Name: Cryopreserved 샘플 복구를 위해 손수 함 장치 실수로 극저온 저장 탱크 떨어졌고 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 47 s
Description: 학습하세요 액체 질소 듀어 탱크에서 크라이오 박스와 바이알을 안전하게 회수하는 저비용 내한성 장치 제작법을. 단일 운전자가 샘플 무결성을 보존하며 신속하게 사용할 수 있습니다.

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DIY 극저온 회수 장치 프로젝트 암 연구 프로그램, 과학 버지니아 학원에 메리 루이스 앤드류스 수상의 후원 &quot;생물 정보학 및 분자 접근법을 사용하여 진핵 세포의 모델링 세균성 단백질 prenylation&quot;, &quot;플라즈마에서 RNA 편집의 생리 의미의 과정에서 테스트되었습니다 토마스 F. Jeffress와 케이트 밀러 Jeffress 기념관 신뢰와 국가 계약 16.740.11.0364 (과학 교육부, 러시아)의 후원 돌기 세포. &quot; 우리는 RNA 무결성 실험과 도움 베스 EOM 감사드립니다.

1. Cryoboxes의 검색을 위해 Cryotolerant 장치의 조립 <ol><li> . 펜치를 사용하여, 3 양면 강한 넥타이 (그림 1A)하게 패 모양의 강한 타이 그림 1B에 표시된 참고 한쪽을 평탄케 : 강한 타이의 크기는 Dewar의 목의 직경에 따라 선택하실 수 있습니다 . </li><li> . 그림 3 (AB)와 같이 Cryoscoop 기반을 형성 크라운 볼트 너트, 와셔 및 나사를 사용하여 강한 타이 T 스트랩 (그림 2) 참고 두 같은 강한 유대 관계를 확보 : 두 개의 강한 유대 관계는의 검색을 허용하는 데 사용됩니다 5 ½ 인치 × 5 ½ 인치 cryoboxes. </li><li> 홈 붙이 플레이트 (그림 4)를 사용하여 홈 붙이 플레이트의 한쪽 끝을에 슬롯이 강한 넥타이 T 스트랩의 슬롯을 정렬하고 Hillman 너트와 볼트 (그림 5)의 도움으로 두 가지를 확보 참고 :. 경우 홈 붙이 플레이트와 강한 넥타이가 공동되지 않습니다내가 미리 뚫고 구멍으로, 당신은 구멍이 초경 드릴 비트를 사용 뚫고해야 할 것이다. </li><li> 그림 6과 같이 펜치의 도움으로 홈 붙이 접시의 다른 쪽 끝을 구부려. (이 단계는 선택 사항입니다.) </li><li> 때 액체 질소에서 그림 6과 같이 좋은 장비를 파악하기 위해 거품으로 핸들을 넣어. (선택 사항) 참고 : autoclaving 이전에 거품을 제거합니다. </li></ol> 2. Cryovials의 검색을 위해 Cryotolerant 장치의 조립 Cryotolerant DIY 복구 장치도 cryovials의 검색에 맞게 조정 할 수 있습니다. 이것은 액체 질소 (그림 7)에서 튜브를 떠서 위해 변조와 같이 스테인리스 스트레이너와 플랫베이스를 대체하는 것입니다. <ol><li> 나사가 빠지다 크라운 견과류와 홈 붙이 접시에 강한 타이 T 스트랩을 장착 볼트. </li><li> 홈 붙이 접시에 스테인리스 스트레이너를 부착하기 전에 조심스럽게의 목을 구부., 이것은 쉽게 장치와 함께 작전을하게 스트레이너는 입술로 온다면, 입술을 아래로 구부 위해 펜치를 사용하여 레이 (그림 8) 참고 닮은 각도에서 동양 기지 펜치의 도움으로 거르는. </li><li> 홈 붙이 접시 구멍과 함께 스트레이너의 손잡이에 구멍을 정렬하고 Hillman 견과류와 그림 8과 같이 볼트 도움 참고로 여과기를 확보 :. 