July 23rd, 2012
우리는 ovalbumin 유도된 알레르기기도 염증의 설정에서 ovalbumin에 대한 응답으로 폐 돌기 세포의 성숙 및 마이 그 레이션을 모니터링하는 전략을 설명합니다. 이 전략은 감염의 설정에서 폐 돌기 세포의 이주를 평가하기 위해 수정할 수 있습니다.
이 절차의 목적은 생쥐에서 Val Boomin이 유발한 알레르기성 기도 염증이 진행되는 동안 폐 수지상 세포 또는 DC 성숙 및 이동을 평가하는 것입니다. 이것은 먼저 Val Boomin으로 쥐를 민감하게 한 다음 Val Boomin이라고 표시된 fitsy로 기도 챌린지를 수행함으로써 수행됩니다. 다음으로, 폐와 종격동 림프절을 적출합니다.
마지막으로, 폐와 림프절 조직에서 단세포 현탁액을 준비합니다. 궁극적으로, FITC Val Boomin 챌린지 후 종격동 림프절에서 발견된 Pullman read 수지상 세포의 성숙 상태와 절대 세포 수는 유세포 분석을 통해 평가할 수 있습니다. 이 방법은 덴드레틱 세포가 성숙을 겪는지, 항원 노출이 감소하는지, 등급 림프절로 이동하는지 여부와 같은 폐 면역 반응에 대한 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다.
그리고 만약 그들이 이주한다면, 이주의 비율은 어떻게 될까요? 볼텍싱하는 동안 갓 준비한 Val Boomin 용액을 명반 튜브에 1:1 비율로 Dropwise를 추가하는 것으로 시작합니다. 혼합물을 30분 동안 저어준 다음 1ml 주사기에 0.2ml의 혼합물을 채웁니다.
한 손의 집게 손가락에 엄지 손가락을 사용하여 두개골 기저부에 가까운 목 조각으로 주입 할 마우스를 잡습니다. 그런 다음 다른 손으로 Val Boomin 명반 용액을 마우스의 복강에 주입합니다. 명반에 Val의 두 번째 주입 후 7 일, 마취 된 val을 명반 감작 동물에 똑바로 세운 다음 멸균 피펫 팁 피펫 100 마이크로 리터와 fxi 용액에서 갓 준비된 val을 마우스의 NAS에 적하 방식으로 사용합니다.
1밀리리터의 주사기에 20게이지 카테터를 부착하는 것으로 시작합니다. 그런 다음 마우스의 안락사를 확인한 후 동물의 흉강을 목까지 열어 마우스 기관을 노출시키고 캐뉼레이션합니다. 폐를 세척하고 심장을 풍부하게 하여 말초 혈액에 존재하는 모든 오염 폐포 대식세포와 단핵 세포를 제거하는 것이 절대적으로 중요합니다.
그리고 다음 두 단계를 신중하고 물론 꾸준한 손으로 수행해야 합니다. 이제 카테터를 통해 EDTA가 포함된 얼음처럼 차가운 PBS를 3회 투여하여 하기도를 헹구고 폐포 공간에서 세포를 제거합니다. 그런 다음 10ml 주사기에 20게이지 바늘을 끼운 후 심장의 우심실을 통해 헤파린이 함유된 PBS 10ml를 폐에 관류합니다.
폐 혈관 구조에 남아 있는 혈액 세포를 제거하는 것은 폐가 하얗게 변하면 완료된 것으로 간주됩니다. 다음으로 종격동 림프절을 제거하여 별도의 접시에 담습니다. 조직의 빛 노출을 최소화하여 핏 스퀜칭을 방지합니다.
그런 다음 관류된 폐를 해부하고 가위를 사용하여 페트리 접시에 넣고 폐를 다집니다. 다음으로, 콜라겐 분해 효소 D.After 25 분 콜라겐 분해 효소 밀리리터 당 250 단위에서 섭씨 37도에서 폐 조직을 소화하십시오. 콜라겐 분해 효소 활성을 중지하기 위해 5 분 동안 혼합물에 EDTA를 추가하십시오. 마지막으로, 소화된 폐 조각을 100미크론 세포 여과기에 통과시키고 적혈구에 저장성 완충액을 놓습니다.
가는 바늘을 사용하여 종격동 림프절을 분리하고 폐에 대해 방금 설명한 것처럼 콜라겐 분해 효소로 소화한 다음 복강내, 감작 및 기도에 이어 세포 여과기를 통해 조직을 긴장시킵니다. 챌린지 중인 발. 염증성 세포의 존재는 대조군의 대표적인 폐 절편에서 hemat, toin 및 eosin 염색으로 평가할 수 있습니다.
식염수를 처리한 동물의 조직에는 상단 그래픽에서 볼 수 있듯이 염증이 없습니다. 대조적으로, 염증성 세포는 바닥에서 볼 수 있듯이 민감하고 장애가 있는 동물의 Val에서 폐 섹션 전체에 널리 퍼져 있습니다. 이 하단 그래픽과 같이 그래픽, 주기적인 산 이동 염색을 사용하여 점액 생성을 평가할 수 있습니다.
감작된 마우스에서 Val in Challenge in Val에 따른 기도 알레르기 염증의 유도는 점액의 존재에 의해 확인됩니다. 반대로, 점액 생성의 완전한 부재는 대조군에 의해 나타납니다. 생리식염수를 처리한 마우스는 val in challenge 폐 유관세포가 성숙을 거친 후 배출 림프절로 이동하는 상단 그래픽에서 볼 수 있습니다.
여기서, 마우스의 종격동 림프절에 대한 대표적인 분석은 식염수를 처리한 마우스와 비교하여 Val Boomin에 감작되고 도전한 동물에서 CD 11 C 양성 세포의 비율이 완만하지만 일관되게 증가한다는 것을 보여줍니다. 더욱이, 감작 및 도전 마우스에서 Val의 종격동 림프절에서 C 양성 세포에 맞는 CD 11 C 양성 Val Boomin의 절대 세포 수를 분석한 결과, 식염수 처리된 동물에 비해 도전 마우스에서 DC 수치가 몇 배 더 높은 증가가 발생한다는 것을 보여줍니다. 이 비디오를 시청한 후에는 폐 수지상 세포 성숙과 이동을 분석하는 기술에 대해 정말 잘 이해하게 될 것입니다.
그리고 일단 이 기술을 정말로 이해하게 되면, 다른 병원체에 대한 폐 수지상 세포 반응과 다른 실험 요인을 평가하기 위해 이 기술을 수정할 수 있습니다.
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이 연구는 알레르기 기도 염증 중 오발부민에 대한 폐 덴드리트 세포의 성숙 및 이동을 평가하는 방법을 설명합니다. 이 접근 방식은 다양한 감염 상황에서 덴드리트 세포의 행동을 조사하는 데 적용될 수 있습니다.
Understanding dendritic cell maturation and migration is critical for de-risking target validation in immunology-driven drug discovery. This method provides quantitative, flow cytometry-based readouts that enable mechanistic insight into allergic airway inflammation models. It supports predictive confidence in early discovery by linking antigen exposure to immune cell dynamics relevant to asthma and allergy therapeutics.
The method fits within the immunology discovery continuum, supporting early target validation through to preclinical mechanistic de-risking in allergy and asthma research.