Name: 알레르기기도 염증 동안 폐 돌기 세포 성숙과 마이 그 레이션 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-23T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: 학습하세요 폐 수지상 세포 성숙 및 마이그레이션 분석 방법을 알레르기 기도 염증 연구에 적용하는 기술입니다. 오발부민 감작 마우스 모델에서 유세포 분석으로 면역 반응 메커니즘을 규명할 수 있습니다.

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이 작품은 박사 짐 후진타오에 CIHR과 CF 캐나다 보조금 의해 CF 캐나다로 라훌 Kushwah에게 수여 박사 학생이기 의해 재정 지원되었다.

1. Ovalbumin으로 마우스의 Sensitization <ol><li> OVA (학년 V, 시그마, MO)의 솔루션을 준비 한 MG / ML의 농도에서 멸균 PBS에서 (솔루션은 -80 ° C에 저장할 수 있습니다.) </li><li> OVA-명반 혼합물을 준비하기 위해 튜브에서 명반을 가지고 1시 1분의 비율로 튜브를 vortexing하면서 dropwise 패션 OVA 솔루션을 추가합니다. 30 분간 혼합 저어과 믹싱 후 바로 사용하십시오. </li><li> 1 ML의 주사기를 사용하여, 마우스 복막 캐비티로 혼합물의 0.2 ML 주사 2 주 후에 다시 주사를 반복합니다. </li></ol> 2. FITC 라벨 Ovalbumin와 마우스의 비강 도전 <ol><li> OVA-명반의 두 번째 주사 후 칠일은 마우스 OVA-FITC와 intranasally 도전을받을 준비가 된 것입니다. </li><li> -80에서 1 밀리그램 / ML 및 aliquots의 저장소의 농도에서 멸균 PBS를 사용 OVA-FITC (시그마)의 솔루션 ° C를 준비 </li><li> 50 ML 팔콘 튜브의 하단과 화학 H의 멸균 거즈를 놓으십시오ood는 거즈에 Aerrane의 5 ML에 추가합니다. 생쥐를 마취하기 위해, 약 5-10초위한 튜브로 동물을 직접. </li><li> 직립 자세 및 멸균 피펫 팁, 드롭 현명한 패션의 생쥐의 nares 진입 OVA-FITC 솔루션의 피펫 100 μl를 사용하여 anesthetized 동물을 잡아. </li><li> 앞으로 이틀 동안 OVA-FITC와 비강 도전을 반복합니다. </li></ol> 3. 단일 세포 폐로부터 정학 및 배수 림프절의 작성 <ol><li> Euthanyl의 intraperitoneal 주사를 이용하여 생쥐를 희생. </li><li> 직류 분석을 복잡 수있는 대식 세포 오염을 줄이기 위해, 폐 세척이 수행됩니다. 폐를 세척하려면 마우스 tracheas는 잠시 카테터와 주사기로 노출되어 cannulated하고, 5 밀리미터 EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산)과 함께 얼음처럼 차가운 PBS를 사용하여 더 낮은 호흡 기관을이 폐포 공간에서 세포를 제거하는 3 번 씻어서있다. </li><li> 10 U / ML hepar를 포함하는 PBS의 10 ML과 폐가 Perfuse심장의 우심실 통해에서 폐 vasculature에서 혈액 세포를 제거합니다. 폐 혈액 세포의 대부분의 제거는 지표로, 흰색으로 바뀝니다까지 perfusions을 수행합니다. 이것은 말초 혈액의 오염 세포를 제거하려면 특히 중요합니다. </li><li> 폐를 해부하고 mediastinal 림프절 (MLN)를 제거하고 별도의 접시에있는 림프절을 넣으십시오. (FITC 형광 반응의 담금질을 방지하기 위해 나가기 위해서 조직의 노출을 최소화하기 위해보십시오.) </li><li> 배양 접시에 폐를 놓고 가위를 사용하여 말하다. 다음 37 25 분 동안 폐가 소화 ° collagenase 활동을 중지하려면 다음 5 분 동안 250 U / ML Collagenase D (로슈)와 추가 EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) (10 MM 최종 농도)를 사용하여 C #. </li><li> 100 μm의 셀 스트레이너를 통해 소화 폐의 조각을 통과하고 적혈구를 제거하는 hypotonic 용해를 수행합니다. 단일 세포 현탁액은 DC가의 자세한 분석을위한 준비가되었습니다. </li><li> MLN, T에서 단일 세포 현탁액을 준비하기 위해서는셀 스트레이너를 통해 긴장이어서 위에서 설명한대로 collagenase와 미세 바늘 및 다이제스트를 사용하여 MLN를 완화. </li></ol> 4. DC위한 염색법은 성숙 / 마이 그 레이션을 평가하기 위해 마커 <ol><li> 폐의 DC가를 파악하기 위해, 염색법는 CD11c 및 CD11b에 대해 수행됩니다. 