Name: HH 스테이지 10 치킨 태아의 비켜 Electroporations에서 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-11-01T00:29:01.000+00:00
Duration: 13 min 6 s
Description: 배우세요 HH 10 단계 병아리 태아의 신경관 전기천공 기법을 통한 유전자 조작 방법을. 이 기술은 중추신경계 발달 관련 유전자 기능 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

에그 처리 <ol><li> 계란이 생존에 상당한 손실 (작은 와인 쿨러는 이러한 용도에 이상적입니다)없이 부화하기 전에 최대 1 주일 13 ° C에 보관 수 있습니다. </li><li> 이전 부화하기 위해 달걀이 인큐베이터는 37.8로 설정 humidified 닭고기에 다음 상온, 장소에 따뜻한 있도록 ° C (100 ° F). </li><li> 우리는 일반적으로 배아가 햄버거와 해밀턴 단계 10에 도달 인큐베이션의 시작에서 태아에게 약 48 시간 electroporate. </li><li> 부화의 시간 원하는 햄버거와 해밀턴 단계에 따라 다를 수 있습니다. 온도가 최적 배양 온도에서 중요하고 편차 것은 배양 시간 및 감소 배아 생존을 변경합니다. </li><li> 부화 기간 동안, 계란은 배아가 제대로 electroporation에 대한 위치를되도록 자신의 양쪽에 보관해야합니다. 난자는 노른자 위에 떠되며 어디자를 알고 그래서 윈도우 전에 연필로 계란의 맨 위에 표시하기 위해 도움이됩니다. </li></ol> 준비 <ol><li> 37 ° C.에 따뜻한 Leibovitz L - 15 미디어 바늘에 유리 모세관을 당기세요. 위치 전극과 micromanipulator 및 펄스 발생기에 전극을 연결합니다. </li></ol> 윈도우 <ol><li> 피어스 계란의 작은 끝에 껍질, 큰 구멍 바늘로 주사를 사용합니다. </li><li> 노른자의 중단을 방지하기 위해 조심스럽게 아래 바늘 가리키며, 알부민의 5ml에 대한 제거합니다. </li><li> 테이프의 작은 조각으로 구멍을 밀봉합니다. </li><li> 테이프의 또 다른 조각 (4X4 cm 정도)와 계란의 상단 커버. </li><li> 곡선 가위를 사용하고 배아를 방해하지를 돌보는 작업에 창문을 제공하기 위해 충분 큰 구멍을 뚫고. </li></ol> 옵션 : 신경 튜브를 시각화하려면, 배 (胚) 아래에 26 게이지 바늘 (혈액 링 밖에서 배아 아래에 바늘을 삽입)와 잉크 솔루션을 주입. 인도 잉크는 행크스 또는 유사한 살균 버퍼 솔루션 1시 5분 희석해야합니다. 사출 및 Electroporation <ol><li> 핀셋을 사용하여 원하는 직경으로 모세관 팁을 브레이크 </li><li> 입 피펫을 사용하여 플라스미드 / 빠른 그린 염색과 모세를로드합니다. </li><li> 여러분쪽으로 머리와 배아를 위치와 얕은 각도로 신경 튜브에 바늘을 삽입합니다. </li><li> 염료가 전체 공간을 채우고까지 신경 튜브의 루멘에 플라스미드 솔루션을 주사. </li></ol> 참고 : 다음 끝 큰 신경 튜브 직경을하지 않도록주의하십시오. 일반적으로 최적의 팁 크기는 모세관에 액체를 뽑아 얼마나 쉽게 또는 하드에 의해 달성되었는지 말할 수있을 것입니다. 극단적인 저항이있다면, 시작은 아마도 너무 작습니다 그리고 끝까지 높은 망가해야합니다. 거의 또는 전혀 저항이있다면, 오프닝이 너무 큽니다 새로운 주사 바늘을 사용해야합니다. <ol><li> 배아에서 멸균 L - 15 미디어의 장소는 1-2 방울. </li><li> 당장 1 초 간격으로 50 mseconds 위해 10-24 볼트의 신경 튜브에 평행 배아의 양쪽에 전극, 및 펄스 5 번 놓으십시오. 그것이 제대로 작동하면 전극 근처에 거품을 볼 수 있습니다. </li><li> 조심스럽게, 전극을 제거 배아 위에 L - 15의 5 방울을 넣고 테이프로 계란을 밀봉. 건조가 electroporation 다음 배아 손실에 비만으로 계란이 잘, 밀봉되어 있는지 확인합니다. </li><li> 인큐베이터에 다시 플레이스 계란, 창 측면까지, 그들이 H &amp;​​ H 단계를 원하는 도달할 때까지 알을 품다. </li></ol>

