Name: Heterokaryon 형성의 두 가지 방법 HCV 제한 요소를 발견하기 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-16T12:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 49 s
Description: 학습하세요 HCV 복제 주기 완성에 대한 제한 요소의 영향을 조사하는 두 가지 이형핵 형성 방법을. 이 기술은 감염성 HCV 후대 입자 생성을 억제하는 우성 제한 요소를 발현하는 세포주를 선별하는 데 활용됩니다.

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우리는 Takaji Waki​​ta 각각 JFH1 및 J6CF의 분리를위한 젠스 Bukh에 감사를드립니다. 아울러 우리는 찰스 허-7.5 세포에 대한 쌀과 9E10 항체, E2 특정 항체 CBH-23에 대한 스티븐 였어, 그리고 실험 바이러스학, 유용한 제안 및 토론을위한 Twincore학과의 모든 구성원 감사드립니다.

<ol><li>Zhu, Q., Guo, J. T., Seeger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication+of+hepatitis+C+virus+subgenomes+in+nonhepatic+epithelial+and+mouse+hepatoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Replication of hepatitis C virus subgenomes in nonhepatic epithelial and mouse hepatoma cells.</a> J. Virol. 77, 9204-9210 (2003).</li>
<li>Kato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonhepatic+cell+lines+HeLa+and+293+support+efficient+replication+of+the+hepatitis+C+virus+genotype+2a+subgenomic+replicon%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Nonhepatic cell lines HeLa and 293 support efficient replication of the hepatitis C virus genotype 2a subgenomic replicon.</a> J. Virol. 79, 592-596 (2005).</li>
<li>Ali, S., Pellerin, C., Lamarre, D., Kukolj, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatitis+C+virus+subgenomic+replicons+in+the+human+embryonic+kidney+293+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Hepatitis C virus subgenomic replicons in the human embryonic kidney 293 cell line.</a> J. Virol. 78, 491-501 (2004).</li>
<li>Date, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genotype+2a+hepatitis+C+virus+subgenomic+replicon+can+replicate+in+HepG2+and+IMY-N9+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Genotype 2a hepatitis C virus subgenomic replicon can replicate in HepG2 and IMY-N9 cells.</a> J. Biol. Chem. 279, 22371-22376 (2004).</li>
<li>Chang, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication+of+hepatitis+C+virus+%28HCV%29+RNA+in+mouse+embryonic+fibroblasts%3A+protein+kinase+R+%28PKR%29-dependent+and+PKR-independent+mechanisms+for+controlling+HCV+RNA+replication+and+mediating+interferon+activities%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Replication of hepatitis C virus (HCV) RNA in mouse embryonic fibroblasts: protein kinase R (PKR)-dependent and PKR-independent mechanisms for controlling HCV RNA replication and mediating interferon activities.</a> J. Virol. 80, 7364-7374 (2006).</li>
<li>Zhong, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robust+hepatitis+C+virus+infection+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Robust hepatitis C virus infection in vitro.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 9294-9299 (2005).</li>
<li>Lindenbach, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+replication+of+hepatitis+C+virus+in+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Complete replication of hepatitis C virus in cell culture.</a> Science. 309, 623-626 (2005).</li>
<li>Wakita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+infectious+hepatitis+C+virus+in+tissue+culture+from+a+cloned+viral+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Production of infectious hepatitis C virus in tissue culture from a cloned viral genome.</a> Nat. Med. 11, 791-796 (2005).</li>