또한 성숙을위한 평가, 염색법은 DC가가 성숙을 받다으로 upregulated되는 CD86과 CD80를 위해 수행됩니다. MLN에서 CD11c + CD11b + OVA-FITC + 세포는 허파로부터 OVA기도 도전에 대응 MLN로 마이 그 레이션 폐 DC가로 식별됩니다. </li><li> 10 × 10 6 세포 / ML FACS 버퍼에 (1 % FBS 및 1mM EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산)과 PBS)와 FACS의 염색법에 대한 세포 현탁액 / 관 나누어지는 150 μl의 농도에서 세포를 일시 중지합니다. 폐 DC가의 확인 내용은 다음과 같은 얼룩이 필요합니다 : 흠없는 제어 (OVA-FITC에 노출되지 생쥐의 폐 세포), OVA-FITC 제어, CD11c 단일 제어, CD11b 단일 제어, CD11b+ CD11c + 이중 제어, CD11b + OVA-FITC + 이중 제어, CD11c + OVA-FITC + 이중 제어, MHC II OVA-FITC + CD11c + CD11b + MHCII에 대해 묻다 단일 제어, CD86 단일 제어, CD80 단일 제어 및 샘플 + , OVA-FITC + CD11c + CD11b + CD86 + 및 OVA-FITC + CD11c + CD11b + CD80 +. </li><li> , DC 마이 그 레이션을 평가 MLN에서 단일 세포 현탁액의 절대 셀 계산을 수행하고 이후에 다음과 같은 튜브를 준비하려면 : CD11c 흠없는 제어 (OVA-FITC에 노출되지 생쥐에서 MLN 세포), OVA-FITC 제어, + 단일 제어, CD11b를 + 이중 제어, CD11b + OVA-FITC + 이중 제어, CD11c + OVA-FITC + 이중 제어 및 CD11c + CD11b + OVA-FITC + 샘플. </li></ol> 5. 대표 결과 기도 알레르기 염증을 유발해서 intraperitoneal sensitization에 필요한 시간은 지점이 중요하며 그림 1에 묘사된대로 실시해야합니다. 기도 알레르기 염증의 유도를 확인하기 위해 intraperitoneal sensitization과기도 OVA의 도전을 이어, 일부 쥐들이 희생 수 있으며 그림 2와 같이 histological 분석은 폐 섹션에서 수행 할 수 있습니다. 염증성 세포의 존재는 Hematoxylin &amp; Eosin 얼룩으로 확인하실 수 있습니다 (그림 2A) 및 점액 생산의 존재는 정기 - 산 - 쉬프 얼룩 (그림 2B)로 평가됩니다. 다 합해서 이것이 OVA-sensitized 생쥐 8 OVA 도전에 따라 알레르기기도 염증의 유도를 확인합니다. 반대로, 염분 취급 생쥐의 폐 부분은 어떤 점액 생산의 부재와 함께 염증 무료 것으로 예상된다. 또한 다음 OVA 도전, 폐 DC가 unde<html> rgo의 성숙과 배수 림프절에 대한 후속 마이 그 레이션. sensitized 및 OVA 맡고 생쥐에서 mediastinal 림프절 (MLN)에서 CD11c + 세포의 분석은 식염수 - 취급 생쥐 (그림 3A)에 비해 CD11c + 세포의 높은 비율을 보여주 것으로 예상된다. 또한, CD11c + CD11b의 절대 셀 카운트의 분석 OVA-sensitized과 도전 생쥐의 MLN에서 + OVA-FITC + 세포 (몇 배 더 높은 IE) 상당히 높은 수를 보여주 것으로 예상되는 염분 처리된 생쥐 (의 대응 그림 3B). <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/4014/4014fig1.jpg" /> 그림 1. ovalbumin의 유도 (OVA) FITC 라벨이 ovalbumin (OVA-FITC)와기도 도전과 함께 생쥐에서 유도된 알레르기기도 염증에 대한 실험적 프로토콜. fig2.jpg &quot;/&gt; OVA기도 도전 다음에 그림 2. OVA sensitization은 ()에 표시 폐 섹션 Hematoxylin &amp; Eosin 염색법에 의해 식별과 같은기도 알레르기 염증의 유도에 이르게하고 또한 폐의 정기 산성 쉬프의 염색법으로 식별기도의 점액 생산에 이르게 (B)와 같이 섹션. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/4014/4014fig3.jpg" /> 그림 3. OVA-FITC 도전은 허파에서 mediastinal 림프절 (MLN)에 직류 마이 그 레이션을 유도합니다. () 유동세포계측법의 플롯은 컨트롤이나 OVA-sensitized 생쥐의 MLN에서 CD11c + 세포의 비율을 묘사. (B) 염분이나 OVA-sensitized 생쥐의 MLN에서 CD11c + CD11b + OVA-FITC + 세포의 절대 건의. * P &lt;0.05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4014/4014fig3large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 누르십시오</a> .

