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DOI: 10.3791/3852-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
낮은 분자 - 무게 헤파린, enoxaparin에 의한 혈액 응고의 억제의 급속한 양적 분석의 데모. enoxaparin의 기여는 heparinase과 소화를 통해 영향을 제거하여 평가된다. 분석의 둥근 설명은 우리 출판 종이에 자세히 설명되어 있습니다.
소개를 통해, 우리는 인간 피험자에서 저분자량 헤파린 Enoxaparin의 혈장 수준의 시간 경과에 대한 발표 된 연구를 참조합니다. 우리는 오늘 저분자량 헤파린에 대한 신속한 현장 진단 분석으로 결과를 입증하고 있습니다. 이 경우 엔터티는 Enoxaparin입니다.
이 슬라이드에 표시된 결과는 하루에 한 번, 하루에 40mg을 만성적으로 투여받은 환자의 혈장 농도를 나타내며, 마지막 투여가 더 이상 사라지기까지의 시간 비용을 보면 투여 후 약 4 시간에 ML 당 0.4 국제 단위의 최고 농도가 달성되는 것을 볼 수 있습니다. 그리고 그 수준은 약물의 치료 범위 내에 있습니다. 그러나 특히 관심을 끄는 점은 투여 후 12시간이 경과할 때 얼마나 남는가 하는 점인데, 이는 저분자량 헤파린(이 경우 에녹사파린) 투여 후 최소 12시간 후에 출혈의 위험을 초래할 수 있는 특별한 침습적 시술을 하기 전에 기다려야 한다는 임상적으로 인정되는 지침이 있기 때문입니다. 그 당시에도 여전히 명확하게 검출 가능한 양이 존재한다는 것이 우리에게 흥미로웠으며, 우리는 우리가 입증할 것처럼 일부 연구에서 이에 초점을 맞췄습니다.
또한 Sender in etal의 이 연구에서 제시된 것은 신장 장애가 있는 개인이 시간 경과에 걸쳐 약물 수치가 상당히 높다는 사실이며, 신장 장애 환자의 경우 또는 임신 중인 여성 또는 비만 환자에게 알려진 바와 같이 12시간 지침이 매우 부적절할 수 있음을 알 수 있습니다. 뉴욕 의과대학에서 이 프로젝트에 참여한 연구자들을 소개하고 싶습니다. 제 이름은 마리오 오사입니다.
저는 이곳의 약리학 교수입니다. 저는 뉴욕 의과대학 임상마취과 부교수인 Surya Patula 박사입니다. 제 이름은 케샤르 칼입니다.
저는 의대생 3학년입니다. 이것은 우리가 이러한 분석에 사용하는 장치입니다. 이 장치는 Omicron Corporation에서 생산합니다.
그것은 작동한 선 또는 건전지에서 사용될 수 있고, 그래서 그런 의미에서 배려의 진실한 요점입니다. 이 장치에는 온도 조절 장치로 제어되는 두 개의 구획이 있으며 응고 분석 자체뿐만 아니라 실제 분석 준비 과정에서 샘플의 사전 배양에 이 구획을 사용합니다. 이 분석법의 주요 특징은 고도로 정제되고 상업적으로 이용 가능한 헤파리나아제 제제를 사용한다는 것입니다.
우리는 이것을 Siemens Corporation에서 구입했습니다. 그것은 매우 안정한 형태로 제공되며 식염수 또는 수용액에 쉽게 용해됩니다. 헤파린 ACE의 사용은 환자의 기준선 응고 수치를 얻을 수 있기 때문에 본 접근법에서 특히 가치가 있습니다.
헤파린의 영향이 없을 때, 헤파린, ACE는 저분자 헤파린과 분획되지 않은 헤파린을 완전히 분해할 수 있지만, 여기서 우리의 특별한 관심은 저분자 헤파린에 있으며 헤파린의 영향이 없는 상태에서 비활성 상태로 분해되고 응고 시간에 대한 값을 생성하는 것입니다. 여기서 우리가 설명하는 것은 저분자량 헤파린, 이 경우 헤파리나제에 의한 에녹사파린의 분해 시간 경과입니다. 데이터는 기준선 절단 시간의 백분율로 표시되므로 여기에서 볼 수 있는 것은 Enoxaparin이 10 반대로 추가되었다는 것입니다.
