Name: 고밀도의 인간 배아 줄기 세포 문화의 급속한 섬유 아세포 제거 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-28T16:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 12 s
Description: 배우세요 고밀도 인간 배아 줄기 세포 배양에서 마우스 배아 섬유아세포를 빠르게 제거하는 방법을. 이 기술은 배양 접시에서 MEF 층을 흡입하여 줄기 세포 집락의 무결성과 다능성을 보존합니다.

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이 작품은 재생 의료의 캘리포니아 연구소 (RN2 - 00921-1) 및 NIH 투자 국가 연구 상 (F32-HL104924)에서 새로운 교수 상 II가 추진하는 사업

1. 마우스 배아 공급기의 작성 <ol><li> hESCs의 공동 문화에 사용되는 MEFs는 이전에 다음 부서를 겪고에서 세포를 억제하기 위해 조사 또는 미토 마이신-C에 의해 처리되어야합니다. </li><li> MEF를 심는 이전 두 시간, 코트는 각 60mm 플라즈마는 0.05 % 젤리 2 ML과 문화 요리를 취급. </li><li> 처리 MEFs의 약병과 ~ 20,000 세포 / cm 2에 판을 해동. </li><li> 세포가 밤새 준수 할 수 있도록 허용합니다. </li></ol> 2. MEFs로 공동 심는 hESCS <ol><li> 새로운 식민지는 다음과 같이 새로운 MEF-코팅 요리에 cryopreserved 문화 나 passaging 현재 문화에서 시작 될 수 있습니다. </li><li> 예열 1X PBS의 3 ML로 1 회를 passaged 할 큰 hESC의 식민지가 들어있는 판을 씻으십시오. </li><li> Collagenase IV / PBS 용액 (1 MG / ML) 3 ML을 추가하고 37 5-10 분 동안 품다 ° C. (참고 : 세포가 뚜렷한이나 공 등의 트립신으로 본이되지 않습니다.) </li><li> 세포는 아직있는 동안collagenase, 5 ML의 pipet 팁의 가장자리를 사용하여, 작은 세포 clumps으로을 깨고, 식민지에 그리드 패턴을 만들 수 있습니다. </li><li> 표면의 모든 셀을 dislodging, 문화 판의 바닥을 긁어 pipet 팁 (문화 판에 수직 방식에서 개최)의 끝을 사용합니다. </li><li> 5 분을위한 (1000 RPM)에서 매 관과 스핀으로 세포를 수집합니다. </li><li> 원심 분리 후, 매 튜브에 세포 펠렛을두고 매체를 대기음. </li><li> 전에 MEFs 도금 날부터 MEF 매체를 대기음. </li><li> 재 판 원본 판에서 1시 3분 비율 셀 및 hESC 매체의 3 ML과 피드 </li></ol> 3. 공동 문화에서 MEFs를 없애고 참고 : 인간 ESC 문화는 일반적으로 문화 10 14 일 사이에 고밀도에 있어야합니다. <ol><li> 접시의 가장자리에서 aspirating pipet의 팁을 놓고 흡입은 부드럽게 MEF 시트의 가장자리를 당겨 할 수 있습니다. </li><li> R요리에서 미디어를 emove, 그리고 끝이 세포 시트를 잡아 천천히 접시 위의 arced 방식으로 끝을 이동 할 수 있습니다. 참고 : 시트 pipet의 끝에서 방해 할 수 있지만 수동으로 문화 판의 표면에서 시트를 당기는 사용자를 방지하지 말아야으로이 문제가되지 않습니다. 세포 흡인기의 끝에 붙어있는 경우에는 전체 열망에 대한 세포 시트를 깨 배양 접시의 상단을 사용할 수 있습니다. </li><li> 즉시 hESC 매체를 교체하고, 보육에 다시 판을 넣어. </li></ol> 4. 대표 결과 MEF 제거 프로세스의 최종 결과는 작은 방해받지 hESC의 pluripotency 업체 SSEA-4의 표현을 유지하면서 매우 큰 식민지 (그림 2)에 상당한 확장을 받아야 할 수 식민지 (그림 1D), 10 월 ¾, 그리고 Tra 1-81 (그림을 생산 3). 1 그림. ESC의 콜로니의 형태학 MEF 제거 이전과 이후. 문화 요리로 심는 후 A) 일 1 B) 2 일에서의 인간의 배아 줄기 세포 식민지. C) 고밀도 인간 배아 줄기 세포의 식민지 (H7)은 MEFs로 둘러싸여. 두 hESC의 식민지가 빨간색 대시에 설명되어 있습니다. D)이 설명 된 흡인 기술을 사용하여 MEF 제거 후, 우리는 그대로 식민지를 둘러싼 거의 MEFs과 격리 된 hESC의 식민지로 남아 있습니다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3951/3951fig2.jpg" /> 그림 2. 10 일 MEF 제거 후 ESC의 콜로니 확장. 바로 MEF 고갈 후 원래 hESC의 식민지가 (왼쪽) 매우 큰 식민지 (오른쪽) appro으로 확장 할 수 있습니다10X ximately 800 μm. 원래 식민지가 복합 식민지와 같은 배율 (10 배)에 이미지로되어 있습니다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/3951/3951fig3.jpg" /> 그림 3. MEF-소모의 hESC의 식민지 Immunostaining. 식민지의 Immunofluorescent 식별가 MEF 고갈부터 10 일까지하는 것은 식민지가 10월 ¾, SSEA-4에 의해 분명 같은 pluripotency 마커의 표현, 그리고 Tra-1-81 착색을 유지 것으로 나타났습니다. 또한, 이러한 hESC의 식민지가 mesodermal 운명으로 차별화를 전시하지 Flk-1의 부재로 표시. A, E, I, 그리고 M) immunoflouscently 스테인드 식민지, 20, 10, 10, 2 배의 전송 빛 이미지이며, .. 각각 B, F, J, 그리고 N) 핵 표시 - 각각 immunofluorescently 스테인드 식민지, 20, 10, 10, 배, CD)의 DAPI 스테인드 셀의 표현을 보여인간의 줄기 세포 마커 만 SSEA-4, 및 복합 이미지, 20x. GH)은 인간의 줄기 세포 마커 10월의 표현을 보여 ¾ 만하고 복합 이미지, 10 배. KL)은 인간의 줄기 세포 마커의 표현 Tra 만 1-81 표시 , 그리고 복합 이미지, 10 배. MP) 마지막 행은 이미지가 확대, 배,이 식민지에서 볼 전형적인 부드러운 테두리를 설명해 식민지을 묘사 아닌 경우 명시 적 O) Flk-1, 중배엽 차별화의 초기 마커 않으며, 그랬지 DDR2 착색의 부재에 의해 표시된대로 그들은 P)은 섬유 아세포가 포함되어 있습니다. 보충 비디오. 시트 흡인에 의해 섬유 아세포를 삭제를. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3951/3951movie1.mp4" target="_blank">동영상을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> .

