Name: 핫 수성 - 페놀 추출에 의한 그람 음성 박테리아에서 정화와 Lipopolysaccharide의 시각화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-28T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 31 s
Description: 학습하세요 그람 음성 박테리아에서 핫 수성-페놀 추출법을 이용한 지질다당류(LPS) 정화 및 시각화 방법을. SDS-PAGE와 웨스턴 블롯으로 LPS 특성을 분석하여 세균 병원성 및 면역 반응 연구에 활용할 수 있습니다.

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이 작품은 건강과 낭성 섬유증 재단의 국립 연구소에서 교부금에 의해 지원되었다.

1. LPS 추출을위한 박테리아의 작성 <ol><li> 항생제 필요한 경우에 보충 Luria 국물 (LB), 5 ML에서 하룻밤 문화를 시작합니다. 37시 배양기를 흔들어 ° C ~ 200 RPM의 (12-18시간) 야간 문화를 성장. </li><li> LB와 문화 1시 10분을 희석하고 분광 광도계에서 OD 600 독서 가져가라. OD 600 독서를 바탕으로 0.5의 OD 600으로하여 박테리아의 1.5 ML 서스펜션을합니다. </li><li> 펠렛은 10 분 10,600 X g에서 microcentrifuge의 박테리아. 표면에 뜨는를 제거하고 폐기. LPS를 즉시 추출되지 않을 경우 펠렛은 -20 ° C에 저장할 수 있습니다. </li></ol> 2. LPS의 추출 <ol><li> 첫째, 2X SDS 버퍼를 준비합니다. 0.1에서 50 ML의 4% β-메르 캅 토 에탄올 (BME) 4 % SDS의 솔루션 및 20 % 글리세롤 만들기 M 트리스-HCL, 산도 6.8. 솔루션을 염색하는 bromophenol 파란색의 핀치를 추가합니다. 2X을 diluting하여 1X SDS-버퍼 주식을 만들기멸균 증류수 H 2 O에 관련 째깍 1시 1분 이것은 상온에서 저장할 수 있습니다. </li><li> 멸균 증류수 H 2 O에에 DNase 나 RNase와 Proteinase K의 세 별도의 10 밀리그램 / ML 솔루션 만들기 </li><li> 1X SDS-버퍼 200 μl의 단계 1.3에서 pelleted 박테리아를 Resuspend. 펠렛 완전히 천천히 아래로 솔루션을 pipetting 및하여 resuspended되었는지 확인하십시오. 와동하지 마십시오. </li><li> 15 분 동안 물을 욕조에 정지 박테리아를 끓이다. 15 분 동안 상온에서 냉각 솔루션을 허용합니다. </li><li> 2.2에서 준비 DNase I 및 RNase 솔루션 모두 5 μl를 추가합니다. 30 분간 37 ° C에서 샘플을 품어. *이 단계는 선택 사항입니다, nuclease-대우와 비 대우 샘플 사이 LPS의 품질에 최소한의 차이가있다. </li><li> 2.2에서 준비 Proteinase K의 솔루션을 10 μl를 추가합니다. 3 시간 동안 59 ° C에서 샘플을 품어. 시간 제약이있는 경우이 단계는 하룻밤 사이에 수행할 수 있습니다. </li><li> 각 샘플, 광고까지의 D 200 μl는 얼음처럼 차가운 트리스 - 포화 페놀 (트리스 - 포화 페놀를 사용할 수없는 경우에는 수상 포화 페놀은 대신 사용될 수 있습니다.) 튜브가 꽉 닫혀있에 모자, 약 5~10초위한 와동 각 샘플을 확인합니다. </li><li> 가끔 vortexing, 15 분 동안 65 ° C에서 샘플을 품어. 실온에 시원한 잠복기 후, 다음 1 각 샘플로 룸 온도 디에틸 에테르 ML 5로 10 초간 소용돌이를 추가합니다. 그것이 휘발성이기 때문에, 연기 후드에 핸들 에테르를 수행하십시오. </li><li> 10 분 동안 20,600 X g에서 샘플을 원심 분리기. 조심스럽게 원심 분리기에서 샘플을 제거하고 아래쪽에 파란색 레이어를 추출합니다. 상위, 투명 레이어를 사용하지 않아야합니다. 파란 레이어의 소량 뒤에두면 상위 레이어와 오염 것이 바람직합니다. </li><li> 2.9 - 단계 2.7을 반복하여 샘플을 다시 압축을 풉니다. 두 extractions은 일반적으로 충분합니다. 샘플 흐린 나타나는 경우 자세한 extractions는 performe 수 있습니다라. SDS-PAGE로 분리되기 전에 추출된 표본 각 2X SDS-버퍼 200 μl를 추가합니다. 샘플은 8% -15 %는 SDS-polyacrylamide의 젤에서 실행할 수 있습니다. 이 방법을 사용 준비가 LPS의 다섯 데 15 μl는 시각화를 위해 일반적으로 충분합니다. </li></ol> 3. 대표 결과 위와 같이 준비 LPS 샘플 표준 실버 염색법 프로토콜이나 상용 LPS의 염색법 키트를 사용하여 SDS-PAGE에서 분리에 따라 직접 염색법에 의한 시각이 될 수 있습니다. 또는 polyacrylamide 젤에 분리된 LPS는 nitrocellulose 막에게 양도 및 LPS 특정 안티 세라를 사용하여 immunoblotting 서양를 받게됩니다. 이 프로토콜의 경우, 우리는 프로-Q 에메랄드 300 Lipopolysaccharide 젤 얼룩 키트 (분자 프로브)를 사용하고, 제조 업체의 지침을 따라갔다. 프로-Q 에메랄드 300 스테인드 12% SDS-polyacrylamide 겔은 그림 1에 표시됩니다. 각 레인은 DIF에서 준비 LPS의 15 μl를 포함Burkholderia dolosa의 ferent 변종은 낭성 섬유증 환자의 가래 샘플로부터 격리. 사다리 패턴을 banding 다른 LPS, 다른 숫자 올리 고당 코어에 연결된 장치를 반복 O-항원의 반사,이 방법을 사용하여 증거들이, 예를 들어, 레인 1과 6의 샘플이 서로 유사한 banding 패턴을 가지고 (빨간색 박스). <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3916/3916fig1.jpg" /> Burkholderia dolosa 임상 분리의 그림 1. 프로-Q 에메랄드 300 스테인드 LPS. 일곱 B.로부터 LPS 이 프로토콜의 설명에 따라 낭성 섬유증 환자의 확산에서 dolosa의 종자는 고립되었다. 열 다섯 μl는 제조 업체의 지침에 따라, 프로-Q 에메랄드 300과 12% SDS-polyacrylamide 젤, 그리고 스테인드에서 분리되었다. LPS 코어는 화살표를 표시하고, O-항원 반복 유사한 banding 패턴을 보여주는 LPS는 빨간색으로 박스가 있습니다. M은 = 분자량 마커.

