Name: 치료의 척추 배달을위한 수술 기법 : 괴팅겐 Minipigs의 절차의 데모 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-07T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: 학습하세요 척수 내 생물학적 치료제의 안전하고 정확한 전달을 위한 외과적 기법을 괴팅겐 미니피그를 이용하여 시연합니다. 이 방법은 유연한 카뉼라와 안정화 플랫폼을 사용하여 정확한 표적화와 안전성을 보장합니다.

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우리는 동물 치료 동물 자원 직원의에 모리 대학 본부 감사드립니다. 자금 출처는 다음과 같습니다 ALS 협회, 국방부, 그리고 Neuralstem, 주식회사

1. 동물 사용 여기 증명 절차에 모리 대학 기관 동물 케어 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다. 약 15~20킬로그램 무게 여성 괴팅겐의 minipigs이 사용됩니다. 2. 마취 동물 수술하기 전에 약 12​​ 시간을 금식하고 있습니다. 동물 진정 작용과 마취 유도는 근육 케타민 (35 MG / kg), Acepromazine (1.1 밀리그램 / kg) 및 아트로핀 (0.04 밀리그램 / kg)의 칵테일로 구성되어 있습니다. 동물 그런 다음 intubated와 산소와 1-3% isoflurane 전신 마취에 유지됩니다. 이 시점에서, 다시 각 동물의 머리는 면도 있습니다. 마취 심도는 수의학 직원에 의해 모니터링된다. , interdigital 각막과 palpebral 반사뿐만 아니라, 심장, 호흡, 펄스 oximetry, 간접 / 직접 혈압, 최종 갯벌 탄소 이산화탄소 측정 및 근육 톤 / 유해 자극에 대한 반응의 부재는 깊이를 모니터링하는 데 사용됩니다<html> 마취의. 3. 위치 동물은 수술실로 이동하고 잭슨 척추 수술 테이블에 환자 위치를 모방하기위한 프레임 사용자 정의에 발생하기 쉬운 위치로 배치됩니다. 프레임은 복부와 가슴 못하여 경막 외 정맥 출혈 (그림 1)에 압력을 최소화 따라서, 복부 무료 교수형 할 수 있으며, 동물의 가슴과 골반 아래 위치하게된다 조절 slings을 활용합니다. 프레임은 또한 절차 1 척추의 외부 고정을 제공합니다. 또한, 동물 몸의 온도와 유체 관리 및 수술 중에 필요한 약물 전달을위한 catheterized 한계 귀 정맥을 유지하기 위해 온수 다시 순환 패드에 게재됩니다. 마지막으로, 수술 필드가 알코올 및 Chlorhexadine 또는 Betadine 솔루션을 준비하고 있으며, 수술 커튼은 수술 현장에 배치되어 있습니다. 르 &quot;&gt; 4. Laminectomy 약 10-15센티미터 피부 절개가 수행되고 paraspinal의 근육은 양자 척추를 해부하고 있습니다. 다음 등쪽의 다중 레벨 laminectomy이 수행됩니다. 세 척추 놓인 C3-C5 또는 L2-L4 세그먼트의 얇은 판과 spinous 프로세스 rongeurs과 수술 드릴을 사용하여 제거됩니다. 5. 척수 데릭의 위치 우리는 척수 데릭 척수 2-5로 (유전자 및 세포) 요법의 전달을위한 장치 전화하십시오. 이 장치의 설계 및 진화에 대한 자세한 논의는 라일리 외., 2011에서 찾을 수 있습니다. 4 환자에 장치를 확보하려면, percutaneous 게시물은 기본 절개 위 아래 1cm 피부 절개를 통해 위치와 주요 절개 위 아래의 얇은 판에 장착되어 있습니다. 다음 두 개의 통합 견인기는 강한에 부착된다절개 사이트 위 아래 UR percutaneous는 게시물 laminectomy를 마쳤습니다 척추의 영역을 표시합니다. 6. 경질 막 개관 우드 슨 치과 도구의 도움과 11 블레이드로 2.5 cm의 절개는 척수를 노출 경질을 통해 이루어집니다. 경질은 4-0 Nurolon의 봉합을 사용하여 pial 층에서 떨어져 반영하고 깊은 paraspinal 근육에 고정된다. 수술 패티는 개방의 뱃 부리 장식이있는과 꼬리 극단에 배치됩니다. 이러한 뇌척수 흐름에 일부 장벽을 제공하고 또한 코드를 손상시키지 않고 스폰지를 삽입 할 수있는 의사의 안전한 대상을 제공합니다. 인간에서 수술 현미경 배율 아래에있는 pial 표면은이 시점에서 해부하고 있습니다. 기술적 인 제한으로 인해이 절차가 필요이나 동물에 적합하지 않을 수 있습니다. 7. 척추 주사 및 추가 주입을위한 척수 데릭의 측면 변위에스 주사 직전에, Methylprednisolone (125 MG, IV)의 bolus이 붓기 척수를 방지하기 위해 제공됩니다. 이 시점에서, 플랫폼 레일 시스템은 장착되어 있으며 측면 레일은 적절한 길이에 맞게 조정됩니다. 곤돌라는 2 개의 바에 최고​​로드와 Z 드라이브는 보편적 공동에 장착되어 있습니다. 