Name: 고양이와 쥐의 Ovariectomy 및 17β-estradiol 대체 : 비주얼 데모 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-07T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: 학습하세요 쥐와 고양이에서 난소절제술과 17β-estradiol 대체를 통해 혈청 에스트로겐 농도를 조절하는 방법을. 실리캡슐과 Nutella 경구 투여를 비교하여 안정적인 호르몬 수준을 유지하는 기술을 익히세요.

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연구는 Linköping 대학교 Östergötland의 군 의회에 의해 재정 지원되었다.

1. 지느러미 루트를 통해 Ovariectomy <ol><li> 산소 / 질소 산화물 30% / 70 %의 혼합에서 isoflurane 1.5 %를 (유도 4 %)를 사용하여 예를 들어, 동물을 마취. 직장 온도계에 연결된 열판에서 발생하기 쉬운 위치에있는 동물을 놓습니다. 그것은 동물과 플레이트 사이에 고립의 얇은 레이어를 가지고하는 것이 중요하다, 그래서 온도계 피드백 시스템은 37 이내에 체온을 유지 ± 0.5 ° C. 눈 보호를위한 젤을 적용하고 수술 후 통증 완화를위한 동물의 목 측면에는 subcutaneously 식염수에 희석 5 MG의 Rimadyl / kg bodyweight를 관리합니다. </li><li> 장골의의 문장에서 cephally 4 * 4cm (3 생쥐에 대한 * 3 ㎝) 영역을 면도. 철저하게 4 * 4cm의 조리개 수술 시트와 동물을 취재하기 전에 예제 Jodopax 위해 함께 음모 지역을 씻는다. </li><li> 2~3센티미터 중간선 절개를 만들어 퉁명스럽게 기본 근막으로부터 피부를 해부. 중간선의 측면 하나 CM은, 다른 절개를 죽하다근막 윽. 퉁명스럽게 복강에 도달하기 전까지 같은 피상적 가능한이 근막 아래 laterally 해부. </li><li> 족집게 사용하여 복강에 난소를 둘러싸는 지방 조직을 잡고 부드럽게 빼낸다. 난소를 확인하고 자궁 뿔을하고이 구조의 proximally 혈관 0.5-1 센티미터 ligate. 난소와 출혈도 잡았 지방 조직을 잘라 복강에 남아있는 조직 입어요. contralateral 근막에 다른 절개를 확인하고 절차를 반복합니다. </li><li> 선호 monofilament의 봉합사를 이용하여 상처를 닫고 마취에서 깨어 동물 봅시다. 수술 후 최소 2 시간 동안 열띤 케이지 (25-27 ℃)에서 동물을 놓습니다. 동물은 처음 며칠 postoperatively 별도로 지내게됩니다. 그것은 새장가 자주 복구 단계에서 청소 / 교체되는 중추이다. 스물 네 시간 수술 후에 희석 앞으로 5 MG의 Rimadyl / kg bodyweight으로 subcutaneously 동물을 주입염분. </li></ol> 2. Silastic 캡슐을 통해 17β-estradiol의 피하 관리 <ol><li> 완전히 깨 기름에 17β-estradiol의 원하는 금액을 섞는다. 쥐 및 생쥐의 생리적 농도의 경우, 우리는 각각 180 μg / ML 및 μg / ML 18-36을 추천합니다. 위약 캡슐은 순수 참기름으로 채워진다. </li><li> 3cm (생쥐 2 ㎝) silastic 튜브의 길이와 5mm (쥐 3 ㎜) 도전을위한 작은 주걱 나무 스틱의 길이를 잘라. 포셉 사용하여 전체 길이를 채울 17β-estradiol/sesame 오일 솔루션을 주입하기 전에 silastic 캡슐로 한 목조 플러그를 조인다. 부드럽게 다른 나무 플러그 (플러그는 캡슐에 영구적으로 유지하기로하고)으로 열린 끝에 silastic 캡슐를 쏠. 이식하기 전에 하룻밤 나머지 17β-estradiol 솔루션 캡슐을 품어. </li><li> 캡슐의 주입은 쥐의 ovariectomy에서 사용 마취 중에 수행할 수 있습니다. 마일을 위해CE 그러나, ovariectomy 후 14 일간의 복구 기간이 강력하게 연약한 피부를 통해 튀어나와 캡슐의 위험을 최소화하는 것이 좋습니다. </li><li> 1.1에서와 같이, 또는 ovariectomy의 절개를 닫은 후 수술 준비 후, 면도하고 동물의 목 지느러미 부분에 2 * 2cm 영역을 씻는다. 1cm의 절개를 만들어 퉁명스럽게 캡슐을위한 충분한 공간과 함께 caudolaterally 피하 주머니 해부. silastic 캡슐 (이 시간 시점까지 17β-estradiol 용액에 incubated되었는지) 닦아 부드럽게 이후 봉합사에 의해 닫혀 절개를 통해 그것을 설치합니다. 그것은 확실히 중추입니다 특히 상처 가까운 지역에서 가능한 거의 같은 캡슐 변종은 피부. 이식에 대한 캡슐의 생산에서 그것은 오염은 피할 수있다는 것이 중요합니다. </li></ol> 3. 