Name: 연구를위한 기관지 폐포 세척액 (BAL), 적절한 샘플 수익률을 얻기 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-24T19:45:00.000+00:00
Duration: 11 min 47 s
Description: 배우세요 기관지폐포세척술(BAL)을 안전하고 효과적으로 수행하는 방법을. 저압 흡입을 사용하여 폐에서 면역 세포를 채취하고 세포 생존율을 유지하는 이 기술은 호흡기 및 면역학 연구에 적합합니다.

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우리의 연구 bronchoscopies 그의 지원을 위해 엘레나 Mitsi (연구 조교)와 미스터 캐롤 핸콕 (연구 간호사)과 촬영에 기여하기위한 극장 직원과 데이비드 쇼 (연구 간호사)을 부탁드립니다. 이 절차가 촬영 될 수 있도록하기위한 또한 우리의 자원 봉사 레베카 던 피는 감사합니다.

1. 주제는 호흡 연구 간호사에 의해 도착에 만족 <ol><li> 주제는 고체 음식과 맑은 액체 1 2 시간&gt; 4 시간 동안 금식을하고있다. </li><li> 절차는 (표준 병원 정책에 따라) 적절한 사전 및 사후 절차 검사와 함께 일 경우로 수행됩니다. </li><li> 주제는 병원 가운을 착용. </li><li> 작은 계기 정맥은 (이상적으로 왼쪽 손에) 삽입 시술 후 회복 기간 1이 끝날 때까지 현장에 남아있다. </li><li> 시술 전 관측이 수행된다 (혈압, 맥박, 산소 포화도 [SAT 성적]). </li><li> 피사체가 기관지 제품군에 전달된다. </li></ol> 2. 주제는 기관지에 경험 호흡기 임상 연구에 의해 스위트 룸에있는 절차에 대한 준비가되어 있습니다 <ol><li> 3 - 리드 ECG, 맥박 산소 측정기 1,10 및 혈압계, 모니터링 장비 등의 부착된다. AnesthetIC 지원은 서면 동의서를 포함하여 필요하지 않습니다. </li><li> 산소는&gt; 90 % 1 SAT 성적을 달성하기 위해, 최대 4 L / min으로 비강 캐뉼라를 통해 전달 될 ​​수있다. </li><li> 운영자는이 멸균 생리 식염수를 흡입하여 효과적인 흡입을 보장 포함, 기관 지경을 확인합니다. </li><li> 리도카인과 국소 마취 (xylocaine 사용) (Instillagel를 사용하여) 비강과 구강 점막에 달성 </li><li> 진정 작용이 적절하고 피사체에 의해 요구되는 경우, 정맥 미다 졸람 1을 투여한다. 적절한 반전 에이전트 (플루 마제 닐은) 즉시 사용할 수 있습니다. </li><li> 소생 장비는 1,10 쉽게 사용할 수 있습니다. </li></ol> 3. 기관 지경을 삽입 위치 <ol><li> 삽관 법은 코를 통해 보통이다. 이 때문에 비강 폴립, 염증 비갑개 또는 불편 다음 피사체가 입을 통해 삽관되어 할 수없는 경우 (입 가드 방지하는 데 사용됩니다) 범위 나 대상의 치아에 손상 될 수 있습니다. </li><li> 후두에 국소 마취 보통 4-6 밀리리터의 전체가 사용되며, 4 % 리도카인을 사용하여 완성된다. 일반적으로이 점안에 기침의 원인이됩니다. </li><li> 성대가 전달되고 오른쪽 하엽과 오른쪽 중간 엽 (RML)의 부문과 RML 입구에, 분 기부에서 2 % 리도카인 2 ㎖ 분취 량을 사용하여 더 점막 마취. </li><li> 기관 지경은 흡인 ( &#39;윙크 시험&#39;흡인 버튼을 이용하여인가 될 때기도가 붕괴되도록 그것이 안전한 위치에 충분한 원위 그러나 너무 원위없는 위치에 이상적으로 내측 부분에서, RML 내에 위치 ). </li><li> 좋은 위치는 완전히 bronchoscopist 즉시 부드러운 흡입에 완전히 닫히지기도에 의해 위치에 유지 될 수있는 지경에 윙크 테스트 중에 표시됩니다. </li></ol> 4. BAL이 수행 <ol><li> 네 개의 60 ㎖를 주사기 사전입니다60 ㎖, 50 ㎖, 50 ㎖, 연속 주사기에 40 ㎖ - 가온 생리 식염수로 채워진. 제목과 bronchoscopist 준비가되면 bronchoscopist가 RML의 위치를​​ 유지하는 동안 식염수의 첫 번째 주사기는 기관지 조수에 의해 주입된다. </li><li> 부드러운 손 흡입 후, 같은 포트 및 50 ㎖ 주사기를 사용하여 보조에 의해 수행된다. </li><li> 이 절차는 다음 우리 고유의 기술로 사용되는 200 ㎖의 최대 양으로, 또한 3 회 반복된다. </li><li> 검색 BAL 유체는 이미 얼음이 녹는에 개최 라벨이 부착 된 용기에 부드럽게 배출된다. 유리 용기는 세포 부착을 억제하고 세포의 수익을 극대화하기 위해 presiliconized 할 수있다. </li><li> BAL 액이 계면 활성제에 의해 형성된 표면에 비누 거품과 빛에 대한 흐릿한 나타납니다. </li><li> 기관 지경 서서히 완전히 배출된다. </li><li> BAL 액은 즉시 처리를 위해 얼음에 지연없이 전송됩니다. </li></ol> 5. 제목 복구 </p&gt; <ol><li> 주제는 병동 호흡 연구 간호사에 의해 2 ~ 4 시간 동안 복구됩니다. </li><li> 이 시간 동안 그들이 (그들의 제비가 안전한 것으로 평가 될 때) 과정을 거친 후, 순서에 흡인의 위험을 감소 휴식 후 만 먹고&gt; (60) 분 1을 마실 수 있습니다. </li><li> 포스트 절차 관측 모니터링 및 기록됩니다. 임상 검사는 배출하기 전에 발생합니다. </li><li> 피사체가 일반적인 부작용 (발열, 가벼운 바로 submammary 가슴 통증, 목의 통증)에 대한 프리 디스 브리핑 상당한 부작용 1 발생할 경우 연락 번호 부여됩니다. </li><li> 피사체 추적 관찰 1 ~ 5 일 임상 접촉 후 절차에. 이 전화 나 사람이 될 수 있습니다. </li></ol> 6. 세포는 실험실에서 고립되어 - 녹는 얼음에 수행 가능한 <ol><li> BAL 유체의 부피는 멸균 거즈 면봉의 이중 층을 통해 기록 및 여과prechilled, 멸균 50 ML의 원심 분리기 튜브에 점액 플러그를 제거합니다. </li><li> 세포는 5 ~ 10 분 동안 4 ° C에서 500 XG에서 원심 분리하여 펠렛 및 50 ㎖의 차가운 생리 식염수에 소용돌이로 교반하여 세척한다. 원심 분리 한 번 반복된다. </li><li> 세포 (RPMI-1640 + 10 % 소 태아 혈청 + 2 밀리미터 L-글루타민 + 페니실린 [40 IU / ㎖], 스트렙토 마이신 [75 IU / ㎖] 및 암포 테리 신 B [0.5 IU / ㎖])와 문화 매체에 재현 탁된다 미분 계수 트리 판 블루의 동량과 혈구를 사용하여 수행 하였다. </li><li> 세포 현탁액은 적절한 조직 배양 접시에 피펫에 의해 도입, (우리가 1 × 10 6 세포 / ml 사용), 그리고 대식 세포의 부착을 허용하는 3 시간 동안 37 ° C에서 배양 필요한 밀도로 정규화됩니다. 웰 당이 세포 현탁액 1 ㎖를 24 - 웰 배양 플레이트에 적절하다. </li><li> 림프구 작업, 3 시간 배양 한 후, 배양 배지를 부드럽게 상하 3X 피펫 팅하고, 수집된다. 이 매체는 림프구를 포함및 비 접착 성 대 식세포 및 림프구 기능을 평가하기 위해 사용될 수 있으며, 또한 정제 단계에서 사용될 수있다 식세포를 제거하는 CD14 자기 비드 예. </li><li> 대식 작업, 배양 3 시간 후, 매체는 조심스럽게 최소한의 피펫으로 제거하고 항생제없이 신선한, 따뜻한 배지 (RPMI 1640 + 10 % 소 태아 혈청 + 2 밀리미터 L-글루타민)로 대체. 대 식세포는 (도 1 참조) 조직 배양 플레이트에 부착한다. </li></ol>