<ol><li>Kushwah, R., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+dendritic+cells+in+the+induction+of+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biosci%22%5BJournal%5D)">Role of dendritic cells in the induction of regulatory T cells.</a> Cell Biosci. 20, (2011).</li>
<li>Kushwah, R., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complexity+of+dendritic+cell+subsets+and+their+function+in+the+host+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Complexity of dendritic cell subsets and their function in the host immune system.</a> Immunology. 133, 409-419 (2011).</li>
<li>Lambrecht, B. N., Hammad, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taking+our+breath+away%3A+dendritic+cells+in+the+pathogenesis+of+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Taking our breath away: dendritic cells in the pathogenesis of asthma.</a> Nat Rev Immunol. 3, 994-1003 (2003).</li>
<li>Hammad, H., Lambrecht, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+and+epithelial+cells%3A+linking+innate+and+adaptive+immunity+in+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells and epithelial cells: linking innate and adaptive immunity in asthma.</a> Nat. Rev. Immunol. 8, 193-204 (2008).</li>
<li>Lloyd, C. M., Murdoch, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerizing+allergic+responses+in+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Tolerizing allergic responses in the lung.</a> Mucosal. Immunol. 3, 334-344 (2010).</li>
<li>Herz, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relevance+of+murine+animal+models+to+study+the+development+of+allergic+bronchial+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The relevance of murine animal models to study the development of allergic bronchial asthma.</a> Immunol. Cell Biol. 74, 209-217 (1038).</li>
<li>Herz, U., Lumpp, U., Daser, A., Gelfand, E. W., Renz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+animal+models+to+study+the+central+role+of+T+cells+in+immediate-type+hypersensitivity+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Exp.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Murine animal models to study the central role of T cells in immediate-type hypersensitivity responses.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 409, 25-32 (1996).</li>
<li>Nakae, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TNF+can+contribute+to+multiple+features+of+ovalbumin-induced+allergic+inflammation+of+the+airways+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Allergy+Clin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">TNF can contribute to multiple features of ovalbumin-induced allergic inflammation of the airways in mice.</a> J. Allergy Clin. Immunol. 119, 680-686 (2007).</li>
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<li>Kushwah, R., Oliver, J. R., Zhang, J., Siminovitch, K. A., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptotic+dendritic+cells+induce+tolerance+in+mice+through+suppression+of+dendritic+cell+maturation+and+induction+of+antigen-specific+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Apoptotic dendritic cells induce tolerance in mice through suppression of dendritic cell maturation and induction of antigen-specific regulatory T cells.</a> J. Immunol. 183, 7104-7118 (2009).</li>
</ol>

관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.