<ol><li>Bongso, A., Fong, C. Y., Ng, S. C., Ratnam, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+inner+cell+mass+cells+from+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of inner cell mass cells from human blastocysts.</a> Hum. Reprod. 9, 2110-2117 (1994).</li>
<li>Reubinoff, B. E., Pera, M. F., Fong, C. Y., Trounson, A., Bongso, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cell+lines+from+human+blastocysts%3A+somatic+differentiation+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cell lines from human blastocysts: somatic differentiation in vitro.</a> Nat. Biotechnol. 18, 399-404 (2000).</li>
<li>Thomson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cell+lines+derived+from+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts.</a> Science. 282, 1145-1147 (1998).</li>
<li>Thomas, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated%2C+scalable+culture+of+human+embryonic+stem+cells+in+feeder-free+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Automated, scalable culture of human embryonic stem cells in feeder-free conditions.</a> Biotechnol Bioeng. 102, 1636-1644 (2009).</li>
<li>Kolhar, P., Kotamraju, V. R., Hikita, S. T., Clegg, D. O., Ruoslahti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+surfaces+for+human+embryonic+stem+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Synthetic surfaces for human embryonic stem cell culture.</a> J. Biotechnol. 146, 143-146 (2010).</li>
<li>Hovatta, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+culture+system+using+human+foreskin+fibroblasts+as+feeder+cells+allows+production+of+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod%22%5BJournal%5D)">A culture system using human foreskin fibroblasts as feeder cells allows production of human embryonic stem cells.</a> Hum. Reprod. 18, 1404-1409 (2003).</li>
<li>McKay, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+feeder+cell+line+for+derivation+and+culture+of+hESc%2FhiPSc%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Human feeder cell line for derivation and culture of hESc/hiPSc.</a> Stem Cell Res. 7, 154-162 (2011).</li>
<li>Xu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeder-free+growth+of+undifferentiated+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells.</a> Nat. Biotechnol. 19, 971-974 (2001).</li>
<li>Stein, G. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStein%2C+GS+%22Thawing%2C+Seeding%2C+and+Changing+Medium+of+Human+Embryonic+Stem+Cells%22">Thawing, Seeding, and Changing Medium of Human Embryonic Stem Cells</a>. Shi, M. J., Stencel, K., Borowski, M. , John Wiley & Sons, Inc. (2010).</li>
<li>Schwartz, P. H., Brick, D. J., Nethercott, H. E., Stover, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traditional+human+embryonic+stem+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Traditional human embryonic stem cell culture.</a> Methods Mol. Biol. 767, 107-123 Forthcoming.</li>
</ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