스트레이너는 사전 뚫고 구멍으로 나오지 않으면, 당신이 필요합니다 초경 드릴 비트로 뚫고 구멍을 가지고 준비합니다. </li></ol> 3. Dewar에서 Cryoboxes 및 Cryovials 검색 중 <ol><li> 시작하려면 극저온 장갑을 끼도록하고 안전한 공간을 허용하도록 Dewar에서 1 개 또는 2 개 냉장고 선반을 제거합니다. </li><li> 부드럽게 강한 타이 T 스트랩베이스 (그림 5)를 들으며 직립 Cryotolerant DIY 복구 장치와 Dewar 하단 데리고 상자 falle를 수집즉시 따뜻한 물체와 접촉에 액체 질소 종기 질소 가스 (Leidenfrost 효과) 절연에 개체를 뒤덮었 :. Dewar 탱크주의의 하단으로 그렇죠. 샘플 회수하기 전에 장치를 냉각하기 위해 천천히 Dewar에 장치를 담가 액체 질소가 위의 단계를 진행하기 전에 충분히 장치를 냉각 수 있습니다. </li><li> 항아리 밖으로 나가게 냉동고 상자와 약속 Dewar의 성벽을 따라 수직으로 장치를 당겨. </li><li> Dewar의 바닥에서 가져온 상자를 잡아. </li><li> cryovials를 검색하는 경우, 부드럽게 스트레이너 (그림 9)를 들으며 cryoscoop와 Dewar의 바닥을 다쳤어요. </li><li> cryobox 검색과 마찬가지로 직립 장치를 끌어와 스트레이너에서 수집한 튜브를 잡아 야지. </li></ol> 4. 대표 결과 유전자 발현 연구의 주요 과제는 RNA의 품질은 저장 조건에 따라 다릅니다있다는 것입니다냉동 조직 샘플 및 RNA 추출 4. 그림 10 모두에 대해 총 RNA의 무결성에 대한 시료 처리의 효과가 나타납니다. 동일한 조직 소스 (인간 지방)에서 총 RNA는 다양한 샘플 처리를 받게되었다. 이전 실험, 손상 총 RNA 움직여 약 두배 18S rRNA 밴드 (그림 10, 레인 1)과 같은 강렬한 같은 28S rRNA 밴드가있는 명확 28S와 18S rRNA 밴드를 보여줍니다. 18S 강도 비율 2시 1분 5에서 출발 :이 2시 1분 비율 (28S : 18S)는 부분적으로 저하 RNA는 얼룩, 또는 28S로 나타나는 반면, RNA이 그대로 있다고 표시입니다. 3-4 차선이 상당한 저하와 RNA 샘플을 묘사. 이러한 RNA 샘플은 따라서 정기가 타락한 튜브와 상자의 검색 (그림 10, 레인 3-4의 필요성으로 인해 decanting와 장기 저장 장치를 모델링, Dewar (방법)에서 단기 retrievals에 의해 반복되는 부분 defreezing를 받게되었다 ). 그러나 샘플 Dewar 서비스에 저장DIY 장치 (방법 B)을 사용하지 않고, 따라서 어떠한 부분 defreezing, 그대로 RNA를 (그림 10, 레인 2)이 포함되어 있습니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig1.jpg" /> 1 그림. )베이스는 2 개의 3 양면의 강한 넥타이 표시된 치수로 구성되어 있습니다. 각 강력한 넥타이 하나의 큰 사전 뚫고 구멍 (고체 화살표) 및 각 얼굴에 여러 개의 작은 구멍 (작은 화살표)가 포함되어 있습니다. 이것은 너트와 볼트로 조임 허용하는 옵션을 제공합니다. 또한 작은 구멍 샘플 검색시 액체 질소의 빠른 배수를 허용합니다. B)에 강한 타이 각각의 한 측면은 L은 모양의 강한 넥타이 만드는 펜치의 도움으로 정리하고 있습니다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig2.jpg" /> 그림 2. 강한 타이 T 스트랩이 함께 강한 유대 관계를 확보하는 데 사용됩니다. 강한 넥타이와 마찬가지로 T-스트랩 하나의 큰 사전 뚫고 구멍 (고체 화살표) 두 개의 작은 구멍 (smal 있습니다각 모서리에 &#39;화살표). 너트와 볼트를 사용하여 스트랩 - 이것은 T의 길이를 따라 강한 유대 관계를 확보하실 수 있습니다. 또한 홈 붙이 접시에 T-스트랩을 고정 수 있습니다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig3.jpg" /> 그림 3. ) 각 강한 넥타이) 나. 