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</ol>

안드레아 M. 콜린스는 빌과 멜린다 게이츠 재단, 및 잠재적 인 이해 충돌에 의해 투자된다. 그녀는 회의 및 강의 비용에 참석하기 위해 머크 (MSD)와 GSK로부터 자금을 받았다. (50) 연구 발스는 독립적으로 수행. 제이미 Rylance는 웰컴 트러스트 (Wellcome Trust)에 의해 투자, 관심의 충돌이 없습니다. 그는 다른 자금을받은 바 없습니다. (70) 연구 발스는 독립적으로 수행. 다니엘 G. 우톤은 NIHR 박사 친교에 의해 투자, 관심의 충돌이 없습니다. (40) 연구 발스는 독립적으로 수행. 안젤라 D. 라이트는 잠재적 인 이해 충돌이 없습니다. 100 개 이상의 연구 발스와 보조. 아담 KA 라이트는 잠재적 인 이해 충돌이 없습니다. 그는 50 BAL 샘플을 통해 처리했습니다. 던컨 G. 풀러 턴 </strong&gt; 잠재적 인 이해 충돌이 없습니다. 100 연구 발스는 독립적으로 수행. 스티븐 B. 고든은 잠재적 인 이해 충돌이 없습니다. 그는 회의에 참석하기 위해 머크 (MSD)와 노바티스에서 자금을 받았다. 400 연구 발스는 독립적으로 수행.