이 논문에 제시된 방법은 인간 배아 세포 문화에서 섬유 아세포 피더 세포를 제거에 신속하고 적은 비용이 많이 드는 대안을 제공합니다. 섬유 아세포의 성공적인 제거 더 이상 줄기 세포 문화에 개발이 세포의 단단히 합류 monolayer의 존재에 따라 달라집니다. 7~10일 후, 성장 hESC의 식민지는 식민지 사이에 점점 더 조밀 한 섬유 아세포 monolayer를 생성, 바깥 방향으로 피더 섬유 아세포를 밀어 것입니다. 섬유 아세포 monolayer에서 강력한 휴대 전화 첨부 파일은 셀 시트 등의 빠른 제거를 할 수 있습니다. 그것은이 정화 기술은 이전 루틴을 확장 문화 활용 만이 아니라 실험에 hESC에서 MEF 제거의 방법으로 사용하기 위해 추천되는주의 깊게 주목해야한다. 그것은 품질이 낮은 줄기 세포 식민지를 구출이 정화 기술을 활용하는 것도 가능합니다. 고품질의 hESC의 식민지 disti을 전시한다자신과 피더 세포 사이의 경계를 nct. 그러나, 줄기 세포 식민지는이...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 (선택 사항) </td></tr><tr><td> DDR2 </td><td> 산타 크루즈 (Santa Cruz) </td><td> 7555 </td><td> 섬유 아세포 마커 </td></tr><tr><td> Dapi </td><td> Calbiochem </td><td> 268298 </td><td> 세포 핵 마커 </td></tr><tr><td> SSEA-4 </td><td> Millipore </td><td> MAB4304 </td><td> 인간 ESC 마커 </td></tr><tr><td> Oct 4분의 3 </td><td> 산타 크루즈 (Santa Cruz) </td><td> 9081 </td><td> 인간 ESC 마커 </td></tr><tr><td> Flk-1 </td><td> BD 제약 </td><td> 555307 </td><td> 조기 차별화 마커 </td></tr><tr><td> Tra-1-81 </td><td> Acris </td><td> AM20377AF4-S </td><td> 인간 ESC 마커 </td></tr></tbody></table> 표 1. 특정 정말이에요 표신사는 hESC를 immunostaining에 사용됩니다.