여기에 제시된 방법은기도 도전 OVA-FITC의 제공을 바탕으로 폐 DC가를 분석하기위한 유동세포계측법 기반 접근 방식을 제공합니다. 이것은 OVA-FITC을 가지고 감시 따라서 직류 인구가 효과적으로 OVA 유발 알레르기기도 염증 과정 중에기도 면역 반응에 참여하는 사람들입니다 폐동맥 DC가의 선택적 모니터링을 허용합니다. 컨트롤 마우스에서 알레르기기도 염증의 부재에서, MLN에서 확인된 철새 DC가의 숫자 (OVA-FITC + DC가)는 크게 증가의 결과로 알레르기기도 염증에 대한 응답으로 가속 DC 이주의 기저 속도의 지표로 MLN의 OVA-FITC + DC가의 절대 개수. 분석 짧은 타임 스팬에서 수행하고 효율 / 감도가 훨씬 높다 수 있기 때문에 설명하는 전략은 전통적인 immunostaining / immunohistochemical 기반의 접근 방법을 통해 이점을 제공합니다. 따라서 전자는방법에서 설명한대로 적절한 컨트롤이 유동세포계측법 분석 기간 동안 고용되는 것을 보장하기 위해 qually 중요합니다. 결과에 ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> Ovalbumin </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> A5503 </td></tr><tr><td> 명반 </td><td> 써모 과학 </td><td> 77,161 </td></tr><tr><td> OVA-FITC </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> A9771 </td></tr><tr><td> Collagenase D </td><td> 로슈 </td><td> 11088858001 </td></tr><tr><td> 항체 </td><td> E-Bioscience </td><td></td></tr></tbody></table>

알레르기기도 염증 동안 폐 돌기 세포 성숙과 마이 그 레이션 분석

Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation

돌기 세포 (DC가)는 항원에 특정한 T 세포를 활성화하여 적응 면역 반응의 개시에 관여 핵심 선수입니다. DC가가 안정된 상태에서 말초 조직에 존재 있지만 항원 자극에 대한 응답으로, DC가이 항원을 가지고 급속하게 그들이 항원에 대한 T 세포 1,2 응답을 시작 배수 림프절로 마이 그 레이션. 또한 DC가 또한자가 면역 질환뿐만 아니라 알레르기 면역 반응 3 시작에서 핵심 역할을한다. DC가이 폐 환경 4 설정에서 관용의 면역 반응과 유도의 두 개시에 필수적인 역할을한다. 폐 환경은 환경 항원 5의 광대한 배열과 노출로 인하여, 크게 tolerogenic입니다. 그러나 어떤 사람은 알레르기와 천식의 유도로 연결 오차의 휴식,있다. 본 연구에서 우리는기도의 DC 성숙과 미그을 모니터링하는 데 사용할 수있는 전략을 설명sensitization에 사용되는 항원에 대한 반응으로 배급. 기도의 DC 성숙 및 마이 그 레이션의 측정은기도 알레르기 염증시 면역 반응의 동력학의 평가를 허용하며 기본 메커니즘과 함께 이후의 면역 반응의 정도를 이해하는데 도움이됩니다. 우리의 전략 sensitizing 대리인으로 ovalbumin의 사용을 기반으로합니다. Ovalbumin 유도된 알레르 기성 천식은기도 eosinophilia, 폐의 염증과 천식 6,7 중 발견된 상승된 IGE 수준을 재현하기 위해 널리 사용되는 모델입니다. sensitization 후, 마우스는 이해의 ovalbumin기도 DC가 특정 라벨링을 허용 FITC 분류 ovalbumin의 비강 전달에 의해 도전을하고 있습니다. 다음으로 여러 DC 특정 마커를 사용하여, 우리는 이러한 DC가의 성숙을 평가할 수 있으며 유동세포계측법를 채용하여 배수 림프절 자신의 마이 그 레이션을 평가할 수 있습니다.