크라운 볼트 너트, 볼트와 와셔를 사용하여 길이를 따라, T-스트랩 중 한 코너로 고정되는 두 강한 유대은 5 ½ 인치 × 5 ½를 검색할 수 있도록 서로 인접 확보 cryoboxes 인치. X 2인치 등이 같은 작은 cryoboxes 들어,, 하나의 강한 넥타이는 T-스트랩없이 홈 붙이 판에 직접 고정 할 수 있습니다. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig4.jpg" /> 그림 4. 플랫 플레이트는 손잡이로 사용됩니다 끌어들 였는데. 홈 붙이 접시의 길이는 Dewar의 깊이에 따라 달라집니다. 이 경우에는 홈 붙이 플레이트 4 피트가 사용되었습니다. 홈 붙이 판재의 두께는 중요 s입니다Dewar을 가득 액체 질소에서 샘플을 검색하는 동안 얇은 홈 붙이 번호판 (&lt;14 게이지) 장치가 어설픈하게 ince. <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig5.jpg" /> 그림 5는. 강한 유대 관계와 T 스트랩으로 구성된 플랫베이스 그런 다음 홈 붙이 접시의 한쪽 끝에 고정합니다. T 스트랩의 남은 모서리에있는 큰 구멍은 평면 접시 슬롯과 ​​정렬과 진수 볼트와 너트를 사용하여 고정한다. 이 장치는 현재 Dewar에서 cryoboxes를 검색하는 데 사용할 수 있습니다. <img alt="그림 6" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig6.jpg" /> 그림 6. 홈 붙이 플랫 플레이트의 한쪽 끝을은 펜치를 사용하여 구부 러 특히 본 사건과 같이 깊은 Dewars을 위해 더 나은 손잡이를 제공하기 위해 거품으로 덮여있다. <img alt="그림 7" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig7.jpg" /> 그림 7. 와이어 메쉬와 스테인레스 스틸 손잡이와 스트레이너Dewar에서 cryovials를 검색하는 데 사용됩니다. 핸들 슬롯이 함께 제공되지 않은 경우 초경 비트와 드릴은 구멍을 뚫는 데 필요한 것입니다. <img alt="그림 8" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig8.jpg" /> 그림 8. cryovials의 검색을 쉽게하기 위해서는 스트레이너는 국자 모양의 스트레이너를 얻을 펜치를 사용하여 목을 따라 굽습니다. 스트레이너는이 사건에서와 같이 입술과 함께 제공되는 경우, 펜치는 그것을 구부하는 데 사용할 수 있습니다. 이 여과기는 Dewar 내에 잡히지 않길 보장합니다. <img alt="그림 9" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig9.jpg" /> 그림 9. 스트레이너는 16 진수 너트와 볼트를 사용하여 한쪽 끝에 홈 붙이 플랫 플레이트로 고정됩니다. <img alt="그림 10" src="/files/ftp_upload/3903/3903fig10.jpg" /> 10 그림. 총 RNA의 샘플 무결성은 다른 시료 처리 조건에 노출. 탐구 RNA 품질이 C를 처리 샘플에 영향하는 방법onditions는 같은 소스로부터 RNA 샘플의 집합 handlings 두 가지 방법을 받게되었다. 방법 따라서 DIY 장치를 사용하여 샘​​플 retrievals를 받게 Dewar, 아니 일부 defreezing에서 RNA의 스토리지로 구성되어. 방법 B는 따라서 정기가 무너졌다 샘플을 가져오기위한 decanting와 장기 저장 장치를 모델링, Dewar에서 단기 retrievals에 의해 반복되는 부분 defreezing 들어서는 Dewar의 RNA의 스토리지로 구성되어. 총 RNA 무결성 후 겔 전기 영동에 의해 분석되었다. Lane1 : 샘플 전에 Dewar의 저장 공간, 레인 2 : 방법에 의해 검색 들어서는 Dewar의 샘플, 레인 3, 4 : 방법 B로 검색 들어서는 Dewar의 샘플, M : 100 BP의 사다리.