고밀도의 인간 배아 줄기 세포 문화의 급속한 섬유 아세포 제거

Rapid Fibroblast Removal from High Density Human Embryonic Stem Cell Cultures

마우스 배아 섬유 아세포의 (MEFs)는 blastocyst 절연 1 일 이후 인간 배아 줄기 세포 (hESCs) 문화를 확립하는 데 사용되었습니다. 이 피더 시스템은 셀 확장하는 동안 자연스럽게 차별화를 겪고에서 hESCs을 유지합니다. 그러나이 공동 문화에있어서, 집중적 인 노동이 고도로 숙련 된 인력을 필요로하고, 수율 낮은 hESC의 순도 4. 많은 실험실 hESC 문화의 피더 세포의 수를 (즉, 매트릭스 코팅 요리 또는 기타 피더 세포 유형 5-8을 포함) 최소화하기 위해 시도했습니다. 이러한 수정 문화 시스템은 몇 가지 약속을 표시했지만, 미토 마이신 C-처리 마우스 embyronic의 섬유 아세포로 배양의 hESCs hESC 문화의 원치 않는 자연 차별화를 병신하기 위해에 대한 표준 방법을 supplanted 없습니다. 따라서, hESC 확장에 사용되는 피더 세포는 분화 실험을하는 동안 제거해야합니다. 여러 기술 hESC의 공동 정화에 사용할 수 있지만피더에서 lonies은 (FACS, 맥, 또는 약물 내성 벡터의 사용), 이러한 기술은 노동 집약적 인 비용 및 / 또는 hESC에 파괴됩니다. 이 프로젝트의 목적은 hESCs의 순수한 인구의 수확을 가능하게 정화하는 방법을 발명하는 것이 었습니다. 우리는 합류 hESC 문화에서, MEF 인구는 MEF 시트의 간단하고 빠른 흡인을 사용하여 제거 할 수 관찰했다. 이 제거 &quot;측면 휴대 전화의 스티렌 배양 접시에 낮은 바인딩 친화력을 가지고 MEFs의 결합, 그리고 자신의 세대 동안 바깥쪽으로 섬유 아세포를 누르는 줄기 세포 콜로니의 능력 등 여러 가지 요인에 따라 달라집니다 틈새 &quot;. hESC 그런 다음 pluripotency의 유지 보수를 보장하기 위해 MEF 제거 후 10 일 SSEA-4, Oct3 / 4, Tra 1-81 표현에 조사되었다. 또한, hESC의 식민지는 hESC 확장의 추가 레벨을 제공 MEF 제거 후 큰 형태로의 성장을 계속 할 수있었습니다.

전환 문화에 피더 - 무료 조건에 지속적인 노력에도 불구하고, 인간 배아 줄기 세포 (hESC)의 유도와 문화 마우스 배아 피더 (MEFs)와 공동 문화에 달려 남아 있습니다. 여기, 우리는 신속하게 이전 실험에 hESC 문화에서 피더를 제거 소설 방법을 보여줍니다.

포배 배아 분리 후 인간 배아줄기세포(hESC) 배양을 확립하기 위해 마우스 배아 섬유아세포(MEF)가 사용되었습니다1. 이 피더 시스템은...

