Name: Moxi Z 미니 자동 셀 카운터를 사용하여 포유류 세포 계산, 세포 크기와 세포 건강의 결정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-21T12:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 16 s
Description: 배우세요 Moxi Z 미니 자동 셀 카운터를 사용하여 포유류 세포 계산, 세포 크기 및 세포 건강을 신속하게 측정하는 방법을. 쿨터 원리와 임피던스 측정 기술을 활용하여 8초 만에 정확한 결과를 제공합니다.

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1. 샘플의 준비 <ol><li> 세포 농도가 악기 (3,000 500,000 세포 / ML 타입 M 카세트를위한, 또는 3,000 2,500,000 세포 / 타입 S 카세트에 대한 ML)의 작동 범위 내에 있도록 ORFLO 희석제 또는 적절한 희석제와 세포 현탁액을 희석. </li><li> 1시 20분 (타입 M 카세트) 또는 1시 5분 희석 (타입 S 카세트)에 노 희석에 1시 5분의 희석은 대부분의 포유 동물 세포 라인에 권장되지만 적절한 희석은 세포 종류와 심는 밀도에 따라 달라집니다. 정확한 숫자는 필요한 볼륨은 약 75 μL입니다. </li></ol> 2. 실행 샘플 <ol><li> 전원 버튼을 누르고 홈 화면이 표시됩니다에 의해에 Moxi Z를 돌립니다. </li><li> 트레이를 아래로 눌러 Moxi Z, 피펫 75μL 샘플이 ... 화면이 표시됩니다에 카세트를 삽입합니다. </li><li> 카세트의 채움 포트 (파란색 타원형에 75 μL 시료를 피펫어느 카세트 끝에 따라 1 또는 2, 레이블) 악기에 삽입되었다. 이들은 2 시험에 사용할 수있는 일회용 카세트입니다. 참고 : 장소 끝이 잘 전면 입술 아래 잡은되도록 ~ 45 ° 각도로 잘 직접로드에 피펫 팁. 분배하면 카세트를 입력하도록 공기의 주머니를 일으킬 수로 진공이 유체의 분배에 대해 &quot;출세&quot;하지 않는 것이 중요합니다. 그것은 분배하는 동안 잘 넘는 액체 형태의 작은 구슬 (물론 항목의 크기)를 가지고하는 것이 좋습니다. </li><li> 대부분의 포유 동물 세포를 카운트 들어, 시작하는 데 어디서나 화면을 만지지. 매우 작은 입자 (4-8 μm의 유형 M 및 3-8 μm의 타입 S의 평균 직경의 평균 직경)를 카운트 들어, Moxi Z는 작은 입자 모드에서 실행할 수 있습니다. 참고 : 카세트 타입은 화면 상단의 검은색 막대에 표시됩니다. 이 모드에서는 Moxi Z는 기본값으로 2-10 μm의 직경에 규모를 설정하고 카운트 u를 수행작은 세포 검출을위한 최적화된 매개 변수를 노래. 여기 터치 테스트를 시작하고이 모드에서 실행하도록 소형 입자 모드 버튼 (블랙 스퀘어) 누르십시오. </li><li> Moxi Z는 테스트를 시작하며 세포 개수 결과는 약 8 초 (타입 M 카세트) 또는 15 초 (타입 S 카세트)에 완료됩니다. </li><li> 곡선 피팅 및 MVI 계산이 자동으로 시작하고 몇 초 추가로 필요합니다. 적당한 발작이 발견되면, 결과는 자동으로 화면에 표시됩니다. </li><li> 게이팅 기본 수집 모드를 확인하려면 곡선이 게이팅 모드로 전환하려면 카운트 버튼을 맞추기 누르십시오. </li><li> 이때 카세트 장치에서 제거할 수 있습니다. </li></ol> 3. 관리 데이터 <ol><li> AutoMode 스케일링이 꺼져있는 경우, 결과는 초기 곡선 맞춤 2-34 μm의 직경의 규모 (유형 M 카세트)를받을 2-26 μ에 대해 표시됩니다M (타입 S 카세트). Automode 스케일링가 켜져있다면, Moxi Z는 자동으로 모든 곡선 맞춤 데이터가 표시됩니다 확보하면서 곡선 맞춤 인구의 넓이에 가장 가까운 범위로 가로 축 (X 축)를 확장할 것입니다. </li><li> AutoMode 스케일링 수동으로 높은 해상도에서 결과를 표시, 해제면, 2-26 μm의 아이콘 (M 타입) 또는 2-18 μm의 아이콘 (타입 S)를 만져. 참고 : 카세트 타입은 화면의 왼쪽 상단에있는 파란색 상자에 표시됩니다. 커브 - 피팅 기능뿐만 아니라 시각적으로 데이터의 미묘한 차이를 구별하는 사용자의 능력을 모두 향상시킬 수있는 작은 세포 또는 입자를 계수 때 권장합니다. </li><li> 수평 해상도를 증가시 확장 버튼을 동적으로 사용할 수있는 X 축 스케일 범위 사이의 사이클링을 할 수 있도록 조정합니다 : 2-34, 2-26, 2-18 및 종류 M 카세트를위한 2-10 μm의, 또는 2 타입 S 카세트에 대한 -26, 2-18 및 2-10 μm의. 이 기능은 availa입니다즉시 셀 카운트를 따라 경. </li><li> 곡선 맞춤 또는 게이트디 지역 카운트 정보 (세포 / ml) 쇼핑은 히스토그램의 왼쪽 아래에 블랙 박스에 표시됩니다. 평균 셀 크기 정보는 히스토그램의 오른쪽 아래에 블랙 박스에 표시됩니다. </li><li> MVI 값이 히스토그램의 오른쪽 상단에 파란색 상자가 표시됩니다. 검사는 작은 입자 모드에서 실행 되었다면 MVI이 적용되지 않고 &quot;MVI = SPM&quot;로 표시됩니다. 세포의 농도가 MVI 운영 범위, &quot;범위 MVI = 부족&quot;의 메시지 이외의 경우 또한 표시됩니다. </li><li> 현재 히스토그램을 저장하려면 완료 아이콘을 만질. 이것은 XXX는 해당 시험 번호입니다 &quot;테스트 XXX&quot;의 이름으로 데이터를 저장합니다. </li><li> 수동으로 게이트 히스토그램을 위해, 곡선 맞추기 카운트 결과 버튼을 켜고 만질. 이것은 게이팅 기본 수집 모드를 만듭니다. 다음 회를 성문을 설정하거나 생략하고 각 파란색 게이팅 마커 밀어미세 게이트 조정을위한 e 왼쪽 및 오른쪽 화살표 (이들은 파란 게이팅 마커를 감동시 표시)은 마커 사이에있는 세포가 포함됩니다. 