우리는 ovalbumin 유도된 알레르기기도 염증의 설정에서 ovalbumin에 대한 응답으로 폐 돌기 세포의 성숙 및 마이 그 레이션을 모니터링하는 전략을 설명합니다. 이 전략은 감염의 설정에서 폐 돌기 세포의 이주를 평가하기 위해 수정할 수 있습니다.

수지상세포(Dendritic cells, DCs)는 항원 특이적 T 세포를 활성화함으로써 적응 면역 반응의 개시에 관여하는 핵심 요소입니다. 수지상세포는 ... 에 존재하며

본 절차의 목적은 마우스에서 Val Boomin으로 유도된 알레르기성 기도 염증 과정 동안 폐 수지상 세포(dendritic cell 또는 DC)의 성숙과 이동을 평가하는 것입니다. 이는 먼저 Val Boomin으로 마우스를 감작시킨 후, fitsy 표지 Val Boomin으로 기도를 자극함으로써 수행됩니다. 그 다음, 폐와 종격동 림프절을 채취합니다.마지막으로, 폐와 림프절 조직으로부터 단일 세포 현탁액을 준비합니다. 최종적으로, FITC Val Boomin 자극 후 종격동 림프절에서 발견되는 폐 수지상 세포의 성숙 상태와 절대 세포 수를 유세포 분석법으로 평가할 수 있습니다. 이 방법은 수지상 세포가 항원 노출에 따라 성숙 과정을 거치는지, 그리고 배수 림프절로 이동하는지 등 폐 면역 반응에 관한 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다.그리고 만약 이동한다면, 그 이동 속도가 얼마인지 확인합니다. 볼텍싱을 하며 알루미늄 튜브에 갓 준비한 Val Boomin 용액을 1:1 비율로 한 방울씩 첨가하는 것으로 시작하십시오. 혼합물을 30분 동안 교반한 후, 1 mL 주사기에 혼합물 0.2 mL를 채웁니다.한쪽 손의 엄지와 검지를 사용하여, 두개골 기저부 근처의 목덜미 부분을 잡아 주입할 마우스를 고정합니다. 그런 다음 다른 손을 사용하여 마우스의 복강 내에 Val Boomin 알럼 용액을 주입합니다. 알럼 내 Val의 두 번째 주입 7일 후, 알럼으로 감작되어 마취된 동물을 똑바로 세운 자세로 잡고, 멸균 피펫 팁을 사용하여 갓 조제한 val in fxi 용액 100 µL를 마우스의 NAS 위에 한 방울씩 떨어뜨려 피펫팅합니다.먼저 20게이지 카테터를 1mL 주사기에 연결합니다. 그다지 마우스의 안락사가 확인되면, 마우스 기관을 노출시키고 캐뉼라를 삽입하기 위해 동물의 흉강을 목까지 완전히 엽니다. 폐를 세척하고 심장을 관류하여 말초혈액에 존재하는 모든 오염된 폐포 대식세포와 단핵구를 확실히 제거하는 것이 매우 중요합니다.다음 두 단계는 주의 깊게, 그리고 반드시 손을 안정시킨 상태에서 수행하십시오. 이제 카테터를 통해 얼음처럼 차가운 EDTA 함유 PBS를 세 번 투여하여 하기도를 헹구고 폐포 공간에서 세포를 제거합니다. 