다음 실험의 전반적인 목표는 빠르고 효율적인 방식으로 인간 줄기세포 콜로니를 분리하는 것입니다. 이는 인간 배아 세포를 생쥐 배아 섬유아세포의 조밀한 층 위에 배양함으로써 달성됩니다. 시간이 지남에 따라 줄기세포 집단이 확장되면서 인간 줄기세포의 수가 증가하며, 이들이 중간에 섬과 같은 콜로니를 형성하게 됩니다.다음으로, 흡입을 통해 meth 층을 제거하여 인간 배아 줄기세포의 개별 콜로니만 남깁니다. 줄기세포 마커에 대한 면역조직화학 염색 결과, 이 방법이 피더 세포를 제거하고 콜로니의 무결성을 유지하는 데 효과적인 분리 방법임이 확인되었습니다. 저는 저희 실험실에서 세포를 공배양하던 중, 과하게 밀집된 배양 시스템으로부터 줄기세포 배양물을 보호하고 싶다는 생각에 이 방법을 처음 고안하게 되었습니다.따라서 대부분의 사용자가 이 시스템을 사용할 때 겪게 될 문제는 인간 줄기세포 배양 경험의 부족입니다. 저희는 정렬(sorting)이나 줄기세포 콜로니를 직접 손으로 집어내는 방식과 같은 다른 방법에 비해, 실험을 위해 다량의 인간 배아 줄기세포를 분리해야 할 때 이 기술이 특히 유용하다는 것을 발견했습니다. 이 방법은 고밀도 배양물에서 콜로니를 분리하는 데 있어 더 빠르고 효율적입니다.마우스 배아 섬유아세포는 배아 줄기세포와 공배양하기 전에 분열을 억제하기 위해 mitomycin C로 처리하거나 방사선을 조사해야 합니다. mEF 파종 2시간 전에, 0.05% Gelatin 2 mL를 사용하여 60 mm 플라스마 처리 배양 접시를 각각 코팅하십시오. 처리된 mEF 바이알을 해동한 후 1,500 RPM에서 5분 동안 원심 분리하고, 젤라틴 코팅 접시에 cm²당 약 20,000개의 세포가 되도록 파종하십시오. 세포가 부착될 수 있도록 하룻밤 동안 배양하십시오. 새로운 배양은 냉동 보존된 세포로부터 시작하거나 기존 배양물을 mEF 코팅 접시로 계승하여 시작할 수 있습니다. 대형 인간 배아 줄기세포 콜로니가 포함된 플레이트로 시작할 때는 가온된 phosphate buffered saline 3 mL로 한 번 세척하십시오.1 mg/mL 농도의 collagenase four 용액 3 mL를 첨가하고, 37 °C에서 5~10분 동안 배양합니다. 이때 세포는 trypsin을 사용했을 때처럼 뚜렷하게 분리되거나 뭉치지 않습니다. 5 mL 피펫 팁의 끝부분을 사용하여 콜로니에 격자무늬를 만들어 작은 세포 덩어리로 분쇄합니다.이제 피

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 문서는 고립과 야생 설치류 동물의 피부와 폐 조직에서 기본 fibroblast 문화의 유지 관리를위한 프로토콜을 설명합니다.

설치류에서 기본 성인 Fibroblast 문화를 구축

섬유아세포 행동은 다양한 임상 개체의 기초가 되지만, 주로 내재된 이질성으로 인해 특성화가 제대로 이루어지지 않은 상태로 남아 있습니다. 전통적인 섬유아세포 연구는 체외 조작, 생체 내 섬유아세포 거동 마스킹에 의존합니다. 세포 배양이 필요하지 않은 마우스 피부 섬유아세포의 분리를 위한 FACS 기반 프로토콜에 대해 설명합니다.

FACS에 의해 쥐 피부 섬유 아세포 격리

우리는 귀 및 쥐의 꼬리에서 일차 섬유 아세포를 생성하기위한 간단하고 신속한 실험 절차를 설명한다. 절차는 특별한 동물 훈련을 필요로하지 않고, 최대 10 일 동안 실온에서 저장 귀에서 배양 섬유 아세포의 생성을 위해 사용될 수있다.

마우스 귀와 꼬리 조직에서 생성 차 섬유 아세포 배양

인간 유래 다 능성 줄기 (hiPS) 세포의 강력한 유도는 피부 섬유 아세포의 비 통합 적 센다이 바이러스 (SeV) 벡터 매개 재 프로그램 화를 사용하여 달성되었다. 재조합 인간 라미닌 521 (LN-521) 매트릭스 및 필수 E8 (E8) 배지를 사용하여 제노 프리 및 화학적으로 한정된 배양 조건을 사용하여 hiPS 세포 유지 및 클론 확장을 수행 하였다.

Laminin 521 매트릭스를 이용한 인간 유래 다 능성 줄기 세포의 통합 된 자유 유도

여기 우리 재활 요인 인코딩 수정된 mRNAs를 사용 하 여 유도 만능 줄기 세포로 인간의 기본 섬유 아 세포를 재 설 정할 임상 관련, 높은 효율, 피더 무료 메서드를 설명 하 고 성숙한 예측에 관한-367/302 모방. 또한는 재활 효율성을 평가 하는 방법 클론 iPSC 식민지 확장 및 pluripotency 마커 TRA-1-60의 식을 확인 있습니다.