히스토그램 수직 스케일은 자동으로 곡선 맞춤 인구 진폭을 기반으로 확장됩니다. 이 수직 스케일을 조정하려면 히스토그램 영역에서 슬쩍가 화면 위나 아래로. </li><li> 곡선 맞춤 모드로 디스플레이를 반환하고 곡선 맞춤 모드는 기본 수집 모드를 만들기 위해 게이트 카운트 결과 단추를 만져. </li><li> 그런 다음 결과를 저장하고 홈 화면으로 돌아갑니다 완료 아이콘을 누르십시오. 결과를 삭제하려면 영구적으로 시험 결과를 삭제하려면 언제든지 삭제 아이콘을 누르십시오. </li></ol> 4. 이전 획득 데이터의 분석 <ol><li> 저장된 테스트를 열려면 홈 화면의 히스토그램 아이콘을 누르십시오. </li><li> 최대 9 저장된 histograms에 대한 아이콘이 화면에 표시됩니다.관심 시험에 적절한 아이콘을 누르거나 더 많은 테스트 결과를 볼 수있는 아이콘이 아래 페이지 위로 또는 페이지를 누르십시오. </li><li> 각각의 히스토그램은 그것이 구원받은 방법에 따라 곡선 맞추기 카운트 모드 또는 게이트 카운트 모드 중 하나에서 열립니다. 게이트 카운트 모드에서 게이팅 마커는 독립적으로 각각 블루 게이팅 마커를 밀어서 원하는대로 배치 할 수 있습니다. 자동 게이트는 원하는 정상에 감동하여. 게이트 카운트와 곡선 맞추기 카운트 모드를 토글 만져. </li><li> 히스토그램의 수직 스케일을 조정하기 위해 줌과 Unzoom 아이콘을 누르십시오. 수직 스케일은 또한 수직으로 아래로 표시 최대 (증가) 또는 (감소)에 손가락을 보내주시면하여 변경할 수 있습니다. </li><li> 영구적으로 시험 결과를 삭제하려면 삭제 아이콘을 누르십시오. </li><li> 에 완료 아이콘을 누르면테스트 결과를 닫고 홈 화면으로 돌아갑니다. (참고 : 확대된보기가 저장되지 않습니다.) </li></ol> 5. PC로 데이터를 전송 <ol><li> 데이터는 PC 또는 Mac에 Moxi Z USB 케이블을 연결해하여 Orflo의 Moxichart 응용 프로그램을 사용하여 PC로 또는 USB 전송을 ​​통해 전송할 수 있습니다. 블루투스 전송의 경우 (MoxiChart) 먼저 Moxi Z 단위의 홈 화면에 블루투스 아이콘을 눌러 장치의 블루투스 ID를 결정합니다. </li><li> 컴퓨터에서 MoxiChart 응용 프로그램을 열고 오른쪽 상단에있는 블루투스 아이콘을 클릭하십시오. 다음 Moxi Z의 블루투스 아이디에 해당하는 장치를 선택하고 업로드된 파일에 대한 대상 폴더를 선택합니다. </li><li> Moxichart이 자동으로 블루투스 연결을 통해 지정된 디렉토리에 모든 파일을 전송합니다. </li><li> 블루투스 (MoxiChart) 또는 USB로 전송된 파일은 analy 열리고 수그들은 포맷되기 때문에, MoxiChart 응용 프로그램과 함께 직접 제드 자형의 것 또는. csv 파일은, 그들은 직접 추가 / 사용자 정의 분석을 위해 Microsoft Excel 또는 다른 데이터 분석 프로그램에서 열 수 있습니다. </li></ol> 6. 대표 결과 Moxi Z의 정밀도 및 정확도를 평가하려면, HEK-293 세포, HELA 세포, CHO-K1, 효모, Jurkat E6-1 세포, PC12 세포 및 건의는 0-500,000 세포에서부터 농도와 비드 현탁액을 정밀 보정 / ML (타입 M 카세트)과 0-2-2.5e 6 셀 / ML (타입 S 카세트)을 계산하고 모든 포유 동물 세포를 미국 유형 문화 수집 (ATCC)에서 얻은되었다 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 Z2와 Moxi Z &#39;를 사용하여 비교했다 그리고 교양 등 이전에 7-11을 설명했다. 간단히, 세포는 RPMI 1640 (Jurkat E6-1, PC12), MEM (HEK-293, HELA) 셀 또는 F12K (CHO-K1) 전지의 핵심 매체와 75mm 두 조직 문화 flasks에 정지에서 배양해되었다. 모든 미디어로 보충되었다10% 태아 소 혈청과 100 U penicillin/100 μg의 스트렙토 마이신. Flasks는 5퍼센트 CO 2와 37 ° C에서 인큐베이터 유지되었다. 세포는 삼일마다 passaged되었다. 효모 세포는 (X5, C. albicans, 빈 13) 기증과 즉시 같이 제공된 사용되었습니다. 타입 M 카세트 데이터와 타입 S 카세트에 대한 ~ 2 2.5e 6 셀 / ML위한 ~ 500,000 세포 / ML의 초기 샘플의 농도는 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 Z2를 사용하여 설립되었다. 후속 이론 농도 수준은 생리적 버퍼 (Isoton II 또는 행크의 균형 식염수)와 시리얼 dilutions을 통해 준비했습니다. 각각의 농도에서 동일한 샘플은 두 시스템에 의해 측정되었으며 서로 역모를 꾸몄다. 그림 2에서 볼, 강한 선형 상관 관계가 있었다 (타입 M R 2&gt; 0.9886, 유형 S R 2&gt; 0.9781) 모든 샘플에 대한 카운트 사이. 농도는 또한 Moxi Z와 Z2 모두와 이론 / 예상 세포 농도와 비교되었다 ( <str긴 사연&gt; 그림 3)을 다시 보여준 강한 선형 상관 관계 (타입 M R 2&gt; 0.9758, 유형 S R 2&gt; 0.9774). 정밀도를 평가하려면, HEK-293 및 HELA 세포 카운트는 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 Z2, Moxi Z 및 hemocytometer를 사용하여 수행되었다. 