양호한 결과를 달성하기 위해 다음과 같은 도움이된다 : <ol><li> 혀와 구강 인두 후부의 기지에서 좋은 anesthetisation. 피사체의 절차 적 내성과 전체적인 편안함을 향상하기 때문에 중요하다. </li><li> 소아 (외부 직경 3.4-3.6 mm) 또는 성인 지경 (외부 직경 4.8-5.9 mm) 중 하나를 사용할 수 있습니다. </li><li> 비강 삽관시 불편 함이있는 경우, 경구 삽관 법이 바람직하다. 일반적으로 코 삽관 법은 간단한 방법 중 하나 또는 포기해야한다. </li><li> 구강 인두에 리도카인의 초기 점안 후, 피사체는 기관 지경은 경구로 삽입되는 경우에는 특히 마취 개시 보류 철회하는 기관 지경을 선호 할 수 있습니다. </li><li> 적어도 10 × 10 ㎖ 주사기는 리도카인의 만 2 ~ 4 ㎖로 채워져되어 있는지 확인합니다. 공기가 직접 코드와 기관지 점막에 마취의 개선 배달을 허용 주사기에 남아 있어야합니다사. </li><li> 절차를 수행하는 동안 기침 때문에 크게 BAL 수율을 줄여 따뜻하게 식염수를 사용하여 좋은 점막 마취이 감소하는 것이 중요하지. </li><li> 50 ㎖ 주사기 따뜻하게 식염수로 채워져 있어야합니다. 그것은 죽은 공간 손실과 터미널기도로 실행하는 나머지로 인해 10 ~ 20 사이의 ML을 산출하기 심어 생리 식염수의 첫 번째 50 ㎖ 일반적입니다. 또한 분주 유체의 더 큰 비율을 반환합니다. </li><li> 운전자는 항상 멸균 생리 식염수를 흡입하여 효과적인 흡입을 보장하는 등의 이전 삽관에 기관 지경을 확인해야합니다. 흡인의 손실은 일반적으로 인한 기관 지경 또는 흡입 장치와 연결 주변 튜브 또는 누출의 꼬임에 발생할 수있다. </li><li> 수동 흡입하는 동안, 이상적으로기도 붕괴하지 않아야합니다. 흡입 재발 하기도를 축소하는 경우, BAL 반환은 밸브기구로 감소, 지역 염증과 출혈이 더 가능성이있다 :이 차례로기도 m합니다광 과민성 기침 가능성이 높습니다. 가장 적절한 RML의 subsegmental 분기를 선택하고 낮은 흡입 압력을 사용하는 것이 중요 둘 수 있습니다. </li><li> 공기가 지속적으로 흡입되면 지경에 주사기의 연결도 원위기도에있는 기관 지경의 위치를​​ 다시 확인. 이 재발하는 문제의 경우, 시술 후 기관 지경 자체에 구멍이 있는지 확인하십시오. </li><li> 흡연자에서 BAL은 종종 인해 세포 내 입자의 존재에 어둡다. 흡연자가 덜 기관지 내시경을 허용, 증가 기침이있을 수 있습니다. </li><li> 바람직한 BAL 볼륨 수율은&gt; 100 ㎖이다. &gt; 150 밀리리터의 수율이 우수합니다. 우리는&gt; 170 ㎖의 모든 수익률을 경험하지 않았습니다. 세포 수율 및 BAL 볼륨 수익률 사이에 선형 관계가 없습니다. </li><li> &lt;100 ML의 수율, 우리의 경험에, 기침, 가슴 통증과 발열 등의 부작용을 초래할 가능성이 더 높습니다. 우리는 &lt;100의 수율 과목 RECO 수 밀리리터하는 것이 바람직합니다왼쪽 측면 위치에 베 레드, 이것은 남아있는 폐 유체의 배수에 도움이 있습니다. </li><li> 임상 접촉은 부작용을 지키기 위하여 1 ~ 5 일 사이 대상으로해야한다. </li><li> 미다 졸람의 진정 작용은 영국의 과목의 50 %와 말라위에있는 &lt;5 % &lt;에 사용됩니다. 미다 졸람 직접 내약성을 개선하기 위해 표시되지 않습니다, 일부 사업자는 진정 작용이 때때로 주제와 일관성 (및 재 보증) 대화를 유지하는 역효과를 수 있다는 것을 생각합니다. </li><li> 우리의 경험에 의하면,이 기술에 상당한 학습 곡선이있다. 예를 들어 의사와 간호사 간의 조정은 시간이 걸리고 수익률은 학습 과정의 시작 부분에 종종 낮다. </li><li> HIV 긍정적 인 주제에, 우리는 예방 prebronchoscopy 항생제를 사용합니다. </li></ol>

배경 광섬유 기관지 내시경은 임상 실습을 위해 개발되었다 널리 모두 단적으로 및 치료 1, 2를 사용합니다. 기관지 폐포 세척액 (BAL)는 비 접착 세포와 점막 표면에서 폐 라이닝 유체를 제거하며 조직 검사는 점막과 점막하 조직을 샘플링하는 데 사용됩니다. 연구 환경에서, BAL은 폐 내에서, (폐의 대 식세포 3-5) 타고난 세포 (B-및 T-세포 6)의 샘플링 및 체액 성 (면역 글로불린 7) 응답을 할 수 있습니다. BAL은 국제적으로 연구 목적으로 8을 위해 허용되며, 1999 년부터이 기술은 우리의 그룹에 의해 영국과 말라위에서&gt; 1,000 과목에서 수행되었습니다. 우리는 실험적인 인간의 폐렴 구균 마차 9,17, 바이오 매스 연기 5, HIV 예방 접종 및 부속 치료 STU 등의 폐렴 구균 항원에, 타고난 세포 및 체액 성 면역 반응의 연구에서이 기술을 사용폐렴에서 회복에 죽는다. 우리의 기술은 점안 유체의 완만 한 휴대용 흡인을 사용하며, 이는 리턴 BAL 볼륨을 최대화하고 BAL 유체 내에서 세포의 구조와 기능을 유지하기 위해 섬모 상피 조직에 최소 전단력을 적용하도록 설계된다. 연구의 맥락에서 BAL 진단 또는 치료 효과를 얻기 위해 목표로 호흡기 및 집중 치료 의사 (종종 불리는 기관지 세척, 세척, 세척, 또는 BAL)에 의해 실행과는 다른 기술을 사용합니다. 연구 기법은 세포를 수확하고 생체 외 배양 세포의 성장을 촉진하기 위하여 생존력을 유지하도록 설계된다. 이러한 이유로 연구 기법은 (일반적으로 200 ㎖의 순으로) 더 큰 부피 instillate를 사용하며 세포 손상을 감소시키기 위해 수동 흡착을 이용한다. 환자는 국소 마취를 부여 수면 마취 (미다 졸람)을 제공하고, 최소한의 부작용과 잘 절차를 허용하고 있습니다. 구두 및 서면 subjecT 정보는 내성을 개선하고 서면 동의서는 1 필수입니다. 골 전반적인 목표는 절차가 안전하고 효과적 일해야한다는 것입니다. 주제는 생리 장해를 발생하지 않습니다 및 운영자는 지속적으로 과목에서 BAL 100 ㎖를 초과 수집해야합니다. 시술 후, 주제는 최소한의 부작용을 경험해야합니다. 안전 피사체의 안전이 가장 중요하다. 주제는 신중하게 명확 포함 및 제외 기준을 사용하여 선택됩니다. 이 프로토콜은 잠재적 위험하고이를 완화하기 위해 취해지는 단계의 설명을 포함한다. 연구 기관 지경 금기는 절대 또는 상대 다음과 같이 표현 될 수있다, 배제 및 포함 조건으로 우리의 연구 프로토콜에 포함되어 있습니다. 우리의 주제는 모든 전체의 건강을 보장하기 위해 검사합니다. 절대 금기불안정 경추, 응답 저산소증, 불안 정형 협심증, 출혈 체질, 악성 부정맥이 (가) 있습니다. 증가 합병증 비율과 관련된 이러한 조건을 포함하여 상대적 금기 사항은 다음을 포함한다 : 일반 : 가난하게 협력 대상 1, 의미있는 일반적인 의료 문제, 예를 들면 간질, 리도카인 또는 미다 졸람, 임신, 영양 결핍에 대한 이상 반응 알려진 이전 저조한 용납 지경. 호흡기 :, 고탄 산혈증, 불안정한 천식 1, 크게 손상 호흡 기능 1 (FEV 1 &lt;1 L), 폐동맥 고혈압 저산소증 [공기 &lt;94 %의 포화도 (SAT 성적)]. 심장 혈관 : 요독증, 심근 경색 1, 우수한 대정 맥 폐쇄 후 6 주 이내. 기타 : 면역 억제 (우리 그룹은 정기적으로이 proce을 수행HIV 양성 과목에서 틀리면). 연구 BAL과 관련된 위험 - 표 1을 참조하십시오.

