Name: 과립에 따라 달라 Autoantibody 유발 피부 젖어 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 23 s
Description: 배우세요 수동적 항체 전이를 이용한 쥐의 피부 수포 유발 및 분석 방법입니다. VII형 콜라겐 특이 항체를 사용하여 후천성 표피박리증 수뇌증(EBA)의 병태생리를 연구하고 면역성 피부 질환의 치료 전략 개발에 기여합니다.

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저자는 프라이 부르크 (Freiburg) 대학 (CS까지)의 의료 학부에서 독일 Forschungsgemeinschaft SI-1281/4-1과 BIOSS에서 교부금의 지원을 인정합니다.

1. 병원성 항체의 작성 참고 : 항체가 하룻밤 사이에 0.1 M 글리 산도 2.5-3 (용출 버퍼) (ON)에 저장 할 수 없기 때문에 정제 및 항체의 농도가 같은 날에 수행되어야합니다. IgG의 친 화성 정화 : 면역 토끼 혈청의 25 ML을 사용 : <ol><li> 4에 ON 토끼 혈청을 해동 ° C, 20 ° C.에 1xPBS (버퍼를 실행)와 그것에게 1:1 혼합 10 분에 1,260 XG에서 원심 분리기를 선택적 필터 종이 필터링 단계는 혈청은 지방산입니다 경우에 원심 분리 한 후 포함 될 수 있습니다. </li><li> 한편, G 매트릭스는 1XPBS (버퍼를 실행) 10 침대 볼륨 (침대 볼륨 = 매트릭스 볼륨)에 열을 가득 단백질을 씻는다. </li><li> 희석과 컬럼에 혈청 필터링을 적용하고 실온 (RT)에 흔들 플랫폼에서 1 시간을 품다. </li><li> 수집 흐름을 통해 (FT) 50 ML의 Flacon 튜브 인치주세요 을 삭제하지 마십시오 농도까지그리고 정화 IgG의 titer가 알려져있다. </li><li> 1XPBS 5 침대 볼륨과 매트릭스을 씻고 동안 용출 IgG 분획을 수집 50 ML 팔콘 튜브를 준비합니다. 피펫 1 ML의 산도를 중화 버퍼 : 각 관 1 M 트리스 산도 10 일 (그렇지 않으면 수집 할 eluate의 양에 비해 1시 20분 트리스 버퍼의 비율). </li><li> 항목에 0.1 M 글리 산도 2.5-3 50 ML 분율 (들)을 수집 100-150 ML의 용출 버퍼를 적용합니다. , 튜브 2 배를 뒤집기 pH를 측정하고 산도를 7.2-7.4에 도달 할 때까지 중화 버퍼를 추가 할 수 있습니다. </li><li> IgG의 eluate의 몇 방울을 수집하고 etalon 280 나노 미터에서 OD를 측정으로 용출 버퍼를 사용합니다. OD는 &lt;0.1 ​​정지 수집하는 경우. </li><li> 단백질 G 매트릭스를 생성하고는 제조업체의 지침에 따라 저장합니다. </li></ol> Amicon 튜브와 ultrafiltration의 농도 : <ol><li> 15-20 분 centrifuging하여 1XPBS과 Amicon 울트라 (15 ML / 30KDa) ultrafiltration 튜브를 씻어4 ° C.