이력서는 200,000-300,000 셀 / ML 범위 5 별도 카운트에서 측정한 것으로 Moxi Z (타입 M 카세트), 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 Z2과 hemocytometer를 사용하여 셀 카운트의 편차의 평균 계수는 (이력서, N = 19) 계산되었다. Moxi Z의 작은 평균 이력서 (그림 4) Z2의 비교 및 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 기반의 계산 기술에서만 달성 가능한 정밀도의 높은 수준의 대표이다. Moxi Z 악기의 치수 정밀도는 구입, 정밀 보정 폴리스티렌 구슬의 측정을 통해 다음 평가되었다. Moxi Z에서 평균 입자 크기 측정 (n은 = 5)를 제조보고 크기가 역모를 꾸몄다되었다. 볼 수 있듯이 전N 그림 5는 Moxi Z 측정은 지속적으로 높은 선형 상관 관계 (R 2 = 0.9989)와 제조 업체 값을 일치. 크기와 카운트 정보 이외에도, Moxi Z는보고 Moxi의 생존 능력 지수 (MVI) 값을 가진 포유 동물 세포 배양 건강 시약이없는, 일반적인 평가를 제공합니다. 이 인덱스는 전체 미립자 카운트와 관련하여 관심 인구 세포의 수를 비율로 생성됩니다. MVI 측정 기능을 발휘하려면, MVI의 판독 (타입 M 카세트)가 표준 설명서 및 흐름 cytometric 죽은 / 실시간 측정 기법을 비교했다. 죽음 (&lt;10% 가능한) HEK-293과 HELA 세포의 인구는 37 희석제 (Isoton II, Beckman 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날)을 포함한 영양소 프리, 나트륨 불화물 ° C로 살아있는 세포의 하룻밤 incubations을 통해 만들어진 제어 이론 생존 수준은 살아있는 죽은 세포의 ratiometrically 혼합 알려진 농도에 의해 준비되었다. 해상도ulting 솔루션은 hemocytometer 카운트 및 유동 cytometer 측정 모두에서 중복의 생존 능력 수준에 대해 분석했다. Hemocytometer 측정은 0.1 % Trypan 블루 솔루션 및 세포 전통 50분의 50 혼합되어 사용되었다. 유동세포계측법 측정은 Viacount 시약 및 제조 지정된 프로토콜 (머크)를 사용 구아바 PCA cytometer (머크)를 사용되었다. 마찬가지로 그림 6과 같이 HEK 세포와 HELA 세포 &quot;에 대한 유사 hemocytometer의 생존 비율로 MVI 데이터의 선형 적합의&quot;피어슨 상관 계수 값 (R 2) = 0.9937 및 R 2 = 0.9728, 각각 R이 있었다. 이러한 결과는이 접근법은 유동 cytometer 또는 hemocytometer를 사용하여 얻은 라이브 / 죽은 측정에 유리하게 비교할 세포 viabilities 광범 걸쳐 문화 건강 정보를 제공하는 것을 보여줍니다. 표 및 그림 (Dittami 외 2011에서.) 15 : 1 그림. 박막 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날의 계산 : 전기 전류는 박막 카세트의 셀 감지 구역을 통해 전달됩니다. 세포 CSZ를 통해 하나의 파일을 흘러로서, 전압의 순간적인 증가는 Moxi Z &#39;로 측정된다 <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3842/3842fig2.jpg" /> 그림 2. Moxi Z 카운트는 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 Z2 카운트 비교할 수 있습니다. 세포 및 비드 현탁액의 동일한 카운트가 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 Z2와 Moxi Z &#39;를 사용하여 계산되었다해도 Moxi Z 카운트의 카운트 값 (N = 3-4)를 평균에 대하여 꾸몄다되었습니다 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 해당 Z2 건의 및 선형 끼워 맞춤 R 2 값이 결정됩니다. ) 종류 M 카세트 - 0의 농도 범위 - 500,000 셀 / ML. B) 타입 S 카세트 - 0의 농도 범위 - 2-2.5e 6 / ml.Error 바에 따르면 ± 1 표준 편차. 그림 3. Moxi Z 농도 측정은 이론적으로 세포 농도를 VS. ) 종류 M 카세트 - 이론 농도 값은 초기 500,000 세포 / ML 시료의 시리얼 dilutions에서 준비가되어있다 B) 타입 S 카세트 -. 2.5e 6 셀 / ML 시료 - 이론 농도 값은 초기 2의 시리얼 dilutions에서 준비되었다. 오류 바 ± 1 표준 편차를 나타냅니다. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/3842/3842fig4.jpg" /> 4 그림. 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 Z2, Moxi Z (타입 M 카세트) 및 Hemocytometer위한 변동 계수는. 각 접근 방식 HEK-293 및 HELA 세포 카운트의 편차의 평균 계수는 (이력서, N = 19) 별도 5에서 측정한 CVS로 계산되었다 300,000 셀 / ML 범위 - 200,000의 HEK-293과 HELA 셀 건의. 오류 바 ± 1 표준 편차를 나타냅니다. 그림 5. Moxi Z-Moxi Z를 사용하여 입자 크기 측정의 정밀도는 구슬 크기를 측정 (타입 M 카세트) 대 제조 업체 비드 크기를보고했다. 오류 바 ± 1 표준 편차를 나타냅니다. <img alt="그림 6" src="/files/ftp_upload/3842/3842fig6.jpg" /> 6 그림. MVI를 사용하여 문화 건강 평가 - hemocytometer를 사용하여 시각적, trypan-푸른 스테인드 생존 카운트 대 MVI 측정 (타입 M 카세트)와 구아바 PCA Viacount의 생존 능력의 비교.