<ol><li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27Shocking%27+developments+in+chick+embryology%3A+electroporation+and+in+ovo+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">'Shocking' developments in chick embryology: electroporation and in ovo gene expression.</a> Nat Cell Biol. 1, 203-207 (1999).</li>
</ol>

저자들은 공개할 사항이 없습니다.

이 프로토콜은 HH10 여자는 태아의 신경 튜브 electroporation 단계 가이드에 의해 단계를 제공합니다. 기술을 보여주는 이외에도, 스토리지 및 계란의 취급에 대한 지침도 제공됩니다. 이 기술은 유전자 분석을위한 어플 리케이션의 광범을 가지고 있으며, 실험의 용이성과 낮은 비용으로 많은 실험실 위해이 가능합니다.

<table><tbody><tr><td>닭알 부화기</td><td></td><td></td><td>가습 처리하고, 37.80으로 설정함&amp;#x00B0;C (100F). </td></tr><tr><td>펄스 발생기 </td><td>제네트로닉스(Genetronics)</td><td>BTX T820</td><td>구형파 발생기 또는 이에 준하는 장치</td></tr><tr><td>전극</td><td></td><td></td><td>전극은 직경 0.25 mm의 백금선으로 제작하였으며, 길이는 5 mm, 전극 간 간격은 1 mm로 설정하였습니다.</td></tr><tr><td>커넥터 케이블</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>마이크로매니퓰레이터</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>해부용 스코프 </td><td></td><td></td><td>긴 작동 거리의</td></tr><tr><td>유리 모세관 </td><td></td><td></td><td>및 모세관 인입기(capillary puller) 또는 상용 유리 니들</td></tr><tr><td>라이보비츠&amp;rsquo;L-15 배지</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>닭의 알</td><td></td><td></td><td>수정된</td></tr><tr><td>곡선 가위</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 ml 주사기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>대구경 바늘 </td><td></td><td></td><td>16-18G</td></tr><tr><td>입 파이펫팅</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>인디아 잉크 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>인슐린 주사기/주사기 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>플라스미드 DNA </td><td></td><td></td><td>&amp;#8805; 1&amp;#x03BC;g/&amp;#x03BC;0.05% Fast Green 염료가 포함된 멸균 TE 또는 1X PBS 1 ml</td></tr></tbody></table>

hh 스테이지 10 치킨 태아의 비켜 electroporations에서

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

대형 크기와 닭 배아의 외부 개발 오래 발달 생물학 연구에 가치있는 도구가 만들었습니다. 분자 생물 학적 기법의 도래와 함께, 여자가 유전자 조절과 기능을 연구하는 유용한 시스템이되고있다. 개발 닭 배아에 DNA 또는 RNA 구조를 electroporating함으로써, 유전자는 명시적 또는 생체내 유전자 기능의 분석을 위해 무너뜨렸다 수 있습니다. 마찬가지로 기자의 구성은 운명 매핑에 사용할 수 또는 putative 유전자 규제 요소를 검사합니다. 마우스에서 유사한 실험에 비해, 여자의 electroporation은 빠르고 쉽고 저렴한되는 장점이 있습니다. 이 비디오는 배아를 조작하기 위해 달걀 껍질에 창문을 만드는 방법 첫째 보여줍니다. 다음, 난자는 배아 아래 주입 인도 잉크의 희석 용액과 시각이다. 유리 바늘과 피펫은 개​​발 신경 튜브 다음, 백금 전극이 배아로 병렬 배치하고 짧은 전기 펄스가 펄스 발생기와 함께 관리되는에 DNA와 빠른 그린 염료를 주입하는 데 사용됩니다. 마지막으로 계란은 테이프로 밀봉하고 발전을위한 인큐베이터에 다시 배치. 또한, 비디오 적절한 계란 보관 및 처리를 보여줍 배아 손실 다음의 electroporation의 가능한 원인에 대해 설명합니다.