에서 3,220 XG에 Amicon에서 FT 폐기하십시오. </li><li> 25-30 3220 XG의 분, 4 용출 IgG 분획 및 원심 분리기 15 ML과 Amicons을 작성 ° C, 원심 분리 시간은 항상 eluate의 단백질 함량에 따라 달라집니다. </li><li> FT을 취소하고 남은 용출 분획이없는 때까지 ultrafiltration를 반복합니다. </li><li> 원심 분리하여 1XPBS 25-30 분으로, 광범위하게, 두 번 집중 IgG를 씻으십시오. </li><li> 1XPBS의 1,500-2,000 μl의 최종 볼륨의 Amicon 필터에서 &#39;끈적&#39;노란 항체 솔루션을 수집합니다. </li><li> 분광 광도계 또는 NanoDrop를 사용하여 IgG 준비의 측정 농도 : Conc. (MG / ML) = A (280 nm 정도) × 희석 계수 / 1,4 </li><li> 제조업체의 지침에 따라 Amicons을 씻고 저장합니다. </li></ol> 2. 마우스로 콜라겐 VII 특정 IgG의 주입 실제 실험 절차를 시작하기 전에 확인 그 실험 프로tocol이 작성되어 있으며 모든 자료는 실험을 위해 준비가되어 있습니다. <ol><li> 질병 득점, ELISAs, immunofluorescence (IF) 분석 및 myeloperoxidase (MPO) 분석 4 데이터 시트를 준비합니다. </li><li> 혈액 및 기관, cryomolds뿐만 아니라 조직학은 처리 및 카세트를 삽입하기위한 튜브를 붙입니다. </li><li> 항체 솔루션은 신선한 준비 또는 주식에서 해동하고 (IF 현미경 및 / 또는 엘리사에 의해 titer)의 반응성에 관한 특징해야합니다. 멸균 필터링 항체 솔루션은 사출에 필요한 용량은 250-1000 μl 사이에 차이가있는 방식으로 PBS에 희석해야합니다. 당신은 전체 실험을 수행하기에 충분한 IgG이 있는지 확인하십시오. </li><li> 준비 신선한 항응고제 : 헤파린 20 U / ML 및 8.7 MG / ML 케타민 / 마취에 대한 1.3 MG / ML xylazine 혼합물.에게 쥐가 준비된 3.7 %의 포름 알데히드와 튜브를 분류했습니다 희생합니다. </li><li> (메스, 가위, 고급 가리킨 curv 수술기구 멸균을에드 forcipes)와 주사기 (인슐린 주사기, 1, 2 ML의 주사기), 바늘, 디지털 카메라와 여분의 메모리 카드를 작성. </li></ol> 참고 : 케타민 / xylazine 또는 isoflurane narcotized 마우스의 모든 절차를 수행 마우스를 신속하게 복구로 Isoflurane은 매일 피부 검사에 대한 선호 마취 옵션입니다.. 그러나, 사진, 87 밀리그램 / kg 케타민과 13 밀리그램 / kg xylazine을 볼 때 일반적으로 피하에 주입합니다. 안락사에 대한 케타민 / xylazine 복용량은 130 밀리그램 / kg 케타민, 20 밀리그램 / kg xylazine로 증가하고 있습니다. <ol><li> 자신의 일반적인 건강 상태, 피부와 털 모양의 이미 표시된 동물을 확인을 무게 (항상 같은 귀에 충실)은 귀 두께를 측정합니다. </li><li> 관찰 된 값과 임상 평가 시트의 변경 사항을 등록합니다. </li><li> 항응고제의 동일한 볼륨을 포함하는 주사기의 꼬리 정맥 20-30 μl (2-3 물방울) 피를 수집합니다. </li><li> 모피를 소독하고80 % 에탄올을 사용하여 피부. </li><li> . 