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</ol>

관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.

Dewar 탱크의 바닥에서 cryoboxes 및 cryovials를 검색하는 가장 일반적인 방법 중 하나는 여분의 용기에 액체 질소를 가만히 따르다하고 플라스크에 남아있는 또는 decanted 액체 질소에 떠 샘플을 끄집어하는 것입니다. 그러나 이것은 액체 질소 증기에 장시간 노출이에 의한 극저온 화상이나 질식의 원인이 될 수 있습니다 안전 연습이다. 타락한의 cryovials의 검색의 다른 일반적인 방법은 cryovial 집게 3의 사용을 포함한다. 그러나 액체 질소로 가득 탱크의 어두운 공간 내에서 제한된 가시는 기동성을 제한합니다. 위에서 설명한 Cryotolerant DIY 복구 장치는 제한된 시야와 깊은 flasks의 바닥에서 떨어진 cryoboxes 및 cryovials를 가져오기위한 저렴, 안전하고 쉬운 대안을 제공합니다. DIY 복구 장치를 취급의 용이성은 검색 이전 flasks을 비울 필요가 circumvents. 또한,...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> Hillman 그룹 도금 홈 붙이 작은 1-3/8 X 4피트, 14 게이지 </td><td> 로컬 하드웨어 상점 </td><td> N / A </td><td> 1 단위 필수 </td></tr><tr><td> 크라운 볼트 스테인레스 # 6 - 타원형 헤드 십자 드라이브 머신 스크류 인치 32 X 8분의 3 </td><td> 로컬 하드웨어 상점 </td><td> 모델 # 42281 </td><td> 필수 4 대 </td></tr><tr><td> 크라운 볼트 아연 도금 강판 펜더 와셔 인치 X 1-1/2 인치 8분의 3 </td><td> 로컬 하드웨어 상점 </td><td> 모델 # 20122 </td><td> 필수 4 대 </td></tr><tr><td> 크라운 볼트 아연 도금 # 8-32 머신 스크류 너트 </td><td> 로컬 하드웨어 상점 </td><td> 모델 # 18512 </td><td> 필수 4 대 </td></tr><tr><td> 심슨 강한 - 타이 BC40Z 절반 자료 인치 4 In.x4 </td><td> 로컬 하드웨어쇼핑 </td><td> 모델 # BC40Z </td><td> 필수 2 대 </td></tr><tr><td> T 벨트 매세요 X 6인치 심슨 강한 타이 6 </td><td> 로컬 하드웨어 상점 </td><td> 모델 # 66T </td><td> 1 단위 필수 </td></tr><tr><td> Oneida 6 &quot;메쉬 스트레이너 </td><td> 지역 식료품 가게 </td><td> 모델 # 7859W </td><td> 1 단위 필수 </td></tr><tr><td> Hillman 그룹은 16 진수 너트 3/8-16을 아연 도금 </td><td> 로컬 하드웨어 상점 </td><td> 모델 # : 810509 </td><td> 필수 6 대 </td></tr><tr><td> Hillman 그룹은 16 진 볼트 3/8- 16 아연 도금 </td><td> 로컬 하드웨어 상점 </td><td></td><td> 필수 4 대 </td></tr><tr><td> 절연을위한 폼 </td><td> 로컬 하드웨어 상점 </td><td></td><td> 1 단위 필수 </td></tr><tr><td> 드라이버 스크류 </td><td> 로컬 하드웨어 상점 </td><td></td><td> 1 단위 필수 </td></tr><tr><td> 펜치 </td><td> 로컬 하드웨어 상점 </td><td></td><td> 1 단위 필수 </td></tr></tbody></table>

cryopreserved 샘플 복구를 위해 손수 함 장치 실수로 극저온 저장 탱크 떨어졌고

Do-It-Yourself Device for Recovery of Cryopreserved Samples Accidentally Dropped into Cryogenic Storage Tanks 