<li>Witteveldt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD81+is+dispensable+for+hepatitis+C+virus+cell-to-cell+transmission+in+hepatoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">CD81 is dispensable for hepatitis C virus cell-to-cell transmission in hepatoma cells.</a> J. Gen. Virol. 90, 48-58 (2009).</li>
<li>Bitzegeio, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptation+of+hepatitis+C+virus+to+mouse+CD81+permits+infection+of+mouse+cells+in+the+absence+of+human+entry+factors%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Adaptation of hepatitis C virus to mouse CD81 permits infection of mouse cells in the absence of human entry factors.</a> PLoS Pathog. 6, e1000978(2010).</li>
<li>Lindemann, D., Goepfert, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+foamy+virus+envelope+glycoproteins%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Microbiol+Immunol%22%5BJournal%5D)">The foamy virus envelope glycoproteins.</a> Curr Top Microbiol Immunol. 277, 111-129 (2003).</li>
<li>Brohm, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+determinants+important+for+hepatitis+C+virus+p7+function+in+morphogenesis+by+using+trans-complementation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Characterization of determinants important for hepatitis C virus p7 function in morphogenesis by using trans-complementation.</a> J. Virol. 83, 11682-11693 (2009).</li>
<li>Steinmann, E., Brohm, C., Kallis, S., Bartenschlager, R., Pietschmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+trans-encapsidation+of+hepatitis+C+virus+RNAs+into+infectious+virus-like+particles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Efficient trans-encapsidation of hepatitis C virus RNAs into infectious virus-like particles.</a> J. Virol. 82, 7034-7046 (2008).</li>
<li>Koutsoudakis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+early+steps+of+hepatitis+C+virus+infection+by+using+luciferase+reporter+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Characterization of the early steps of hepatitis C virus infection by using luciferase reporter viruses.</a> J. Virol. 80, 5308-5320 (2006).</li>
<li>Frentzen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Completion+of+hepatitis+C+virus+replication+cycle+in+heterokaryons+excludes+dominant+restrictions+in+human+non-liver+and+mouse+liver+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Completion of hepatitis C virus replication cycle in heterokaryons excludes dominant restrictions in human non-liver and mouse liver cell lines.</a> PLoS Pathog. 7, e1002029(2011).</li>
<li>Lindemann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+particle-associated+glycoprotein+signal+peptide+essential+for+virus+maturation+and+infectivity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">A particle-associated glycoprotein signal peptide essential for virus maturation and infectivity.</a> J. Virol. 75, 5762-5771 (2001).</li>
<li>Blight, K. J., McKeating, J. A., Rice, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+permissive+cell+lines+for+subgenomic+and+genomic+hepatitis+C+virus+RNA+replication%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Highly permissive cell lines for subgenomic and genomic hepatitis C virus RNA replication.</a> J. Virol. 76, 13001-13014 (2002).</li>
</ol>