피하 인슐린 주사기를 사용하여 뒷면에 항체 솔루션을 주사 (특정 사이트 (예를 들어, 귀) 만 작은 볼륨 (10-50 μl)를 주입 할 가능합니다.) </li></ol> 주사는 매 둘째 날 4 번 반복해야합니다. Balb / C와 약 20 g의 체중 C57BL6 마우스 3-4 낮 750 μg / g 체중 / 사출 autoantibodies에 400-500의 첫 관리 후 질병을 개발하기 시작합니다. 실험을 마무리 할 때 : <ol><li> 130 MG / kg와 케타민 / xylazine 피하 20 밀리그램 / kg를 주입하여 깊은 마취법에서 쥐를 넣고, 뒤쪽 대정맥에서 그들을 ...에게서 피를 뽑다하고 심장을 도려내. </li><li> 같은 피부와 같은 기관 / 조직 샘플 수집 : 꼬리, 귀, 피와 식도하고 이전에 표시하고 PBS 또는 3.7 %의 포름 알데히드가 가득 찬 튜브에 넣습니다. </li></ol> 에 반환 할 때연구실 : <ol><li> 1200 XG, 별도의 플라즈마에 대한 RT에서 10 분에서 피를 원심 분리기, 적절한 라벨을 튜브로 플라즈마를 전송하고 그에 따라이를 저장합니다. </li><li> 피부가 제대로 cryomolds, 라벨을 사용하여 최적의 컷 온도 매체에 생검, 그리고 -80에서 보관 삽입 ° C. </li><li> 라벨이 삽입 금형에 조직학 목적으로 조직 샘플을 놓고 파라핀 퍼가기까지 3.7 %의 포름 알데히드에 보관. </li></ol> 3. 질병 심각도의 임상 평가 마우스는 피부와 점막의 병변 매일 검토해야하고 결과는 해당 양식을 사용하여 기록해야합니다. 초기 안락사에 대한 기준은 5 병 점수 (표 1)에 대한 의지보다 더 20 몸 표면의 비율 (%)과 세 연속 일 전체 몸무게의 5~10%의 체중 감소에 영향을 미치는 피부 병변입니다. <ol><li> 그 배에 마우스를 놓습니다. 오른쪽으로, 즉 머리 지역에서 시작귀 및 물집, erosions, 내부에 지각뿐만 아니라 바깥 쪽면에 있는지 확인합니다. 왼쪽 귀에과 같은 방법을 계속합니다. </li><li> 오른쪽과 왼쪽 눈은 탈모증, 홍반의 신호를 통제 erosions 및 / 또는 지각 있습니다. </li><li> 이마와 코 지역은 코, 입술과 입의 점막의 복부 부분을 계속, 다음을 통해 닦았 있습니다. </li><li> 위쪽으로 이동 앞발로 땅을 차다부터 오른쪽 앞 다리를 검사하고, 왼쪽 앞 다리로 전환합니다. 오른쪽과 왼쪽 뒷다리와 동일한 절차. </li><li> 곡선 훌륭한 포인트 포셉과 목 다시 지역에 모피를 브러시. </li><li> 그 뒷면에 마우스를 켜고 복부 부분뿐만 ​​아니라 사지의 복부 측면 이전에 같은 방법으로 확인합니다. </li><li> 꼬리를 확인합니다. </li><li> 쥐가 질병을 개발 관련 신체 부위의 사진을보세요. 주의는 사진의 품질과 수량에 지불해야합니다. </li><li> 임상 질병 점수를 계산. </li></ol> 4. 피부와 플라즈마 샘플의 분석 <ol><li> , 저장, 및 / 준비 또는 계획에 따라 모든 수집 된 조직을 처리합니다. </li><li> 에 대한 냉동 조직 섹션을 잘라 IF 토끼 항체와 마우스 보완 시스템 구성 요소의 감지. </li><li> 냉동 조직 및 / 또는 장기 추출물의 다른 단백질과 효소 콘텐츠 (MPO 분석)을 분석합니다. </li><li> 제 파라핀은 조직을 포함 및 조직 손상의 정도를 시각화하기 위해 H &amp; E와 얼룩. </li><li> 엘리사, immunoblot으로 플라즈마를 분석합니다. </li></ol>

