Name: 배아 Murine 신경 튜브에서 신경 크레스트 세포의 분리 및 문화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 48 s
Description: 배우세요 마우스 배아 신경 튜브에서 신경 크레스트 세포를 분리하고 배양하는 방법을. 콜라게나제/디스파제 소화와 저산소 조건을 사용하여 96% 순도의 세포를 얻을 수 있습니다.

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우리는 비디오 지원 마크 워즈 니 악을 인정하고 싶습니다. 우리는 또한 culturing 쥐 NC 세포의 원래 프로토콜 UT 남서에서 숀 모리슨을 인정하고 싶습니다. 이 작품은 밴더빌트 대학 메디컬 센터 아카데미 프로그램 지원을 지원하고 NIH (HD36720과 HD036720-11S109)와 PAL에 AHA 11GRNT7690040 남구로 AHA (0615209B)와 NIH (NS065604)에서 predoctoral 장학금 및 ERP에서 교부금에 의해 있었다 NIH 연수 보조금 T32HD007502에 의해 지원.

1. 준비 플레이트 <ol><li> 항상 무균 기술을 사용합니다. </li><li> Dulbecco의 PBS (dPBS)에서 3.3 ML의 최종 볼륨으로 인간의 플라즈마 FN 주식의 100 μL를 diluting하여 fibronectin (FN)를 준비합니다. 최종 농도가 30 μg / ML이며이는 1 주일 동안 4 ° C에 저장할 수 있습니다. </li><li> FN 솔루션 무균 조직 배양 네 잘 접시의 각 우물의 바닥을 커버하고 15 분 동안 앉아 보자. 전체 표면이 덮여 있는지 확인하십시오. 이 시간 (2 단계와 3 단계) 동안 미디어를 확인합니다. </li><li> 솔루션을 FN과 접시가 건조하도록 제거합니다. 부드럽게 500 μL DMEM, 제거 DMEM으로 우물 린스, 그리고 자기 갱신 500 μL (SR) 매체 (아래 참조)에 추가합니다. CO 2 5 %를 포함한 humidified 배양기에서 37 ° C에서 품어. 접시는 사용하기 전에 건조되도록 해부하기 전에이 약 한 시간을 완료합니다. </li></ol> 2. SR 매체를 준비 <ol><li> vagal 및 트렁크 노스캐롤라이나의 문화에 대한열 배아 (약 쓰레기, 마우스 라인의 유전적 배경에 따라)에서, SR 매체의 25 ML을 준비합니다. 12.5 ML 낮은 포도당 DMEM, 7.5 ML Neurobasal 중간, 25 μL retinoic 산성 (117 μm의 최종 농도), 25 μL 2 - 메르 캅 토 에탄올 (50 MM 최종 농도)를 결합. 잘 섞는다. </li><li> 3.75 ML 여자는 배아 엑기스, 250 μL N이 소금 보충, 500 μL B27 보충제 250 μL 페니실린 - 스트렙토 마이신 (1 % 최종 농도)를 추가합니다. 0.22 μm의 필터를 통해 매체를 필터링합니다. </li><li> 10 μL 멸균 IGF1 (20 μg / ML 최종 농도)와 20 μL 멸균 bFGF (20 μg / ML 최종 농도)를 추가합니다. 반전으로 섞는다. 4 ° C.에 저장 </li></ol> 3. 워시 매체를 준비 <ol><li> 의 경우 약 10 배아는 세척 매체의 50 ML을 준비합니다. 35 ML 낮은 포도당 DMEM, 15 ML Neurobasal 매체, 500 μL 페니실린 - 스트렙토 마이신 (1 % 최종 농도)와 50 밀리그램 BSA이 결합되어 있습니다. 0.22과 무균 필터μm의 필터. </li></ol> 4. Collagenase / dispase 준비 <ol><li> 100 MG / ML collagenase / dispase 5 ML의 dPBS 50 μL를 추가합니다. 잘 섞는다. </li><li> 0.2 μm의과 주사기 필터는 12 잘 접시 세 우물 각각에 1.5 ML을 필터링하고 추가합니다. 나머지 우물에 피펫 약 1 ML 세척 매체. 해부 조직을 소화 준비 때까지 얼음 전체 접시를 보관합니다. </li><li> 멸균 면도날과 p20 및 P1000 피펫 팁 필터의 조언을 자르고. 