Moxi Z 미니 자동 셀 카운터를 사용하여 포유류 세포 계산, 세포 크기와 세포 건강의 결정

Mxi Z Mini 자동 세포 계수기는 매우 정확한 세포 및 입자 계수를 수행하는 초소형 탁상형 기기입니다. 황금 표준 TER 원리와 특허받은 박막 센서 기술을 결합합니다. Mxi Z와 함께 사용되는 카세트는 세포 수를 얻기 위한 정밀 미세유체 센서입니다.

카세트가 장치 전면에 삽입되고 75마이크로리터의 샘플이 샘플 포트에 로드됩니다. 실행이 시작되면 세포는 카세트의 박막 멤브레인에 있는 세포 감지 영역을 통해 단일 파일로 당겨지며, 감지 영역을 통해 이동할 때 샘플당 수천 개의 세포가 계산됩니다. 각각의 정확한 볼륨은 임피던스 측정에 의해 결정됩니다.

8초 후, 세포 농도, 평균 세포 크기 및 세포 건강 지수가 전체 입자 집단에 대한 완전한 고해상도 히스토그램과 함께 표시됩니다. 그런 다음 샘플에서 샘플 데이터를 분석하여 기기 자체에 저장하거나 Bluetooth 또는 USB를 통해 Mac 또는 PC로 전송할 수 있습니다. 혈구, 세포 분석기 또는 이미지 기반 자동 세포 계수기와 같은 다른 시스템에 비해 이 기술의 주요 장점은 이미지 기반 시스템의 75-80%에 비해 95% 이상의 정확도와 정밀도로 훨씬 더 신뢰할 수 있다는 것입니다.

또한 세포 크기를 측정하고 훨씬 빠르며 주관적이지 않습니다. 이 방법은 백만 개의 세포 수에서 이상적일 수 있습니다. 광범위한 동적 범위로 인해 다양한 세포 계수 응용 분야에 적용할 수 있습니다.

이러한 응용 분야에는 백혈구 수, 적혈구, 원생동물, 조류 및 효모가 포함됩니다. 이 실험은 HEK 2 93 세포의 갓 분리된 현탁액을 모든 유동 희석제 또는 PBS와 같은 생리학적 전도성을 가진 배지에 적절한 농도로 희석하여 시작합니다. 셀 클러스터링을 최소화하기 위해 부드럽게 분쇄하고 장치가 전원 공급 장치에서 뽑혀 있는지 확인하십시오.

그런 다음 mxi Z를 켭니다 전원 버튼을 누르면 홈 화면이 표시됩니다. Mxi Z는 정밀 미세유체 센서인 일회용 M형 또는 S형 카세트를 사용합니다. 각 카세트에는 파란색 타원형으로 표시되고 1 또는 2로 표시된 두 개의 로딩 포트가 있습니다.

각 카세트는 두 가지 테스트에 사용할 수 있습니다. 유형 M 카세트의 작동 범위는 3000에서 500, 밀리리터 당 000 셀입니다. S 형 카세트의 범위는 밀리리터당 3000-250 만 셀입니다.

트레이를 아래로 누르고 카세트를 삽입하여 샘플의 균질성을 확인하십시오.amp여러 번 천천히 반전시켰습니다. 그런 다음 75 마이크로 리터의 샘플을 피펫으로 추출합니다. 피펫 팁을 시료 포트에 단단히 놓고 피펫을 45도 각도로 유지한 다음 샘플을 한 번의 부드러운 동작으로 포트에 분배하여 샘플의 높이가 분주되었는지 확인합니다.

지정된 원 안의 화면을 터치하거나 작은 입자 모드 상자를 제외한 아무 곳이나 터치하여 계산을 시작합니다. mxi Z가 테스트를 시작하고 세포 계수 결과가 8 초 내에 완료됩니다. Type M 카세트를 사용하면 관심 있는 단일 세포 모집단에 맞는 독점적인 곡선 피팅 알고리즘으로 결과가 자동으로 표시되고 우연의 일치를 위해 총 개수를 보정합니다.

여러 입자 또는 클러스터가 동시에 셀 감지 영역을 통과하는 이벤트 또는 이벤트입니다. 이러한 우연의 일치 이벤트는 오른쪽의 곡선 맞춤 영역을 벗어나지만 여전히 총 개수에 포함됩니다. 적합한 피팅이 발견되면 전체 샘플 모집단의 고해상도 히스토그램이 세포 농도, 평균 직경 및 평균 부피에 대한 수치와 함께 표시됩니다.