액체 질소 (-196도 ℃) 액체 압력 하에서 보관 매우 춥고, 무취, 무색이다. 그것은 일반적으로 같은 혈액, 세포 및 조직의 1,2 등 생물 학적 물질의 장기 보관을위한 극저온 유체로 사용됩니다. 액체 질소 극저온 자연, 샘플 보존에 적합 반면, 문의에 대한 살아있는 조직의 급속한 동결을 일으킬 수 있습니다 - &#39;극저온 화상&#39;2로 알려진, 밀접하게 저장 및 Dewars에서 샘플 검색에 관련된 사람에 심한 동상으로 이어질 수 있습니다. 또한 액체 질소가 증발은 공기 중의 산소 농도를 줄이고, 특히 밀폐된 공간 2, 질식을 일으킬 수 있습니다. 실험실에서 생물 학적 샘플은 종종 Dewar 탱크 1 ~ 스테인레스 스틸 선반에 쌓인 cryovials 또는 cryoboxes에 저장됩니다. 이러한 스토리지 랙에은 랙에으로부터 줄어 드에서 박스를 방지하기 위해 긴 샤프트와 함께 하단에 제공됩니다루틴 처리시 Dewars. 모든 너무 자주, 그러나 귀중한 표본과 상자나 유리병 삐져 나올 액체 질소 채워 탱크의 바닥에 가라 앉다. 그러한 경우에는 샘플은 지루하고 여분의 용기 또는 폐기 그것에 액체 질소를 전송 후 검색할 수 있습니다. 상자와 유리병 후 비교적 안전하게 비우지 Dewar에서 회복 될 수 있습니다. 그러나, 액체 질소와 그 팽창 률의 극저온 자연 침몰한 샘플 회수 위험을 만듭니다. 이것은 일반적으로 시료 회수가 한 사람에 의해 실시 않을 것이 안전 기관에 의해 권장합니다. 또 다른 대안은 유리병 3 끄집어 상용 시원한 그래버이나 집게를 사용하는 것입니다. 그러나, 짙은 액체 충​​만 Dewars 내에서 제한된 가시들이 사용하는 주요 제한 포즈. 이 문서에서 우리는 안전하고 모두 극저온 유체를 포함하는 Dewar에서 샘플 검색을하게 Cryotolerant DIY 복구 장치의 건설을 설명기 쉬운.

여기에서 우리는 액체 질소로 가득 Dewar 탱크에서 샘플 검색을 위해 저렴한 비용, 내구성 cryotolerant 장치를 제시. 건설 장비의 모듈식 설계의 용이성은 극저온 탱크에서 시료를 쓰는 과정이 안전하고 쉽습니다.

Cryopreserved 샘플 복구를 위해 손수 함 장치 실수로 극저온 저장 탱크 떨어졌고

액체 질소는 무색, 무취이며 매우 낮은 온도(-196 °C)를 유지하는 가압 상태의 액체입니다. 이는 일반적으로 장기 보관을 위한 저온 유체로 사용됩니다...