<table><tbody><tr><td>광섬유 기관지경, 광 및 흡입 소스</td><td>unspecified</td><td></td><td> </td></tr><tr><td> 수술 가운, 멸균 장갑 </td><td>지정되지 않음</td><td> <</td><td>p> </td></tr><tr><td> 혈압계 </td><td>지정되지 않음</td><td></td><td> 지속적인 환자 모니터링 </td></tr><tr><td> 맥박 산소 농도계 </td><td>지정되지 않음</td><td> <</td><td>p>지속적인 환자 모니터링용 </td></tr><tr><td>3-리드 ECG 모니터</td><td>지정되지 않음</td><td></td><td> 지속적인 환자 모니터링 </td></tr><tr><td>비강 산소 전달 2-4 L/min</td><td>지정되지 않음</td><td></td><td> </td></tr><tr><td> 리도카인 10% 스프레이 (자일로카인) </td><td>아스트라제네카</td><td></td><td>국소 마취</td></tr><tr><td> 리도카인 염산염 2% </td><td>지정되지 않음</td><td></td><td>국소 마취</td></tr><tr><td> 리도카인 젤(Instillagel) </td><td>Farco-Pharma, 독일</td><td></td><td> 다른 공급업체에서 사용 가능한 대체 제품 </td></tr><tr><td> 일반 식염수, 멸균, 200 ml</td><td>지정되지 않음</td><td></td><td>30까지 따뜻하게 &#176; C</td></tr><tr><td>10 ml 테이퍼 엔드 주사기 (x10)</td><td>불명</td><td></td><td> 리도카인 투여 </td></tr><tr><td>정맥 캐뉼라 18 G</td><td>불명</td><td> <</td><td>p>미다졸람 투여 </td></tr><tr><td> 미다졸람 </td><td>불특정</td> <td> <</td><td>p>진정제의 경우 </td></tr><tr><td> Flumazenil </td><td>지정되지 않음</td><td> <</td><td>p>벤조디아제핀 진정제의 반전(비상 전용) </td></tr><tr><td>60ml 테이퍼 엔드 주사기(x4)</td><td>지정되지 않음</td><td></td><td>일반 식염수 주입 및 BAL 유체 인출용. 커넥터를 연결해야 할 수 있습니다. bronchoscope.</td></tr><tr><td> 멸균 거즈 면봉 </td><td>Vernaid, UK</td><td></td><td> 다른 공급업체에서 구할 수 있는 대체 제품 </td></tr><tr><td> BAL 유체용 멸균 용기 </td><td>텍스트 및 설명 참조</td><td></td><td>실리콘화된 유리병은 대식세포 부착을 감소시킵니다. 또는 50ml 원심분리기 튜브를 사용할 수 있습니다(총 용량 200ml)</td></tr><tr><td> Sigmacote </td><td>Sigma, UK</td><<td>p>SL2 <</td><td>p>실리콘화된 유리병을 사용하는 경우에만. 주의: 유해하고 가연성입니다. 사용하는 경우 제조업체에 설명된 주의 사항을 따르십시오. s MSDS </td></tr><tr><td> 원심분리기 </td><td>지정되지</td><td></td> 않음<td>최소 4 x 50ml 튜브 용량. 4에 냉장 &#176; C preferred.</td></tr><tr><td> Shandon Cytospin centrifuge </td><td>Thermo Scientific, UK</td><td></td><td> 차등 계수 전용 </td></tr><tr><td> RPMI 1640 배지 with L-glutamine </td><td>Sigma, UK</td><<td>p>R8758</td><td> 다른 공급업체에서 구할 수 있는 대체 제품 </td></tr><tr><td> 태아 소 혈청 </td><td>Sigma, UK</td><<td>p>F6178</td><td> 다른 공급업체로부터 사용 가능한 대체 제품 </td></tr><tr><td> 페니실린-스트렙토마이신 </td><td>Sigma, UK</td><<td>p>P4333</td><td> 다른 공급업체로부터 구매 가능한 대체 제품 </td></tr><tr><td> 암포테리신 B </td><td>Sigma, UK</td><<td>p>A2942</td><td> 다른 공급업체로부터 사용 가능한 대체 제품 </td></tr><tr><td> 조직 배양 플레이트 </td><td>Greiner Bio-One, UK</td><<td>p>662160</td><td> 다른 공급업체로부터 구할 수 있는 대체 제품 </td></tr><tr><td> 유리 현미경 슬라이드 </td><td>지정되지 않음</td><td></td><td> 차등 계수 전용 </td></tr><tr><td> Shandon cytofunnel </td><td>Thermo Scientific, UK</td><td>A78710003 </td><td> 차등 계수 전용 </td></tr><tr><td> Shandon cytoclip </td><td>Thermo Scientific, 영국</td><td>59910052</td><td> 차등 계수 전용 </td></tr><tr><td> Hemacolor 염색 세트(고정제, 적색 및 청색 시약) </td><td>Merck, Germany</td><td>111661</td><td> 제조사에 따라 사용' S 지침 </td></tr></tbody></table>