끝에만의 beveled 가장자리 아래 잘라. P1000 오프 절단은 p20이 고립된 조직의 조각을 전송하는 데 사용됩니다 동안 전체 배아를 전송하는 데 사용됩니다. </li></ol> 5. 9.5 dpc의 태아에서 Vagal 및 간선 신경 튜브를 분리 <ol><li> 시간이 초과 임신의 경우 질 플러그 댐은 아침 플러그가 관찰되고 정오에 0.5 dpc로 간주됩니다. 9.5 dpc에서 자궁을 희생하고 제거합니다. </li><li> 자궁에서 decidua를 제거하고 부드럽게 Rdecidua에서 배아를 emove. 일단이 프로토콜과 경험, 멸균 dPBS에서 한 번에 3-4 9.5 dpc의 배아를 분리. 멸균 기술과 소독을 해부 장비를 사용하십시오. 악기 autoclaving, 열 살균 또는 에탄올에 부화하여 소독 수 있습니다. </li><li> 앞부분은 vagal 노스캐롤라이나의 경우 : 인슐린 바늘을 사용 중반 귀의 placode에 신경 튜브를 잘라. 4 번째 체절의 후부 가장자리에 다시 잘라. pharyngeal 아치와 가슴을 제거하는 신경 튜브로 복부 조직을 손질. </li><li> 트렁크 NC의 경우 : 인슐린 바늘을 사용하여 somites 16-22 (또는 배아 이전 22 체절 무대보다 발달면 마지막 체절) 사이 신경 튜브의 부분을 제거합니다. </li><li> 난황 및 genotyping에 대한 남은 배아 조직을 유지. </li></ol> 6. 비 신경 Ectoderm 및 Mesoderm 제거 <ol><li> 십분 동안 상온에서 collagenase / dispase로 세그먼트를 포함하는 신경 튜브를 배치의. 즉시 세탁 매체에 씻는다. </li><li> 멸균 dPBS로 조직을 반환합니다. 멸균 인슐린 바늘을 사용하여 부드럽게 조직에서 비 신경 ectoderm를 제거하고 멀리 신경 튜브에서 somites을 분리. 체절 조직에서 mesoderm의 마지막 남은 부분 잘라내기 다운 p20 팁을 사용하여 부드럽게 triturating하여 제거할 수 있습니다. 신경 튜브를 손상하지 않도록주의하십시오. 가루약 중에 밀접하게 이것을 관찰. </li><li> 세차 매체의 두 번째 및 세 번째 삼십초 세차를 통해 고립된 신경 튜브를 놓습니다. </li><li> SR 매체에 한 번 씻어, 그리고 (단계 1.3) 이전에 준비되었다 FN-코팅도의 중심에 격리된 신경 튜브를 넣습니다. 멸균 물을 접시와 hypoxia 실 ...을 축이다. hypoxia 챔버로 접시를 놓고 3 % O 2 (1 % 혼합 O 2, 6퍼센트 CO 2, 93% N 2를 포함하는 탱크를 사용)로 혼합 가스와 함께 챔버를 플러시. </li><li> 항상 THA을 보장하기 위해 매우 신중 챔버 처리하지마 explants은 그대로이며, 우물의 중심에 남아 있습니다. </li><li> 37 품어 ° C. 단계 5-6 개요는 그림 1에 표시됩니다. </li></ol> 7. 신경 튜브의 제거 <ol><li> 부화 후 24 시간 후, 부드럽게 떨어져 불임이 인슐린 바늘을 사용하여 마이 그 세포로부터 신경 튜브의 가장자리를 괴롭히고하여 신경 튜브를 제거합니다. 제거하고 단계 6.2에서와 같이 멸균 p20 인하를 사용하여 매체에서 신경 튜브를 버리고 신선한 SR 매체 (그림 2)와 매체를 교체하십시오. 이것은 가장 쉽게 거꾸로 현미경을 사용하여 수행됩니다. </li></ol> 8. 대표 결과 hypoxic 조건에서 ° C, NC 세포는 거의 순수한 인구 (그림 3A)에서 신경 튜브에서 떨어져 마이그레이션한 37에서 부화 후 24 시간에 따라. 때로는 이상적인 문화보다 강력한 outgrowths를 얻을 수 없습니다. 예를 들어, 그 24 시간 이내에 t 가능그는 신경 튜브 자체적으로 웅크리고있다되며 엔씨는 신경 튜브 (그림 3B)에서 떨어져 마이 그 레이션되지 않습니다. 간혹 신경 튜브 fibronectin 코팅 접시에 부착하지 않습니다. 우리의 경험에서는, 하위 최적의 NC 마이 그 레이션 또는 신경 튜브의 부착에 문제가 악영향 각각 normoxia 조건이나 fibronectin의 농도에 의해 영향을받을 수 있습니다. collagenase / dispase의 효소 활동이 배치 및 소화 시간에 따라 약간의 차이가 적절하게 조정해야하지만 15 분 이상 조직을 소화하지 않습니다. collagenase / dispase의 조직을 포함하는 신경 튜브 Overdigestion 또한 결함 outgrowths집니다. 