다음로드의 캐뉼라는 microdrive에 배치됩니다. microinjection 플랫폼에서 범용 공동을 사용하여 코로나와 화살 각도는 척추 주사의 캐뉼라의 위치를​​ 따라 표면에 대해 수직 궤적을 보장하기 위해 조정됩니다. 바늘은 등쪽 루트 항목 영역 (DREZ)에 따라 중간 위치입니다. DREZ는 3.5X 수술 루페 배율에서 확인하고 지점 코드 표면에 수직 궤적 &lt;medially 1mm에 침투하고 있습니다. 인간에 ​​미리 수술 MRI는 기본 평가 O를 제공합니다수술 계획을위한 F 척추 크기. 또한, 척추의 두께는 복부 뿔의 대상 깊이를 결정하기 위해 측정됩니다. 정지는 pial 접촉에서 4 mm의 깊이에 주입합니다. ultem 플라스틱으로 만든 플랜지 원하는보다 훨씬 발전에서 바늘을 방지하기 위해 피아 표면에 스토퍼 역할을합니다. 바늘 끝이 목표 지점에 위치하고되면 단단한 금속 바깥 쪽 슬리브는 유연한 튜브가 노출 남겨두고 체포된다. 주입이 완료되면, 바늘은 캐뉼라 주입 기관을 백업 세포 역류를 방지하기 위해 추가 1 분에 장소에 남아 있습니다. 케어가 약간 microdrive laterality 또는 rostro - caudally 중 하나를 조정하여 표면 vasculature을 피하기 위해 이루어집니다. 침투 사이트의 일부 출혈이 발생할 수 있습니다. 이러한 출혈이 발생하는 경우, 마이크로 패티는 출혈이 주사 부위에 배치되어 있으며 흡입은 캐뉼라 penetr의 피를 등심하도록 적용됩니다ation 사이트 및 코드를 축적되지 않도록합니다. 이 안정적으로 응고하는 혈액 할 수 있습니다. 직접 압력이 그대로 소작을 피할 수 있습니다. 바늘 제거 후, ​​stereotaxic 장치는 척추의 등 표면에 보이는 혈관을 피하기 위해 필요한 2 또는 4 mm 또는로 구분하여 rostro - 꼬리 축을 따라 다음 대상 사이트로 이전합니다. 주어진 연구에서 제안으로이 과정은 많은 시간을 반복하고 있습니다. 8. 플로팅 정맥 좁은 직경의 사용자 지정 주입 캐뉼라는 주사에 사용됩니다. 캐뉼라는 가변 길이의 30 게이지 유연한 silastic 튜브에 연결 고정 길이의 30 게이지 바늘 beveled로 구성되어 있습니다. 말단부는 microinjector 펌프에 부착되어있는 해밀턴 luer 자물쇠가 장착되어 있습니다. 근위 silastic 튜브는 24 게이지 경질의 외부 캐뉼라 내 ensheathed되는 주입 바늘 플랜지의 근위 끝 석. 이 플랜지 두 석외부 캐뉼라하고 주사 바늘에 대한 깊이 정류장 역할을합니다. 각각의 주입 들어, 치료 중지의 적절한 볼륨으로 주입하는 분 당 5 μl의 비율로 미리 교정 MINJ-PD microINJECTOR 펌프 (Tritech 연구, 주식회사, 로스 앤젤레스, CA)를 사용하여. 9. 폐쇄 모든 주사이 완료되면 척추 데릭은 부드럽게 제거하고 절개은 네 층으로 폐쇄됩니다. 경질은 방수 방식으로, 4.0 Nurolon 스티치를 사용하여 문을 닫습니다. 0 Vicryl의 봉합이 깊은 근육 층에 사용됩니다. 근막은 다음 방수 방식도 0 Vicryl의 봉합과 함께 폐쇄됩니다. 피부 층은 드디어 실행 스티치와 함께, 2.0 Vicryl으로 문을 닫습니다. 피부 폐쇄는 3-0 나일론 봉합사를 사용하여 완료됩니다. 10. 복구 및 통증 관리 동물은 2 시간 다음 마취 복구를 위해 extubated하고 모니터링합니다. 다음, 동물은 개별 C으로 전송됩니다연령과 식품 소비, 깨끗하게 함, 그리고 방뇨 최소 하루에 한 번씩 모니터. 통증 관리를 들어, transdermal 펜타 패치 (75 mcg)는 수술 진통제 3 일 동안 동물의 뒷면에 잘라 있습니다. 또한, Buprenorphine는 (0.05 밀리그램 / kg, BID, IM)는 최대 사후 operatively 3 일에 제공 될 수 있습니다. 11. 결과 및 대표 성과 임상과 행동 관찰은 연구 설계에 따라 엔드 포인트까지 수술 전에 수행 한 후 일 1 일까지 7 일에 녹화하고 주 단위로되어 있습니다. 행동 데이터는 이전 6에 설명 된대로 신경 병적 상태를 평가하기 위해 수집됩니다. 감각 기능은 전면과 두 다리의 발끝에 기계적 자극에 탈퇴 응답의 유무에 의해 평가된다. -; 1 - 두 다리에 지각 tonus, 약간의 m 마비, 아니 운동 0 : 모터 기능은 Tarlov 점수 (표 1) 다음ovement, 2 - 두 다리의 운동 만 앉거나 서서 할 수없는, 3 - 서서하지만 ataxic 짧은 기간 동안 도보로하는 능력, 4 - 전체 복구, 정상적인 운동 기능. 절차의 안전은 미리 수술 기본으로 돌아가려면 동물의 능력에 의해 결정됩니다. 과도 신경 결손은 주로 동물의 품종과 절차에 따라 몇 가지 변화 (주사 수, 다른 매개 변수들)과 수술 일 1과 7 사이에 해결됩니다. 영구 병적는 동물 IACUC 기본 끝점 (그림 2)에 도달 때까지 해결되지 않는 지속적인 신경 결손에 의해 정의됩니다.

