고양이와 쥐의 Ovariectomy 및 17β-estradiol 대체 : 비주얼 데모

이 실험 절차의 전반적인 목표는 암컷 쥐와 생쥐에서 평소 변동성이 큰 혈청 에스트로겐 농도를 엄격하게 제어하는 것입니다. 이는 먼저 등쪽 경로를 통해 난소를 제거함으로써 이루어집니다. 그다음으로 셀 탄성 캡슐과 Nutella 혼합물을 준비합니다.

마지막으로, 캡슐을 피하에 삽입하거나 Nutella 혼합물을 경구 투여합니다. 최종적으로 방사면역측정법을 통해 결과를 얻을 수 있으며, 캡슐법의 경우 혈청 17 beta estradiol 농도가 안정적으로 유지되는 반면 Nutella법의 경우 변동하는 것을 확인할 수 있습니다. 서방형 펠렛과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기법들의 주요 장점은 장기간 동안 생리적 농도의 estradiol을 생성하는 것으로 입증되었다는 점입니다.

이 방법은 투여 방식, 뿌리 및 용량에 따른 효과 차이와 같이 에스트로겐 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 동물을 마취시킨 후, 직장 온도계가 연결된 가열판 위에 엎드린 자세로 놓으십시오. IGEL을 투여하고, 수술 후 통증 완화를 위해 동물의 목 측면에 피하 주사하십시오.

장골능 제모 부위의 4 by 4 cm 영역 앞쪽에 5 mg/kg의 IL을 식염수로 투여합니다. 그 다음, 해당 부위를 소독제로 소독하고 4 by 4 cm 개구부가 있는 수술 포로 동물을 덮습니다. 정중선을 따라 2~3 cm 절개한 후, 정중선에서 가쪽으로 1 cm 떨어진 지점에서 피부를 하부 근막으로부터 둔성 박리합니다.

근막을 통해 다시 한 번 절개합니다. 그런 다음 복강에 도달할 때까지 이 근막 아래를 최대한 표층에서 외측으로 둔성 박리합니다. 핀셋을 사용하여 복강 내 난소를 둘러싸고 있는 지방 조직을 잡고 조심스럽게 끌어냅니다.

난소를 확인하고 자궁각과 혈관을 결찰합니다. 해당 구조물에서 근위 방향으로 0.5에서 1cm 지점을 결찰하십시오. 난소와 결찰된 지방 조직을 절제하여 제거하고, 남은 조직을 복강 내로 다시 넣습니다.

반대편 근막에 다시 절개창을 내고 나머지 난소를 제거합니다. 상처 부위를 봉합하고, 17 beta estradiol을 즉시 투여하지 않는 경우 동물이 마취에서 깨어날 때까지 기다립니다.

수술 후 동물을 가열된 케이지에 최소 2시간 동안 둡니다. 수술 후 처음 며칠 동안은 쥐를 개별 사육합니다. 수술 24시간 후에 피하로 투여합니다.

동물들에게 scholastic 캡슐을 통해 17 beta estradiol을 투여하기 위해 kg당 5 mg의 IL을 추가로 주입합니다. 필요한 양을 참기름에 완전히 섞습니다. 핀셋을 사용하여 scholastic 튜브를 3 cm 길이로, 나무 도포용 스틱을 막음용으로 5 mm 길이로 자릅니다.

17 beta estradiol 참깨 오일 용액을 주입하기 전, scholastic capsule에 나무 마개 하나를 밀어 넣습니다. 전체 길이를 채우기 위해, scholastic capsule의 열린 끝부분을 다른 나무 마개로 조심스럽게 막습니다. 이식 전, 남은 17 beta estradiol 용액에 캡슐을 넣고 하룻밤 동안 배양합니다.

절제술 절개 부위를 봉합한 후, 쥐 목의 등쪽 부위에 2 by 2 cm 크기의 정사각형 영역을 삭모하고 소독합니다. 1 cm 길이로 절개한 후 측면으로 둔성 박리를 시행합니다. 피하 포켓을 형성하여 캡슐이 들어갈 수 있는 충분한 공간을 확보합니다.

학습 캡슐을 닦아낸 후 절개창을 통해 조심스럽게 삽입합니다. 그 다음 봉합사로 절개창을 닫습니다. 특히 상처 주변의 피부가 캡슐에 의해 최대한 당겨지지 않도록 주의하십시오.

에스트로겐 투여 매개체로 너트 크림인 Nutella를 사용하려면, 17 beta estradiol을 참기름에 완전히 용해시킨 후, 이 참기름을 너트 크림과 혼합합니다. 실험 5일 전에 17 beta estradiol이 포함되지 않은 위약 너트 크림을 준비합니다. 1일 차부터 3일 차까지 쥐가 호르몬이 없는 너트 크림을 먹도록 훈련시킵니다.

넷째 날과 다섯째 날에 동물들을 그룹별로 훈련시킵니다. 실험 전 과정 동안 견과류 크림은 개별 케이지에서 급여하십시오. 견과류 크림 생리식염수를 급여할 때도 동물들을 개별 케이지에 배치하십시오.

현재의 방법들이 재현하고자 하는 17 beta estradiol 농도는 쥐의 경우 약 5~140 pg/mL이며, 생쥐의 경우 5~35 pg/mL입니다. 여기에 표시된 바와 같이, 300g의 암컷 Sprague Dawley 쥐에게 투여했을 때의 결과입니다.

피하 탄성 캡슐은 17 beta estradiol 혈청 농도를 2일 차의 약 40 picograms per milliliter에서 35일 차의 10 picograms per milliliter까지 서서히 감소시키며 생성합니다. 하지만 25 gram의 암컷 C 57 black six 마우스에 캡슐을 투여한 경우, 투여 직후 혈청 농도가 약 1000 picogram per milliliter까지 정점에 도달했다가 8시간 이내에 생리적 범위로 떨어질 것으로 예상됩니다.

300 g의 Sprague Dawley 쥐에게 너트 크림을 통해 투여했을 때, 혈청 농도는 2일 차의 약 90 pg/mL에서 35일 차의 25 pg/mL로 서서히 감소했습니다. 생쥐에서 17β-estradiol의 생리학적 수치는 매일 10에서 70 pg/mL 사이로 변동되었습니다.

17 beta estradiol 수치는 20에서 120 picograms per milliliter 사이에서 변동되었습니다. 일단 숙달되면, ectomy 및 capsule implantation 기술은 적절하게 수행될 경우 10분 내에 완료될 수 있습니다. 이 절차를 시도할 때는 위생 지침을 엄격히 준수하는 것이 중요합니다.