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그레고리 M. Dittami 그분 Ayliffe는 Orflo 기술, 설계, 제조 및 판매 Moxi Z, 리처드 D. Rabbitt이 Orflo 테크놀러지에게 지급 컨설팅 전문, 아르바이트를 제공하는 회사의 직원입니다. 이 문서에 대한 생산 및 무료 액세스가 Orflo 테크놀로지의 후원됩니다.

기본 구현은 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날의 접근 방식은 측정의 전반적인 정확도 높은 결정적이 될 수 있습니다. 임계 영역은 둘 이상의 세포가 동시에 조리개를 통과하고 한 전기 사건으로 측정되는 &quot;우연 사건&quot;에 대한 원시 세포 카운트의 수정입니다. &quot;우연 사건&quot;은 세포 크기와 클러스터링의 정도 (데이비스 외 1967) 6를 포함한 여러 가지 요인에 따라 달라집니다 오류에 기여한다. 그 결과, 주어진 샘플에 대한 필수 우연 보정 널리 셀 / 입자 타입 간의 심지어는 동일한 세포 유형의 서로 다른 문화 사이의 변화, 예측 할 수 없습니다. 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날에 의해 초기 출판물에 뿌리 이론을 설립 관찰 행사와 경험적으로 정해진, 입자 고유의 보정 계수, Z의 숫자에 따라 원료 카운트의 대수 조정을 적용하는 것입니다. 정확한 카운트가 제대로 t 스위치와 함께 얻을 수 있지만그의 보정 알고리즘은, 그것은 세포 종류와 정확히 그 값을 예측에 대응하는 어려움 사이의 Z 값의 큰 변화로 인해 그 실질적인 적용에 제한됩니다. 여기서 우연 보정 알고리즘과 함께 Moxi Z 커브 피팅으로 식별 &#39;참&#39;셀 카운트를 사용하여 Moxi Z는 동적으로 진정한 농도를 달성하기위한 우연의 일치를 위해 해결합니다. 500,000 세포 / ML (타입 M 카세트)와 3,000 - - 2-2.5e 6 셀 / ML (타입 S 카세트) 하이 엔드 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 Z2를 사용하여 얻은 결과를 비교하면, Moxi Z는 0의 농도 범위에 걸쳐 비교 카운트를 생산 . 또한 Moxi Z는 카운트에서 변화의 유사한 낮은 계수와 황금 표준 세포 계수의 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 - 기법의 특징은 입자 사이징의 정밀도로이 카운트 정확성을 실현. 또한, 여기에 제시된 데이터는 Moxi Z &#39;가 유용한 정보를 제공할 수 있음을 나타냅니다셀 문화의 전반적인 건강에 관한. Moxi Z는이 문화 건강 평가를 결정하는 독점적인 소프트웨어 알고리즘과 커브 피팅 접근 방식을 활용합니다. 분리 파괴 등 blebbing 같은 세포 죽음과 관련된 형태학의 변화, 그리고 용적 왜곡 (카타 오카와 Tsuruo 1996, Liegler 외 1995, 쉐리 던 외 1981) 12-14 불가능하게 Moxi-Z &#39;가 사이 impedimetric 차이를 구별하기 위해 만들어 인구 및 죽은 세포 / 파편 인구를 살고 있습니다. MVI는 입자 파편의 상대적인 기여도, 수축된 괴사성 세포, 그리고 관심있는 커브-장착되어 세포 인구를 식별할 수 있도록 문화 / 입자 크기 분포를 분석하여 생성됩니다. MVI 값은함으로써 전반적인 입자 인구 프로파일에 관하여 monodisperse 인구 카운트 인구 지수 또는 ratiometric 법안을 반영합니다. 이 값은 다음 algorithmically - 조정 기반의 인구 통계 및 경험적 관찰이다. Becaus전자 MVI 전통 염색법 접근 방식이 아닌 다른 매개 변수를 바라보고, 그것은 이러한 기술을 반영할 것으로 예상되지 않는 대신 세포 배양의 건강에 중요한 대안보기는 특히 파편과 미생물 오염 물질과 관련하여 제공합니다. 요약에서는 Moxi-Z 셀 카운터는 특허 박막 센서 기술과 결합 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 원리와 커브 - 피팅 소프트웨어 알고리즘을 사용하여 정밀 재현성 셀 개수의 assays, 셀 크기, 셀 건​​강을 제공하는 울트라 소형 benchtop 악기입니다 . 8초에 - 직경 25 미크론 (34 미크론 2의 다이나믹 레인지 -) 종류 M 카세트와 함께 4에서부터 입자를 계산이 가능합니다. 15 초 안에 - 직경 20 미크론 (26 미크론 2의 다이나믹 레인지 -) 유형 S 카세트와 함께 3에서부터 입자를 계산이 가능합니다. 또한, Moxi-Z는 시약의 사용없이 건강 평가를 수행합니다. 그것은 훨씬 더 적은 노동 inte입니다nsive 및 수동 계산보다는 주관적. 표준 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날의 계수에 비해, Moxi가 훨씬 작습 빠르고, 더 많은 정보를 제공 상당히 적은 유지 보수가 필요, 사용하기 쉽게, 그리고 비용의 분수입니다.