TP는 Biotest에서 컨설팅 수수료를 받았다.

우리는 HCV 복제를 배제 지배적인 부정적인 제한 사항 분석을 위해 교양 세포 heterokaryon 형성을 유발하는 두 가지 방법을 제시. 이 절차를 사용하여 우리는 다양한 인간 이외의 간장 및 murine 간 세포 라인의 지배 constitutively 표현이나 바이러스 유발 요인의 존재를 제외. 제한 요인 전염성 자손의 HCV 조립 및 릴리스를 방지하는 경우 첫 번째 분석은 주로 분석합니다. 이 경우에는 포장 세포가 HCV replicon 세포에 융합되어 있기 때문에, 포장 세포로 표현 가능한 제한 요인은 이미 바이러스 RNA의 높은 하중을 가지고 세포의 세포질에 접근. 그러므로, 바이러스 RNA의 번역은 달성되었고 수많은 생산 HCV 복제 단지 그러므로 HCV 번역 및 RNA 복제 가능한 제한을 감지하는 가능성을 감소 설립되었습니다. 사실, 이러한 세포의 RNA replicon의 높은 부하가 자신의 신분 및 배제 있습니다또한 HCV 조립 및 / 또는 바이러스성 요인에 의한 포화로 인해 릴리스의 제한 요인의 탐지를 방해 ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen, 카를 스루에, 독일 </td><td> 41965-039 </td></tr><tr><td> L-글루타민 </td><td> Invitrogen, 카를 스루에, 독일 </td><td> 25030-024 </td></tr><tr><td> 비 필수 아미노산 </td><td> Invitrogen, 카를 스루에, 독일 </td><td> 11140-035 </td></tr><tr><td> 페니실린 / 스트렙토 마이신 </td><td> Invitrogen, 카를 스루에, 독일 </td><td> 15140-122 </td></tr><tr><td> 태아 송아지 혈청 </td><td> PAA, Cölbe, 독일 </td><td> A15151 </td></tr><tr><td> α-E2 (CBH23) </td><td> 친절 스티븐 였어 10 제공 </td><td></td></tr><tr><td> ATP </td><td> 시그마, Steinheim, 독일 </td><td> A2833-106 </td></tr><tr><td> 글루타티온 </td><td> 시그마, Steinheim, 독일 </td><td&gt; G4251-1G </td></tr><tr><td> Blasticidin </td><td> Invivo 세대, 샌디에고, 미국 </td><td> 개미-BL-1 </td></tr><tr><td> G418 (geneticin) </td><td> Invitrogen, 카를 스루에, 독일 </td><td> 11811-064 </td></tr><tr><td> 폴리에틸렌 - 글리콜-1500 </td><td> 로슈, 만하임, 독일 </td><td> 10783641001 </td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> 로스, 카를 스루에, 독일 </td><td> 0335.3 </td></tr><tr><td> 트리톤 X-100 </td><td> 로스, 카를 스루에, 독일 </td><td> 3051.2 </td></tr><tr><td> 염소 혈청 </td><td> 시그마, Steinheim, 독일 </td><td> G9023-5mL </td></tr><tr><td> α-NS5A (9E10) </td><td> 친절 찰스 쌀 7에 의해 제공 </td><td></td></tr><tr><td> DAPI (4 &#39;, 6&#39;-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride) </td><td> Invitrogen </td><td> D1306 </td></tr><tr><td> 알렉사 - 형석 546 - 염소 안티 - 인간 IgG </td><td> Invitrogen, 카를 스루에, 독일 </td><td> A21089 </tD&gt; </tr><tr><td> 알렉사 - 형석 488 - 염소 안티 - 마우스 IgG </td><td> Invitrogen, 카를 스루에, 독일 </td><td> A10680 </td></tr><tr><td> Lipofectamine 2000 </td><td> Invitrogen, 카를 스루에, 독일 </td><td> 11668-019 </td></tr><tr><td> CellTracker CMTMR </td><td> Invitrogen, 카를 스루에, 독일 </td><td> C2927 </td></tr><tr><td> CellTracker CMFDA </td><td> Invitrogen, 카를 스루에, 독일 </td><td> C2925 </td></tr><tr><td> Fluoromount </td><td> 시그마, Steinheim, 독일 </td><td> F4680-25ML </td></tr><tr><td> 기타 모든 화학 물질 </td><td> 로스, 카를 스루에, 독일 </td><td></td></tr><tr><td> 세포 배양 자료 </td><td> Sarstedt, Nümbrecht, 독일 </td><td></td></tr></tbody></table>