연구를위한 기관지 폐포 세척액 (bal), 적절한 샘플 수익률을 얻기

Bronchoalveolar Lavage (BAL) for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

우리는 점막 표면에서 비 접착 세포와 폐 라이닝 유체를 제거하기 위해 수동 소형 흡입을 사용하여 기관지 폐포 세척액 (BAL)와 광섬유 기관지 내시경에 대한 연구 방법을 설명합니다. 연구 환경에서는 BAL은 폐 내의 선천적 (폐 식세포)의 샘플링, 셀룰러 (B-및 T-세포) 및 체액 (면역 글로불린) 응답을 허용한다. BAL은 국제적으로 연구 목적으로 허용되며, 1999 년부터이 기술은 우리의 그룹에 의해 영국과 말라위에서&gt; 1,000 과목에서 수행되었습니다. 우리의 기술은 점안 유체의 완만 한 휴대용 흡인을 사용하며, 이는 BAL 볼륨 반품 최대화하고 BAL 유체 내에서 세포의 구조와 기능을 유지하고 성장을 촉진하기 위하여 생존을 유지하기 위해 섬모 상피 조직에 최소 전단력을 적용하도록 설계 체외 배양 세포의. 연구 기술은 따라서 더 큰 볼륨 기능을 사용tillate (일반적으로 200 ㎖의 순서로) 및 세포 손상을 줄이기 위해 수동 흡착을 이용한다. 환자는 국소 마취를 부여 수면 마취 (미다 졸람)을 제공하고, 최소한의 부작용과 잘 절차를 허용하고 있습니다. 구두 및 서면 대상 정보는 내성을 개선하고 서면 동의서는 필수입니다. 피사체의 안전이 가장 중요하다. 주제는 신중하게 명확 포함 및 제외 기준을 사용하여 선택됩니다. 이 프로토콜은 잠재적 위험의 설명 및 그것들을 완화하기 위해 취해지는 단계, 금기의리스트, 사전 및 사후 절차 검사뿐만 아니라, 정확한 기관지 및 실험 기술을 포함한다.

좋은 임상 결과는 100 개 이상의 ML의 BAL 볼륨과 대부분에서 경험 한 주제, 불편 함 (표 1 참조)입니다. 이 편안하고 협력 대상을 필요로한다. 임상의, (재료) 만반의 준비를 확신하고 이해 자원 봉사쪽으로해야합니다. (미분 계수 포함) 세포 수율 간 및 내 주제의 변화를 설명하고있다. 건강한 과목에서 미분 세포 수는 일반적으로&gt; 90 % 호중구의 작은 숫자와 대 식세포 (&lt;2 %)와 림프구 (10 %)이다. 현미경 슬라이드에 원심 분리 BAL 세포는이 정보 (그림 1)을 얻었다 차등 핵 염색을 할 수 있습니다. 그림 1에서, BAL 세포를 고정하고 제조업체의 지침에 따라 Hemacolor 염색을 사용하여 염색되었습니다. 적어도 300 세포는 대 식세포에 대한 신뢰성있는 결과를 얻기 위해 계산되어야호중구와 림프구, 희귀 한 종류의 세포 500 세포. <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> 위험 </td><td> 위험 </td><td> 작성자 :이 프로토콜에 감소 </td></tr><tr><td colspan="3"> 기관지 및 BAL 1, 14의 효과 </td></tr><tr><td> 가벼운 불편 </td><td> &lt;25 % 14 # </td><td> 적절한 마취 및 진정 작용. 주제에 대한 자신감과 돌보는 방법. </td></tr><tr><td> 출혈 </td><td> &lt;1 % # </td><td> 만 코 삽관 가벼운 압력. 만약 대상이 불편하거나 축소 조리개 - 경구 삽관 대신. </td></tr><tr><td> 기관지 출혈 (객혈) </td><td> &lt;는 0.1 % × 15 </td><td> 어떤 조직 검사도 수행하지 않습니다. 기관지 동안주의 깊은 관리 - 호흡기 점막을 피하는. </td></tr><tr><td> 으로 NAUEA, 구토 및 흡인 성 폐렴 </td><td> &lt;0.02 % 14 # </td><td> 단단한 음식&gt; 4 시간의 시술 전 1 단식. 적절한 국소 마취. 절차를 수행하는 동안 Semirecumbent 위치. 조심 시술 후 관찰. </td></tr><tr><td> 열 </td><td> 0.01 14~1% 번호 16 </td><td> 염증에 관한 것으로, BAL의 최대 수집을 최소화 할 수 있습니다. 싱글 로브 BAL 만. # </td></tr><tr><td> 아픈 코 / 목 및 쉰 목소리 </td><td> &lt;25 % 14 # </td><td> 코, 목구멍과 후두 (기침을 최소화)의 적절한 국소 마취. </td></tr><tr><td> 감염 </td><td> &lt;부정 HIV에 0.1 %, HIV 양성 14, # 1 % </td><td> 표준 기관 지경 세척 절차 1. 싱글 로브 BAL 만. # 감염의 조기 인식 : 1 시간 내 임상 시험1-5일 기관지 D 후 임상 접촉. </td></tr><tr><td> 가슴 통증 / 기침 </td><td> &lt;0.2 % 14 # </td><td> 싱글 로브 BAL 만. 최대 BAL 수집. # </td></tr><tr><td colspan="3"> 약물의 효과 : 리도카인, 미다 졸람 </td></tr><tr><td> 부정맥 </td><td> * 매우 드문 </td><td rowspan="3"> 5 MG의 최대 / 사용 14 리도카인을 kg. 주입 따뜻하게 생리 식염수. # 맥박 산소 (산소 보충과 SAT 성적은&gt; 90 %), 절차 전반에 걸쳐 심장 모니터링. 벤조디아제핀 길항제 (플루 마제 닐) 바로 사용 가능합니다. </td></tr><tr><td> 방향 감각 상실 / 교반 </td><td> &lt;0.1 % † 번호 </td></tr><tr><td> 심장 호흡 억제 </td><td> * 매우 드문 </td></tr></tbody></table> * 1500 이상의 연구 과정에서 우리 그룹에 경험하지 않습니다. † Idios오히려 용량 의존적으로 반응보다 yncratic. # 1,500 연구 과정에서 우리 그룹의 경험. 표 1. 연구 BAL과 관련된 위험. 이것은 위험 또는 위험을 포함하고, 이는 설명 된 기술을 사용함으로써 감소되는 방법. 기관지 / BAL도 사용되는 의약 약물의 효과에 미치는 영향이 포함되어 있습니다. <img alt="그림 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/4345/4345fig1highres.jpg" width="500" /> 그림 1. BAL 대 식세포 및 수시 호중구를 보여주는 현미경 슬라이드. BAL 세포는 메탄올에 고정 Hemacolor 레드 (에오신 Y), 청색 (하늘빛 B)로 염색되었다.