<ol><li>Raetz, C. R., Whitfield, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide+endotoxins%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide endotoxins.</a> Annu. Rev. Biochem. 71, 635-700 (2002).</li>
<li>Valvano, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Export+of+O-specific+lipopolysaccharide%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Biosci%22%5BJournal%5D)">Export of O-specific lipopolysaccharide.</a> Front. Biosci. 8, 452-471 (2003).</li>
<li>Pier, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+aeruginosa+lipopolysaccharide%3A+a+major+virulence+factor%2C+initiator+of+inflammation+and+target+for+effective+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Med.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas aeruginosa lipopolysaccharide: a major virulence factor, initiator of inflammation and target for effective immunity.</a> Int. J. Med. Microbiol. 297, 277-295 (2007).</li>
<li>Freudenberg, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+lipopolysaccharide+susceptibility+in+the+innate+immune+response+to+Salmonella+typhimurium+infection%3A+LPS%2C+a+primary+target+for+recognition+of+Gram-negative+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Role of lipopolysaccharide susceptibility in the innate immune response to Salmonella typhimurium infection: LPS, a primary target for recognition of Gram-negative bacteria.</a> Microbes Infect. 3, 1213-1222 (2001).</li>
<li>Jann, K., Jann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polysaccharide+antigens+of+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Polysaccharide antigens of Escherichia coli.</a> Rev. Infect. Dis. 9, Suppl 5. S517-S526 (1987).</li>
<li>McCallum, K. L., Schoenhals, G., Laakso, D., Clarke, B., Whitfield, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-molecular-weight+fraction+of+smooth+lipopolysaccharide+in+Klebsiella+serotype+O1%3AK20+contains+a+unique+O-antigen+epitope+and+determines+resistance+to+nonspecific+serum+killing%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">A high-molecular-weight fraction of smooth lipopolysaccharide in Klebsiella serotype O1:K20 contains a unique O-antigen epitope and determines resistance to nonspecific serum killing.</a> Infect. Immun. 57, 3816-3822 (1989).</li>
<li>Hancock, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+aeruginosa+isolates+from+patients+with+cystic+fibrosis%3A+a+class+of+serum-sensitive%2C+nontypable+strains+deficient+in+lipopolysaccharide+O+side+chains%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas aeruginosa isolates from patients with cystic fibrosis: a class of serum-sensitive, nontypable strains deficient in lipopolysaccharide O side chains.</a> Infect. Immun. 42, 170-177 (1983).</li>
<li>Gupta, S. K., Masinick, S., Garrett, M., Hazlett, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+aeruginosa+lipopolysaccharide+binds+galectin-3+and+other+human+corneal+epithelial+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas aeruginosa lipopolysaccharide binds galectin-3 and other human corneal epithelial proteins.</a> Infect. Immun. 65, 2747-2753 (1997).</li>
<li>Hitchcock, P. J., Brown, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+heterogeneity+among+Salmonella+lipopolysaccharide+chemotypes+in+silver-stained+polyacrylamide+gels%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Morphological heterogeneity among Salmonella lipopolysaccharide chemotypes in silver-stained polyacrylamide gels.</a> J. Bacteriol. 154, 269-277 (1983).</li>
<li>Westphal, O., Jann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+lipopolysaccharides%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Carbohyr.+Chem%22%5BJournal%5D)">Bacterial lipopolysaccharides.</a> Methods Carbohyr. Chem. 5, 83(1965).</li>
<li>Lieberman, T. D. Parallel bacterial evolution within multiple patients ties novel genes to pathogenesis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLieberman%2C+TD+%22Nat+Genet%22">Nat Genet</a>. , Forthcoming (2011).</li>
</ol>