heterokaryon 형성의 두 가지 방법 hcv 제한 요소를 발견하기

Two Methods of Heterokaryon Formation to Discover HCV Restriction Factors

C 형 간염 바이러스 (HCV)는 인간과 침팬지에 제한된 호스트 범위 hepatotropic 바이러스입니다. HCV RNA의 복제 인간이 아닌 간장과 murine 세포 라인에서 관찰되었지만, 효율이 매우 낮은이었고, HCV replicon을 사용하여 필요한 장기적인 선정 절차가 지배적인 항생제가 선택할 수있는 마커 1-5 구성하고 표현. 시험 관내 연구에서 HCV 따라서 바이러스 생활주기의 바이러스 항목과 완성을위한 허용 인간 간암 세포 라인으로 제한됩니다. 좁은 종의 tropism을 HCVs으로 인해 전체 HCV 복제주기에게 6-8 격려하고 사용할 수있는 면역 적격 작은 동물 모델이 없습니다. 마우스 원산지 예 비 인간의 세포에서 HCV의 비효율적인 복제 가능성 필수 호스트 종속 요소 및 / 또는 제한 요인의 표현의 유전자 호환성 부족으로 인한 것입니다. 우리는 HCV 전파가 지배적인 제한 FA에 의해 억압 받고 있는지 여부를 조사비 간장 조직이나 마우스 간 세포 라인에서 파생된 인간의 세포 라인 중의 ctors. 이를 위해, 우리는 체세포 융합에 의존하는 두 개의 독립적인 조건부 횡단 complementation 방법을 개발했습니다. 두 경우 모두, 바이러스 복제 사이클의 완성은 heterokaryons에서만 가능합니다. 따라서 전염성 바이러스 자손의 드 노보 생산을 측정하여 결정됩니다 성공 횡단 complementation은, 지배적인 규제의 부재를 나타냅니다. 특히, 루시페라제 transgene를 들고 subgenomic HCV replicons가 적극 허용 인간 간암 세포 (어 - 7.5 세포)로 transfected되었다. 그 후,이 세포들은 공동 배양해와 HCV 구조 단백질 코어, 봉투 1과 2 (E1, E2) 및 액세서리 단백질 P7과 NS2를 표현하는 다양한 인간과 murine 세포에 융합되었다. 세포 융합은 폴리에틸렌 글리콜 - (PEG)와 치료에 의해 시작되었다고 제공, 문화가 전염성 바이러스 PA를 출시수용체에 의존 방식으로 순진 세포를 감염 rticles. 셀 입력, RNA 번역, 복제 및 바이러스 조립을 포함한 완전한 바이러스 생활주기에 지배적인 제한의 영향을 평가하기 위해, CD81의 내생적인 표현이 부족 인간 간 세포주 (허-7 Lunet N 전지 9)을 이용했다 HCV의 필수 항목 계수. ectopically 표현 CD81의 부재에서 이러한 세포는 HCV 감염 10 ~ 근본적 내화물입니다. 중요한 것은 공동 배양해과 인간 CD81하지만 부족 적어도 또 다른 중요한 세포 엔트리 계수 (예 : SR-BI, CLDN1, OCLN)를 표현하는 세포와 융합 경우에만 결과 heterokaryons 감염에 대한 필요한 HCV 항목 요소의 전체 집합을 표시합니다. 따라서 지배적인 제한 요인 HCV 복제주기의 완성을 억제하는 경우에는 분석, 우리는 위에서 언급한 crit를 충족 인간 및 마우스 유래의 다양한 세포로 Lunet N 개의 세포를 융합eria. 공동 교양 세포 프로토 타입 거품 바이러스의 돌연변이 높은 fusogenic 바이러스성 봉투 단백질 (PFV 11)로 transfected하고 이후 감염 HCV 입자 (HCVcc)와 도전을 때, 전염성 바이러스의 드 노보 제작이 관찰되었다. 이것은 HCV가 성공적 따라서 이들 세포 라인에있는 지배적인 제한 요인의 표현을 배제 heterokaryons 년에 복제주기를 완료했음을 나타냅니다. 이 소설 조건부 횡단 complementation 방법 HCV 특정 지배적인 제한 요인의 표현을위한 셀 라인 및 기본 세포의 대형 패널을 구분할 도움이 될 것입니다.

우리는 조건부를위한 두 가지 방법을 설명<em&gt; 트랜스</emC 형 간염 바이러스 (HCV) 조립 및 heterokaryon 형성에 의존하는 완전한 바이러스 생활주기의 완성&gt;-complementation. 이 기술은 감염 HCV 자손의 생산을 배제 지배적인 제한 요소를 표현하는 세포 라인을위한 화면으로 적합합니다.

Heterokaryon 형성의 두 가지 방법 HCV 제한 요소를 발견하기

C형 간염 바이러스(HCV)는 숙주 범위가 인간과 침팬지로 제한된 간 친화성 바이러스입니다. ...에서 HCV RNA 복제가 관찰되었음에도 불구하고