체절 조직이 쉽게 collagenase / dispase에서 부화 후 신경 튜브에서 제거되지 않은 경우 신경 튜브는 열명 분 이상 동안 incubated 수 있습니다. 때로는 신경 튜브 기판에 연결되지 않습니다. 이 경우 fibronec을 두 번 확인주석 농도와 hypoxia 조건. normoxic 조건은 문화, 야생 형 노스캐롤라이나에 사용할 수 있지만, hypoxic 조건보다 밀접하게 생체내 환경 29,30 년을 모방. 우리의 경험에서, hypoxic 조건이 때 culturing 돌연변 노스캐롤라이나 중요했다. 예를 들어, Foxd3 돌연변 노스캐롤라이 normoxic 조건에서 배양해 때, 트렁크 노스캐롤라이 컨트롤에 비해 크게 감소 셀 파생물했다. explants은 hypoxic 조건 (그림 4)에서 배양해 때 가지 크기의이 불균형이 제거되었습니다. 또한, 야생 형 신경 튜브 explants가 normoxia에서 배양해 때, caspase-긍정 세포의 숫자 (데이터가 표시되지 않음) hypoxia에서 배양해 유사한 explants의 사실을 늘어납니다. hypoxia에있는 모든 NC 문화를 유지함으로써, 비교가보다 쉽게​​ 컨트롤의 역학과 돌연변이의 문화 사이에 만들 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/4134/4134fig1.jpg" alt="그림 1" /> <strong&gt; 그림 1. 노스캐롤라이나 절연의 전체 개략도. ) 배아에서 관심 지역을 해부. B) collagenase / 십분 (15 분 초과하지 않는)에 대한 dispase에 신경 튜브를 소화. C) 세탁 매체에 씻는다. D) 비 신경 ectoderm 및 mesoderm 멀리 해부. EF)은 세탁 매체에 두 번 씻는다. 자동 갱신 매체에서 G) 플레이트. 3퍼센트 O 2 hypoxic 조건에서 37 ° C에서 품어. <img src="/files/ftp_upload/4134/4134fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2. explant에서 신경 튜브의 Stepwise 제거. 신경 튜브가 아닌 노스캐롤라이나 세포와 오염을 방지하기 위해 후 24 ~ 48 시간 제거해야합니다. ) 신경 튜브와 NC의 파생물 (실선) 사이의 경계를 확인할 수 있습니다. B) 인슐린 바늘로 신경 튜브의 가장자리를 따라 잘라. C) 신경 튜브를 취소하고 새로운 자기 갱신 매체와 매체를 교체하십시오. 점선은 자연적인 진전의 정도를 나타냅니다. 약어 : NT, 신경 튜브. 그림 3. 대표적인 결과의 예. hypoxic 조건에서 자기 갱신 배지에서 24 시간 배양 후) 일반 explant의 파생물은 (점선)은 자연적인 진전의 정도를 나타냅니다. 나) 문화의 48 시간 후 노스캐롤라이나의 파생물의보기를 확대했습니다. 낮은 가지 수율과 C) 덜 이상적인 문화. A와 C는 동일한 조건에서 배양해되었다. 이미지는 문화 견고에서 자연 범위를 보여줍니다. 이것은 collagenase / dispase digestions에 신경 튜브 절연, FN의 농도, hypoxic 조건과 시간의 효율성에 의해 영향을받을 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/4134/4134fig4.jpg" alt="그림 4" /> 그림 4. normoxia 대 hypoxia에서 NC의 explant 문화의 체외 분석합니다. normoxic 문화 조건에서 48 시간 후 신경 튜브 explants에서 마이 그 레이션 컨트롤 (야생 타입) 노스캐롤라이나 세포. 대조적으로, Foxd3 돌연변이노스캐롤라이나 크게 normoxia의 세포 outgrowths을 (NC의 outgrowths의 붉은 외곽선 표시 에지) 감소했다. 비교 explants은 hypoxic 조건 하에서 재배 때, Foxd3 돌연변이 노스캐롤라이나의 explants는 후속 분석을 수 있도록 컨트롤 comparably되었다. 참고이 문제는 생체내의 Foxd3 돌연변이 노스캐롤라이나의 동작과 잘 상호.

