폴리비닐 알코올 스폰지 모델 주입

본 절차의 전체적인 목표는 폴리비닐 알코올 스펀지를 사용하여 마우스의 상처 치유 모델을 구현하는 것입니다. 이를 위해 먼저 스펀지를 수화시키고 이식 가능하도록 충전합니다. 그다음, 스펀지를 마우스의 복근과 피부 사이의 포켓에 삽입합니다.

이식 후, 각 스펀지에 치료제를 주입할 수 있습니다. 마지막 단계는 마우스에서 스펀지를 제거하는 것입니다. 최종적으로, 절편 제작, 염색 및 정량 분석을 수행하여 상처 치유 과정의 변화와 차이를 관찰할 수 있습니다.

이 방법은 상처 치유에 대한 통찰을 제공할 수 있을 뿐만 아니라, 종양 혈관 신생, 약물 전달, 이식된 세포의 생존 및 생착과 같은 다른 연구 분야에도 적용될 수 있습니다. 먼저 0.9% 수성 염화 나트륨 용액에서 밤새 교반하여 스펀지를 수화시킵니다. 그 다음, 수화된 스펀지 현탁액 75 milliliters를 121 degrees Celsius에서 25분 동안 오토클레이브합니다.

스펀지를 멸균하려면, 오토클레이브 멸균된 스펀지 용액을 멸균 후드 내에 둡니다. 그 다음 멸균 핀셋을 사용하여 스펀지 하나를 집어 핀셋으로 짠 후, 진공 팁을 사용하여 스펀지에서 용액을 가능한 한 많이 제거합니다. 이제 짜낸 스펀지를 조직 배양 플레이트에 놓되, 스펀지 사이에 공간을 두도록 주의하며, 처리 용액을 스펀지 중앙에 직접 피펫팅합니다. 그다음 피펫 팁으로 스펀지를 가볍게 눌러 스펀지가 용액을 잘 흡수하도록 합니다.

모든 스펀지가 로딩되면, 스펀지를 마우스에 이식할 때까지 플레이트를 얼음에 보관합니다. 꼬집기 반사 검사로 진정 상태를 확인한 후, 마우스를 앙와위로 눕혀 노즈콘에 고정하는 것으로 시작합니다. 그런 다음 전기 면도기를 사용하여 마우스의 갈비뼈 아래쪽 하복부에서 1 x 1 인치 면적의 털을 제거합니다.

이후 절단된 털을 닦아내어 해당 부위를 깨끗하게 합니다. 제모한 부위를 Betadine으로 멸균한 후 70% alcohol로 소독합니다. 다음으로, 피부를 팽팽하게 잡습니다.

메스로 삽입할 스펀지 직경의 1.5배에서 2배 길이로 수직 절개합니다. 이때 체강까지 절개되지 않도록 주의하십시오. 핀셋을 사용하여 피부 가장자리를 잡습니다.

그런 다음 Metzenbaum 가위를 사용하여 절개 부위 양측의 피부를 근육에서 천천히 분리합니다. 포켓을 마우스의 너비 전체와 흉곽에서 뒷다리까지 확장합니다. 이제 핀셋으로 측면을 집어 동물에게 삽입할 첫 번째 스펀지를 집어 올립니다.

그 다음 스펀지를 일자 핀셋으로 잡아 위아래에서 고정합니다. 다음으로, 다른 핀셋을 사용하여 피부 가장자리를 잡고 들어 올린 뒤, 피부나 아래쪽의 근육에 닿지 않도록 주의하며 스펀지를 천천히 삽입합니다. 모든 스펀지를 삽입한 후, 핀셋으로 절개 부위의 양측을 함께 잡고 피부의 두 층을 관통하여 봉합사를 통과시킵니다.

피부 가장자리가 닫힐 정도로만 첫 번째 매듭을 조인 후, 반대 방향으로 한 번 더 매듭을 지어 정사각형 매듭(square knot)을 완성합니다. 이때는 매듭을 단단하게 잡아당깁니다. 그 다음, 봉합을 마무리하기 위해 정사각형 매듭을 두 번 더 묶습니다.

절개 부위 전체를 폐쇄하기 위해 추가 봉합을 실시합니다. 마지막으로, 동물을 마취 시스템에서 분리하고 의식이 회복될 때까지 모니터링합니다. 마우스는 빠르게 보행하기 시작하며 수술 전의 가동성을 회복해야 합니다.

먼저 주사기에 필요한 용액을 채우고 28 gauge 바늘을 주사기에 연결합니다. 그 후 발가락 꼬집기(toe pinch)를 통해 진정 상태를 확인한 다음, 바늘이 스펀지 내에 위치하도록 스펀지 중앙의 피부를 통해 45도 각도로 동물에게 바늘을 찌릅니다. 바늘을 천천히 수직으로 들어 올립니다.

바늘이 스펀지 내에 위치하면 스펀지가 바늘과 함께 위로 이동합니다. 그런 다음 물질을 스펀지에 천천히 주입하고 바늘을 제거합니다. 동물을 희생시킨 후, 핀셋으로 피부를 잡고 원하는 스펀지 근처를 절개합니다.

마지막으로, 제거한 스펀지 주변의 추가 조직이 함께 채취되지 않도록 주의하며 주변 캡슐에서 스펀지를 조심스럽게 분리합니다. 스펀지는 수행할 분석 유형에 따라 서로 다른 조건에서 보관할 수 있습니다. 절편 제작의 경우, 회수한 스펀지를 OCT compound와 같은 동결 매질에 매립하거나, 본 h and e 염색 스펀지 사례와 같이 파라핀 블록 매립 및 절편 제작을 위해 10% formalin에 넣어 보관할 수 있습니다.

그리고 이렇게 염색된 trireme 스폰지의 절편 제작 시, 여기에서 보여주는 것과 같이 스폰지를 직경 방향으로 반으로 자른 후 절단면이 아래로 가도록 임베딩했을 때 가장 좋은 절편 결과를 얻을 수 있습니다. 여기서 입증된 바와 같이, 스폰지 절편은 이 그림과 같이 스폰지의 전체 너비가 모두 포함되도록 제작해야 합니다. 왼쪽의 스폰지는 절편의 오른쪽 가장자리를 따라 조직 경계가 파손된 것으로 보아 임베딩 또는 절편 제작이 잘못되었으며, 반면 오른쪽의 손상되지 않은 스폰지는 올바르게 처리되었습니다.

이 영상을 시청한 후, 생쥐의 상처 치유를 연구하기 위해 폴리비닐 알코올 스펀지를 준비, 이식, 주입 및 제거하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.