이 절차의 목적은 제작이 간편한 장치를 사용하여 액체 질소가 채워진 듀오 탱크에서 크라이오 박스와 크라이오 바이알 내의 샘플을 쉽게 회수하는 것입니다. 우선, 조작 공간을 확보하기 위해 듀오 탱크에서 냉동 랙 1~2개를 제거한 후 장치를 탱크 안에 수직으로 삽입하여 이를 수행합니다. 두 번째 단계는 장치를 이용해 탱크 바닥면을 따라 조심스럽게 긁어내는 것입니다.다음으로, 장치를 도어의 벽면을 따라 수직으로 끌어올립니다. 냉동고 박스를 탱크에서 꺼내기 위한 마지막 단계는 도어 바닥에서 회수한 박스를 잡고 제거했던 냉동 랙을 다시 배치하는 것입니다. 디캔팅(decanting)이나 액체 질소 바(bar)와 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 샘플의 무결성을 보존하면서 한 명의 작업자가 수행할 수 있는 쉽고 안전하며 신속한 대안을 제공한다는 점입니다. 저온 내성 장치의 조립을 시작하려면, 플라이어를 사용하여 세 면으로 된 케이블 타이의 한쪽 면을 펴서 L자형 케이블 타이를 만듭니다.여기서 보시는 바와 같이, 강한 결속대의 크기는 도어 넥의 직경에 따라 선택할 수 있습니다. 장치가 5.5 x 5.5인치 크라이오 박스를 회수할 수 있도록 두 개의 강한 결속대를 제작해야 합니다. 이를 크라운 볼트, 너트 와셔 및 나사를 사용하여 강한 결속 TST 스트랩으로 고정하여 크라이오 스쿱의 베이스를 형성합니다.장치가 이제 여기 보이는 것과 같이 나타나야 합니다. 이제 슬롯 플레이트를 사용하여, 스트롱 타이 티 스트랩(strong tie tee strapp)의 슬롯을 슬롯 플레이트 한쪽 끝의 슬롯과 맞춥니다. 그런 다음 Hillman 너트와 볼트로 두 부품을 함께 고정합니다.슬롯 플레이트와 강한 결속선에 미리 뚫린 구멍이 없는 경우, 부착을 위한 구멍을 뚫으십시오. 원하는 경우, 슬롯 플레이트의 반대쪽 끝을 구부리고 폼으로 감싸서 손잡이를 만들 수 있습니다. 장치를 더 잘 잡기 위해, 세척 전에는 반드시 폼을 제거하십시오.동결 내성 DIY 회수 장치는 동결 보존 튜브(cryo vial) 회수용으로도 조정하여 사용할 수 있습니다. 이를 위해서는 평평한 바닥 부분을 액체에서 튜브를 퍼낼 수 있도록 개조된 스테인리스 스틸 체로 교체해야 합니다. 조립을 시작하려면 먼저 크라운 너트와 볼트를 풀고, 슬롯형 플레이트에 강력한 타이어 티 스트랩을 부착하십시오.그 후, 스테인리스 스틸 거름망을 슬롯 플레이트에 부착하기 전에, 펜치를 사용하여 거름망의 목 부분을 조심스럽게 구부려 바닥 부분이 국자와 비슷한 각도가 되도록 조절합니다. 거름망에 립(lip)이 있는 경우, 펜치를 사용하여 립을 아래로 구부립니다. 이렇게 하면 장치를 조작하기가 더 쉬워집니다.거름망 손잡이의 구멍을 슬롯 플레이트의 구멍과 맞춘 후, Hillman 너트와 볼트를 사용하여 거름망을 고정하십시오. 거름망에 미리 뚫린 구멍이 없는 경우 직접 구멍을 뚫으십시오. 저장 용기에서 cryo box를 꺼내기 전, 반드시 저온 장갑을 착용하십시오.그런 다음, 장치를 조작할 공간을 확보하기 위해 냉동고에서 랙 하나 또는 두 개를 제거합니다. 다음으로, 강한 타이 끈 베이스가 장착된 수직형 저온 내성 DIY 회수 장치를 사용하여 냉동고 바닥을 따라 조심스럽게 긁어내어 냉동고 탱크 바닥에 떨어진 박스를 수집합니다. 이어서, 장치를 벽면을 따라 수직으로 끌어올려 탱크에서 냉동 박스를 퍼 올립니다.장치를 수직으로 잡고 곧게 위로 끌어올려 박스가 다시 도어(doer) 안으로 미끄러져 들어가는 것을 방지해야 합니다. 크라이오 바이알을 회수하려면, 체가 장착된 크라이오 스쿱을 사용하여 크라이오 박스 회수 때와 비슷하게 도어 바닥을 부드럽게 긁어낸 뒤, 장치를 수직으로 들어 올려 체에 수집된 바이알을 잡으십시오. 유전자 발현 연구의 주요 과제는 냉동 조직 샘플과 추출된 RNA 모두의 저장 조건에 따라 RNA의 품질이 달라진다는 점입니다.이 그림은 시료 처리 방식이 전체 RNA의 무결성에 미치는 영향을 보여줍니다. 동일한 조직원으로부터 얻은 전체 RNA를 실험 전 서로 다른 시료 처리 방식에 노출시켰습니다. 손상되지 않은 전체 RNA 준비물은 28 s 및 18 s 리보솜 RNA 밴드가 뚜렷하게 나타나며, 28 s 리보솜 RNA 밴드의 강도가 18 s 리보솜 RNA 밴드보다 약 2배 더 강하게 나타납니다. 이는 RNA가 온전함을 나타냅니다. 3번 및 4번 레인은 보관함에서 단기적으로 반복적으로 꺼내어 부분적으로 해동된 시료의 심각한 분해 상태를 보여주며, 이는 보관함 내 튜브의 위치 확인 등을 위해 주기적으로 꺼내어 보관하는 장기 저장 상황을 모델링한 것입니다.하지만 DIY 장치를 사용하여 doer 서비스에 보관함으로써 부분적 해동이 일어나지 않은 샘플은 2번 레인에서 온전한 RNA를 포함하고 있습니다. 이 영상을 시청한 후에는 액체 질소로 채워진 dvar를 비울 필요 없이 샘플을 회수하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오에서는 생물학적 시료를 보존하기 위한 초고속 극저온 유리화(cryo vitrification) 방법을 보여줍니다. 이 방법은 세포 내 얼음 결정 형성을 방지하여 생물학적 조직을 동결 손상으로부터 보호하기 위해 동결 보호제의 조합을 사용하는 것을 수반합니다.