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<li>Ivanovic, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+or+in+situ+normoxia%3A+The+stem+cell+paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Hypoxia or in situ normoxia: The stem cell paradigm.</a> J. Cell Physiol. 219, 271-275 (2009).</li>
</ol>

우리는 공개 할게 없다.

주의이 방법의 성공을 보장하기 위해 태아의 발달 단계에 납부하여야한다. 초기 마우스 배아의 somites을 계산하는 것은 쓰레기 내에서 배아와 일치하고 격리를 위해 신경 튜브의 정확한 영역을 결정하는 단계에 대해 모두 중요합니다. 배아 사이에 하나 또는 두 개의 somites의 변형 실시한 실험의 해상도에 따라 개발시기의 합리적인 범위 내에 있습니다. 9 9.5 dpc 사이의 태아 17 및 25 somites 사이가됩니다. 배아가 25 개 이상 somites있다면, 노스캐롤라이나 추가적인 개발 시간에 승진하고, 노스캐롤라이나의 outgrowths는 문화에 덜 견고한 될 것입니다. 배아, 따라서 노스캐롤라이나의 발달 단계는 실험의 결과에 영향을 미칠 수있을 때 체절 수에 따라 배아를 준비하는 것이 실험에서 정밀도를 용이하게합니다. 9.5 dpc의 배아에서 vagal 노스캐롤라이 정의 앞부분 - 후부 한계의 지느러미 신경 튜브에서 마이 그 레이션 : 중반 귀의 placode에서 체절 7.마찬가지로, 트렁크 NC는 24 체절하는 수...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> DMEM (낮은 혈당) </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 11,885 </td><td></td></tr><tr><td> Neurobasal 중간 </td><td> Gibco </td><td> 21,103 </td><td></td></tr><tr><td> BSA </td><td> 시그마 </td><td> A3912-10G </td><td></td></tr><tr><td> dPBS </td><td> Gibco </td><td> 14190-144 </td><td></td></tr><tr><td> IGF1 </td><td> BD Biosciences </td><td> 354,037 </td><td> -20 ° C. 50 μg / ML aliquots에 저장 </td></tr><tr><td> bFGF </td><td> BD Biosciences </td><td> 354,060 </td><td> -20 ° C. 25 μg / ML aliquots에 저장 </td></tr><tr><td> Fibronectin </td><td> Gibco </td><td> 33016-015 </td><td> 1mg/mL 알에 저장-20 ° C.에 iquots </td></tr><tr><td> Retinoic 산 </td><td> 시그마 </td><td> R2625 </td><td> -20 ° C.에 에탄올에 reconstituting 후 35 μg / ML aliquots에 저장 </td></tr><tr><td> 2 - 메르 캅 토 에탄올 </td><td> 시그마 </td><td> D-5637 </td><td></td></tr><tr><td> N이 보충 </td><td> Gibco </td><td> 17502-048 </td><td></td></tr><tr><td> B27 보충제 </td><td> Gibco </td><td> 17504-044 </td><td></td></tr><tr><td> Steriflip 0.22 μm의 필터 </td><td> Millipore </td><td> SCGP00525 </td><td></td></tr><tr><td> 페니실린 - 스트렙토 마이신 </td><td> Invitrogen </td><td> 15140122 </td><td></td></tr><tr><td> 0.20 μm의 필터 </td><td> 코닝 </td><td> 431,219 </td><td></td></tr><tr><td> 주사기 (여과 용) </td><td> BD Biosciences </td><td> 301,604 </td><td></td></TR&gt; <tr><td> 네 잘 접시 </td><td> 써모 피셔 과학 </td><td> 176,740 </td><td></td></tr><tr><td> Collagenase / Dispase </td><td> 로슈 </td><td> 269​​ 638 </td><td> 활동은 배치에 따라 다릅니다. -20 ° C. 100 밀리그램 / ML aliquots에 저장 </td></tr><tr><td> 인슐린 바늘 (29 ½ 게이지) </td><td> Becton 딕슨 </td><td> 309,306 </td><td></td></tr><tr><td> Hypoxia 상공 회의소 </td><td> Billups-로텐버그 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 산소 분석기 </td><td> Billups-로텐버그 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 집게 # 5 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td></td><td> 자궁과 decidua을 제거하십시오. </td></tr><tr><td> 트립신-EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) (0.25 %) </td><td> Gibco </td><td> 25,200 </td><td></td></tr></tbody></table>