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</ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

실험 동물에 autoantibodies의 수동 전송은 pathogenicity 7, -12를 입증 할 주요 접근 방법입니다. 이 방법을 통해 얻은 동물 모델은 autoimmunity 13 간접적 인 증거 할뿐만 아니라, 병원성 메커니즘의 efferent 단계의 조사를 할 수 있습니다. epidermolysis bullosa acquisita (EBA)으로 젖어 항체 유발 과립에 의존 피부의 수동 전송 모델은 면역 dermatoses에서 조직 손상의 메커니즘을 해부하는 데 사용되었다. 그것은 잘 콜라겐 VII에 대한 autoimmunity의 한계 넘어 확장 항체로 인한 장기 별 면역 질환의 기본, 생물학적 및 임상 중요한 측면을 연구 할 수있는 정교하게 될지는 모델 병으로도 나타났다. 마지막으로,이 모델은 지하 막 생물학 등의 기초 생물학 및 pathophysiological 프로세스,, 면역 단지의 과립 활성화를 공부하는 데 사용할 수 있습니다d 개의 보완 활성화. <p class...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 </td></tr><tr><td> 재조합 항원 </td><td></td><td></td><td> 손쥐 콜라겐 VII의 재조합 형태의 plasmids 인코딩은 해당 저자에서 사용할 수 있습니다. </td></tr><tr><td> 면역 토끼 혈청 </td><td> <a href="http://www.eurogentec.com/" target="_blank">www.eurogentec.com</a> </td><td></td><td> 우리 항원 200 μg, 2 주 간격 3 회와 예방 접종 뉴질랜드 화이트 토끼했다. 이러한 목적을 위해 우리는 Eurogentec SA, 벨기에의 서비스를 사용했습니다. </td></tr><tr><td> 단백질 G 아가로 오스 </td><td> 로슈 응용 과학 </td><td> 11243233001 </td><td></td></tr><tr><td> Balb / C 마우스 </td><td> 찰스 강 (Charles River) 연구소 </td><td></td><td></TD&gt; </tr><tr><td> 10월 화합물, 조직 - 테크 </td><td> 사쿠라 Finetek </td><td> 4583 </td><td> 10월, 최적의 절삭 온도 </td></tr><tr><td> Cryomold 표준 </td><td> 사쿠라 Finetek </td><td> 4557 </td><td> 25mm × 20mm × 5mm </td></tr><tr><td> Cryomold 중간 </td><td> 사쿠라 Finetek </td><td> 4566 </td><td> 15mm × 15mm × 5mm </td></tr><tr><td> 유니 링크 - Einbettkassette </td><td> R. Langenbrinck </td><td> 09-0503 </td><td> 조직학 처리 및 퍼가기 카세트 </td></tr><tr><td> Spezial-Tatowierfarbe Schwarz </td><td> H. Hauptnerund &amp; 리차드 H​​erberholz GmbH의 앤 컴퍼니 KG </td><td> 71492000 </td><td> 붙여 넣기 문신 </td></tr><tr><td> Tatowierzange TZ1 </td><td> EBECO E. 베커 &amp; 공동 GmbH의 </td><td></td><td> 장치를 문신 </td></tr><tr><td> 헤파린 </td><td> 칼 로스 GmbH의 앤 컴퍼니 </td><td> 7692.1 </td><td></td></tr><tr><td> 포름 알데히드 37% </td><td> 칼 로스 GmbH의 앤 컴퍼니 </td><td> 7386 </td><td></td></tr><tr><td> 케타민 염산염 </td><td> 시그마 - 알드리치 Chemie GmbH의 </td><td> K2753-1G </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine 히드로 클로라이드 </td><td> 시그마 - 알드리치 Chemie GmbH의 </td><td> X1251-1G </td><td></td></tr><tr><td> 무균 PBS </td><td> Biochrom </td><td> L182-50 </td><td></td></tr><tr><td> 디지털 카메라 </td><td> 니콘 </td><td> Coolpix 5400 </td><td></td></tr><tr><td> 주사기 필터 유닛에게 0.45 μm을 구동 </td><td> Millipore </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 캘리퍼스 </td><td> Mitutoyo 7309 </td><td> 1667338 </td><td> Farnell (대리점) </td></tr><tr><td> 질병 점수 시트 </td><td></td><td></td><td> 예를 들어 encloSED </td></tr></tbody></table>

과립에 따라 달라 autoantibody 유발 피부 젖어

Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering

자가 면역 현상은 건강한 개인에서 발생하지만, 자기 내성이 실패하면 면역 반응은 특정 병리 될 수 있습니다. 에 따르면 Witebsky의이 면역으로 질병을 진단하는 기준 중 하나를 여긴다는 autoantibodies의 수동 송금을 통해 실험 동물의 질병의 재현입니다. epidermolysis bullosa를 들어 acquisita (EBA), 피부와 점액을 분비하는 세포막의 prototypic 기관이 특정 면역 질환은 여러 실험 모델은 최근에 설립되었다. 콜라겐 VII 200 아미노산 (AA 757-967)의 스트레치에 대한 IgG 항체를 정화, 우리의 현재 작업에 설명 된 동물 모델에서 젖어 표현형뿐만 아니라 인간을 특징 조직을과 immunopathological 기능을 재현 마우스에 반복적으로 주입 아르 EBA 1. 본격적인 확산 질환은 보통 첫 번째 주사 후 5-6일 볼과 질병의 정도는 관리 C의 복용량과 상관 관계있다ollagen VII 특정 IgG. 실험 EBA의 조직 손상 (물집 형성)은 -4 조직에 바인딩 autoantibodies 2에 의해 과립 성 백혈구의 모집 및 활성화에 따라 수 있습니다. 모델이 efferent 면역 반응은 T 세포 독립적 인 위상을 재현 그러므로,이 모델은 면역 조직 손상에 참여 과립에 의존 염증 경로의 해부 할 수 있습니다. 또한, 그 값은 생체에 autoantibodies의 물집을 유발하는 잠재력을 입증하고 EBA 1,3, -6에 물집 형성의 메커니즘을 조사 연구 수에서 빨간 밑줄이 있습니다. 마지막으로,이 모델은 크게 autoantibody 유발 질병의 새로운 항 염증성 요법의 개발을 촉진합니다. 전반적으로, EBA의 수동 전송 동물 모델은 접근과 유익 질병 모델 및 연구자 EBA의 pathogenesis뿐만 아니라 분석하는 것이 아니라 기본적인 생물학적 및 임상 답변을하는 데 도움이됩니다필수 autoimmunity 질문.