이 절차의 목적은 heca 형성에 기반한 두 가지 방법을 사용하여, 임의의 세포주에서 제한 인자가 C형 간염 바이러스 복제 주기 완결에 미치는 영향을 조사하는 것입니다. 첫 번째 방법은 인간 간 세포와 heal A 및 Hep 56 1D 패키징 세포를 배양하는 것으로 시작합니다. 다음으로, 전기 천공법을 통해 C형 간염 바이러스 또는 HCV RNA를 간 세포에 형질 도입합니다. 그 후, 폴리에틸렌 글리콜을 이용하여 HCV 복제 세포주를 각각의 패키징 세포주와 융합시킵니다. 두 번째 융합 방법의 첫 번째 단계는 고역가의 HCV 스톡을 생산하는 것입니다.이후 서로 다른 세포주를 공동 배양하고, prototype foamy virus 당단백질을 형질전환하여 세포 융합을 유도합니다. 다음으로, 생성된 heterocaryon을 HCV로 감염시킵니다. heterocaryon 형성의 두 방법 중 어느 것을 사용하든, 형광 현미경 관찰을 통해 융합을 확인하고 감염성 입자의 생성량을 정량화합니다.이 기법의 주요 장점은 HV 특이적 우성 제한 인자의 발현을 확인하기 위해 대규모의 세포주 및 일차 세포 패널을 스크리닝하는 데 유용하다는 것입니다. 이 방법은 HCV의 종 특이성과 규범에 관한 핵심적인 질문들에 답하는 데 도움을 줄 수 있습니다. 폴리에틸렌 글리콜을 이용한 세포 융합 유도에 앞서, 두 가지 융합 시스템의 기본 개념에 대한 이해를 돕기 위해 이 방법의 시각적 시연이 매우 중요합니다.표준 프로토콜에 따라 HUH 7.5 세포에 H-C-V-R-N-A를 트랜스펙션하고, 다음 날 37 °C, 5% CO2 조건에서 24시간 동안 배양합니다. 서브게놈 레플리콘을 보유한 트랜스펙션된 HUH 7.5 세포와 heal R 및 hep 56 1D 패키징 세포를 수확합니다. 이 패키징 세포들은 HCV 단백질 core, E1, E2, P7 및 NS2를 이소성으로 발현하도록 제작되었습니다. 트립신 처리 후, 세포를 DMEM 완전 배지에 다시 현탁하고 세포 현탁액을 다음과 같은 농도로 희석합니다: HUH 7.5는 5 × 10⁵ cells/mL, heal 및 hep 56 1D 세포는 2 × 10⁵ cells/mL로 희석합니다.다음으로, 웰당 2~3개의 멸균 유리 커버슬립을 넣은 6-웰 배양 플레이트를 준비합니다. 융합 효율을 추가로 분석하려면, 형질전환된 HUH 7.5 세포 1 mL와 패키징 세포 1 mL를 혼합하여 6-웰 플레이트의 한 웰에 접종하고

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

였죠 셀 유형 - 특정 단백질 현지화 및 nucleocytoplasmic의 특성화를위한 유연하고 효율적인 방법을 설명합니다. 이 heterokaryon 접근은 세포 융합 후 이미지 단백질 localizations에 찬란 - 표시 융합 단백질을 사용합니다. 프로토콜은 정상 상태 localizations 또는 라이브 셀 이미징을 기반으로보다 역동적인 결정 의무가 있습니다.

셀 유형 - 구체적인 현지화의 분석을 위해 Heterokaryon 기법

Source: Ren, S., et al. A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication. J. Vis. Exp. (2014).This video demonstrates an immunofluorescence-based method to detect Hepatitis C virus replication in infected hepatoma cells. The protocol involves cell fixation, antibody staining for viral protein and double-stranded RNA, and visualization using fluorophore-tagged secondary antibodies. Dual signal detection under a fluorescence microscope confirms active viral replication within the host cells.

Immunofluorescence Assay to Detect Hepatitis C Virus Replication Complexes in Infected Cells

C형 간염 바이러스(HCV)는 간경변과 암을 포함한 간 질환을 일으키는 주요 인간 병원체입니다. HCV 감염성 세포 배양 시스템은 HCV 복제의 분자 메커니즘을 이해하고 새로운 치료법을 개발하는 데 필수적입니다. 여기에서는 HCV 복제 주기의 다양한 단계를 조사하기 위한 프로토콜에 대해 설명합니다.

C 형 간염 바이러스의 복제를 분석하기위한 프로토콜

HIV-1 발병기전은 바이러스 특성과 숙주 유전적 요인에 의해 정의됩니다. 여기에서는 gag 유전자 염기서열 변이가 바이러스의 체외 복제 능력에 미치는 영향을 평가하기 위해 재현 가능한 측정을 할 수 있는 강력한 방법을 설명합니다.