<table border="1" ><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> ORFLO 희석제 </td><td> ORFLO </td><td> MXA006 </td><td></td></tr><tr><td> 카세트 디스펜서 </td><td> ORFLO </td><td></td><td> 편리한 분배 25 카세트 최대 쇼핑몰 </td></tr><tr><td> USB 케이블 </td><td> ORFLO </td><td></td><td> PC / Mac 또는 전원 어댑터에 악기를 연결 </td></tr><tr><td> 전원 어댑터 (미국 및 유럽 모델에만 해당) </td><td> ORFLO </td><td></td><td> AC 콘센트에 USB 케이블을 연결 </td></tr><tr><td> USB 플래시 드라이브 </td><td> ORFLO </td><td></td><td> 상점 Mox난 Z 소프트웨어 및 사용자 설명서 </td></tr><tr><td> 교정 확인 비즈 </td><td> ORFLO </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 전자 보정 카세트 </td><td> ORFLO </td><td></td><td> 적절한 시스템 운영 및 교정를 확인하는 전자 카세트 </td></tr></tbody></table>

moxi z 미니 자동 셀 카운터를 사용하여 포유류 세포 계산, 세포 크기와 세포 건강의 결정

Determination of Mammalian Cell Counts, Cell Size and Cell Health Using the Moxi Z Mini Automated Cell Counter

입자 및 세포 계수는 일반적인 세포 배양, 혈액 분석 및 산업 제어를 포함한 다양한 응용 분야에 사용됩니다1-5. 세포/입자 계수 기술의 결정적인 돌파구는 50여 년 전 Wallace Coulter가 개발한 Coulter 기법이었습니다. 이 기법은 마이크론 크기의 구멍(aperture)에 전기장을 가하고 단일 입자를 구멍을 통해 유체역학적으로 집중시키는 방식을 포함합니다. 입자에 의해 구멍이 일시적으로 폐쇄되면 전기 임피던스에 측정 가능한 변화가 발생하며, 이는 세포의 크기/부피와 직접적이고 정밀하게 상관 관계를 가집니다. 이 방식이 세포/입자 계수의 벤치마크로 인정받는 이유는 특히 수동 및 이미지 기반 기술과 비교했을 때 입자 크기 측정 및 계수의 정밀도와 정확도가 매우 뛰어나기 때문입니다(수동 및 비전 기반 시스템의 정확도는 75-80%인 반면, Coulter 카운터는 98% 수준의 정확도를 보입니다). 이는 이미지 기반의 세포 계수 방식과 달리, Coulter 기법은 세포/입자의 정확한 부피 정보를 계산하여 세포/입자를 진정한 3차원(3-D)으로 측정함으로써 잔해물과 응집으로 인한 계수 간섭을 획기적으로 줄인다는 점에 기인합니다. 결과적으로 이는 다른 계수 기법보다 더 정확하고, 덜 지루하며, 시간이 적게 걸리고, 주관성이 낮은 방식으로 세포를 열거하고 크기를 측정하는 수단을 제공합니다6.
세포 계수에서 Coulter 기법의 중요성에도 불구하고, 기존 장비의 비용과 크기로 인해 일상적인 생물학적 연구에서 널리 사용하기에는 제약이 많았습니다. 보다 저렴한 Coulter 기반 장비가 출시되기도 했으나, 이는 두 개 이상의 세포가 구멍을 동시에 통과하여 함께 측정되는 "동시 발생 이벤트(coincidence events)"의 보정 측면에서 고가의 장비에 비해 한계가 있습니다. 기존 Coulter 기술의 또 다른 한계는 세포 샘플의 전반적인 건강 상태에 대한 측정 지표가 부족하다는 점입니다. 결과적으로, 세포 생존력을 평가하기 위해 Coulter 계수와 함께 추가적인 기법을 병행해서 사용해야 하는 경우가 많습니다. 전통적인 생존력 평가 방법은 세포 염색이 필요하거나 유세포 분석기와 같이 고가의 번거로운 장비를 사용해야 하므로, 이는 실험 준비 시간과 비용을 증가시킵니다.
여기서 설명하는 Moxi Z mini 자동 세포 카운터는 Coulter 원리의 정확성과 박막 센서 기술을 결합한 초소형 벤치탑 기기로, 사용하는 세포 카운팅 카세트에 따라 3-25 microns 범위의 입자를 정밀하게 측정하고 계수할 수 있습니다. M 타입 카세트는 평균 직경 4-25 microns(동적 범위 2-34 microns)의 입자 계수에 사용할 수 있으며, S 타입 카세트는 평균 직경 3-20 microns(동적 범위 2-26 microns)의 입자 계수에 사용할 수 있습니다. 이 시스템은 부피 측정법을 사용하므로, 비구형 입자를 측정할 때 4-25 microns는 34-8,180 fL의 세포 부피 범위에 해당하며, 3-20 microns는 14-4200 fL의 세포 부피 범위에 해당합니다. Moxi Z를 사용하여 포유류 세포를 계수하려면, 우선 계수할 세포를 ORFLO 또는 유사한 희석액으로 희석합니다. 세포 카운팅 카세트를 기기에 삽입하고, 카세트의 포트에 시료를 로딩합니다. 8-15초 동안 수천 개의 세포가 박막 막의 "세포 감지 구역(Cell Sensing Zone, CSZ)"을 통해 한 줄로 통과합니다. 분석 후, 기기는 독자적인 커브 피팅과 소프트웨어 알고리즘을 사용하여 중복 이벤트 보정을 수행하며, 전체 입자 수 대비 관심 세포군의 비율을 결정하여 전반적인 배양 상태를 평가합니다. 총 입자 수에는 수축되거나 파쇄된 사멸 세포뿐만 아니라 기타 잔해 및 오염물이 포함됩니다. 결과는 자동 커브 피팅이 적용된 히스토그램 형식으로 표시되며, 게이트는 필요에 따라 수동으로 조정할 수 있습니다.
궁극적으로 Moxi Z는 현재의 골드 표준인 Coulter Z2와 견줄 만한 정밀도와 정확도로 세포 수를 측정할 수 있으며, 동시에 배양 건강에 대한 추가 정보를 제공합니다. 또한, 더 짧은 시간 내에 이러한 결과를 도출하며, 설치 면적이 더 작고, 조작 및 유지관리가 훨씬 간편하며, 유사한 기술들과 비교해 훨씬 저렴한 비용으로 구현 가능합니다.