임상 조직 학적 및 immunopathological 수준에서 인간의 EBA 닮은 마우스에서 전체 고장 질병의 항원 특정 항체 결과의 수동 전송됩니다. 수포, 빵 껍질, erosions과 탈모는 귀, 코, 손, 다리, 뒤로 생쥐의 눈 주변에 개발할 수 있습니다. 이 질병의 첫 번째 임상 증상은 대부분의 경우 귀 및 / 또는 머리 영역에 나타납니다. 특정 토끼 IgG 및 마우스 보완 C3의 증착은 IF perilesional 피부 cryosections의 피부 표피 교차로에 직접 감지되어 있습니다. lesional 피부 subepidermal 물집과 염증에 침투는 조직학으로 볼 수 있습니다. 병원성 콜라겐 VII 특정 항체의 주입이 단종되는 경우에는, 질병 활동이 점차 낮은되고, 몇 주 이내에 병변이 치유. 그럼에도 불구하고, postinflammatory cicatricial 탈모증의 특정 정도는 무기한 계속 될 수 있습니다. C...

콜라겐 VII 200 아미노산 (AA 757-967)의 스트레치에 대한 IgG 항체를 정화, 우리의 현재 작업에 설명 된 동물 모델에서 젖어 표현형뿐만 아니라 인간을 특징 조직을과 immunopathological 기능을 재현 마우스에 반복적으로 주입 아르 epidermolysis bullosa acquisita (EBA)<sup&gt; 1</sup&gt;.