<ol><li>Usvald, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+dosing+regimen+and+reproducibility+of+intraspinal+grafting+of+human+spinal+stem+cells+in+immunosuppressed+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Analysis of dosing regimen and reproducibility of intraspinal grafting of human spinal stem cells in immunosuppressed minipigs.</a> Cell Transplant. 19, 1103-1122 (2010).</li>
<li>Riley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+spinal+cord+therapeutics+delivery%3A+stabilized+platform+and+microelectrode+recording+guidance+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Stereotact.+Funct.+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Targeted spinal cord therapeutics delivery: stabilized platform and microelectrode recording guidance validation.</a> Stereotact. Funct. Neurosurg. 86, 67-74 (2008).</li>
<li>Federici, T., Riley, J., Park, J., Bain, M., Boulis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+safety+validation+of+a+stabilized+viral+vector+direct+injection+approach+to+the+cervical+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Transl.+Sci%22%5BJournal%5D)">Preclinical safety validation of a stabilized viral vector direct injection approach to the cervical spinal cord.</a> Clin. Transl. Sci. 2, 165-167 (2009).</li>
<li>Riley, J. P., Raore, B., Taub, J. S., Federici, T., Boulis, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platform+and+Cannula+Design+Improvements+for+Spinal+Cord+Therapeutics+Delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Platform and Cannula Design Improvements for Spinal Cord Therapeutics Delivery.</a> Neurosurgery. 69, 147-154 (2011).</li>
<li>Riley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cervical+spinal+cord+therapeutics+delivery%3A+preclinical+safety+validation+of+a+stabilized+microinjection+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Cervical spinal cord therapeutics delivery: preclinical safety validation of a stabilized microinjection platform.</a> Neurosurgery. 65, 754-761 (2009).</li>
<li>Raore, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cervical+multilevel+intraspinal+stem+cell+therapy%3A+assessment+of+surgical+risks+in+Gottingen+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22Spine%22%5BJournal%5D)">Cervical multilevel intraspinal stem cell therapy: assessment of surgical risks in Gottingen minipigs.</a> Spine. 36, 164-171 (2011).</li>
<li>Boulis, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translational+stem+cell+therapy+for+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Translational stem cell therapy for amyotrophic lateral sclerosis.</a> Nat. Rev. Neurol. , (2011).</li>
<li>Riley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraspinal+Stem+Cell+Transplantation+in+ALS%3A+A+Phase+I+Safety+Trial%2C+Technical+Note+%26+Interim+Safety+Outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Intraspinal Stem Cell Transplantation in ALS: A Phase I Safety Trial, Technical Note & Interim Safety Outcomes.</a> Neurosurgery. 71 (2), 405-416 (2012).</li>
<li>Boulis, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lumbar+intraspinal+injection+of+neural+stem+cells+in+patients+with+ALS%3A+results+of+a+Phase+I+trial+in+12+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Lumbar intraspinal injection of neural stem cells in patients with ALS: results of a Phase I trial in 12 patients.</a> Stem Cells. 30 (6), 1144-1151 (2012).</li>
</ol>