ML당 국제 단위는 혈액의 응고 시간을 약 50% 연장합니다. 그런 다음 섭씨 37도에서 헤파리나아제를 사용하여 다양한 배양 기간을 거친 후 기준선 응고 시간을 회복하는 데 드는 시간 비용을 확인할 수 있습니다. 즉, Enoxaparin이 비활성 상태로 완전히 분해됩니다.
항응고제 효과에 관해서는 이미 1분 30초 정도 차이가 납니다. 기본적으로 기준선 응고 시간의 100% 회복이 있습니다. 이 시간 과정을 조사한 후, 우리는 응고 시간을 측정하기 전에 혈액의 표준 사전 배양 시간으로 5분의 배양을 사용하기로 결정했습니다.
이 현장 진단 분석을 위한 분석 튜브는 제조업체로부터 받는 방식에서 약간 수정되었습니다. 이 튜브는 원래 활성제 카올린(activator kaolin)에 함유되어 있으며, 이는 활성화된 응고 시간을 측정하기 위해 존재합니다. 우리는 활성제 없이 튜브를 사용하면 감도가 상당히 증가한다는 것을 발견했습니다.
우리는 이것을 최소 활성화 분석이라고 불렀는데, 이는 이제 가능한 유일한 활성화 원천이 튜브의 유리 표면과 아마도 자석이라고 생각하기 때문입니다. 자석은 자동 분석의 필수 부분입니다. 이 튜브는 튜브 웰에서 회전하고 자석이 밀도 응고에 갇혀 움직임을 잃게 되면 이를 감지하고 응고 완료를 알립니다.
우리는 또한 오미크론 활성화 부분 혈전 Platin 시간 카트리지를 사용하여 분석을 연구했습니다. 분석은 동일한 방식으로 수행됩니다. 이 시스템에는 약간 더 많은 활성화가 있습니다.
우리의 첫 번째 단계는 백합 헤파리나제를 바이알에 담아 재생산하는 것입니다. 바이알에 식염수 0.25ml를 첨가한 다음 완전히 용해될 때까지 약 20초 동안 기다립니다. 다음으로 바이알의 전체 내용물을 투베르쿨린 주사기로 흡인하고 일반적으로 이 다음 단계에서 약 0.2ml를 회수합니다.
사전 배양을 위한 첨가제는 3개의 ml 진공 튜브에 에녹사파린을 함유한 갓 채취한 혈액 샘플에 추가됩니다. 첫 번째 판은 헤파리나제를 나타내며 현재 혼합되고 있습니다. 다음으로, 이것은 에녹사파린이 함유되어 있지만 헤파리나아제는 없는 튜브에 식염수 0.2ml를 첨가하여 유사한 VO 총 부피를 갖는 것입니다.
우리는 악기의 내장 타이머를 사용하여 300초를 카운트다운합니다. 그것은 5분의 사전 배양입니다. 진공 튜브는 사전 배양이 완료되면 제거됩니다.
마지막 단계는 사전 배양된 샘플 2ml를 최소 활성화 분석 튜브로 옮기는 것입니다. 이 튜브는 응고를 시작하기 위해 100 마이크로 리터의 0.25 몰 염화칼슘으로 미리 채워져 있습니다. 이 첫 번째 튜브는 헤파리나아제로 사전 배양된 튜브입니다.
두 번째 샘플은 에녹사파린을 함유하고 있지만 헤파리나아제는 포함하지 않는 샘플입니다. 타이머는 염화칼슘 첨가 이후 만료 시간을 나타내고 있으며, 이제 첫 번째 샘플이 완성되었음을 확인할 수 있습니다. 이는 응고 완료에 필요한 200초의 상부 바이알입니다.
헤파리나아제를 함유하지 않은 샘플은 더 오래 진행되고 있으며 현재 완료되었습니다. 이것은 ml당 0.4 국제 단위의 에녹사파린으로 혈액이 급증하는 일반적인 결과를 시뮬레이션한 것입니다. 이는 이 농도의 에녹사파린에서 응고 시간이 약 45초 단축되거나 응고 시간이 18% 감소
하는 것입니다.보시다시피, 응고 감지는 자동화되고 검사가 완료될 때까지 기기에 시간이 보존됩니다. 우리는 실제로 이 분석을 ml당 0.1 국제 단위의 Enoxaparin만큼 낮은 농도로 테스트했다는 점을 언급해야 합니다. 서론에서 언급했듯이 이것은 Enoxaparin의 일반적인 치료 용량 후 12시간 후에 존재할 수 있는 농도입니다.
우리는 이 농도에서도 신뢰할 수 있게 검출할 수 있었습니다.
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