그다음, 20 gauge 바늘을 장착한 10 milliliter 주사기를 사용하여 심장의 우심실을 통해 헤파린이 포함된 PBS 10 milliliters로 폐를 관류합니다.폐 혈관계에서 남아 있는 모든 혈구를 제거하여 폐가 하얗게 변하면 제거가 완료된 것으로 간주합니다. 다음으로, 종격동 림프절을 제거하여 별도의 접시에 담습니다. 조직의 빛 노출을 최소화하여 형광 소광을 방지하십시오.그 후 관류된 폐를 적출하여 페트리 접시에 넣고 가위로 폐를 잘게 다집니다. 다음으로 37 °C에서 250 units/mL의 collagenase D를 사용하여 폐 조직을 소화시킵니다. 25분간 배양한 후, 혼합물에 EDTA를 첨가하여 5분 동안 collagenase 활성을 정지시킵니다. 마지막으로 소화된 폐 조각들을 100 µm 세포 여과기에 통과시킨 후 저장성 완충액으로 적혈구를 용해시킵니다.미세 바늘을 사용하여 종격동 림프절을 분리하고, 폐 조직에서 시연한 것과 동일하게 콜라게나아제로 소화시킨 후, 복강 내 투여, 감작 및 기도 내 투여를 거친 조직을 세포 여과기에 걸러줍니다. 염증 세포의 존재 여부는 대조군 및 실험군의 대표적인 폐 절편에서 헤마톡실린 및 에오신 염색을 통해 평가할 수 있습니다.식염수를 처리한 동물들의 경우, 상단 이미지에서 확인되는 바와 같이 조직에 염증이 없습니다. 이와 대조적으로, 하단 이미지에서 볼 수 있듯이 감작 및 자극을 준 동물의 Val 폐 절편 전체에 걸쳐 염증 세포가 퍼져 있습니다. 하단 이미지에 나타난 것처럼, 점액 생성을 평가하기 위해 주기산-시프(periodic acid shift) 염색을 사용할 수 있습니다.Val로 감작된 생쥐에서 Val 도전 후 기도 알레르기성 염증의 유도는 점액의 존재로 확인됩니다. 반대로, 상단 그래픽에 나타난 바와 같이 식염수를 처리한 대조군 생쥐에서는 점액 생성이 완전히 나타나지 않습니다. Val 도전 후 폐의 dcs는 성숙을 거쳐 배출 림프절로 이동합니다.마우스 종격동 림프절의 대표적인 분석 결과, 식염수 처리군과 비교하여 Val Boomin으로 감작 및 유발된 동물에서 CD 11 C 양성 세포의 비율이 완만하지만 일관되게 증가하는 것이 확인되었습니다. 또한, 감작 및 유발된 마우스의 종격동 림프절에서 CD 11 C 양성, CD 11 B 양성, Val Boomin fits C 양성 세포의 절대 세포 수를 분석한 결과, 식염수 처리군에 비해 유발군에서 수지상 세포(DC) 수가 수 배 더 크게 증가하는 것으로 나타났습니다. 이 영상을 시청한 후에는 폐 수지상 세포의 성숙 및 이동을 분석하는 당사의 기술에 대해 충분히 이해할 수 있을 것입니다.이 기술을 충분히 숙달하면, 다른 병원체나 기타 실험적 요인에 대한 폐 수지상 세포의 반응을 평가하기 위해 이 방법을 수정하여 적용할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