관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.

우리는 핵산과 단백질 등 다른 세포 구성 요소에서 LPS를 멀리 정화하는 방법을 설명했습니다. 이 방법은 그림 1에 표시된 SDS-PAGE의 젤의 탄수화물의 염색법을 포함한 다양한 시각화 방법, 다수에서 사용할 수있는 고품질의 LPS를 제공합니다. 이 방법은 특정 안티 세라를 사용하여 종자의 다양한 LPS를 혈청형하거나 직접 시각화하여 분리 사이 relatedness을 표시하는 데 사용할 수 있습니다. 예를 들어, LPS 특성화와 함께 최근의 게놈 전체의 시퀀싱 프로젝트 B.의 발발에서 dolosa는 이러한 변종 11 LPS의 존재와 부재와 연결합니다 단일 염기 다형성 (SNP)의 발견으로 이끌었다. 우리는 더 이상 분석을위한 고품질의 LPS를 얻을 정도로 엄격한 아직 상대적으로 빠른이기 때문에이 방법은, 히치콕과 브라운 9 설명한 전체 세포 lysates의 단백 분해 효소 처리에 바람직하다고 믿고의. G...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> DNase 나 재조합, RNase가없는 </td><td> 로슈 </td><td> 04716728001 </td></tr><tr><td> RNase </td><td> 로슈 </td><td> 10109169001 </td></tr><tr><td> Proteinase K </td><td> 어부 </td><td> BP1700 </td></tr><tr><td> 페놀 트리스 - 포화 </td><td> 어부 </td><td> BP1750-100 </td></tr><tr><td> 디에틸 에테르 </td><td> 토마스 과학 </td><td> C313K31 </td></tr><tr><td> 프로-Q 에메랄드 300 Lipopolysaccharide 젤 얼룩 키트 </td><td> 분자 프로브 </td><td> P20495 </td></tr></tbody></table>

