Orthotopic 폐 이식의 Murine 모델에 Obliterative Bronchiolitis의 개발

이 절차의 전반적인 목표는 정소성 폐 이식을 반영하는 문학적 세기관지염 모델을 확립하는 것입니다. 이는 먼저 C 57 BL 10 마우스에서 기증자 폐를 채취하여 수행됩니다. 두 번째 단계는 문합을 위해 기관지, 폐동맥 및 정맥을 위한 커프를 준비하는 것입니다.

다음으로, 준비된 기증자 폐를 수용자 C 5 7 BL 6 마우스에 이식합니다. 마지막 단계는 이식 후 21일 또는 28일 동안 이식된 마우스를 관찰하는 것입니다. 궁극적으로, 조직학적 분석은 이식된 폐의 문학적 세기관지염 병변을 보여주는 데 사용됩니다.

미러링 이종성 기도 이식 모델과 비교했을 때 이 모델의 주요 장점은 현재 모델이 인간의 조건을 모방한다는 것입니다. 일반적으로, 이 방법을 처음 접하는 개인은 쥐의 고등 구조가 매우 섬세하고 부상에 더 취약하기 때문에 어려움을 겪을 것입니다.질량은 쥐 질량의 10분의 1에 불과하기 때문에 기증자 마우스를 밀폐된 보관실에 놓고 5%의 불소로 마취를 유도합니다. 그런 다음 20게이지 정맥 카테터를 사용하여 마우스 또는 Trae를 삽관한 다음 설치류 인공호흡기에 놓습니다.

1-2%의 불소로 마취를 유지하십시오. 꼬리 튕기기와 발가락 꼬집기에 반응하지 않아 마우스가 완전히 마취되었는지 확인한 후 누운 자세로 놓고 복부에 70% 알코올을 준비합니다. 이제 가위로 복부 위의 피부를 잘라내고 복부 근육 조직을 노출시킵니다.

다음으로, 먼저 복벽을 통해 정중선을 절개한 다음 흉골을 가로질러 가로로 절개하여 장을 멀리 옮기고 간 바로 아래에 있는 하대정맥을 찾아 복대 흉골 절개술을 수행합니다. 헤파린을 킬로그램당 100마이크로리터로 IVC에 주입합니다. 다음으로, 간의 팔시폼 인대를 아래로 당기고 배쪽 인과 부착을 따라 척추를 향한 횡격막을 자릅니다.

흉강을 노출시키기 위해 흉벽의 양쪽을 목까지 자릅니다. 폐를 보호하면서 흉곽을 양측으로 자르고 흉선을 제거합니다. 다음으로, 횡격막 수준에서 흉곽내 IVC를 절단합니다.

이제 심장의 위치를 파악하고 오른쪽 심방 부속기를 절제합니다. 그런 다음 폐동맥 줄기의 뿌리를 가로 절개하고 절개 부위를 사용하여 냉각된 젖산 링거 2ml와 헤파린 0.1ml로 폐를 씻어냅니다. 기관을 노출시킨 다음 식도와 함께 잘라냅니다.

이제 말단 조력 팽창의 2/3에서 환기를 정지하십시오. 심장 긴 블록을 잘라 얼음 위에 보관하십시오. 절제된 폐에 거즈를 올려 빛으로부터 보호합니다.

폐 인대를 폐 정맥 또는 pv까지 절개합니다. 식도와 대동맥을 제거하여 hilum을 국소화합니다. 폐동맥(pulmonary artery) 또는 파(pa)를 찾는데, 이는 문턱의 가장 두개골 측면에 위치하고 있으며, 이는 부속된 주요 기관지(main bronchus)에 위치한다.

기관지에서 멀리 떨어진 폐동맥을 조심스럽게 절개하십시오. 이제 24게이지 IV 카테터를 0.5mm 길이로 자르고 0.7mm 연장하여 PA 커프를 만듭니다. 커프의 표면은 AB 꼰 것입니다.

문합을 위한 표면을 제공하기 위해 0.7mm 연장으로 1mm 길이로 절단된 20게이지 카테터만 사용하여 PA 커프와 유사한 재료를 사용하여 기관지용 커프를 만듭니다. PV 커프 크기는 기증자 마우스의 무게에 따라 다릅니다. 무게가 24-27g인 마우스의 경우.