박사 Boulis는 인간 척추의 안전하고 정확한 주사를 사용하려면 장치의 발명가이다. Neuralstem, Inc는이 기술에 대한 독점적 인 사용권을 구입했다. 박사 Boulis이 요금의 invento의 점유율을받은이 기술의 배포에 대한 로열티 지불에 대한 권리가 있습니다. 다른 저자 공개는 아무 상관이 없습니다.

인간 7-9에 설명 된 기술을 계속 진행하기 위해 승인에도 불구하고, 중요한 질문은 성공 척추 요법에 대한 순서로 답변을 할 수 남아 있습니다. intraparenchymal 주사로 척추 허용의 엄격한 이해, 퇴행성 demyelinating 및 외상성 척추 질환에 대한 치료를 개발하는 실험의 계획 및 실행을 사용하도록 설정해야합니다. 현재 대형 포유류의 척추가 과도하고 영구적 인 질병없이 용인 할 수있는 주사의 수 더 명확한 이해가 없습니다. 마찬가지로, 주사의 간격은 병적에 영향을 미칠 가능성이 높습니다. 또한, 매크로 (예를 들면, 환기 관련 또는 부주의 환자의 움직임)과 미세 (즉, 환기 및 심장 맥박이 모두 진동) 척추의 움직임은 분사 동안 척수 위험을 가지고 있습니다. 큰 동물 모델에서 질병에 대한 임계 값에 대한 이해가 도움이 될모든 척추 치료 프로그램에 계산을 주입. 우리 병진 척추 이식 연구소는 현재 척추 응용 프로그램에 대한 재판을 디자인하는 ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 장비의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 (선택 사항) </td></tr><tr><td> 척추 데릭 </td><td> Neuralstem 주식회사 </td><td></td><td> Neuralstem, Inc는이 기술에 독점적 인 라이센스를 구입 한 </td></tr><tr><td> MINJ-PD Microinjector 펌프 </td><td> Tritech 연구 주식회사 </td><td></td><td> 이 특정 응용 프로그램에 대한 사용자 정의 </td></tr><tr><td> 플로팅 정맥 </td><td> Neuralstem 주식회사 </td><td></td><td> 이 특정 응용 프로그램에 대한 사용자 정의 디자인 </td></tr></tbody></table>

치료의 척추 배달을위한 수술 기법 : 괴팅겐 minipigs의 절차의 데모

Surgical Technique for Spinal Cord Delivery of Therapies: Demonstration of Procedure in Gottingen Minipigs

이것은 척추에 (유전자 및 세포) 요법의 제공을위한 수술 기법 및 장치의 조합의 소형 시각적 설명입니다. 기술은 동물에서 증명되는 동안 절차는 FDA가 승인 한 현재 ALS 환자의 척수 코드에 줄기 세포 이식에 사용되는 것입니다. FDA가 높은 특징을 쥐 모델에서 치료 효과에 대한 증명 원리 데이터를 인식하지만, 큰 동물의 사용은 수술의 결합, 장치 및 인간의 사용에 대한 최종 치료의 안전을 확인을위한 중요 간주됩니다 . 크기, 해부학, 그리고 돼지의 척추와 척추의 일반적인 문제는 더 나은 모델 인간을로 인정 받고 있습니다. 또한, 노출 및 조작 척수를뿐만 아니라 돼지에 상처를 폐쇄의 수술 과정은 인간의 거의 구분할 수 있습니다. 우리는 건강한 돼지 모델 criti를 나타냅니다 생각절차 안전 연구에 칼 첫 걸음.