또한 moxie 개체군 지수 또는 MPI 값은 일반적인 문화 건강의 지표로 제공됩니다. 히스토그램의 맨 왼쪽에 있는 개수는 정상이며 시스템 감도와 가능한 샘플 파편 수를 최적화하기 위해 조정된 시스템의 기준선 노이즈 임계값을 나타냅니다. 일단 sample 실행이 완료되면 장치에서 카세트를 제거하고 완료를 선택하여 저장하고 홈 화면으로 돌아갑니다.

시각적 표시기는 샘플이 실행되었음을 확인합니다. 두 번째 샘플을 실행하려면 카세트를 돌려 un에 삽입하십시오. 다시 말하지만, 일반 모드에서 실행한 후 M 유형 카세트의 경우 4-34미크론, 유형 S의 경우 3-26미크론의 크기 스케일에서 곡선 맞춤 수에 대한 결과가 표시되어 x축을 4-26미크론으로 다시 조정하고 재조정 아이콘을 터치합니다.

연속적으로 크기 조정 아이콘을 눌러 4 - 18 미크론, 4 - 10 미크론, 다시 4 - 34 미크론의 배율을 통해 x축 배율을 변경합니다. 원하는 경우 곡선 맞춤 모드로 다시 전환합니다. 현재 분석에 대한 테스트 번호는 히스토그램 상단의 녹색 상자에 표시됩니다.

데이터는 테스트 번호로 저장되며 게이팅 아이콘을 터치하여 게이팅 모드를 전환하면 히스토그램의 수동 게이팅이 가능합니다. 이렇게 하면 게이팅이 기본 획득 모드가 됩니다. 게이트는 왼쪽 및 오른쪽 파란색 게이트 마커를 밀거나 마커 중 하나를 터치한 다음 나타나는 화살표 키를 사용하여 점진적으로 이동하여 변경할 수 있습니다.

표시된 개수 및 평균 크기 정보는 게이팅 범위 내의 입자에서만 계산됩니다. 완료 아이콘을 눌러 결과를 저장하고 홈 화면으로 돌아갑니다. 저장 테스트를 열려면 홈 화면에서 히스토그램 아이콘을 누릅니다.

최대 9개의 저장된 히스토그램에 대한 아이콘은 한 번에 표시되며, 페이지 아래로 또는 페이지 위로 또는 위로 또는 위로 스와이프 디스플레이를 터치합니다. 필요에 따라 더 많은 테스트 결과를 보고 관심 있는 테스트의 아이콘을 선택합니다. 각 히스토그램은 곡선 맞춤 모드 또는 게이트 모드에서 열립니다.

저장 방법에 따라 테스트에 사용된 카세트 유형, M 또는 S가 화면 왼쪽 상단에 표시됩니다. 저장. 히스토그램은 게이팅 모드와 곡선 맞춤 모드 사이를 전환하여 원하는 피크에 자동으로 게이트 터치를 할 수도 있습니다. 이렇게 하면 선택한 피크에 대한 최적의 보행 위치가 설정됩니다.

이는 다중 피크 상황에서 특히 유용합니다. 관심 있는 피크를 나타내려면 확대/축소 및 확대/축소 해제 화살표 아이콘을 눌러 히스토그램의 Y축에서 카운트 스케일을 조정합니다. 수직 눈금은 피크 위로 손가락을 스와이프하여 낮추거나 아래로 스와이프하여 증가시키고 뒤로 아이콘을 눌러 이 테스트를 닫고 홈 화면으로 돌아가는 것도 변경할 수 있습니다.

데이터는 목시 차트 응용 프로그램을 사용하여 Mac 또는 PC로 전송할 수 있습니다. 이 작업을 먼저 수행하려면 Moxie Z 장치의 홈 화면에서 Bluetooth 아이콘을 누릅니다. 장치는 컴퓨터에서 Bluetooth ID를 보고하고 뜸시 차트 응용 프로그램을 연 다음 오른쪽 상단 모서리에 있는 Bluetooth 아이콘을 클릭합니다.

그런 다음 Z의 Bluetooth ID에 해당하는 장치를 선택하고 Bluetooth 외에 업로드된 파일에 대해 선택한 대상 폴더를 선택합니다. Mxi Z에서 컴퓨터로 데이터를 전송하는 또 다른 방법은 USB 케이블을 사용하여 일반 USB 장치로 취급하는 것입니다. 데이터 파일을 사용하면 A USB를 통해 연결된 Mxi Z 장치의 데이터 파일을 컴퓨터의 모든 디렉토리로 복사할 수 있습니다.