Moxi Z 초소형 자동 세포 계수기는 특허 박막 센서 기술과 사이징을 수행하는 독점적인 소프트웨어 알고리즘과 입자의 넓은 크기의 범위를 계산뿐만 아니라 monodisperse의 전반적인 건강을 결정하는 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 원리를 결합한 소설 악기 포유 동물 세포 배양. 이 프로토콜은 세포 배양의 건강을 계산하고 평가하는이 악기의 사용을 설명합니다.

Moxi Z 미니 자동 셀 카운터를 사용하여 포유류 세포 계산, 세포 크기와 세포 건강의 결정

입자 및 세포 계수는 일상적인 세포 배양, 혈액학적 분석 및 산업적 제어를 포함한 다양한 응용 분야에 사용됩니다1-5. A ...

Mxi Z Mini 자동 세포 계수기는 매우 정확한 세포 및 입자 계수를 수행하는 초소형 벤치탑 장비입니다. 이 장비는 표준 TER 원리와 특허 받은 박막 센서 기술을 결합하여 작동합니다. Mxi Z에 사용되는 카세트는 세포 계수 값을 얻기 위한 정밀 미세유체 센서입니다.카세트를 장치 전면에 삽입하고 75 µL의 시료를 시료 포트에 로딩합니다. 분석이 시작되면, 세포들이 카세트의 박막 막에 있는 세포 감지 영역을 통해 한 줄로 통과하며, 감지 영역을 이동하는 동안 시료당 수천 개의 세포가 계수됩니다. 각 세포의 정확한 부피는 임피던스 측정을 통해 결정됩니다.8초 후에 세포 농도, 평균 세포 크기 및 세포 건강 지수가 전체 입자 집단의 고해상도 히스토그램과 함께 표시됩니다. 샘플의 경우, 샘플 데이터를 기기 자체에서 분석 및 저장하거나 Bluetooth 또는 USB를 통해 Mac 또는 PC로 전송할 수 있습니다. 혈구 계수기, 유세포 분석기 또는 이미지 기반 자동 세포 계수기와 같은 다른 시스템에 비해 이 기술의 주요 장점은 신뢰도가 훨씬 높다는 점이며, 이미지 기반 시스템의 정확도와 정밀도가 75~80%인 것과 비교하여 95% 이상의 정확도와 정밀도를 나타냅니다.또한, 이 방법은 세포 크기를 측정할 수 있고 훨씬 빠르며 주관적이지 않습니다. 따라서 이 방법은 백만 개의 세포 수를 측정하는 데 이상적입니다. 광범위한 다이내믹 레인지를 가지고 있어 매우 다양한 세포 계수 응용 분야에 적용할 수 있습니다.이러한 응용 분야에는 백혈구 수 측정, 적혈구, 원생동물, 조류 및 효모 등이 포함됩니다. 이 실험은 갓 분리한 HEK 2 93 세포 현탁액을 all flow 희석액 또는 PBS와 같이 생리적 전도성을 가진 배지에 적절한 농도로 희석하여 시작합니다. 세포 응집을 최소화하기 위해 부드럽게 파이펫팅하며, 장치의 전원 공급 장치가 분리되어 있는지 확인하십시오.그런 다음 전원 버튼을 눌러 mxi Z의 전원을 켜면 홈 화면이 표시됩니다. Mxi Z는 정밀 미세유체 센서인 일회용 M 또는 S 카세트를 사용합니다. 각 카세트에는 파란색 타원으로 표시되어 있고 1 또는 2로 라벨이 지정된 두 개의 로딩 포트가 있습니다.각 카세트는 두 번의 테스트에 사용할 수 있습니다. M형 카세트의 작동 범위는 밀리리터당 3000에서 500,000 cells입니다. S형 카세트의 범위는 밀리리터당 3000에서 2.5 million cells입니다.트레이를 아래로 누르고 카세트를 삽입하여, 천천히 여러 번 반전시켜 샘플의 균질성을 확보합니다. 그다음 샘플 75 µL를 피펫팅합니다. 피펫을 45도 각도로 유지한 채 피펫 팁을 샘플 포트에 단단히 고정시킨 후, 한 번의 부드러운 동작으로 샘플을 포트에 분주하여 샘플 전체가 모두 분주되었는지 확인합니다.지정된 원 안이나 소입자 모드(small particle mode) 상자를 제외한 화면 어디든 터치하여 계수를 시작하십시오. mxi Z가 테스트를 시작하며, 세포 수 측정 결과는 8초 후에 완료됩니다. Type M 카세트를 사용하면, 관심 있는 단일 세포 집단에 적합한 독자적인 커브 피팅(curve fitting) 알고리즘을 통해 결과가 자동으로 표시되며, 중첩(coincidence) 현상에 대한 총 계수 보정도 함께 이루어집니다.