배아 murine 신경 튜브에서 신경 크레스트 세포의 분리 및 문화

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

배아 신경 능선 (NC)는 신경 튜브 등의 측면에서 유래 multipotent 전구 인구 mesenchymal 전이 (EMT)로 상피를 겪습 다양한 세포 유형에 1-3로 상승을주는, 태아에 걸쳐 마이 그 레이션합니다. NC는 또한 표적 장기 4-6의 분화와 성숙에 영향을주는 독특한 능력이있다. 체외에서 explanted 때, 노스캐롤라이나의 progenitors 자기 갱신을 받다, 마이 그 레이션과 뉴런, glia, 평활근 세포, 연골 및 뼈 포함하여 조직 유형의 다양한으로 차별화. NC의 multipotency 처음. 조류 신경 튜브 7-9의 explants에서 설명한 NC 세포의 체외 절연에서 증식, 이주 및 multipotency 포함하여 노스캐롤라이나 역학 연구를 용이하게되었다. 조류 및 쥐의 시스템의 추가 작업은 배아 10에 다시 이식하면 explanted 노스캐롤라이나 세포들이 노스캐롤라이나 잠재력을 유지 것을 증명-13. 이러한 고유 셀룰러 속성 explanted NC의 progenitors에 보존되기 때문에 신경 튜브 explant 분석은 체외에서 노스캐롤라이나를 공부를위한 매력적인 옵션을 제공합니다. 포유류의 노스캐롤라이나의 더 나은 이해를 달성하기 위해 여러 방법은 NC의 인구를 분리하기 위해 고용되었다. NC-파생 progenitors이 포스트 철새 NC의 progenitors 11,14-20의 역학을 연구하는 배아와 성인 모두에서 사후 철새 위치에서 배양해 수있다 그러나 그들은 신경 튜브에서 이민으로 노스캐롤라이나의 progenitors의 고립은 최적의 보존을 제공 NC 잠재력 전지 및 철새 속성 13,21,22. 일부 프로토콜은 특정 progenitors 11,13,14,17위한 풍부한 NC 인구를 분리하는 형광 활성화된 셀 정렬 (FACS) 채용. 그러나, 초기 단계의 배아로 시작하는 경우, 분석을위한 적절한 셀 번호는 초기 노스캐롤라 populatio의 절연 복잡 FACS로 취득하기가 어렵습니다각각의 배아에서 NS. 여기서는 Wnt1-Cre 활성화 혈통 기자 23 일 기준으로 약 96% 순수 노스캐롤라이나 인구에 FACS 및 결과에 의존하지 않는 방식을 설명합니다. 여기에 제시된 방법은 쥐의 노스캐롤라 11,13의 문화에 최적화된 프로토콜에서 적응하고 있습니다. 이 프로토콜 이전 방법에 비해의 장점은 1) 세포는 FACS)가) 비교적 순수한 노스캐롤라이나 인구, 3을 얻기 위해 필요하지 않습니다 premigratory 노스캐롤라이나 세포가 격리되고 4) 피더 레이어 2에서 재배되지 않는 결과를 쉽게임을 있습니다 계량. 또한이 프로토콜은 서로 다른 유전자 조작과 노스캐롤라이나 특성의 학습을 촉진, 모든 돌연변이 마우스 모델에서 NC의 분리에 사용될 수 있습니다. 이 방법의 한계는 노스캐롤라이 노스캐롤라이나 2,24-28의 생존, 이주 및 분화에 영향을 미치는 것으로 알려져 배아의 맥락에서 제거되는 것입니다.