과립에 따라 달라 Autoantibody 유발 피부 젖어

자가면역 현상은 건강한 개인에게서도 나타나지만, 자가 내성이 실패할 경우 자가면역 반응은 특정 병리로 이어질 수 있습니다. ...에 따르면

저는 독일 프라이베르크 대학교 피부과 전문의 Cassian RO입니다. 저희 실험실의 연구는 자가면역 피부 질환의 병인에 초점을 맞추고 있습니다. 저희가 관심을 가지고 있는 자가면역 질환 중 하나는 표피수포성 자가면역질환(Epidermolysis QUISTA) 또는 EBAA로, 이는 항원-자가항체 체계가 명확히 정의된 장기 특이적 자가면역 질환이며, 이 질환에 대해 상호 보완적인 ex vivo 및 동물 모델을 사용할 수 있습니다.EBA의 수포 형성은 PE를 통해 7형 콜라겐에 대한 항체를 마우스에 전이시킴으로써 재현될 수 있습니다. 따라서 본 비디오 기사에서는 7형 콜라겐 특이적 항체의 수동 전이를 통한 마우스의 피부 수포 유도 및 분석 방법을 제시하겠습니다. 안녕하세요, 프라이부르크 대학 병원 피부과 CAS 그룹의 King OBA입니다.본 영상에서는 병원성 자가항체의 수동 전이를 통해 EBA 실험 마우스 모델을 유도하는 방법을 시연하겠습니다. 이 절차는 자가면역 피부 질환의 잠재적 병리 기전을 조사하거나 병원성 에피토프를 탐색할 때 사용됩니다. EBA 수동 전이 모델을 구축할 때는 야생형 BALB/c 마우스에 자가항체를 주입하기 전 몇 가지 추가 단계를 수행해야 합니다.첫 번째 단계로 흰토끼의 피하에 정제된 재조합 항원을 접종합니다. 토끼 혈청에서 총 IgG를 친화성 컬럼 크로마토그래피로 분리한 후, 이를 야생형 마우스에 주입합니다. 주사는 이틀 간격으로 총 4회 피하 투여하며, 혈액은 2일 간격으로 채취합니다.마우스의 전신 상태와 피부 병변의 증거를 매일 확인합니다. 실험 기간 동안 각 개체에 대해 질병 활성을 반영하는 임상 점수를 산출하며, 첫 번째 주사 후 2주가 지나면 동물을 희생시켜 혈청 샘플과 피부 생검 조직을 채취하여 추가 분석을 진행합니다. 배양 시간이 지난 후, 컬럼을 수직 지지 랙에 배치하고 바닥면을 열어 가볍게 두드려 유출액을 수집합니다.50 mL Falcon 튜브에서, 면역형광 분석을 통해 특이적 항체가 없음을 확인받을 때까지 통과액을 유지하십시오. 특수 Amicon 튜브를 사용하여 4°C에서 3,220 ×g로 30분 동안 초여과하여 IgG를 희석 농축합니다. 농축 과정은 용출액을 필터에 통과시키고, 통과액을 버린 후, 튜브를 다시 채우고 용출액이 남지 않을 때까지 이 과정을 반복하는 방식으로 진행됩니다. 마지막 단계로 1× PBS로 세척한 후, 노란색의 끈적한 농축 IgG를 수집하여 농도를 측정하고 적절하게 라벨이 부착된 튜브에 보관하십시오.자가항체를 실제로 주입하기 전, 간접 면역형광법을 통해 특이성과 역가를 평가하십시오. 정상 생쥐 피부의 동결 절편을 농축된 IgG 제제의 연속 희석액과 함께 배양하고, 적절한 2차 항체로 표지하여 침착 상태를 시각화한 후 동물 시설로 이동하기 전 사진을 촬영하여 기록하십시오. 동물 실험 프로토콜이 작성되었는지와 모든 준비물이 갖춰졌는지 확인하십시오.혈액 및 조직 샘플용 튜브에 표시된 질병 활성도의 임상 점수 기록지. 적절한 부피를 주입할 수 있도록 희석된 항체 용액. 신선한 항응고제와 마취제, 멸균된 수술 도구 및 주사기.체크리스트에 캘리퍼스와 디지털 카메라가 포함되어 있어야 합니다. 작업 표면을 세척하고 이소플루레인 설치를 준비한 후, 채혈용 시린지를 헤파린 처리하고 인슐린 시린지에 항체 용액을 채웁니다. 마우스를 케이지에서 꺼내 식별 번호를 확인하고 무게를 측정합니다.모든 측정 및 관찰 데이터를 마우스 개인 데이터 및 임상 점수 기록지에 작성하십시오. 