너트 - 크림 Nutella 통해 17β-estradiol의 Peroral 관리 <ol><li> 완전히 용해 17β-그리고 참깨 기름 estradiol,하고 Nutella와 참깨 오일을 섞는다. 우리는 각각의 매일 부분은 17β-estradiol 28 μg, 5 μL 참기름과 kg 바디 쥐에 대한 무게와 17β-estradiol 1.12 μg, 0.312 μL 참기름과 각 30 g 마우스 60 MG의 Nutella 당 1g의 Nutella를 포함하는 것이 좋습니다. 위약 너트 - 크림은 17β-estradiol이없는 경우를 제외하고 동일하게 준비가되어 있습니다. </li><li> 실험 전에 5 일 동안 호르몬없는 너트 - 크림을 먹는 동물을 훈련. 연수의 첫 번째 3 일, 쥐가 최적의 자택 연습장에서 (약 0.5 g에 Nutella 2-5 동물) 그룹에서 훈련을해야합니다. 훈련의 네번째와 다섯째 날에는 동물 실험 상황을 닮은 매일 부분을 수신하기 전에 별도의 케이지에 부착 할 것입니다. </li><li> 실험을 진행하는 동안 동물 Nutella 부분은 작은 세라믹 타일에 제공되는 이후, 모든 먹이 때를 위해 별도의 케이지에 부착 할 것입니다. 교육은 위에서, O로 수행되었을 경우UR 경험 쥐 및 생쥐 이상의 95 % 너트-크림을 수락하고, 한번에 완전히 길들여지지, 동물의 대부분은 초 내에 그것을 소비한다는 것입니다. </li></ol> 4. 대표 결과 현재의 방법을 재현하는 것을 목표로 생리 혈청 17β-estradiol 농도가 있으며, 약 5-140 PG / 쥐 및 생쥐 4,6를위한 5-35 PG / ML위한 ML. 피하 silastic 캡슐은 위의 지시에 따라, 300g 암컷 Sprague-Dawley의 쥐에 투여했을 때, 천천히 PG / ML 일 40 2-10 PG / ML 일 35에서 17β-estradiol 혈청 농도를 감소 생산하고 있습니다. 다만, 즉시 행정 후에, 1000 PG / ML 주변의 혈청 농도 피크는 4,5 (그림 1A) 8 시간 이내에 생리적 범위로 떨어지는, 기대할 수 있습니다. 25g 암컷 C57BL / 6 마​​우스에 투여 36 μg의 17β-estradiol/mL로 위에서 설명한 생쥐에 대한 silastic 캡슐은 혈청 conc을 세우다천천히 약 90 PG / ML 하루 2-25 PG / ML 일 35 감소한 entrations. 이것은 (그림 1B) 6을 조사하는 것은 아니지만, 쥐에서 발견되었다대로 이것은 아마도 유사한 피크 앞에있다. 복용량과 peroral Nutella 방식은 300g 암컷 Sprague-Dawley의 쥐에 투여했을 때, 위에 설명된 10-70 PG / ML (그림 2A) 4 사이의 일일 변동과 17β-estradiol의 생리적 수준을 렌더링. 위 복용량을 사용하는 마우스의 경우 일일 수준은 약 20 120 PG / ML (그림 2B) 6 사이의 변동. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/4013/4013fig1.jpg" /> <st<html> . 쥐의 17β-estradiol 농도 제시 룽&gt; 그림 1화한 그래프, 4,5와 쥐 (나중 포인트에서 N까지 시간 포인트에서 = 10 최대 24 H, N = 15) (B, N = 10) 캡슐 이식 후 6. silastic 캡슐은 1000 혈청 농도의 짧은 초기 피크를 생산 PG / ML지만, 100 PG / ML 아래 수준까지 시간 이내에 감소. 꾸준히 감소하고 있지만 오는 4~5주 들어, 캡슐은, 혈청 농도를 안정적으로 얻을 수 있습니다. 그늘진 지역은 각각 온전 여성 쥐 및 생쥐의 생리 17β-estradiol 혈청 농도에 해당합니다. 시각적으로 그래프에서 시연되지하더라도, 남북 각각의 변화는 (매우 낮은 평균 27 일부터 쥐의 1백83퍼센트로 28에서 silastic 캡슐 방식으로 마우스의 1백15%에 변이 계수 렌더링, 17β-estradiol 농도에있다 농도는 종종) 유사 높은 계수를 생성합니다. iles/ftp_upload/4013/4013fig2.jpg &quot;/&gt; 그림 2 쥐의 17β-estradiol 농도를 제시화한 그래프 (; N = 15). 4와 생쥐 (B, N = 10) Nutella에서 매일 호르몬 관리의 결과로서 6. peroral Nutella 방법은 피하 또는 정맥 주사 방법으로 생산되는만큼 높은 그러나 안하 시니 지금까지 매일 봉우리 렌더링. 이것은 인간의 호르몬 대체 요법의 pharmacokinetics을 모방한 것이었하고 peroral 치료는 위의 예제는 초기 96시간을 제시하는 경우에도 한 필요를 위해 진행할 수 있습니다. 그늘진 지역은 각각 온전 여성 쥐 및 생쥐의 생리 17β-estradiol 혈청 농도에 해당합니다. 비록 시각적으로 그래프에서 보여준 아니라 남북 각각의 변화는 (매우 낮은 평균 농도 Nutella 방법과 마우스로 쥐의 40~132%에서 그리고 13 일부터 2백19퍼센트로 변이 계수 렌더링, 17β-estradiol 농도에있다 자주 높이를 생성변동 계수).