제한 효소 기반의 복제 방법을 평가하기 위해<em&gt; 시험관</em&gt; HIV-1 서브 타입 C 개그 - MJ4 키메라 바이러스의 복제 능력

여기서 우리는 HBV의 생활주기의 초기 단계를 모니터링하는 새롭게 개발 된 B 형 간염 바이러스 (HBV) 리포터 시스템을 설명한다. 시험 관내 시스템에서 간략화 이것은 높은 처리량 전략을 사용 항 HBV 에이전트 스크리닝 도울 것이다.

B 형 간염 바이러스 리포터 시스템 개발은 복제주기의 초기 단계를 모니터링하기

지질 방울은 C 형 간염 바이러스 (HCV) 등 여러 가지 병원균의 복제에 중요한 소기관이다. 우리는 관련 단백질의 양적 질량 분석에 대한 지질 방울을 분리하는 방법을 설명; 그것은 바이러스 감염, 환경 스트레스, 또는 약물 치료와 같은 조건의 다양한에서 사용할 수 있습니다.

양적 질량 분광법 분석을위한 지질 물방울 절연

우리 여기는 생체 외에서 세대의 HBV DNA는 B 형 간염 바이러스 감염 시스템을 통해 설명 하 고 역을 사용 하 여 (1-2 부) 통합의 매우 민감한 탐지 중첩 PCR.

낮은 복사의 번호 통합된 바이러스 성 DNA 생체 외에서 B 형 간염 감염에 의해 형성 된

여기서, 우리는 분할 루시퍼라아제 분석 시스템을 사용하여 HBx-DDB1 상호작용을 억제하는 항-B형 간염 바이러스 성 물질을 스크리닝하는 방법을 제시한다. 이 시스템은 단백질-단백질 상호 작용의 쉬운 검출을 허용하고 그 같은 상호 작용의 억제제를 확인하기 위해 적당합니다.

분할 루시퍼라아제 분석 시스템을 사용하여 HBx-DDB1 상호 작용의 억제제 식별

이 원고는 인간 NTCP, HNF4α, RXRα 및 PPARα를 발현하는 새로운 엔지니어링 293T-NE-3NR및 전통적인 간 세포(HepG2-NE, 인간 NTCP를 표현하는 HepG2-NE)에서 B형 간염 바이러스(HBV) 감염을 위한 상세한 프로토콜을 설명합니다.

비 간염 293T-NE-3NRs 세포에 있는 B형 간염 바이러스 감염을 모델링

이 프로토콜은 오류가 발생하기 쉬운 PCR과 역유전학을 사용하여 전장 돌연변이 RNA 합성을 결합하여 C형 간염 바이러스 게놈에 제어 가능한 유전적 다양성을 도입하는 방법을 설명합니다. 이 방법은 표현형 선택을 위한 모델을 제공하며 10kb 길이의 양성 감지 RNA 바이러스 게놈에 사용할 수 있습니다.

양성 RNA 바이러스 변이체를 엔지니어링하기 위한 역유전학

자사는 숙주 타우로콜레이트 나트륨 공동 수송 폴리펩티드와의 결합 친화도(KD)를 측정하기 위해 등온 적정 열량계를 사용하여 바이러스 진입 전후 수명 주기 단계를 표적으로 하는 B형 간염 바이러스(HBV) 화합물을 스크리닝하는 프로토콜을 제시합니다. 항바이러스 효능은 바이러스 수명 주기 마커(cccDNA 형성, 전사 및 바이러스 어셈블리)의 억제를 통해 결정되었습니다.

치료 표적으로 폴리펩티드를 공동 수송하는 나트륨 타우로 콜레이트를 통한 B 형 간염 바이러스 진입을 조사하는 유능한 간세포 모델

학습하세요 HCV 복제 주기 완성에 대한 제한 요소의 영향을 조사하는 두 가지 이형핵 형성 방법을. 이 기술은 감염성 HCV 후대 입자 생성을 억제하는 우성 제한 요소를 발현하는 세포주를 선별하는 데 활용됩니다.

Heterokaryon 형성의 두 가지 방법 HCV 제한 요소를 발견하기

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