마우스가 이미 ssis 상태인 경우, 귀 두께를 측정한 다음 동물의 피부와 털 상태를 확인하십시오. 머리 부위, 등, 배 및 사지에 특히 주의를 기울여 관찰하십시오.꼬리 정맥의 상단 1/3 지점에 작은 절개를 넣어 혈액을 채취하십시오. 털을 소독하고 등 쪽의 피부를 들어 올려 IgG 용액을 피하로 조심스럽게 주입하십시오. 실험실로 돌아와 혈액을 상온에서 1,200 ×g로 10분 동안 원심분리하여 혈청을 얻으십시오. 샘플을 적절하게 라벨이 부착된 튜브에 옮기고 계획에 따라 보관하십시오.홍반, 탈모 및 피부 병변이 나타나기 시작하면 매일 마우스의 질병 징후를 관찰하십시오. 체중 측정과 더불어 질병 활성도를 평가하십시오. 마우스를 전신 마취시키기 위해 ketamine cila 혼합물을 피하 주사하십시오.귀 두께를 측정하고 이어서 전신 검사를 시작합니다. 곡선형 미세 포인트 포셉을 사용하여 털이 자라는 방향의 반대 방향으로 털을 쓸어내어 잠재적인 병변 부위를 노출시킵니다. 얼굴 주변을 따라 꼼꼼히 확인합니다.눈과 주둥이에서 시작하여 귀의 외측과 내측으로 이동하며 확인하고, 머리의 반대편도 동일하게 확인합니다. 이어서 구강 점막, 주둥이의 복측 및 복부 영역을 확인합니다. 등 외측, 등 및 목 부위와 전지 및 후지 또한 확인합니다.기록상 병변의 정도를 정량화하며, 마우스의 전체 피부 표면적 대비 특정 신체 부위 및 영역의 피부 피복 면적 백분율 형태로 결과를 작성합니다. 전체 영향을 받은 피부 및 점막 면적을 기준으로 임상 질환 점수를 계산합니다. 마지막으로, 관련 신체 부위와 병변 부위의 사진을 촬영합니다.실험 종료 후, 동물을 깊은 마취 상태에서 안락사시키고 혈액 및 조직 샘플을 수집합니다. 본 실험 설정에서는 귀, 꼬리, 식도를 가장 빈번하게 채취합니다. 병변이 있는 피부 생검 조직을 더 작은 조각으로 자릅니다.이를 조직 처리 및 포매 카세트에 넣고 파라핀 포매 전까지 3.7% formaldehyde에 보관하십시오. 그 후, 면역형광 분석을 위해 시료를 h 및 e 염색 과정으로 처리하십시오. 펄 피부 스트립을 Optimal cutting temperature medium에 포매하고, cryostat을 사용하여 6 µm 두께의 절편을 제작하십시오.조직에 결합된 특이적 토끼 항체와 마우스 보체 성분을 시각화하기 위해 직접 면역형광 분석을 수행하고, 추가 분석으로 재조합 항원이 코팅된 마이크로 타이트레이션 플레이트와 마우스 혈청의 연속 희석액을 사용하여 ELISA를 수행함으로써 순환 자가항체 수치를 측정합니다. 콜라겐 VII 특이적 항체의 수동 전이는 임상적, 조직학적 및 면역 병리학적 수준에서 인간의 질환과 유사한 완전한 질병을 마우스에서 유발합니다. 인간 EBA의 수포, 가피, 미란 및 탈모가 마우스의 귀, 눈 주변, 코, 발, 다리 및 등에 나타납니다.실험 전반에 걸쳐 증가하는 경향을 보이는 질환 활성도는 영향을 받은 피부 및 점막 면적을 기준으로 계산되었습니다. 진피-표피 접합부에서 간접 면역형광법으로 검출한 특이적 토끼 IgG 및 마우스 보체 C3의 침착을 나타내는 대표적 결과입니다. 여기에는 외이 피부의 냉동 절편 영상이 제시되어 있습니다.대조군에서는 IgG 또는 보체 C3가 검출되지 않았습니다. 이후 병변 부위 피부의 조직학적 분석 결과, 표피 하 수포와 염증성 침윤이 관찰되었습니다. 반면, 대조군에서 동일한 실험을 수행했을 때는 표피 하 수포 형성이 관찰되지 않았습니다.여기에서 보여주는 바와 같이, 표피하 수포 형성 유발 자가항체 모델은 조직 손상을 초래하는 자가항체에 의해 트리거되는 ROS 의존적 염증 경로의 분석에 크게 기여할 것입니다. 이 모델의 견고한 설계와 간단한 프로토콜은 자가항체 유도 질환에 대한 새로운 항염증 치료법을 개발하고 테스트하는 데에도 적합합니다.