핫 수성 - 페놀 추출에 의한 그람 음성 박테리아에서 정화와 lipopolysaccharide의 시각화

Purification and Visualization of Lipopolysaccharide from Gram-negative Bacteria by Hot Aqueous-phenol Extraction

Lipopolysaccharide가 (LPS) 그람 음성 세균의 외부 세포막의 주요 구성 요소입니다. 그것은 지방질로 구성된 삼자 간의 분자는 외부 세포막에 박혀있는, 셀 1, 2의 표면에서 바깥쪽을 확장하는 핵심 올리 고당 및 반복 O-항원 단위. LPS는 녹농균, 살모넬라균 종, 그리고 대장균 3-5 및 LPS O-항원 구성 양식 종자의 serotyping의 기초의 차이 등 많은 세균 종의 독성 및 pathogenesis에 중요 immunodominant 분자이다. LPS는 감염의 개시에 세포를 호스트 첨부에 참여하고 보완 - 중재 죽이는에서 보호를 제공합니다; LPS 부족 변종은 독성 6-8에 대한 감쇠가 될 수 있습니다. 이러한 이유로, 그것은 특히 임상 분리에서 LPS를 시각화하는 것이 중요합니다. 특정 의해 패턴과 인식을 banding 떠올리 LPSntibodies는 스트레인 lineages를 식별할 수 있도록, 다양한 돌연변이를 특성화하는 데 유용한 도구가 될 수 있습니다. 이 보고서에서 우리는 그람 음성 박테리아 세포에서 LPS의 분리 및 정제를위한 고온 수성 - 페놀 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 멀리 구 짧고 덜 집약적인 추출 방법으로 발생 LPS의 시각화를 방해할 수있는 핵산과 단백질에서 LPS의 추출을 허용합니다. LPS이 방법은 탄수화물 / 당단백질 얼룩 또는 표준 실버 염색법 방법을 사용하여 나트륨 dodecyl 황산 (SDS)-polyacrylamide 겔 전기 영동 (PAGE)와 직접 스테인드으로 구분됩니다 준비. LPS로 방지 세라 많은 저해 수있는 외부 막 단백질이나 다른 antigenic 목표와 교차 반응 반응은 SDS-PAGE로 구분 원유 세포 lysates의 서양 immunoblot에 따라 관찰되는 항체가 포함되어 있습니다. 혼자 원유 세포 lysates의 단백 분해 효소 처리는 항상 이것을 제거하는 효과적인 방법 없습니다이 문서나 다른 시각화 방법을 사용하여 배경. 또한, 이러한 배경을 제거하기 위해 광범위한 단백 분해 효소 처리가 잘 앞서 언급한 방법 중 하나가 해결되지 품질의 LPS로 이어질 수 있습니다. 이러한 이유로, 우리는 Westpahl 및 Jann 10 일부터 맞게 다음과 같은 프로토콜, LPS 추출에 이상적이라고 생각합니다.

우리는 그람 음성 세균의 lipopolysaccharide을 (LPS) 정화를위한 수정된 뜨거운 수성 - 페놀 추출 방법을 설명합니다. 일단 압축을 푼, LPS는 연속적으로 SDS-PAGE에 의해 분석 및 직접 염색법이나 서양 immunoblot에 의해 시각하실 수 있습니다.