비켜 electroporation의 여자는 조류 배아의 유전자 조작을 허용하는 기법입니다. 이 기법의 일반적인 응용 프로그램은 유전자와 putative 향상제 요소의 기능 분석을 포함합니다. 이 동영상은 HH 10 여자는 배아에서 신경 튜브 electroporation을 보여줍니다. 사출 기술과 적절한 계란 처리는 설명합니다.

HH 스테이지 10 치킨 태아의 비켜 Electroporations에서

닭 배아는 크기가 크고 체외에서 발달한다는 점 덕분에 오랫동안 발생 생물학 연구에서 가치 있는 도구로 활용되어 왔습니다. ...의 등장으로 인해

닭은 배아가 조작하기 매우 용이하고 크기가 커서 다른 배아보다 다루기가 훨씬 쉽기 때문에 좋은 모델 시스템입니다. 또한 닭 전기천공법 실험을 통해 짧은 기간 내에 많은 수의 유전자를 스크리닝할 수 있습니다. 안녕하세요, Marissa Blank입니다.저는 시카고 대학교 인간유전학과의 Kathy Millon 교수님 연구실에서 공부하고 있는 대학원생입니다. 오늘은 병아리 인 오보(in ovo) 전기천공법 수행 방법에 대해 설명해 드리겠습니다. 저희는 배아 발달 단계가 약 2일에 해당하는 해밀턴 단계 10(Hamilton stage 10)의 닭 배아를 사용하여 전기천공을 진행할 것입니다. 이 절차는 저희 연구실에서 일상적으로 수행하고 있으며, 주로 중추신경계 발달에 관여하는 유전자에 관심이 있기 때문에 척수 내 유전자의 과발현 또는 녹다운(knock down) 효과를 연구하고 있습니다.오늘 제가 보여드릴 in ovo electroporation 기술은 몇 가지 단계로 구성됩니다. 첫 번째 단계는 달걀에 창을 내는 windowing 과정이며, 두 번째 단계는 신경관의 내강에 DNA를 직접 주입하는 것입니다.세 번째 단계에서는 전기장을 사용하여 DNA를 신경관의 한쪽으로 밀어 넣을 것입니다. 그런 다음 달걀을 밀봉하는 방법과 인큐베이터에 다시 넣는 과정을 보여드리겠습니다. 시작하기 전에, 적절한 달걀 취급 방법에 대해 잠시 설명해 드리겠습니다.따라서 알은 닭 번식업자로부터 수정란 상태로 구매하게 됩니다. 이 알에는 배아가 포함되어 있으므로 취급 시 주의가 필요합니다. 따라서 부화 전까지 알은 13°C로 보관해야 합니다.이를 위해 소형 와인 냉장고를 사용하며, 알을 배양할 준비가 되면 인큐베이터에 넣기 전에 실온에 도달하도록 두어야 합니다. 그 후 인큐베이터에 넣으면, 인큐베이터 온도는 100 °F(약 37.8 °C)로 유지해야 합니다. 또한 인큐베이터의 습도를 유지하는 것이 중요하며, 습도는 배아의 적절한 발달에 매우 중요합니다.전기천공법을 위해 이 난자들을 준비하는 첫 번째 단계는 윈도잉(windowing)을 하는 것입니다. 이 과정의 첫 단계는 난자에서 알부민을 소량 제거하는 것입니다. 우선 난자 끝부분에 작은 테이프 조각을 붙인 후, 굵은 바늘을 사용하여 끝부분에 구멍을 뚫습니다. 그런 다음 배아나 난황을 손상시키지 않도록 바늘 끝을 난자 바닥 방향으로 향하게 하여 매우 주의해서 진행합니다.주사기를 사용하여 알부민

in-ovo-electroporations-of-hh-stage-10-chicken-embryos

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 동영상은 이용 배아 여자 척수에서 뉴런의 유전자 정의된 그룹의 axonal 경로를 시각화하는 방법을...