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<li>Levin-Allerhand, J. A., Sokol, K., Smith, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safe+and+effective+method+for+chronic+17beta-estradiol+administration+to+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Contemp.+Top+Lab+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Safe and effective method for chronic 17beta-estradiol administration to mice.</a> Contemp. Top Lab Anim. Sci. 42, 33-35 (2003).</li>
</ol>

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이전 연구에서 경험 위에 표시 관리 모드는 17β-estradiol의 생리 혈청 농도를 생산의 관점에서 상업 천천히 릴리스 알약과 주사 우수이었다. 느린 - 릴리스 알약이 매우 높고 장시간 혈청 농도 봉우리를 생산하는 동안 주사는 극단 매일 호르몬 변동의 원인과 동물 4-6의 반복 스트레스 처리를 필요로합니다. 적절한 관리 모드를 선택의 중요성은 낮은 복용량 17β-estradiol 관리 regimens (예 : 현재 문서에서 제공 기법 등) 대뇌 국소 빈혈의 8-10으로부터 보호하면서, 17β-estradiol 농도가 제작한하다는 최근의 연구에 의해 강조된다 상업 느리게 출시 쥐똥 실제로 대뇌 손상 1,2,11-14을 증가시킬 수 있습니다. 식수 관리와 구강 gavage가 테스트한 두 개의 다른, 덜 자주, 방법이 있습니다. 를 관리<html> 식수를 통해 호르몬 모두가 필요에 거의 어떤 동물 처리 이후 극도로 비침습되고의 가장 큰 장점이 있습니다. 그러나, 17β-...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> Rimadyl, 50 밀리그램 / ML </td><td> 화이자 </td><td> 462,986 </td><td> ovariectomy 후 수술 후 진통제. </td></tr><tr><td> Lubrithal 아이 젤 </td><td> 레오 연구소 </td><td></td><td> 수술 중 안구 보호. </td></tr><tr><td> Jodopax의 수의사 </td><td> Pharmaxim </td><td></td><td> 수술 소독. </td></tr><tr><td> Vicryl 4-0 봉합사 </td><td> 존슨 앤 존슨 </td><td></td><td> 봉합과 난소를 내고 상처를주는 군. </td></tr><tr><td> 17β-estradiol,&gt; 98% </td><td> 시그마 </td><td> E8875-1G </td><td> silastic 캡슐 및 Nutella위한 참깨 기름합니다. </td></tr><tr><td> 향유 </td><td> 시그마 </td><td> S3547-1L </td><td> 17β-estradiol을 해소. </td></tr><tr><td> Silastic 튜빙, 아이디 / OD : 1.575/3.175 mm </td><td> 다우 코닝 </td><td> 508-008 </td><td> silastic 캡슐 생산. </td></tr><tr><td> 나무 작은 주걱 스틱 </td><td> Selefatrade </td><td> 12-0783 </td><td> silastic 캡슐의 상한. </td></tr><tr><td> Nutella </td><td> Ferrero </td><td></td><td> peroral 17β-estradiol에 대한 중간. </td></tr></tbody></table>