핫 수성 - 페놀 추출에 의한 그람 음성 박테리아에서 정화와 Lipopolysaccharide의 시각화

리포폴리사카라이드(Lipopolysaccharide, LPS)는 그람 음성균 외막의 주요 성분입니다. 이는 ...인 lipid A, ...

본 절차의 전체적인 목표는 그람 음성균으로부터 LPS를 추출하는 것입니다. 먼저 적절한 배지에서 5 mL의 박테리아를 하룻밤 동안 배양한 후, 600 nm에서의 광학 밀도(OD₆₀₀)를 0.5로 조정하여 이를 수행합니다. 그다음, 미세 원심분리를 통해 박테리아를 펠렛화하고, SDS와 beam 또는 capto 에탄올이 포함된 Tris 완충액에 세포를 재부유시킵니다.그런 다음 세포 용해물을 가열하고 프로테아제와 뉴클레아제로 처리합니다. 마지막으로, 고온의 수성 페놀과 디에틸 에테르를 사용하여 두 번의 연속 추출을 수행하며, 이때 수성 청색층을 조심스럽게 제거하여 회수합니다. 최종적으로 SDS page 분리와 LPS 특이적 항체를 이용한 웨스턴 블롯 분석 또는 겔 내 다당류의 직접 염색을 통해, LPS의 존재 여부와 양, 박테리아 균주 및 O 항원 사슬 길이 양상을 나타내는 결과를 얻을 수 있습니다.Hitchcock과 Brown의 프로테아제 처리 방식과 비교했을 때 이 기술의 장점은, SDS page 및 western blotting을 통해 더 정밀하게 분해될 수 있는 순수한 LPS 샘플을 얻을 수 있다는 점입니다. 이 방법은 E. coli 및 Salmonella를 포함한 거의 모든 그람 음성균뿐만 아니라, 각각 Ella 및 Acetobacter와 같은 생물방어 및 신종 병원체 내의 리포폴리사카라이드 합성과 조절에 대한 통찰을 제공할 수 있습니다. 박테리아 배양을 위해, 항생제가 첨가된 5 mL의 LB 배지에서 그람 음성균을 하룻밤 동안 배양하십시오.필요한 경우, 200 RPM 및 37 °C의 진탕 배양기에서 배양물을 하룻밤 동안 성장시킵니다. LB를 사용하여 배양물을 1:10으로 희석한 후, 그 결과에 따라 600 nm에서 광학 밀도를 측정합니다. 600 nm에서의 최종 광학 밀도가 0.5가 되도록 박테리아 현탁액 1.5 mL를 준비합니다.마이크로 원심분리기를 사용하여 10,600 ×g에서 10분 동안 박테리아를 원심분리하여 펠릿화합니다. 그런 다음 상층액을 제거하여 버립니다. LPS를 추출하기 위해 다음과 같은 용액들을 준비합니다. 1X SDS 버퍼, 4% beta-mercaptoethanol 또는 BME 4% SDS, 그리고 소량의 bromophenol blue가 포함된 0.1 M Tris-HCl pH 6.8 내의 20% glycerol 용액, 그리고 멸균 증류수에 용해한 10 mg/mL 농도의 DNase I, RNase A 및 proteinase K 용액을 준비하여 재현탁합니다.200 µL의 1X SDS 버퍼에 담긴 박테리아 펠렛을 피펫팅하여 완전히 재부유시킵니다. 부유시킨 박테리아를 항온수조에서 15분 동안 천천히 가열하여 끓입니다. 그런 다음 15분 동안 실온에서 용액을 식힙니다.선택 사항으로, DNA 용액과 RNA 용액을 각각 5 µL씩 첨가하고 샘플을 37 °C에서 30분 동안 배양합니다. Proteinase K 용액 10 µL를 첨가하고 샘플을 59 °C에서 3시간 동안 배양합니다. 각 샘플 옆에 얼음처럼 차가운 tris-포화 페놀 200 µL를 첨가합니다.캡을 단단히 닫고 각 튜브를 5~10초간 볼텍싱합니다. 시료를 65 °C에서 15분 동안 배양합니다. 가끔 볼텍싱하며 실온으로 냉각합니다.그런 다음 흄 후드 아래에서 각 시료에 실온의 ethyl ether 1 mL를 첨가하고 5~10초 동안 볼텍싱합니다. 시료를 20,600 ×g에서 10분 동안 원심분리한 후 원심분리기에서 조심스럽게 꺼냅니다. 위쪽의 투명한 층이 섞이지 않도록 주의하며 각 시료의 하단 파란색 층을 추출합니다.각 튜브에 얼음처럼 차가운 tris와 포화 phenol을 200 µL씩 추가로 넣고 추출 과정을 반복합니다. 2X SDS 버퍼를 200 µL 추가합니다. 각 LPS 샘플 중 5~15 µL를 분리하여 8~15% SDS 폴리아크릴아마이드 겔(poly acrylamide gels)에 로딩합니다.여기 제시된 것은 낭성 섬유증 환자의 객담 샘플에서 분리된 다양한 균주의 bur cold area de losa로부터 준비된 LPS 샘플의 12% SDS-PAGE 겔입니다. 서로 다른 밴딩 패턴은 코어 올리고당에 부착된 O 항원 반복 단위의 수가 서로 다름을 반영합니다. 샘플 1과 6에서 유사한 수의 반복 단위를 확인할 수 있습니다.페놀 다이메틸 에테르(phenol dimethyl ether)를 사용하는 것은 위험할 수 있으므로, 실험복, 장갑 및 고글과 같은 개인 보호 장구를 착용하는 등의 예방 조치를 취해야 하며, 본 절차를 수행하는 동안에는 반드시 흄 후드 내에서 실험을 진행해야 함을 유의하십시오. 처리 과정에서 시료를 손실하지 않으려면 추출을 신속하게 수행하는 것이 중요합니다. 본 절차 이후에는 균주 간의 연관성을 시각화하기 위해 웨스턴 면역 블로팅(Western immuno blotting)이나 실버 염색(silver stain) 또는 기타 방법을 통해 지질다당류(lipopolysaccharide)를 시각화하는 과정이 필요합니다.

