Drosophila melanogaster를위한 지구력 훈련 프로토콜과 세로 성능 Assays

다음 실험의 목표는 새로운 지구력 운동 프로그램을 사용하여 Dsof와 Melanogaster를 훈련시키고 운동 훈련의 효과를 평가하는 것입니다. 이것은 여러 바이알의 파리를 들어 올리고 떨어뜨리는 자동화 장치를 사용하여 파리의 본능적인 상승 반응을 반복적으로 활성화하여 파리에게 운동 세션을 제공함으로써 달성됩니다. 파리는 3주간의 훈련 기간 동안 2시간에서 3시간씩 매일 훈련을 받습니다.

다음으로 파리는 운동의 효과를 측정하기 위해 다양한 행동 분석을 실시합니다. 결과는 운동 파리가 빠르게 유도된 음의 지리 축 또는 고리 분석에 의해 측정된 것처럼 더 빠르게 상승한다는 것을 보여줍니다. 지구력 훈련, 다른 동물과 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 초파리 유전학을 조작하는 데 사용할 수 있는 광범위한 도구 모음입니다.

지구력 운동에 대한 연구에서, 우리는 많은 단일 음성 지오 택시 분석을 수행했을 때 이 방법에 대한 아이디어를 처음 얻었습니다. 우리는 파리가 얼마나 오래 계속 올라갈 수 있는지, 그리고 이런 식으로 인내력을 발휘하여 파리를 훈련시킬 수 있을지 궁금했습니다. 파워 타워는 테이블에 고정된 직사각형 합판 위에 지어졌습니다.

분당 4.5회 회전. 기어 모터는 여러 보드에 놓여 있으며 속도 제어 장치, 퓨즈 및 전원 스위치에 연결됩니다. 접합 상자에서 금속 튜브에 고정된 3인치 팬은 냉각을 위해 모터를 향합니다.

모터에는 롤러가 있는 회전 암이 연결되어 있습니다. 끝에서 모터와 암이 회전하여 합판에 부착된 구부러진 막대의 한쪽을 아래로 밀어 내립니다. 막대의 반대쪽에 도어 힌지가 있으면 바퀴가 부착되어 플랫폼에 굴러갈 수 있습니다.

모터가 회전함에 따라 위아래로 밀고 모터의 동력을 조정하여 전체 회전 시간이 15초 동안 지속되도록 합니다 플랫폼에서 플라이 바이알 랙은 번지 코드로 부착되며, 이 랙에 배치된 바이알은 플랫폼에 부착된 스크린으로 고정됩니다. 번지 코드를 통해 플랫폼은 표준 드로우 슬라이더를 따라 위아래로 미끄러질 수 있으며 스티로폼 쿠션은 낙하의 충격을 완화합니다. 파워 타워는 동물이 사육되는 조건에 맞게 온도가 조절되는 방에서 작동됩니다.

운동 실험을 실행하려면 지구력과 음의 지리 축 또는 등반 능력에 대한 종단 모니터링을 위해 최소 240마리의 연령이 일치하는 수컷 파리가 필요합니다. 파리의 개체군을 바이알당 20마리로 유지합니다. 바이알을 동일한 크기의 두 그룹으로 나누고, 그 중 하나는 운동하고, 해당 그룹의 바이알은 플루그로 막아야 하고, 대조군은 스폰지 마개로 막아야 합니다.

스펀지는 고정에 사용되는데, 그 이유는 적응형 크기로 바이알 바닥 근처에 쉽게 배치할 수 있기 때문입니다. 더 부드러운 스폰지 소재는 또한 더 단단한 플루그로 인한 부상을 줄여줍니다. 식품 바이알은 테스트 전에 격일로 교체해야 합니다.

훈련 중에는 빈 바이알을 사용하면 더 많은 파리가 고통을 겪기 때문에 파리가 음식 바이알에 남아 있습니다. 훈련 관련 부상. 제어 파리의 바이알을 파워 타워에 적재할 때 스폰지 마개를 먹이 수준보다 약 3mm 위로 밀어 파리를 제한합니다.

일관된 결과를 위한 움직임. 3주 동안 세션당 시간을 하루 2시간에서 3시간으로 늘리는 램핑 일정을 활용하여 일주일에 5일 연속으로 두 그룹의 파리를 모두 테스트합니다. 물론, 어떤 정권이라도 사용될 수 있다.