신경 튜브의 배아 신경 능선의 분리가의 사용을 용이하게<em&gt; 체외에서</em&gt; 마이 그 레이션, 자동 갱신, 그리고 신경 능선의 multipotency를 공부를위한 방법.

배아 Murine 신경 튜브에서 신경 크레스트 세포의 분리 및 문화

배아 신경능(neural crest, NC)은 신경관의 배측에서 기원하며, 상피-간엽 이행(epithelial to mesenchymal transition)을 거치는 다능성 전구세포 집단으로...

본 프로토콜을 수행하는 데 3시간을 할당하십시오. 숙련된 후에는 박리하는 배아의 수에 따라 완료까지 1시간 30분에서 2시간 정도 소요됩니다. 본 프로토콜에서는 미중이판(mid otic plaque) 부위와 제4 체절(somite four) 사이에서 9.5일 된 배아를 절단하여 미주신경 신경관(vagal neural tube)을 포함하는 조직을 분리하는 방법을 설명합니다. 절단 과정.배아 16일 및 22일 차에 몸통 신경관을 포함하는 조직을 분리합니다. 미주신경 신경능세포는 미주 신경관에서 이동하며, 몸통 신경능세포는 몸통 신경관에서 이동합니다. 분리된 조직을 collagenase 용액으로 효소 처리하여 분해한 후 세척하고, 신경이 아닌 표피와 중배엽을 절제하여 제거합니다.분리된 신경관을 두 번 더 세척한 후 자가 재생 배지에 도말합니다. 저는 밴더빌트 대학교 Bosky 연구실의 Elise Graph입니다. 오늘은 외식 배양(explan culture)에서 신경관으로부터 신경능(neural crest)을 분리하는 방법을 시연하겠습니다.이 기술을 통해 신경능 세포의 특성을 In vitro에서 연구할 수 있습니다. 이제 시작하겠습니다. 우선 1 mg/mL 농도의 피브로넥틴 100 µL를 멸균된 DPBS 3.2 mL에 희석하십시오.4-웰 플레이트의 각 웰 바닥을 충분히 덮을 정도의 30 µg/mL 피브로넥틴(fibronectin) 용액을 넣습니다. 4-웰 플레이트의 모서리를 가볍게 두드려 모든 웰이 고르게 덮이도록 합니다. 배지를 제조하고 필터링하는 동안 플레이트를 그대로 둡니다.플레이트는 최소 15분 동안 그대로 둡니다. 배지를 준비하기 위해 다음 시약들을 수집하십시오. 배지는 사용 직전에 생물안전작업대 내에서 신선하게 제조합니다.항상 멸균 조작법을 준수하십시오. 4웰 디쉬에서 fiber nin을 꺼내고, 후드 뒤쪽에서 뚜껑을 연 채로 건조시킵니다. fiber nin이 건조되는 데는 약 15분이 소요됩니다.플레이트가 마르면, 각 웰에 self-renew 배지 500 µL를 넣습니다. 해부 단계에 들어가기 직전에 플레이트를 37 °C, 5% CO₂ 습윤 배양기에 넣습니다. collagenase disc space 50 µL를 5 mL의 DPBS에 혼합합니다. 효율적인 소화를 위해 모든 collagenase dispa를 반드시 첨가하십시오.0.2 micron 시린지 필터를 사용하여 collagenase dispa 용액

isolation-culture-neural-crest-cells-from-embryonic-murine-neural

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 동영상은 배아 생쥐의 개발​​ 피질에서 neuroprecursors의 절연에 사용되는 방법을 설명합니다. , 자궁에서 태아를 제거하는 대뇌 피질의 조직을 해부하고, 고립 대뇌 피질을 소화에 대한 절차는 표시됩니다.

마우스 신경 줄기 세포 엽 성의 전구 물질의 문화

여기 마우스 표피 신경 능선의 줄기 세포를 (에피 NCSC) 분리하기 위해 방법을 보여줍니다. 기술과 관련된 마이크로 해부, 수염 모공 볼록한 분리하고 조직 문화에 그것을 placeing. 사일 - 에피 NCSC 3 이내 하층에 팽창의 explants에서 이민을 시작합니다.