쥐 호흡 생리학과기도 염증 세포의 샘플링의 반복 측정이 바람직하지만, 일반적으로 가능하지 않습니다. 여기 구두기도 염증 세포의기도 기능 항 진성과 샘플링의 반복 측정을 허용 쥐를 intubating에 대한 반복 방법을 설명합니다.

에어웨이 저항 측정 및 마우스에 Bronchoalveolar 세척 유체 샘플링에 대한 가역, 비침습 방법

마우스 폐 돌기 세포의 고도 정화 준비가 설명되어 있습니다. 구체적인 중점이 종래의 돌기 세포 집합의 고립에 제공됩니다.

마우스 폐에 돌기 세포의 분리

인간의 수지상 세포(DC)를 포함한 폐 상주 면역 세포는 흡입된 병원체와 알레르겐에 대한 방어에 매우 중요합니다. 그러나 인간의 폐 조직이 부족하기 때문에 연구가 제한적입니다. 이 연구는 면역조직화학 및 유세포 분석을 사용하여 폐 DC를 연구하기 위한 인간 점막 기관지 내 생검을 처리하는 프로토콜을 제시합니다.

면역 및 유동 세포 계측법을 사용하여 기관지 생검의 공간 분포 및 표현형 확인 : 인간의 폐 수지상 세포

우리는 정밀 컷 폐 조각 (PCLS)를 생성하고, 폐에 다양한 면역 세포 유형의 현지화를 시각화하도록 면역 염색하는 방법을 설명합니다. 우리의 프로토콜은 다양한 조건 하에서 위치와 다양한 세포 유형의 기능을 시각화 할 수 있도록 확장 할 수 있습니다.

정밀 절단 라이브 폐 수지상 세포를 시각화하기 위해 마우스 폐 슬라이스

여기, 선물이 개발 및 특성 tolerogenic 수지상 세포 (TolDCs) 하 고 그들의 immunotherapeutic 유틸리티를 평가 하는 프로토콜.

개발 및 Murine Tolerogenic 수지상 세포의 기능적 특성

현재 문서의 목적은 더블 챔버 plethysmography 여 의식 쥐에 호흡 기능을 평가 하는 권장된 절차에 대 한 자세한 설명을 제공 하는 것 이다.

더블 챔버 Plethysmography 여 의식 생쥐에 호흡기 기능의 평가

여기 소개 된 프로토콜 vivo에서 염증 성 조건 하에서 기본 인간 림프 톨의 폐 유도 용량 특성을 수 있습니다. 알레르기 염증의 마우스 모델에서 adoptively 전송된 인간의 면역 세포의 폐 침투 몇 군데 하 고 화학적으로 허가 폐 조직의 빛 시트 형광 현미경 검사 법에 의해 측정할 수 있습니다.

고급 폐 유도 빛 시트 현미경 검사 법에 따라 알레르기 염증의 Vivo 모델에서 실험에서 인간 림프 톨의 이미징

이 프로토콜에서 림프구는 다공성 멤브레인에 의해 하단 챔버로부터 분리 된 트랜스 이민 시스템의 상부 챔버에 배치됩니다. 케모카인은 하단 챔버에 첨가되어 케모카인 그라데이션을 따라 활발한 이동을 유도합니다. 48 시간 후, 림프구는 트랜스 이민을 정량화하기 위해 두 챔버에서 계산됩니다.

Ex Vivo 트랜스이민 시스템에서 림프구 마이그레이션 평가

이 프로토콜은 허혈성 뇌졸중의 뮤린 모델인 일시적 중간 대뇌동맥 폐색 후 폐 환경에서 면역 세포 조성, 사이토카인 프로파일, 및 케모카인 프로파일의 변화를 확인하기 위한 유세포 분석기의 사용을 기술한다.

폐 환경에서 면역 세포 및 전염증성 중재자의 특성화

여기서 우리는 체외 DC 분화에 대한 안정적인 녹다운 세포주를 얻기 위해 shRNA의 렌즈바이러스 트랜스듀션을 사용하여 수지상 세포(DC)의 개발에 관여하는 잠재적 전사 인자를 선별하기 위한 프로토콜을 제공합니다.

대장포에이성 줄기및 전구세포주에서 짧은 헤어핀 RNA 중재 유전자 녹다운에 의한 수지상 세포 개발 연구

이 연구에서, 우리는 뮤린 호흡기의 면역 집단을 분리하기위한 효과적이고 재현 가능한 프로토콜을 제시합니다. 우리는 또한 9 색 기반 유세포 측정 패널을 사용하여 건강한 마우스의 폐에 존재하는 모든 선천적 및 적응 면역 세포를 확인하는 방법을 제공합니다.

뮤린 폐의 선천적 및 적응성 면역 세포의 확인을 위한 유세포 분석

학습하세요 폐 수지상 세포 성숙 및 마이그레이션 분석 방법을 알레르기 기도 염증 연구에 적용하는 기술입니다. 오발부민 감작 마우스 모델에서 유세포 분석으로 면역 반응 메커니즘을 규명할 수 있습니다.

알레르기기도 염증 동안 폐 돌기 세포 성숙과 마이 그 레이션 분석

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