여러 개의 입자 또는 클러스터가 세포 감지 구역을 동시에 통과하는 이벤트 또는 현상입니다. 이러한 동시 발생 이벤트는 우측의 곡선 피팅 영역 밖에 위치하지만, 전체 카운트에는 여전히 포함된다는 점에 유의하십시오. 적절한 피팅이 완료되면, 전체 샘플 집단의 고해상도 히스토그램이 세포 농도, 평균 직경 및 평균 부피의 수치와 함께 표시됩니다.또한, 일반적인 배양 상태의 지표로 moxie 인구 지수 또는 MPI 값이 제공됩니다. 히스토그램의 가장 왼쪽에 표시되는 수치는 정상이며, 시스템 감도 및 발생 가능한 시료 잔해물 수치를 최적화하여 조정된 시스템의 기저 노이즈 임계값을 나타냅니다. 시료 분석이 완료되면 장치에서 카세트를 제거하고 'done'을 선택하여 저장한 후 홈 화면으로 돌아갑니다.시각적 표시기를 통해 샘플 분석이 완료되었음을 확인할 수 있습니다. 두 번째 샘플을 분석하려면 카세트를 돌려 장치에 삽입하십시오. 마찬가지로, 일반 모드에서 분석을 수행한 후, M형 카세트의 경우 4~34 µm, S형 카세트의 경우 3~26 µm 크기 척도에 따른 곡선 적합 계수 결과가 표시됩니다. x축의 척도를 4~26 µm로 다시 설정하려면 리스케일 아이콘을 터치하십시오.rescale 아이콘을 순차적으로 눌러 x축 스케일을 4~18 µm, 4~10 µm, 그리고 다시 4~34 µm 순으로 변경합니다. 필요한 경우 곡선 피팅(curve fit) 모드로 다시 전환하십시오. 현재 분석의 테스트 번호는 히스토그램 상단의 녹색 상자에 표시됩니다.데이터는 테스트 번호로 저장됩니다. 게이팅 아이콘을 터치하여 게이팅 모드를 전환하면 히스토그램의 수동 게이팅이 가능해집니다. 이렇게 하면 게이팅이 기본 획득 모드로 설정됩니다. 왼쪽과 오른쪽의 파란색 게이팅 마커를 슬라이드하거나, 마커를 터치한 후 나타나는 화살표 키를 사용하여 점진적으로 이동시킴으로써 게이트를 변경할 수 있습니다.표시된 수치와 평균 크기 정보는 게이팅 범위 내의 입자들만을 기준으로 계산됩니다. 완료 아이콘을 눌러 결과를 저장하고 홈 화면으로 돌아가십시오. 저장된 테스트를 열려면 홈 화면의 히스토그램 아이콘을 누르십시오.최대 9개의 저장된 히스토그램 아이콘이 한 번에 표시되며, 페이지 다운 또는 페이지 업 버튼을 터치하거나 화면을 위아래로 스와이프하여 이동할 수 있습니다. 필요에 따라 더 많은 테스트 결과를 확인하고 관심 있는 테스트의 아이콘을 선택하십시오. 각 히스토그램은 커브 피팅(curve fit) 모드 또는 게이팅(gated) 모드 중 하나로 열립니다.저장 방식에 따라 테스트에 사용된 카세트 유형(M 또는 S)이 화면 왼쪽 상단에 표시됩니다. 히스토그램은 게이팅 모드와 커브 피팅 모드 간에 전환할 수 있으며, 원하는 피크를 터치하여 자동 게이팅(auto gate)을 수행할 수 있습니다. 이렇게 하면 선택한 피크에 대한 최적의 게이트 위치가 설정됩니다.이는 특히 다중 피크 상황에서 유용합니다. 관심 있는 피크를 표시하려면 확대 및 축소 화살표 아이콘을 눌러 히스토그램 Y축의 카운트 스케일을 조정하십시오. 수직 스케일은 피크 위로 손가락을 위로 밀어 줄이거나 아래로 밀어 늘려서 변경할 수 있습니다. 뒤로 가기 아이콘을 누르면 이 테스트가 종료되고 홈 화면으로 돌아갑니다.moxie chart 애플리케이션을 사용하여 데이터를 Mac 또는 PC로 전송할 수 있습니다. 먼저, Moxie Z 장치의 홈 화면에서 Bluetooth 아이콘을 누르십시오. 장치가 Bluetooth ID를 보고하면, 컴퓨터에서 moxie chart 애플리케이션을 열고 우측 상단의 Bluetooth 아이콘을 클릭하십시오.그런 다음 Bluetooth ID의 Z에 해당하는 장치를 선택하고, Bluetooth 외에 업로드될 파일이 저장될 대상 폴더를 선택하십시오. Mxi Z에서 컴퓨터로 데이터를 전송하는 또 다른 방법은 USB 케이블을 사용하여 일반 USB 장치로 취급하는 것입니다. 데이터 파일의 경우, USB를 통해 연결된 Mxi Z 장치의 데이터 파일을 컴퓨터의 모든 디렉토리로 복사할 수 있습니다.