커프 크기는 길이가 0.7mm인 22게이지이며 무게가 27-32g인 마우스의 경우 0.7mm 확장입니다. 길이는 동일하지만 20게이지 카테터가 사용됩니다. 이제 커프스를 폐동맥의 원위렌즈에 삽입하고 폐정맥과 기관지를 각각 9개의 실크 봉합사로 고정합니다.

소맷부리가 모두 제대로 장착 된 후. 준비된 기증자의 폐를 젖산 링거에 적신 거즈로 감싸고 이식할 때까지 얼음 위에 올려 놓습니다. 수혜자를 준비하기 위해 마우스는 마취를 유도하고 기증자에게 사용된 것과 동일한 방식으로 기계 환기를 합니다.

왼쪽 흉벽을 면도하고 70% 알코올을 준비합니다. 왼쪽 세 번째 늑간 공간을 개흉술 절개로 시작합니다. 절개 부위를 척추에 가깝게 등쪽 가깝게 뻗습니다.

수술 부위가 멸균 방식으로 드레이프되어 있는지 확인하고 심장에 인접한 왼쪽 폐관과 기관지에 미세 혈관 클램프를 놓습니다. 폐동맥은 두개골 측면, 폐골 끝의 폐정맥 및 그 사이의 기관지에서 시각화할 수 있습니다. 다음으로, 지혈제에 부드러운 견인을 사용하여 pa, PV 및 기관지에 가벼운 긴장을 유발합니다.

고문 구조를 고정된 상태로 두고 왼쪽 폐를 조심스럽게 절제합니다. 폐동맥, 폐정맥, 기관지를 분리한 다음 각 구조 주위에 OH 봉합사를 느슨하게 놓습니다. PA를 외래초에서 완전히 절개한 다음 혈관 둘레의 약 1/4을 전벽으로 작게 가로 절개합니다.

동맥의 등쪽 부분의 연속을 그대로 유지하면서 차가운 젖산 링거에 적신 면 거즈로 싸인 기증자 폐를 가져와 흉강에 배치합니다. 다음으로, 수갑을 수취인 pa, PV 및 기관지에 삽입하여 문합을 만들고 나노 봉합사로 접합합니다. 다음으로, 수용자 폐를 제거합니다.

그런 다음 재관류 및 환기를 허용하는 hilar cross cl을 제거합니다.amp. 이식된 폐를 수혜자의 흉부에 다시 배치하고 개흉술 절개를 닫습니다.5 봉합사를 사용하면 마우스가 이제 마취에서 회복되어야 합니다. 부프레노르핀은 마우스가 의식을 되찾은 후 통증 완화를 위해 투여할 수 있습니다.

이 표는 급성 거부 반응과 문학성 세기관지염 또는 OB의 유병률에 대한 조직학적 점수를 보여줍니다. 급성 거부 반응에 대한 이식 후 점수는 A 점수라고 합니다. 동종이식 조합은 ISO 이식편과 비교할 때 상당히 더 급성 또는 만성 거부 병리를 보여줍니다. 또한, 문학성 세기관지염의 유병률은 이식 후 21일과 28일째에 ISO 이식편보다 동종이식편 조합에서 유의하게 높았습니다.

폐 이식 후 28일째의 거시적 소견과 조직병리학이 여기에 나와 있습니다. 이 이미지는 거시적 소견과 H 및 E 염색 ISO 이식편 폐 및 오른쪽 순진한 폐를 나타냅니다. 이 이미지는 각각 OB 및 Non OB가 발병한 BL 6 마우스 이식자에게 이식된 h 및 e 및 masen trireme 염색 BL 10 폐 동종이식을 나타냅니다.

B의 흰색 화살표는 OB 병변을 나타냅니다. 이 패널은 BL 10 마우스 수혜자에 이식된 BL 6 폐 동종이식편을 보여줍니다. 이 기술은 제대로 수행되면 거의 30 분 안에 완료 할 수 있습니다.

이 기술의 유용성은 폐 이식 후 원발성 이식 기능 장애, 급성 거부 반응 및 절제성 세기관지염에 관한 기계론적 질문에 답하는 데 활용할 수 있다는 것입니다.