granulocyte-dependent-autoantibody-induced-skin-blistering

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

피부염의 herpetiformis (DH)는 이가와 표피 transglutaminase (eTG) 사이의 면역 반응을 특징으로 만성 염증성 조건입니다. DH는 글루텐에 민감한 및 / 또는 복강 환자의 아주 작은 부분에 개발하고 있습니다. 본 연구의 결과는 DH도 idiopatic 피부염의 증상으로 붉은 털원숭이 원숭이 호스트에서 개발할 수 있음을 나타냅니다.

의 드문 경우에 이가와 조직 Transglutaminase이 항체에 의해 표피 Transglutaminase의 인식 붉은 털원숭이 피부염

간접 면역 형광 (IIF) 분석은 전통적으로 인간 혈청에 항핵 항체 (ANA)의 검출에 사용되어왔다. 이 항체의 존재는 전신자가 면역 류마티스 질환 (SARD)의 진단에 도움을 줄 수있다. 이 프로토콜은 효율적으로 정확하게 이러한자가 항체를 검출하기 위해 IIF 기술을 수행하는 방법을 보여줍니다.

반핵 항체 HEP-2 세포를 사용하여 상영

bm12 림프구가 C57BL/6 수용자로 이식되는 것은 전신 홍반성 루푸스의 확립된 모델입니다. 여기에서는 이 모델을 사용하여 질병을 시작하는 방법과 유세포 분석을 통해 T 여포 보조 세포, 생식 중심 B 세포 및 형질 세포를 특성화하는 방법을 설명합니다.

C57BL / 6 마​​우스의 전신 홍 반성 루푸스의 BM12 유도 성 모델 (SLE)

여기, 우리는 흡입 물집 피부 리콜 모델의 데모를 제공합니다. 모델에는 인간의 vivo에서 적응 면역 반응, 예를 들어 백신 개발의 맥락에서에서 연구 간단한 액세스할 수 있습니다.

인간 T 세포 회수 응답에서 Vivo에서 공부 하는 흡입 물집 프로토콜

이 프로토콜 어떤 autoreactive 세포 photoactivatable 녹색 형광 단백질 (GFP PA) 기자를가지고 자연 면역 어린 싹 센터와 혼합된 murine 골 키메라의 생성을 설명 합니다. 이 다운스트림 분자 및 기능 분석 조직에 세포 위치를 연결 하는 기능을 제공 합니다.

면역의 혼합된 공상 모델에 Photoactivation에 의해 개별 Autoreactive 어린 싹 센터 질문

호염기구 활성화 시험은 유세포 분석에 의한 활성화 마커의 측정을 통해 특정 자극의 존재하에 호염기구 활성화의 검출을 기반으로 IgE 매개 알레르기 반응을 평가하기위한 보완적인 체외 진단 시험입니다.

알레르기 진단을 위한 호염기구 활성화 검사

이 연구는 표피(EC) 면역을 통해 생쥐의 면역 반응을 조절하는 피부의 역할을 보여줍니다. 단백질 항원을 사용한 EC 면역은 병원체 관련 분자 패턴과 결합할 때 접촉 과민증 또는 피부 유도 억제에서 면역 반응을 억제할 수 있습니다. EC 면역은 면역 요법에 대한 효과적이고 주사 바늘이 없는 접근 방식으로서 가능성을 보여줍니다.

표피 유도 면역조절의 쥐 모델(Murine Model of Epicutanely-Induced Immunomodulation)

피부 병변은 많은 류마티스 질환에서 흔하고 중요한 특징이며, 병리학적 분석을 통한 생검은 진단에 중요한 역할을 합니다. 이 기사는 표준화된 피부 생검 절차에 대한 자세한 개요를 제공하고 원반형 홍반성 루푸스를 예로 들어 류마티스 질환 진단에서 피부병리학의 필수적인 역할을 강조합니다.

원반형 홍반성 루푸스 진단을 위한 피부 생검

의 intradermal 주입하여 피부 leishmaniasis에 대한 실험 햄스터 모델의...

햄스터의 지느러미 피부에 피부 Leishmaniasis : Antileishmanial 약물의 상영을위한 유용한 모델

이 문서는 총 내부 반사 형광 (TIRF) 현미경에 의한 유리를 지원 평면 bilayers에서 HIV-1 봉투 유발 virological 시냅스 형성을 시각화하는 방법을 설명합니다. 메소드는 또한 HIV-1 봉투 유발 virological 시냅스 형성시 발생하는 신호 전달 분자의 활성화 및 재배포를 탐지하기 immunofluorescence 염색법과 결합 할 수 있습니다.

의 이미징 HIV-1 봉투 유발 Virological 시냅스와 합성 지질 Bilayers에 신호

배우세요 수동적 항체 전이를 이용한 쥐의 피부 수포 유발 및 분석 방법입니다. VII형 콜라겐 특이 항체를 사용하여 후천성 표피박리증 수뇌증(EBA)의 병태생리를 연구하고 면역성 피부 질환의 치료 전략 개발에 기여합니다.

과립에 따라 달라 Autoantibody 유발 피부 젖어

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