파일은 Mxi Charles 애플리케이션에서 직접 열어 분석할 수 있으며, CSV 파일 형식이므로 Microsoft Excel이나 다른 데이터 분석 프로그램을 통해 직접 열어 Mxi Z의 계수 결과와 획득한 결과를 비교 분석할 수 있습니다. 정밀하게 교정된 비드와 포유류 세포의 동일한 현탁액을 사용하여 두 가지 방법으로 계수하였습니다. 직경 6에서 15.6 µm 범위의 네 가지 서로 다른 크기의 비드와 여러 가지 세포주를 테스트하였습니다.여기서 볼 수 있듯이 3~4회 측정값의 평균을 도식화하였습니다. 얻어진 측정값들이 거의 동일하게 나타났으며, 이는 Moxie Z가 다양한 크기 범위에서 정확한 카운팅이 가능함을 보여주며, Mxi Z를 사용하여 정확하게 평가할 수 있는 농도 범위를 입증합니다. 동일한 비즈와 세포를 type M 카세트의 경우 mL당 500,000 cells, type S의 경우 약 mL당 2.5 million cells의 초기 농도부터 단계적으로 희석하였습니다. 이후 여기에서 보여주는 것과 같이 이론적 세포 농도를 얻어진 측정값에 대해 도식화하였습니다. 측정된 농도가 이론적 세포 농도와 일치함을 통해, 각 카세트의 동적 범위인 type M 카세트의 mL당 3000~500,000 cells 및 type S 카세트의 mL당 3000~2.5 million cells 전체에서 정확한 카운팅이 이루어짐을 입증하였습니다. 결과의 변동성을 검토하기 위해, mL당 200,000~300,000 cells 범위의 HEK 2 93 및 HELOC 세포에 대해 call to Z two, Moxi Z 및 hemo cytometer를 사용하여 각각 5회씩 독립적인 카운팅을 수행하였습니다.이 그래프에서 볼 수 있듯이, 평균 변동 계수는 Z2와 Mxi Z에서 유사하게 나타났으며, 혈구계수기(hemocytometer)보다 훨씬 낮게 나타났습니다. 이는 Mxi Z의 재현성이 Z2와 유사하며 혈구계수기보다 우수함을 나타냅니다. 입자 크기 측정 시 Mxi Z의 정밀도를 입증하기 위해, Mxi Z를 사용하여 제조된 비즈를 측정하였습니다. 각 비즈 크기당 5회 측정을 수행하여 평균을 낸 후, 이를 제조사가 보고한 비즈 크기와 대조하여 도식화하였습니다. Mxi Z는 제조사가 보고한 크기로 비즈를 측정하였습니다.mxi Z의 배양 평가 능력을 입증하기 위해 R squared 값은 0.9989로 나타났습니다. 동일한 사멸 세포 스파이크, HEK 및 hela 세포 준비물을 대상으로 Mxi Z를 사용하여 세포 건강 지수 측정값을 기록했으며, 이를 동일 시료의 trypan blue 배제법을 통한 시각적 혈종 생존율 백분율 또는 flow cytometer guava PCA 결과와 비교 분석하였습니다. 해당 시료들의 생존율 측정값 또한 여기에서 볼 수 있듯이 그래프로 도식화되었습니다.Mxi Z를 사용하여 얻은 HGK 및 LAR 세포의 계산된 생존율은 각각 0.9937 및 0.9728의 r-제곱 값으로 Trian blue 배제법을 통해 얻은 생존율 측정값과 대등한 수준이었습니다. 획득한 데이터는 유세포 분석기의 guava PCA를 사용하여 얻은 결과와도 비교 가능하며, EK 세포의 경우 R-제곱 값 0.9724, HeLa 세포의 경우 0.9585였습니다. 특정 사례에서 세포 건강 지수가 표준 생존율 분석 방식과 일치할 수 있으나, 이는 건강 상태 평가를 위한 완전히 새롭고 다른 기술이므로 결과적으로 기존 기술과 항상 동일하지는 않을 수 있습니다.이 영상을 시청한 후, 본 절차를 수행하는 동안 세포 건강도, 세포 크기 및 세포 수 정보를 쉽게 얻는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 세포 밀도가 적절한 범위 내에 있는지 확인하는 것이 중요합니다.

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Research

연구

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Biology

생물학

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