우리는 낮은 압력 흡입을 이용하여 광섬유 기관지 내시경과 기관지 폐포 세척액에 대한 연구 방법을 설명합니다. 기법은 폐 기관지 표면에서 면역 세포를 수확하기 위해 사용된다. 국소 마취제와 가벼운 수면 마취 (미다 졸람)이 사용된다. 주제는 프로 시저 잘 경험 최소한의 부작용을 견딜.

연구를위한 기관지 폐포 세척액 (BAL), 적절한 샘플 수익률을 얻기

We describe a research technique for fiberoptic bronchoscopy with bronchoalveolar lavage (BAL) using manual hand held suction in order to remove ...

본 절차의 전반적인 목적은 안전하고 효과적인 방식으로 기관지폐포 세척술을 수행하는 것입니다. 이는 우선 명확한 선정 및 제외 기준을 사용하여 선택된 피험자의 안전, 협조 및 편안함을 확보함으로써 달성됩니다.시술 전 점검 및 관찰 또한 수행합니다. 그 후 기관지 내시경실로 이동하여 모든 장비를 점검한 뒤, 피험자에게 국소 마취제를 투여하고 의식하 진정법을 시행합니다. 다음으로 성문을 통해 삽관한 후, 기관지 내시경을 RML 내의 적절한 위치까지 진입시킵니다.이를 통해 충분한 BAL 액체 부피를 얻을 수 있습니다. 마지막으로, 부드러운 수동 흡입 장치를 사용하여 BAL 액체를 채취한 후, 즉각적인 실험실 처리를 위해 지체 없이 얼음에 담아 운반합니다. 결과적으로, 이 기법은 세포를 수집하고 생존력을 보존하여 ex vivo 배양에서 세포 성장을 촉진합니다.호흡기 및 중환자실 전문의들이 진단적 또는 치료적 이점을 얻기 위해 흔히 기관지 세척(bronchial washings) 또는 기관지폐포 세척(bronchoalveolar lavage)이라고 부르는 기존 방법들과 비교했을 때, 본 기술의 주요 장점은 주입된 액체를 부드러운 핸드헬드 흡입 방식으로 회수한다는 점입니다. 이는 회수되는 폐포액의 부피를 최대화하고 섬모 상피에 가해지는 전단력을 최소화하여 폐포액 내 세포의 구조와 기능을 보존하도록 설계되었습니다. 기관지폐포 세척 시술은 서면 동의서의 서명 및 날짜 확인을 포함하여 표준 병원 정책에 따른 적절한 시술 전후 점검을 거쳐 당일 입원 형태로 수행됩니다.피험자가 도착하면 호흡기 연구 간호사가 맞이하며, 고형식은 최소 4시간, 액체류는 2시간 동안 금식했는지 확인하는 것을 포함하여 시술 전 필요한 모든 확인 사항을 수행합니다. 피험자가 모든 요구 기준을 충족하면 병원복으로 갈아입고 혈압, 심박수 및 산소 포화도 측정을 포함한 시술 전 관찰을 진행합니다. 소구경 캐뉼라를 가급적 왼손에 삽입합니다.이는 시술 후 회복 기간이 끝날 때까지 C two에 유지됩니다. 그 후 피험자는 숙련된 호흡기 연구 기관지내시경 전문의가 상주하는 기관지내시경실로 이동합니다. 이어서 피험자에게 모니터링 장비를 부착합니다.여기에는 3-리드 ECG, 혈압계 및 펄스 옥시미터가 포함됩니다. 마취 지원은 필요하지 않습니다. 기관지내시경을 삽입하기 전 모든 자원봉사자에게 비강 캐뉼라를 적용하며, 산소 포화도가 96% 미만으로 떨어질 경우 분당 최대 4L의 산소를 공급합니다.이 단계에서 시술자는 기관지경의 시술 전 점검을 수행합니다. 여기에는 멸균 생리식염수를 흡인하여 흡인 기능이 효과적인지 확인하는 과정이 포함됩니다. 시술자가 기관지경이 최적의 상태로 작동함을 확인하면, 각각 instill agel과 Xylocaine을 도포하여 피험자의 비강과 구강 점막에 국소 마취를 실시합니다.진정이 적절하고 피험자가 요청한 경우, 적절한 용량의 midazolam을 정맥 내로 투여합니다. 마취를 포함하는 모든 절차와 마찬가지로, 적절한 역전제가 즉시 사용 가능해야 합니다. 또한, 소생 장비가 준비되어 있는지 확인하십시오.대상자의 코를 통해 기관 삽관을 시행합니다. 이것이 불가능한 경우에는 후두에 적절한 마우스 카드를 사용하는 조건으로 입을 통해 삽관할 수 있습니다. 성대를 통과한 후 4% lidocaine 4~6 mL를 사용하여 국소 마취를 실시합니다.또한, 기관분기부의 우하엽과 우중엽 분지점 또는 RML 및 RML 입구에 2% lidocaine 2 mL씩을 투여하여 점막 마취를 실시합니다. 마지막으로, 기관지경을 우중엽까지 진입시켜 가급적 내측 구역의 안전한 원위부 위치에 배치합니다. 