유리화(Vitrification-based cryopreservation): 장기 보관을 위해 매우 낮은 온도에서 생물학적 시료를 보존하는 초고속 냉각 기술

이 논문은 투과형 전자 현미경으로 현탁 세포를 시각화하기위한 사용하기 쉽고 저렴한 cryofixation 방법을 설명한다.

플 런지 프리즈 : 투과 전자 현미경에서 서스펜션 세포의 초 구조 및 면역 로컬 ​​라이 제이션 연구를위한 도구

이 프로토콜은 액체 질소에 직접 급락으로 근육 조직을 동결하는 절차를 설명합니다. 이 프로토콜은 또한 질소 가스의 "블랭킷 효과"를 방지 할 수있는 새로운 cryovial를 강조 할 때, 액체 질소 연락처 검체의 조직 표면.

근육 조직이 직접 액체 질소에 몰입 할 때 이슈 결빙 멀티 홀 Cryovial 제거

이 원고는 1 차 세포가 낮은 농도에서 저온 보호 제로 미리 배양되고 큰 물방울에서 유리화되는 다량의 쥐 간세포를 위한 얼음없는 동결 보존 방법을 기술합니다.

1 차 간세포 보존을 위한 대량 물방울 유리화

여기에 제시된 것은 싱크로트론 극저온 X선 나노프로브를 사용한 X선 형광 이미징 이전에 실리콘 질화물 멤브레인 및 플런지 동결에 대한 세포 배양 프로토콜이다. 실온 나노 분석만 이 제공되면, 동결된 시료는 더욱 동결건조될 수 있다. 이들은 세포내 원소 조성물에 대한 정보를 얻기 위한 중요한 단계이다.

싱크로트론 X선 형광 나노 분석을 위한 실리콘 질화물 멤브레인의 세포 배양 및 저온 준비

이 프로토콜은 APEX2 태그가 달린 막 단백질이 최적으로 보존된 세포 초음파 구조 내에서 전송 전자 현미경검사법에 의해 국한될 수 있는 cryoAPEX 방법을 설명합니다.

초구조적으로 보존된 세포 내 막 단백질 국소화의 전자 현미경 분석을 위한 CryoAPEX 방법

이 프로토콜은 미크론 규모의 원통형 및 평면 극저온 액체 제트의 작동과 원리를 제시합니다. 지금까지 이 시스템은 레이저 플라즈마 실험에서 높은 반복률 표적으로 사용되어 왔습니다. 예상되는 학제 간 응용 분야는 실험실 천체 물리학에서 재료 과학, 그리고 궁극적으로 차세대 입자 가속기에 이르기까지 다양합니다.

높은 반복률을 위한 극저온 액체 제트 디스커버리 사이언스

여기에 제시된 것은 동결된 시료를 동적 핵 편광(DNP) 매직 앵글 방적(MAS) 핵자기 공명(NMR) 프로브로 전송하기 위한 프로토콜이다. 이 프로토콜에는 실험 전의 로터 저장 방향과 실험 전후의 생존 가능성 측정을 위한 방향이 포함됩니다.

셀룰러 생존력을 보존하는 마법의 각도 회전 핵 자기 공명 분광기에 극저온 샘플 로딩

이 프로토콜은 극저온 구조조명 현미경을 사용하여 생물학적 냉동 보존 샘플을 이미지화하는 방법을 보여줍니다. 우리는 U2OS 세포의 세포 골격을 화상 진찰하여 방법론을 보여줍니다.

극저온 보존 된 세포에서 극저온 구조 조명 현미경 데이터 수집

이 프로토콜은 멸종 위기에 처한 산호 종의 정자 처리 및 냉동 보존의 효율성과 용량을 개선하기 위한 반자동 경로를 설명하여 유전적 다양성을 확보하고 산호초 복원 노력을 지원하는 것을 목표로 합니다.

바이오뱅킹 및 양식업을 지원하기 위한 산호 정자의 냉동 보존을 위한 반자동 워크플로우

학습하세요 액체 질소 듀어 탱크에서 크라이오 박스와 바이알을 안전하게 회수하는 저비용 내한성 장치 제작법을. 단일 운전자가 샘플 무결성을 보존하며 신속하게 사용할 수 있습니다.

Cryopreserved 샘플 복구를 위해 손수 함 장치 실수로 극저온 저장 탱크 떨어졌고

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