purification-visualization-lipopolysaccharide-from-gram-negative

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

출처: Armbruster, KM, Meredith, TC 질량 분석법에 의한 구조 결정을 위한 박테리아 지단백질의 농축 및 N-말단 리포펩티드의 제조. J. Vis. 경험. (2018년)이 비디오는 온열 시 상 분리를 거치는 비이온성 세제를 사용하여 박테리아 지단백질을 농축하는 방법을 보여줍니다. 순차적인 온도 변화와 원심분리 단계를 통해 지단백질은 세제 상으로 선택적으로 분할되는 반면 비지단백질 오염 물질은 제거됩니다. 그런 다음 농축된 지단백질을 침전, 세척 및 다운스트림 응용 분야를 위해 재현탁됩니다.

비이온성 세제 상 분리를 사용한 박테리아 지단백질 농축

출처: Hu, Y. 외. 시험관 욕조 발효 시스템을 이용한 내생제와 인간 장내 미생물 간 상호작용 분석. J. Vis. 경험 (2019)이 영상은 인간 대변 미생물군에 의한 외계다당류(EPS) 분해를 평가하기 위해 얇은 층 크로마토그래피(TLC)를 사용하는 방법을 시연합니다. 발효 상청액의 EPS 조각은 크기와 극성에 따라 TLC를 사용해 분리한 후, 탄수화물 특이적 염색 후 색이 있는 띠로 시각화됩니다.

박테리아 외계다당류 분해를 평가하기 위한 얇은 층 크로마토그래피 수행

이 동영상은 박막 크로마토그래피를 기반으로 한 마이콜산의 분리를 보여줍니다. 이 기술은 극성에 따라 다양한 마이콜산(마이코박테리아의 세포벽에 존재하는 장쇄 지질)을 분리합니다.