마우스 표피 신경 크레스트 줄기 세포 (에피 NCSC) 문화

체외에서 신경 크레스트 줄기 세포 (NCSC)을 육성하기 위해 특수 매체 (NCSCM)가 필요합니다. NCSCM의 필수적인 부분은 여자의 배아 추출물 (시)입니다. 우리는 여기서 고립, 물에 담가서 부드럽게 함, 원심 분리 및 여과 공정과 같은 세부 사항을 포함하여 순수하고 고품질시의 최대 금액을 생산하는 정확한 방법을 설명합니다.

Murine 신경 크레스트 줄기 세포의 배양 칙의 배아 추출 생산

이 문서는 인간의 모낭에서 신경 문장의 줄기 세포의 분리와 문화에 대한 강력한 프로토콜을 제공합니다.

인간의 모공에서 신경 크레스트 줄기 세포의 분리와 문화

이 비디오는 병아리 배아의 중뇌 영역에서 두개골 신경 주름을 분리하는 기술을 보여줍니다. 신경 주름의 상세한 해부 과정, 그 위치 및 피브로넥틴으로 코팅된 커버슬립에 부착된 후 신경 주름에서 신경능선 세포의 이동을 관찰합니다.

신경 능선 세포 배양을 위해 병아리 배아에서 두개골 신경 주름 분리

여기, 전자13 마우스 배아 절 예 하에서 신경 줄기 세포의 분리에 대 한 새로운 microsurgical 기술을 소개합니다.

절연 및 마우스 배아 신경 줄기 세포의 문화

이 프로토콜은 주로 세포 이동 연구를 위해 마우스 모델에서 두개골 신경 문장 세포의 해부 및 배양을 설명합니다. 우리는 사용된 살아있는 화상 진찰 기술 및 속도 및 세포 모양 변경의 분석을 기술합니다.

신경 문장 세포 박리 및 이동의 연구를 위한 마우스에서 1 차적인 두개골 신경 문장 세포의 해부, 문화 및 분석

이 다목적 프로토콜은 병아리 배아에서 두개골 신경 주름의 절제를 통해 이식 신경 볏 세포 (NCC)의 분리를 설명합니다. 도금 및 배양 시 이동 NCC가 신경 접힘 외식편에서 나와 단순화된 2D 환경에서 세포 형태 및 이동을 평가할 수 있습니다.

병아리 두개골 신경 볏 세포 배양의 준비 및 형태학적 분석

이 프로토콜은 신경 능선 세포가 히알루로난이 풍부한 세포외 기질로의 생체 내 이동에 관여하는 분자의 기능 분석에 적합한 시험관 내 이동 실험을 설명합니다.

체외 히알루로난이 풍부한 세포외 기질이 신경 능선 세포 이동에 미치는 영향에 대한 조사

여기에서는 성체 쥐 뇌실 영역에서 분리된 확장된 신경 줄기 세포(NSC)에서 유전자 전달 효율성을 향상시키도록 설계된 핵절충 시스템에 대해 설명합니다. 이 연구 결과는 이 방법이 NSC의 유전자 섭동을 크게 개선하여 기존 transfection 프로토콜의 효과를 능가하고 세포 생존율을 향상시킨다는 것을 보여줍니다.

Isolation, Expansion, and Nucleofection of Neural Stem Cells from Adult Murine Subventricular Zone

우리는 마우스 배아 줄기 세포에서 두개골 신경 능선 세포를 생성하기 위해 재현 가능한 크기의 신경구를 생성하는 3차원(3D) 체외 분화 프로토콜을 제시합니다. 우리는 이 방법론이 이전 프로토콜에 비해 변동성을 줄이고 두개골 신경 능선 세포 발달을 연구하기 위한 다중 분석에 어떻게 사용할 수 있는지 보여줍니다.

Cranial Neural Crest Cells Multiplexed Assay를 위한 3차원 In Vitro Differentiation Protocol

배우세요 마우스 배아 신경 튜브에서 신경 크레스트 세포를 분리하고 배양하는 방법을. 콜라게나제/디스파제 소화와 저산소 조건을 사용하여 96% 순도의 세포를 얻을 수 있습니다.

배아 Murine 신경 튜브에서 신경 크레스트 세포의 분리 및 문화

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