고양이와 쥐의 ovariectomy 및 17β-estradiol 대체 : 비주얼 데모

Ovariectomy and 17&beta;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

Estrogens는 효과의 매우 넓은 스펙트럼과 여성의 성 호르몬의 가족입니다. 쥐 및 생쥐는 에스 트로겐 연구에 사용하는 경우 이들은 일반적으로 17β-estradiol exogenously을 교체, 빠르게 사이클링 호르몬 생산을 ablate하기 위해 ovariectomized됩니다. 호르몬은 생리 혈청 농도를 얻기 위해 관리되는 방식에 관한 합의 부족 그러나,있다. 17β-estradiol 수준 / 관리 방법 뿌리깊은 실험 결과는 1-3 미치는 영향 때문에 이것은 중요합니다. 우리는 피하 silastic 캡슐과 당 구두 너트 - 크림 Nutella는 상용 느리게 출시 알약 (미국의 기업 혁신 연구에서 생산)로 우수하다고 찾는 17β-estradiol 행정의 다양한 모드를 특징 연구 시리즈가 있고 17β-estradiol 4-6의 생리 혈청 농도를 생산의 관점에서 매일 주사. 교수실 사이이전 buprenorphine 행정 7 사용되었습니다 너트 - 크림 방법의 antages은 에스 ​​트로겐 관리에 사용하면 그것이 peroral 호르몬 대체 요법과 유사하고 비침습가된다. 피하 silastic 캡슐이 편리하며 가장 안정적인 혈청 농도를 생산하고 있습니다. 이 비디오 문서 ovariectomy의 단계별 데모 및 silastic 캡슐 및 행정 절차의 중요한 측면에 대한 논의 뒤에 쥐 및 생쥐에서 peroral Nutella 의한 17β-estradiol 호르몬 대체가 포함되어 있습니다.

silastic 캡슐과 peroral Nutella 의한 Ovariectomy 및 17β-estradiol의 후속 교체는 쥐 및 생쥐에서 증명하고 있습니다.

고양이와 쥐의 Ovariectomy 및 17β-estradiol 대체 : 비주얼 데모

에스트로겐은 매우 광범위한 작용 범위를 가진 여성 성호르몬 군입니다. 에스트로겐 연구에 쥐(rats)와 생쥐(mice)가 사용될 때, 이들은...