흡인 버튼을 사용하여 윙크 테스트(wink test)를 수행함으로써, 기도 허탈을 유발할 수 있는 너무 깊은 원위부 위치에 기관지경이 놓이지 않았는지 확인합니다.데워진 멸균 생리식염수를 60 mL, 50 mL 2개, 40 mL 용량으로 각각 60 mL 주사기 4개에 미리 채워 둡니다. 피험자와 기관지경 검사자가 준비되면 기관지경 보조자가 첫 번째 식염수 주사기를 주입합니다. 기관지경 검사자가 우중엽(RML) 위치를 유지하는 동안, 보조자는 동일한 포트와 주사기를 사용하여 부드럽게 수동 흡인을 수행합니다.그 후 각 주사기를 순차적으로 사용하여 동일한 절차를 세 번 더 반복하며, 이 특정 기술에서는 최대 200 milliliters의 부피가 사용됩니다. 회수된 BAL 액체는 이미 실리콘 처리되었을 수 있는 플라스틱 용기에 조심스럽게 배출하며, 이 용기는 얼음 위에 놓여 있어야 합니다. 사전 실리콘 처리는 세포 부착을 억제하고 세포 회수율을 최대화합니다. BAL 액체는 빛에 비추었을 때 뿌옇게 보이며, 단백질과 계면활성제에 의해 형성된 표면 비누 거품이 관찰됩니다.마지막으로, 기관지경을 천천히 완전히 제거합니다. 피험자는 모니터링 하에 회복 단계로 이동하며, BAL 액체는 지체 없이 얼음에 실어 운반합니다. 즉시 처리를 위해, 호흡기 연구 간호사의 보살핌 아래 피험자가 최대 4시간 동안 회복할 수 있도록 합니다.이 시간 동안 피험자가 휴식을 취하게 하되, 시술 후 최소 60분까지는 음식물을 섭취하거나 음료를 마시지 않도록 합니다. 이는 연하 능력이 안전하다고 평가된 후에 시행하며, 흡인의 위험을 줄이기 위함입니다. 시술 후 관찰 사항을 모니터링하고 기록합니다.퇴원 전 임상 검사를 실시합니다. 피험자에게는 일반적인 부작용에 대해 안내하고, 중대한 부작용이 발생할 경우에 대비하여 연락처를 제공합니다. 시술 후 1~5일 사이에 의사 또는 간호사가 피험자와 추적 관찰 진료를 수행합니다.이는 전화 또는 대면으로 진행될 수 있습니다. 연구실에 도착하면, 가능한 한 모든 조작을 젖은 얼음 위에서 수행하십시오.먼저, 기관지폐포 세척액의 부피를 기록합니다. 그 다음, 멸균 거즈 스왑을 두 겹으로 겹쳐 액체를 여과하여 점액 마개를 제거하고, 여과액을 멸균 50 milliliters 원심분리 튜브에 수집합니다. 4 °C에서 500 G로 5~10분 동안 원심분리하여 세포를 펠렛화합니다.상층액을 제거하고 50 milliliters의 차가운 생리식염수로 세척합니다. 원심분리를 반복합니다. 다시 한번, 적절한 부피의 배양액에 세포를 재부유시킵니다.일반적으로 2 mL 정도면 계수를 위한 적절한 세포 밀도를 얻을 수 있습니다. 그 다음 표준 절차에 따라 혈구계수기(hemocytometer)와 trypan blue를 사용하여 세포 수를 측정하고, 적절한 부피의 배지를 추가하여 세포 현탁액의 밀도를 1×10⁶ cells/mL로 조정합니다. 그런 다음 24웰 플레이트의 각 웰에 세포 현탁액 1 mL를 분주합니다.림프구 실험을 위해 대식세포가 부착될 수 있도록 웰 플레이트의 세포를 37 °C에서 3시간 동안 배양합니다. 3시간의 배양 후, 배양액을 피펫으로 부드럽게 세 번 위아래로 섞어 수집합니다. 이 배양액에는 림프구와 비부착 대식세포가 포함되어 있으며, 이를 통해 림프구 기능을 평가할 수 있습니다.또한 대식세포 연구를 위한 추가 정제 단계에 사용할 수도 있습니다. 3시간의 배양 후, 배지를 조심스럽게 흡입하여 제거하고 항생제가 포함되지 않은 따뜻한 신선한 배지로 교체합니다. 이때 대식세포는 조직 배양 플레이트에 부착된 상태입니다. BAL 세포는 thermo shandin cyto centrifuge를 사용하여 현미경 슬라이드 위에 원심 분리하였으며, 세포 유형을 확인하기 위해 차등 핵 염색법으로 염색하였습니다.대부분의 세포는 M으로 표시된 세포와 같은 대식세포이며, 간혹 N으로 표시된 호중구와 L로 표시된 림프구가 관찰됩니다. 이 영상을 시청한 후, 여러분은 이 기술을 사용하여 연구 목적으로 기관지 내시경 검사 및 세척을 안전하고 효과적으로 수행하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 특히 혀 뿌리와 구강 인두 후벽의 적절한 마취, 시술 전 기관지 내시경의 효과적인 흡인 기능 및 공기 누출 여부 확인, 그리고 가장 적절한 우중엽 아분절 분지 선택 등이 포함됩니다. 숙련된 시술자는 부작용을 최소화하면서 피험자로부터 100 mL 이상의 세척액을 일관되게 수집할 수 있어야 합니다.

