 열어줍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

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