활용 칙 신경 튜브에서 뉴런의 유전 정의된 그룹 Axonal 경로를 벗기기 비켜에서 Electroporation

이 비디오의 전반적인 목표는 타겟 망막 주사를 수행하는 방법을...

배아 칙의 망막에서 비켜 Electroporation에

기능과 midbrain dopaminergic 뉴런의 발달 동안 유전자의 규정을 평가하기 위해 관련된 방법을...

Dopaminergic 신경 세포 개발에서 유전자 기능을 유학 칙의 Midbrain에서 비켜 Electroporation에

나중에 인큐베이션 단계 (햄버거와 해밀턴 무대 (HH) 22 세 이상)에서 닭 배아에 유전자 전달의 방법을 설명합니다. 이 방법은 단점을...

에 의한 이전 치킨 태아에 유전자 이체<em&gt; 전 비켜</em&gt; Electroporation

신경 튜브의 유전자 발현은 세포 유형의 특정, 추적 방식으로 downregulated 할 수있는이 방법이 설명되어 있습니다. 우리는 방법을...

오픈 책 준비에 DiI 주입하여 개발 신경 튜브와 Phenotypes의 평가에 miRNA 기반 Plasmids의 비켜 Electroporation에

발달 신경 생물학의 근본적인 문제는 어떻게 신경 네트워크가 배아 뇌에 설립되어있다. 여기에서 우리는 크레 / 훈제 연어 - 플라스미드와 지느러미의 interneurons 레이블을 다양한 발달 단계에서 자신의 축삭 돌기 시냅스 목표를 추적하는 조류 후뇌의 PiggyBac 매개 DNA 전위 시스템과 같은 새로운 유전 도구와의 electroporation 기술을 결합했다.

병아리 배아에서 축삭 궤적과 시냅스 대상을 추적하는 후뇌의 일렉트로

청각 기관은 청각을 중재합니다. 여기에서는 발달 중인 닭 청각 기관에서 청각 전구 세포 증식 및 분화를 연구하기 위해 최적화된 수정된 in ovo micro-electroporation 방법을 제시합니다.

치킨 청각 기관에 유전자 전달에 의한<em&gt; 비켜에서</em&gt; 마이크로 전기

조류와 포유류의 청각 뇌간 신경은 빠른 청력 엔코딩에 특화되어있어 정상적인 청력 기능을위한 기본적인 과정입니다. 이러한 뉴런은 배아 뒷다리의 뚜렷한 전구체에서 발생합니다. 우리는 청각 발달 과정에서 유전자 기능을 연구하기 위해 닭 배아의 뒷배부에 유전자를 발현시키기 위해 일렉트로 포 레이션을 이용하는 기술을 제시한다.

닭 오라클 Brainstem의 Ovo Electroporation에서

우리는 메추라기 배아 모델 시스템에서 여러 단백질의 빠르고 효율적인 발현을 허용하는 방법으로 메신저 RNA (mRNA) 전기 를 보고합니다. 이 방법은 형광성 으로 세포를 표지하고 전기 개공 직후 시간 경과 현미경 검사법에 의해 생체 내 움직임을 기록하는 데 사용할 수 있습니다.

mRNA 전기 포란을 사용하여 조류 배아에서 여러 단백질의 빠르고 효율적인 발현

이 동영상은 midgastrula 무대 Drosophila의 배아에서 기본의 연결을 문화의 준비를 보여줍니다. 라이브 문화의 전망 중탄산염 기반 정의 매체 성장 2 일 후에 도금과 차별화된 뉴런 후 세포를 1 시간 보여줍니다. 뉴런은 전기 고르기하고 시냅스 연결을 형성합니다.

Midgastrula 스테이지 Drosophila의 태아에서 문화의 연결 준비

배우세요 HH 10 단계 병아리 태아의 신경관 전기천공 기법을 통한 유전자 조작 방법을. 이 기술은 중추신경계 발달 관련 유전자 기능 연구에 활용됩니다.

HH 스테이지 10 치킨 태아의 비켜 Electroporations에서

더 많은 동영상 탐색