이 절차의 전반적인 목적은 암컷 쥐와 생쥐에서 평소 변동이 심한 혈청 에스트로겐 농도를 엄격하게 제어하는 것입니다. 이는 먼저 등쪽 경로를 통해 난소를 제거함으로써 달성됩니다. 다음으로 셀 탄성 캡슐과 Nutella 혼합물을 준비합니다.마지막으로, 캡슐을 피하에 삽입하거나 누텔라 혼합물을 경구 투여합니다. 결과적으로, 방사면역측정법을 통해 캡슐 방법은 안정적인 혈청 17 beta estradiol 농도를, 누텔라 방법은 변동하는 혈청 17 beta estradiol 농도를 나타내는 결과를 얻을 수 있습니다. 서방성 펠릿과 같은 기존 방법과 비교하여 이 기술들의 주요 장점은 장기간 동안 생리학적 농도의 estradiol을 생성하는 것으로 입증되었다는 점입니다.이 방법은 투여 경로, 투여 부위 및 용량에 따른 효과의 차이와 같이 에스트로겐 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 동물을 마취시킨 후, 직장 온도계가 연결된 가열판 위에 복와위로 배치하십시오. IGEL과 수술 후 통증 완화제를 동물의 목 가측에 피하 투여하십시오.장골능 쉐이버(iliac crest shaver) 전방 4 by 4 cm 구역에 생리식염수에 희석한 IL 5 mg/kg을 투여합니다. 그 후, 해당 부위를 소독제로 소독하고 4 by 4 cm 개구부가 있는 수술 포로 동물을 덮습니다. 정중선을 따라 2~3 cm 절개하고, 정중선에서 외측으로 1 cm 떨어진 지점에서 하부 근막으로부터 피부를 둔성 박리합니다.근막을 통해 다시 한번 절개합니다. 그다음 복강에 도달할 때까지 이 근막 아래를 가능한 한 표면적으로 둔성 박리하여 측면으로 확장합니다. 핀셋을 사용하여 복강 내 난소를 둘러싸고 있는 지방 조직을 잡고 조심스럽게 밖으로 끌어냅니다.난소를 확인하고 자궁각과 혈관을 결찰합니다. 이 구조물에서 근위쪽으로 0.5에서 1cm 지점을 결찰하십시오. 난소와 결찰된 지방 조직을 절제하여 제거하고, 남은 조직을 복강 내로 다시 넣습니다.대측 근막에 다시 절개창을 내어 반대편 난소를 제거합니다. 상처 부위를 봉합하고, 17 beta estradiol을 즉시 투여하지 않는 경우라면 동물이 마취에서 깨어날 때까지 기다립니다.수술 후 동물을 가열된 케이지에 최소 2시간 동안 둡니다. 수술 후 첫 며칠 동안은 쥐를 단독 사육합니다. 수술 24시간 후에 피하 투여합니다.동물들에게 scholastic 캡슐을 통해 17 beta estradiol을 투여하기 위해 kg당 5 mg의 IL을 추가로 주입합니다. 필요한 양을 참깨오일에 넣고 충분히 혼합합니다. 핀셋을 사용하여 scholastic 튜브를 3 cm 길이로, 나무 어플리케이터 스틱을 막기용으로 5 mm 길이로 자릅니다.17 beta estradiol 참깨유 용액을 주입하기 전에 나무 플러그 하나를 scholastic 캡슐에 끼웁니다. 전체 길이를 채우기 위해, scholastic 캡슐의 열린 끝부분을 다른 나무 플러그로 조심스럽게 막습니다. 이식 전 하룻밤 동안 캡슐을 남은 17 beta estradiol 용액에 넣어 배양합니다.절제술 절개 부위를 봉합한 후, 쥐 목의 등쪽 부위에서 2x2 cm 크기의 정사각형 영역을 면도하고 소독합니다. 1 cm 정도 절개한 후 측면으로 둔탁하게 박리합니다. 피하 포켓을 만들어 캡슐이 들어갈 충분한 공간을 확보합니다.학술적 캡슐을 닦아낸 후 절개창을 통해 조심스럽게 삽입합니다. 그런 다음 봉합사로 절개창을 폐쇄합니다. 특히 상처 주변의 피부가 캡슐에 의해 최대한 덜 당겨지도록 합니다.에스트로겐 투여 매개체로 너트 크림인 Nutella를 사용하려면, 17 beta estradiol을 참기름에 완전히 용해시킨 후 참기름을 너트 크림과 혼합하십시오. 실험 5일 전부터 17 beta estradiol이 포함되지 않은 위약 너트 크림을 준비하십시오. 1일 차부터 3일 차까지 쥐가 호르몬이 없는 너트 크림을 먹도록 훈련시키십시오.넷째 날과 다섯째 날에 동물을 그룹별로 훈련시킵니다. 실험 전반에 걸쳐 개별 케이지에서 견과류 크림을 급여합니다. 견과류 크림 생리 식염수를 급여할 때는 동물을 개별 케이지에 배치합니다.현재의 방법들이 재현하고자 하는 17 beta estradiol 농도는 쥐(rat)의 경우 약 5에서 140 pg/mL이며, 생쥐(mouse)의 경우 5에서 35 pg/mL입니다. 여기에 표시된 바와 같이, 300 g의 암컷 Sprague Dawley 쥐에게 투여했을 때의 결과입니다.피하 탄성 캡슐은 2일 차의 약 40 picograms per milliliter에서 35일 차의 10 picograms per milliliter까지 서서히 감소하는 17 beta estradiol 혈청 농도를 생성합니다. 그러나 25 gram의 암컷 C 57 black six 마우스에 캡슐을 투여했을 때, 투여 직후에는 약 1000 picogram per milliliter의 혈청 농도 정점이 예상되며, 8시간 이내에 생리적 범위로 감소합니다.300g의 Sprague Dawley 랫드에게 너트 크림을 통해 투여했을 때, 혈청 농도는 2일 차의 약 90 pg/mL에서 35일 차의 25 pg/mL로 서서히 감소했습니다. 마우스에서 17β-estradiol의 생리적 수준은 매일 10 내지 70 pg/mL 사이에서 변동되었습니다.17 beta estradiol 수치는 mL당 20에서 120 picograms 사이에서 변동되었습니다. 일단 숙달되면, 절제술 및 캡슐 이식 기술은 적절히 수행될 경우 10분 이내에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도할 때는 위생 지침을 엄격히 준수하는 것이 중요합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

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고양이와 쥐의 Ovariectomy 및 17β-estradiol 대체 : 비주얼 데모

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