Mycolic Acid Variants의 박막 크로마토그래피 기반 분리: 극성에 따라 Mycobacterial 세포벽 지질을 분리하는 방법

그람 음성 박테리아 지질 다당류 (LPS)의 지질 도메인의 분리 및 특성은 세포 표면 항생제 내성의 기반 메커니즘, 세균의 생존과 건강, 어떻게 화학적으로 다양한 지질 분자 종은 차등 호스트 타고난 면역 반응을 조절에 대한 통찰력을 제공합니다.

그람 음성 박테리아에서 분리 및 지질의 화학 특성

세균성 세포벽은 펩티드에 의해 교차된 당가닥의 거대 분자 네트워크인 펩티도글리칸으로 구성됩니다. 울트라 퍼포먼스 액체 크로마토그래피는 펩티도글리칸 조성물의 새로운 발견을 위한 고해상도 및 처리량을 제공합니다. 우리는 세포벽 (sacculi)의 격리와 UPLC를 통해 분석을위한 후속 준비를위한 절차를 제시합니다.

초성능 액체 크로마토그래피에 의한 조성 분석을 위한 세균세포벽의 격리 및 준비

인지질의 지방산 토양 미생물 커뮤니티의 구조에 대한 정보를 제공한다. 우리는 단상 클로로포름 혼합물을 고체상 추출 칼럼을 사용하여 추출한 지질의 분류 및 모세관 가스 크로마토 그래피로 분석 지방산 메틸 에스테르를 생성하기 위해 메탄과 토양 시료로부터 추출하기위한 방법을 제시한다.

추출 및 토양의 미생물 인지질 지방산의 분석

비 이온 계면 활성 제 단계 분할 메서드를 사용 하 여 세균성 단백질의 농축 TLR 분석 실험에 직접 사용 또는 다른 응용 프로그램에 대 한 설명 합니다. 추가 단계 구조 특성에 대 한 N 맨끝 tryptic lipopeptides를 준비 하는 질량 분석에 의해 자세히 나와 있습니다.

세균성 단백질 질량 분석에 의하여 구조 결심에 대 한 N 맨끝 Lipopeptides의 준비의 농축

그람 음성 박테리아는 두 개의 공간적으로 분리된 막을 일으킵니다. 외부 멤브레인은 자두 및 펩티도글리칸 층에 의해 내부 막으로부터 분할됩니다. 이 세균의 이중 이중 층을 격리하는 기능은 그들의 생리학 및 병인을 이해하는 것을 위해 중요했습니다.

아시네토박터 바우만니에 대한 기술적 조정을 통해 그람 음성 박테리아에 대한 셀 봉투를 내부 및 외부 멤브레인 분획으로 분리

이 프로토콜은 고급 특징 추출 및 생물정보학 분석 소프트웨어와 결합된 액체 크로마토그래피 질량분석법을 사용하여 펩티도글리칸 조성에 대한 자세한 분석을 다룹니다.

액체 크로마토그래피, 질량 분석법 및 생물정보학에 의한 펩티도글리칸의 반정량 분석

프로토콜은 광범위한 진균의 세포벽의 총 지질 함량을 추출하기 위해 제시된다. 더욱이, 진동산의 상이한 모형의 추출 및 분석 프로토콜이 도시된다. 이러한 진균 화합물을 모니터링하는 얇은 층 크로마토그래피 프로토콜도 제공됩니다.

얇은 층 크로마토그래피에 의한 진균의 지질 조성 분석

강글리오사이드는 시알산 함유 글리코스핑고지질로서 뇌에 특히 풍부하다. 양친매성 성질은 최적의 회수와 정확한 분석을 보장하기 위해 유기/수성 추출 및 정제 기술을 필요로 합니다. 이 기사에서는 분석 및 분취 스케일 강글리오사이드 추출, 정제 및 박층 크로마토그래피 분석에 대한 개요를 제공합니다.

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핫 수성 - 페놀 추출에 의한 그람 음성 박테리아에서 정화와 Lipopolysaccharide의 시각화

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