3주에 걸친 치료, 시간대 및 분석 방법의 일관성이 필수적입니다. 신중한 일정 수립 및 연습 절차를 통해 오류 피로의 가능성을 줄일 수 있습니다. 분석은 훈련 요법 전, 후 또는 훈련 중에 파리에 대해 종단적으로 수행할 수 있습니다.

또한 환경 변수에 대한 보다 안전한 반응을 평가하는 데 사용할 수도 있습니다. 훈련이 이루어지지 않는 날에 피로 분석을 실행합니다. 하루가 시작될 때 두 그룹의 파리를 발전소에 적재합니다.

장치를 활성화하고 10분에 한 번씩 각 바이알을 관찰합니다. 4회 연속 낙하에서 바이알에 있는 5마리 이하의 파리가 2인치 이상으로 올라가면 해당 파리 집단은 피로한 것으로 간주됩니다. 발전소가 계속 작동하는 동안 발전소에서 지친 파리를 제거하고 제거된 시간을 기록하십시오.

최대 10시간 동안 모든 바이알을 관찰하고 결과를 컴파일합니다. 정량 분석을 위한 하나의 분석법. 훈련의 효과는 달리기 속도의 일일 측정이며, 이는 훈련 체제 전반에 걸쳐 그리고 그 이후에도 수행될 수 있습니다.

교육의 장기적인 효과를 측정합니다. 상승 속도 또는 링 분석을 시작하려면 먼저 전사를 새로운 빈 바이알로 이동하고 6개의 바이알을 한 줄로 바이알 랙에 놓습니다. 롤링된 테이프 조각은 바이알을 랙에 고정하는 데 사용됩니다.

그런 다음 바이알의 균일한 조명을 제공하는 X-ray 보기 상자와 같은 광원 앞에 랙을 설정합니다. 이제 랙을 촬영할 카메라를 설정하여 각 바이알에서 각 플라이의 위치를 볼 수 있도록 합니다. 그런 다음 6개의 바이알을 탭하여 모든 파리를 바이알 바닥으로 쓰러뜨리고 시간 사진을 찍습니다.

파리가 모두 쓰러진 후 2초 후. 카메라의 플래시를 사용하는 경우 지속적으로 사용해야 합니다. 파워 타워를 진행하기 전에 각 바이알 세트에 대해 이 과정을 네 번 반복합니다.

데이터를 분석하려면 소프트웨어를 사용하여 각 사진에 개별적으로 점수를 매겨 바이알의 상한과 하한을 찾습니다. 그런 다음 각 플라이의 등반 높이를 측정합니다. 그런 다음 등반 높이를 Excel에 복사합니다.

각 바이알의 각 플라이에는 사분면의 높이에 해당하는 0에서 4까지의 점수가 부여됩니다. 그들은 가장 높은 사분면을 위해 4까지 오르고 전혀 오르지 않으면 0으로 올라갑니다. 각 바이알에 대해 20마리의 파리 각각에 대한 점수를 계산하고 코호트의 평균 점수를 취합니다.

이것을 등반 지수라고 합니다. 해당 날짜에 각 코호트의 4개 등반 지수의 평균이 데이터 분석에 사용됩니다. 이미지 처리 소프트웨어를 사용할 수 없는 경우, 빈 바이알에 사분면 선을 그릴 수 있으며, 파리는 수동으로 사분면 값을 할당할 수 있으며, 유형 파리는 노화로 인한 등반 능력 저하로 지구력 프로토콜에 응답할 수 있습니다.

이는 훈련이 끝난 후에도 지속되었으며, 이는 생후 5주에 걸친 종방향 고리 분석에 반영되었습니다. 따라서, 파워 타워 프로그램에 의한 운동 유도는 행동 입력으로 사용될 수 있으며, 이 효과를 조절하는 유전적 또는 환경적 요인의 능력을 평가할 수 있습니다. 반대로, 파워 타워는 출력으로도 사용할 수 있습니다.

예를 들어, 식단에서 다양한 비율의 자당을 섭취하는 파리가 피로할 시간을 테스트했습니다. 증가된 자당 함량은 지구력 증가와 상관관계가 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 모든 파리 코호트의 연령이 일치하고 실험 과정 전반에 걸쳐 방법이 일관되게 수행되는지 확인하는 것이 중요합니다.

이 비디오를 시청한 후에는 모든 유전자형의 파리를 인내하고, 훈련하고, 평가하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.