Name: 바이오 - 래드 총 RNA 키트를 사용 Neuroprecursor 셀에서 RNA 추출 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-31T23:51:30.000+00:00
Duration: 17 min 25 s
Description: 배우세요 신경전구세포에서 Bio-Rad 총 RNA 미니 키트를 사용한 RNA 추출 방법입니다. 배아 대뇌피질에서 분리한 세포로 높은 수율과 일관된 결과를 얻을 수 있는 신뢰할 수 있는 실험 기법을 확인하세요.

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바이오 - 래드 총 rna 키트를 사용 neuroprecursor 셀에서 rna 추출

RNA Extraction from Neuroprecursor Cells Using the Bio-Rad Total RNA Kit

바이오 - 래드 총 RNA 키트를 사용 Neuroprecursor 셀에서 RNA 추출

안녕하세요, 캘리포니아 대학교 어바인 캠퍼스(University of California Irvine)의 Ed Maki 교수님 연구실 대학원생 Josh Sh입니다. 이번 시간에는 BioRad RNA mini kit를 사용하여 신경 전구세포에서 RNA를 추출하는 방법을 보여드리겠습니다. 저는 이 키트를 이미 몇 년 동안 이 연구실에서 사용해 왔으며, 항상 높은 수율로 일관된 결과를 얻을 수 있었습니다.우리가 사용하는 세포는 배아 피질에서 급성 분리된 E14.5 신경 전구 세포이며, 보통 PDL 및 라미닌이 코팅된 24웰 조직 배양 처리 플레이트에 웰당 100,000 Cells의 밀도로 플레이팅합니다. 시작하기 전에, RNA 작업을 위해 지정된 벤치에서 작업해야 한다는 점을 말씀드립니다. 가장 먼저 해야 할 일은 RNA 벤치가 깨끗한지 확인하는 것입니다.실험대를 청소하는 적절한 방법은 RNA zap을 사용하는 것입니다. 기본적으로 이는 모든 RNA를 제거하는데, 그 이유는 RA가 기본적으로 RNA를 파괴하기 때문입니다. 또 다른 주의 사항은 추출 작업을 수행할 때 항상 장갑을 착용하는 것이며, 이는 피부에 이러한 RNA가 많이 분포해 있기 때문입니다.따라서 이는 절대 해서는 안 되는 일입니다. 자, 여기 제가 준비한 것은 BioRad total RNA mini kit입니다. 구성품을 꺼냈으니 무엇이 들어있는지 보여드리겠습니다.먼저 X dep C로 처리된 PBS와 70% DEP 처리된 에탄올이 준비되어 있습니다. 또한 에탄올이 첨가된 총 RNA 용출 용액이 있습니다. 다음으로 100% 에탄올이 첨가된 저스트링전시 세척액, 고스트링전시 세척액, DNA 희석 용액, DNA 자체, 그리고 총 RNA 용출액이 있습니다.70°C 가열 블록에 넣을 용액입니다. 그 외에 필요한 것은 1.5 mL 캡 튜브입니다. 이 튜브에는 DNA나 RNA가 포함되어 있지 않아야 하므로, 해당 성분이 없는 튜브를 준비하시기 바랍니다.그리고 2 mL 캡리스 튜브 두 개가 있습니다. 그리고 무엇보다 가장 중요한 것은 RNA 컬럼 그 자체입니다. 이것 없이는 RNA 추출을 수행할 수 없습니다.따라서 이 컬럼들을 조립하려면, RNA 컬럼과 2 mL 캡리스 튜브가 필요하며, 이를 다음과 같이 결합하면 준비가 완료됩니다. 마지막으로 항상 필요한 것은 세포입니다. 여기서 사용하는 세포는 ETON 1.5 신경 전구세포입니다.배아 피질에서 급성으로 분리한 세포들

rna-extraction-from-neuroprecursor-cells-using-bio-rad-total-rna

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

우리는 환경 mRNA로부터 cDNA 생성하는 방법을 제시한다. 일반적으로, 총 RNA는 먼저 환경에서 수집, rRNA는 선택, 제거 mRNA가 선택적으로 증폭되고 농축 mRNA 수영장에서 합성된 cDNA가 합성됩니다. 복구된 시퀀스는 표현 유전자를 식별하는 표준 생물 정보학 기술을 사용하여 주석하실 수 있습니다.