파일은 Mxi Charles 응용 프로그램으로 직접 열고 분석하거나 형식이 지정된 CSV 파일이기 때문에 고객 분석을 위해 Microsoft Excel 또는 기타 데이터 분석 프로그램에서 직접 열어 Mxi Z의 계산 결과를 얻은 결과와 비교할 수 있습니다. 정밀하게 보정된 비드와 포유류 세포의 동일한 현탁액에 대응하기 위해 냉각을 사용하여 두 방법 모두에 의해 계수되었습니다. 직경이 6 - 15.6 미크론에 이르는 4개의 서로 다른 크기의 비드와 여러 개의 서로 다른 세포주를 테스트했습니다.

3-4 카운트의 평균은 여기에서 볼 수 있듯이 표시되었습니다. 얻어진 조사는 거의 동일했다, Moxie Z가 Mxi Z.The를 사용하여 정확하게 평가될 수 있는 농도의 범위를 설명하기 위하여 크기의 넓은 범위에 있는 정확한 조사를 얻어지는 가능하다는 것을 나타내는.동일한 구슬 및 세포는 처음 500에서 연속적으로 묽게 되었다, 유형 M 카세트를 위한 밀리리터 당 000의 세포 또는 유형 S.The를 위한 밀리리터 당 대략 2.50만 개의 세포는 이었다 그런 다음 여기에 표시된 대로 얻은 개수에 대해 플롯합니다. 측정된 농도는 각 카세트의 동적 범위에 걸쳐 정확한 계수를 보여주는 이론적 세포 농도와 일치했으며, M형 카세트의 경우 밀리리터당 3000 - 500, 000 세포, 유형 S ca의 경우 밀리리터당 3000 - 250만 세포의 가변성을 조사하여 200에서 HEK 2 93 및 HELOC 세포의 5개의 별도 개수를 얻은 결과의 가변성을 조사했습니다. 000 내지 300, 밀리리터 범위당 000 세포는 Z 2, Moxi Z 및 혈구 분석기에 대한 호출을 사용하여 얻었다.

이 그래프에서 볼 수 있듯이, 평균 변동 계수는 Z 2 및 mxi Z에서 비슷하고 혈구 분석기보다 훨씬 낮았으며, 이는 Mxi Z의 재현성이 Z 2에 대한 호출과 비슷하고 Hema 세포 분석기보다 우수함을 나타냅니다. 입자 크기를 결정하는 데 있어 Mxi Z의 정밀도를 입증하기 위해 제조된 비드는 Mxi Z를 사용하여 측정되었으며 각 비드 크기에 대한 5가지 측정값을 측정, 평균 및 제조업체가 보고한 비드 크기에 대해 표시했습니다. Mxi Z는 제조업체에서 보고한 크기로 비드를 측정했습니다.

R 제곱 값은 0.9989로 mxi Z가 배양을 평가할 수 있음을 보여주었습니다. 동일한 데드 셀 스파이크, HEK 및 헬라 세포 제제에 대해 Mxi Z를 사용하여 건강 세포 건강 지수 측정을 기록하고, 비교 목적으로 동일한 샘플 헤모토마 생존율 또는 유세포 분석기 구아바 PCA의 시각적 트리안 블루 배제 결과와 비교했습니다. 샘플에 대한 생존력 측정도 여기에서 볼 수 있듯이 그래프에 표시되었습니다.

Mxi Z를 사용하여 얻은 HGK 및 LAR 세포에 대해 계산된 생존율은 각각 0.9937 및 0.9728의 r 제곱 값으로 Trian blue exclusion 방법을 사용하여 얻은 생존율 측정치와 동일했습니다. 얻은 데이터는 EK 세포에 대해 0.9724, 헬라 세포에 대해 0.9585의 R 제곱 값을 가진 유세포 분석기와 함께 구아바 PCA를 사용하여 얻은 데이터와 유사합니다. 어떤 경우에는 세포 건강 지수가 표준 생존 가능성 접근법과 일치할 수 있지만, 이는 건강 평가와는 완전히 새롭고 다른 기술이므로 결과적으로 이전 기술과 항상 동일하지는 않습니다.

이 비디오를 시청한 후에는 이 절차를 시도하는 동안 세포 건강, 세포 크기 및 세포 수 정보를 쉽게 얻는 방법을 잘 이해해야 합니다. 셀 밀도가 올바른 범위에 있는지 확인하는 것이 중요합니다.