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Medicine

의학

출처: Venuprasad, K., et al. 기도 염증을 연구하기 위한 마우스 모델에서 헤모필루스 인플루엔자의 기관내 투여. J. Vis. 경험. (2016년)이 비디오는 다운스트림 분석을 위해 유형화할 수 없는 헤모필루스 인플루엔자 에 감염된 안락사된 마우스로부터 기관지폐포 세척액을 수집하고 처리하는 방법을 보여줍니다.

유형이 불가능한 헤모필루스 인플루엔자에 감염된 마우스 모델의 기관지폐포 세척액 수집

이 비디오는 유세포 분석을 사용하여 기관지폐포 세척액에서 다양한 면역 세포를 식별하고 계수하는 방법을 보여줍니다. 초기에는 생존 염료를 사용하여 단일 면역 세포를 식별한 다음 표면 마커 단백질을 차등 염색하여 각 세포 유형을 정확하게 계수할 수 있습니다.

유세포 분석에 의한 Bronchoalveolar Lavage Fluid에서 면역 세포의 식별 및 계수

병원균 감염에 대한 숙주 면역 반응은 긴밀하게 규제 과정이다. 생쥐의 리포 다당류 폐 노광 모델을 이용해서, 그 질병 병인과 관련된 복잡한 메커니즘은 고해상도 평가를 수행하는 것이 가능하다.

마우스의 호스트 면역 반응을 평가하기 위해 구인두 기관 내 PAMP 관리 및 폐포의 활용

우리는 급성 폐 손상을 모델링하기 위해, 분무에 의해 에어로졸 리포 폴리 사카 라이드에 도전하여 호중구 폐 염증을 유도하는 방법을 설명합니다. 또한, 폐 격리, 기관 삽관 및 기관지 세척액에 대한 기본적인 수술 기법도 설명되어 있습니다.

에어로졸 리포 폴리 사카 라이드를 사용하여 생성 폐 호중구하는 방법

이 문서는 실험 조건에서 소 폐 기관지 내시경 기술, 즉 bronchoscopically 안내 접종, 기관지 세척액, 기관지 솔질하고, 기관지 폐 생검을 설명합니다.

생물 의학 연구에 소 폐 : 시각적으로 유도 기관지, Intrabronchial 접종 및<em&gt; 생체</em&gt; 샘플링 기법

폐의 건강 상태는 폐의 세기관지에있는 면역 세포의 유형과 수에 의해 반영됩니다. 우리는 비 흡착성 세포와 쥐의 하부 호흡기에서 용해되는 요소를 분리하고 연구 할 수있는 기관지 폐포 세척 기술에 대해 설명합니다.

쥐 폐의 기관지 폐포 세척은 염증성 세포의 침윤을 분석하는

여기, 두 세포 외 기 격리 프로토콜, 한 원심 분리 및 밀도 그라데이션 원심 분리, extracellular 소포 murine bronchoalveolar 게 액체 샘플에서 분리 된 ultracentrifugation 설명 합니다. 두 방법으로 murine bronchoalveolar 게 액체에서 파생 된 세포 외 소포는 계량 하 고 특징.

Extracellular 소포 Murine Bronchoalveolar 게 유체는 한 원심 분리 기법을 사용 하 여에서 격리

우리는 폐 HIV 저수지를 평가하기 위하여 항레트로바이러스 치료에 만성 HIV 에 감염된 개별에게서 기관지 정맥 세척 액 및 일치한 말초 혈액을 처리하는 방법을 기술합니다. 이러한 방법은 초과민성 중합효소 연쇄 반응에 의한 면역phenotyping 및 HIV DNA/RNA 정량화에 사용될 수 있는 고순도 CD4 T 세포 및 폐포 대식세포의 획득을 초래한다.

기관지 충혈 유체 및 폐포 대식세포 및 CD4+ T 세포 면역체노티핑 및 HIV 저수지 평가를 위한 일치하는 혈액 처리

이 원고는 오존에 노출 여부를 결정하기위한 프로토콜을 설명, 기준 대기 오염 물질, 생체 내에서 폐포 대식세포 efferocysis를 손상. 이 프로토콜은 일반적으로 사용되는 시약 및 기술을 활용하고 폐 포상 손상의 여러 모델에 적응하여 폐포 대식세포 효능에 미치는 영향을 결정할 수 있습니다.

오존 노출 에 따른 폐포 대식세포 비세포증의 생체내 평가

이 원고는 생쥐에서 폐렴의 전염성 모델을 확립하고 손상 해결의 각각의 특성과 함께 박테리아 성장 및 기관 내 점안 방법을 설명합니다. 고차원 유세포 분석을 사용하여 면역 환경을 평가하는 새로운 접근 방식도 설명합니다.

폐렴의 해결을 평가하기 위한 실험모델

배우세요 기관지폐포세척술(BAL)을 안전하고 효과적으로 수행하는 방법을. 저압 흡입을 사용하여 폐에서 면역 세포를 채취하고 세포 생존율을 유지하는 이 기술은 호흡기 및 면역학 연구에 적합합니다.

연구를위한 기관지 폐포 세척액 (BAL), 적절한 샘플 수익률을 얻기

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