환경 Transcriptomics를 사용하여 해양 미생물 커뮤니티의 유전자 발현 분석

우리는 사후에 인간의 두뇌에있는 우수한 시간적 이랑의 레이어 III에서 단일 세포 인구, 피라미드 뉴런에서 RNA를 분리하고 추출 레이저 캡처 microdissection를 사용하여 프로세스를 설명합니다. 우리는 이후 선형 (T7 기준) mRNA를 증폭하고, Affymetrix microarray 인간 X3P에 샘플을 잡종.

인간의 사후 뇌 조직에서 단세포 집단의 고품질 RNA 구하기

사전 mRNA의 과도 특성으로 인해, 그것은 분리하고 공부하기에 어려울 수...

인간 사전 mRNA에 매핑 Ribonucleoproteins에 대한 신속한 하이 스루풋 방법 (RNPs)

이 문서에서 우리는 쥐를 기본의 연결을 문화와 아르나의 증폭을 사용하여 후속 transcriptome 분석에서 단일 세포의 수확을위한 간단한 방법을 설명합니다. 이러한 접근 방식은 모든 세포 유형에 generalizable있다.

단일 셀 Transcriptome 분석

RIP 칩을 통해 RNA 관련 단지를 분리하고 식별 단계 프로토콜로 단계.

RIP 칩을 사용하여 세포 추출물에서 mRNAs, microRNAs 및 Ribonucleoprotein 단지의 단백질 구성 요소의 분리 및 확인에 방법

RNA-단백질 상호 작용은 많은 세포 과정의 핵심에 있습니다. 여기에서는 특정 RNA를 분리하고 이와 관련된 새로운 단백질을 식별하는 in vivo 방법에 대해 설명합니다. 이것은 RNA가 세포에서 어떻게 조절되는지에 대한 새로운 빛을 비출 수 있습니다.

빠른 방법론에 의해 소설 RNA 결합 단백질 분리

CDNA 끝 (3' 경주)의 두 개의 서로 다른 3' 급속 한 확대 프로토콜 설명된 여기 확인 지도 열려있는 독서 프레임 (ORF), 정지 codon 그리고는 전체 3' UTR RNA를 사용 하 여 증명서의 세그먼트를 포함 하는 시퀀스를 두 개의 서로 다른 DNA polymerases의 사용 다른 암 세포 선에서 얻은.

암에 성적표를 매핑할 CDNA의 급속 한 확대 끝 적응 3'

이 RNA 풀 다운 메서드 오래 비 코딩 RNA (lncRNA)의 RNA 목표를 식별 수 있습니다. 집에서 만든, 설계 방지 감각 DNA oligonucleotide 프로브는 적절 하 게 고정 된 조직 또는 세포 라인에이 lncRNA에 교 잡에 따라, 효율적으로 수 있습니다는 lncRNA의 모든 RNA 대상의 캡처를.

오래 비 코딩 RNA의 RNA 표적 식별에 RNA 풀 다운 절차

원형 RNA (circRNAs)는 단백질 사이 전사 규칙 그리고 중재 상호 작용에 있는 역할을 할 수 있는 비 코딩 RNA입니다. circRNA 염기서열 분석 라이브러리의 구성을 위한 상이한 파라미터의 평가에 이어, RNase R 전처리와 함께 좌초된 총 RNA 라이브러리 제제를 활용한 프로토콜이 컴파일되고 여기에 제시된다.

RNA 시퀀싱을 사용하는 원형 RNA 식별

절대 정량 RNA 염기서열분석(AQRNA-seq)은 생물학적 혼합물에서 모든 소형 RNA의 환경을 정량화하기 위해 개발된 기술입니다. 여기에서는 AQRNA-seq의 라이브러리 준비 및 데이터 처리 단계를 모두 시연하여 기아 유발 휴면 기간 동안 Mycobacterium bovis BCG의 전달 RNA(tRNA) 풀의 변화를 정량화합니다.

small RNA 정량을 위한 AQRNA-seq

배우세요 신경전구세포에서 Bio-Rad 총 RNA 미니 키트를 사용한 RNA 추출 방법입니다. 배아 대뇌피질에서 분리한 세포로 높은 수율과 일관된 결과를 얻을 수 있는 신뢰할 수 있는 실험 기법을 확인하세요.

바이오 - 래드 총 RNA 키트를 사용 Neuroprecursor 셀에서 RNA 추출

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