인간의 기본 섬유 아세포의 유도를위한 피부 펀치 생검 절편 문화

피부 생검 처리 비디오 자습서에 오신 것을 환영합니다. 조직 배양 후드에 필요한 재료를 배치하는 것으로 시작합니다. 후드에 들어가는 모든 물체는 70% 에탄올을 뿌리고 닦아내야 하며, 각 벽에 0.1% 젤라틴 1밀리리터의 PI 번호, 날짜, 이니셜 및 미디어 유형이 적힌 플레이트에 라벨을 붙이고 바닥이 젤라틴으로 코팅되도록 플레이트를 빙빙 돌려야 합니다.

사용하기 전에 플레이트를 한 시간 동안 그대로 두십시오. 첫 번째 단계는 튜브에서 절단 접시로 생검을 옮기는 것입니다. 절단 접시는 생검이 해부될 10cm 페트리 플레이트의 뚜껑입니다.

절단 접시 중앙에 1.5ml의 DMEM 20%FBS를 추가합니다. 중앙에서 미디어를 펼칩니다. 여기에서 피부 생검을 볼 수 있습니다.

다음 단계는 튜브에서 절단 접시의 중앙으로 생검을 옮기는 것입니다. 멸균 집게를 사용하여 피부 생검 조각을 중앙에 놓습니다. 이 작업을 수행하는 동안 주의해야 하며 무균 상태를 유지하는 것이 필수적입니다.

절단 접시를 덮고 층류 후드의 해부 현미경으로 옮깁니다. 다음 단계는 생검을 12-18개의 균일한 크기의 조각으로 해부하는 것입니다. 메스를 조심스럽게 다루십시오.

준비가 되면 생검 결과를 확인하십시오. 메스 하나를 사용하여 생검을 고정합니다. 두 번째 메스를 한 방향 슬라이싱 동작으로 위아래로 움직입니다.

생검을 반으로 자릅니다. 12-18 조각이 될 때까지 각 조각을 반으로 계속 자릅니다. 각 생검 조각의 이상적인 크기는 도립 현미경의 왼쪽 안구 대물렌즈에서 마이크로미터의 약 70-80%를 차지합니다.

마이크로미터 카운트의 50%보다 작은 조각을 피하십시오. 12-18 개가 있는지 확인하십시오. 다음 단계는 조직 배양 후드 내부에서 수행됩니다.

절단 접시를 덮고 티슈로 다시 옮깁니다. 6개의 웰 플레이트에서 배양 후드 흡인 젤라틴은 각각에 700마이크로리터의 DMEM 20%FBS를 첨가합니다. 글쎄, 컨테이너의 측벽에 미디어를 추가하는 것이 좋습니다.

우물이 얇은 미디어 필름으로 덮여 있는지 확인하십시오. 겸자를 사용하면 6개의 각 벽에 2-3개의 생검 조각이 재생됩니다. 웰 플레이트.

두드리거나 슬라이딩 동작을 사용하여 조각을 벽 바닥에 부착합니다. 메스를 사용하여 집게에 붙어 있는 생검 조각을 제거할 수 있습니다. 이 플레이트에서 자랄 세포는 통로 0에 있습니다.

이것이 플레이트가 끝에서 보이는 방식입니다. 다음은 도립 현미경으로 본 조각 중 하나입니다. 이것은 첫날의 피부 생검입니다.

보통 1일에서 3일 이내에 애착을 보게 됩니다. 각질세포는 일주일 이내에 나타나기 시작합니다. 섬유아세포는 2주 이내에 볼 수 있습니다.

때때로 각질 세포는 관찰되지 않습니다. 일반적으로 섬유아세포가 보완되어 포장할 준비가 되는 데 3주가 걸립니다.