인간의 기본 섬유 아 세포의 유도 만능 줄기 세포로 재프로그래밍 RNA 기반

이 원고는 인간의 피부에서 유 두와 망상 섬유 아 세포를 분리 하기 위한 FACS 기반 프로토콜을 설명 합니다. 이는 시험관 문화를 우회 하 고,이는 일반적으로 사용 되는 격리 프로토콜을 통해 명시적으로 불가피 한 것 이었습니다. 발산 된 섬유 아 세포 서브 세트는 기능적으로 구별 되 고 진 피 내에서 차별적 유전자 발현 및 국 소화를 표시 한다.

형광 활성 세포 선별에의 한 인간의 피부에서 유 두 및 망상 섬유 아 세포의 분리

이 프로토콜은 0-4일 된 마우스의 피부로부터 멜라닌세포 및 섬유아세포 배양을 동시에 생성하는 신속한 방법을 간략하게 설명한다. 이러한 1차 배양은 피부 세포 생물학, 색소 침착, 상처 치유 및 흑색종을 포함한 다양한 생리학적 관련 과정을 연구하기 위해 시험관 내에서 유지 및 조작될 수 있다.

1 차적인 뮤린 멜라닌세포 및 섬유아세포 배양물의 급속한 생성

우리는 초보자 (예를 들어, 학생)에 의해 수행 할 수있는 쉽고 빠르고 신뢰할 수있는 방법으로 기본 성인 섬유 아아세포를 분리하는 프로토콜을 제시한다. 이 절차는 효소 조직 소화와 기계적 동요를 초음파와 결합하여 1 차 섬유 아아아를 얻습니다. 프로토콜은 특정 실험 요구 사항(예를 들어, 인간 조직)에 쉽게 적응될 수 있다.

초음파 증강 원발성 섬유아세포 분리

세포 재프로그래밍은 다능성 세포 상태를 조절하고 유지하는 주요 유전자의 도입을 요구합니다. 기술된 프로토콜은 바이러스/통합 방법 없이 인간 진피 섬유아세포로부터 유도된 만능 줄기 세포(iPSCs) 콜로니의 형성을 가능하게 하지만, 세포 방어 메커니즘을 감소시키는 면역 회피 인자와 결합된 비변형 RNA(NM-RNAs)를 사용한다.

비통합 방법을 사용하여 복부 피부에서 성인 인간 진피 섬유 아세포의 분리 및 유도 만능 줄기 세포의 생성

여기서는 화학적 후성유전학적 소거와 메카노센싱 관련 단서를 결합하여 유전자 형질감염이나 레트로바이러스 벡터가 필요 없이 포유동물 다능성 세포를 효율적으로 생성하는 방법을 제시한다. 따라서이 전략은 번역 의학에 유망하며 줄기 세포 오가노이드 기술의 주목할만한 발전을 나타냅니다.

후성유전학적 변형과 생체역학적 단서를 결합하여 포유류 다능성 세포를 생성하는 두 단계 전략

여기에 제시된 프로토콜은 기계학 연구, 질병 모델링 및 스크리닝 애플리케이션에 적합한 이중 극이 있는 다중 우물 판에서 48개의 조직의 병렬 배양에 대한 엔지니어링 된 결합 조직을 생성하는 프로토콜입니다. 프로토콜은 다른 장기와 종에서 섬유 아세포와 호환되며 인간의 기본 심장 섬유 아세포와 함께 여기에 예시됩니다.

섬유아세포, 선별 애플리케이션을 위한 인간 공학형 결합 조직

배우세요 고밀도 인간 배아 줄기 세포 배양에서 마우스 배아 섬유아세포를 빠르게 제거하는 방법을. 이 기술은 배양 접시에서 MEF 층을 흡입하여 줄기 세포 집락의 무결성과 다능성을 보존합니다.

고밀도의 인간 배아 줄기 세포 문화의 급속한 섬유 아세포 제거

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