<table border="1"><tbody><tr><td colspan="2"> Tarlov 평가 점수 </td></tr><tr><td> 0 </td><td> 마비, 아니 운동 </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 두 다리에 지각 tonus, 약간의 운동 </td></tr><tr><td> 이 </td><td> 두 다리의 운동 만 앉거나 서서 할 수 없습니다 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 하지만 ataxic 짧은 기간 동안을 서서 걸어 할 수있는 능력 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 완전한 복구, 정상적인 운동 기능 </td></tr></tbody></table> 표 1. Tarlov 점수. 신경 병적 상태 및 복구는 동물의 운동 기능 점수를하여 평가된다. <p...

척수로 (유전자 및 세포) 요법의 전달에 사용되는 수술 기술과 장치의 짧은 영상 설명입니다. 이 기술은 동물에 보여하지만, 완전히 번역 현재 인간 응용 프로그램에 사용되는입니다.

치료의 척추 배달을위한 수술 기법 : 괴팅겐 Minipigs의 절차의 데모

본 영상은 척수 내로 (유전자 및 세포) 치료제를 전달하기 위한 수술 기법과 장치의 결합에 관한 간결한 시각적 설명입니다.

이 절차의 전반적인 목표는 생물학적 치료제를 척수 내의 특정 관심 괄질 부위에 안전하게 전달하고 정확하게 표적화하는 것입니다. 이는 먼저 동물을 수술에 맞게 준비함으로써 수행됩니다. 다음으로, 척추궁절제술을 시행하고 척수 고정 장치(spinal derrick)를 조립합니다.그 다음 경막을 절개하고 척수 내 주사를 실시합니다. 마지막으로 경막, 근육, 근막 및 피부를 봉합합니다. 최종적으로 행동 데이터와 타겟팅 데이터 수집을 통해 안전성 및 타겟팅 결과를 얻을 수 있습니다.본 원고에서 보여주는 기술은 척수 내로 생물학적 페이로드를 전달하기 위한 유연한 캐뉼라 및 안정화 플랫폼의 사용법입니다. 이 접근법의 장점은 전달의 정확성을 확보할 수 있다는 점이며, 이는 척수의 가동성으로 인해 적용하기 어려운 표준 정위 고정 기술을 대체할 수 있게 합니다. 정확성 외에도, 이 기술은 환자의 움직임에 대비한 안전 마진을 제공합니다.이 사례에서 고정 플랫폼 덕분에 돼지의 척수 손상이 발생하지 않으며, 카뉼라의 유연성으로 인해 호흡 및 심장 박동 중에 척수관 내에서 발생하는 척수의 움직임이 척수에 추가적인 손상을 주지 않습니다. 미니 돼지를 12시간 동안 금식시킨 후 케타민, ace, 프로마진 및 아트로핀을 근육 내 주사하여 진정시키고, 동물에게 기관 내 삽관을 실시한 후 산소와 1~3% isof fluorine으로 유지하십시오. 서면 프로토콜에 명시된 대로 마취 깊이를 모니터링하십시오.동물의 머리와 등 부분의 털을 깎습니다. 진정된 동물을 수술실로 옮긴 후, Jackson 척추 수술대의 위치를 모방하여 제작된 맞춤형 프레임 위에 복와위(prone position)로 배치합니다. 이 프레임은 동물의 가슴과 골반 아래에 배치되는 조절 가능한 슬링을 사용하여 복부가 자유롭게 매달리게 함으로써, 복부와 가슴에 가해지는 압력을 최소화하고 결과적으로 경막외 정맥 출혈을 줄여줍니다.해당 프레임은 척추의 외부 고정 장치 역할도 수행합니다. 실험 절차를 위해, 체온 유지를 위해 동물을 가열 순환 패드 위에 놓습니다. 다음으로, 수술 중 수액 투여 및 약물 전달을 위해 귀 주변 정맥 카테터를 삽입합니다.그런 다음 알코올과 클로르헥시딘 또는 베타딘 용액으로 수술 부위를 소독하고 수술 포를 덮습니다. 피부를 10~15cm 절개하고 단극 전기소작기를 사용하여 척추 주변 근육을 양측으로 박리합니다. 이어서 Rongeurs와 수술용 드릴을 사용하여 극돌기를 제거함으로써 등쪽 다분절 척추후궁절제술을 시작하고, C3~C5 또는 L2~L4 분절 상부의 척추후궁절개술을 시행합니다.스파이널 데릭(spinal Derrick)은 척수 내로 유전자 및 세포 치료제를 전달하기 위해 설계된 장치입니다. 장치를 환자에게 고정하려면 주 절개창의 위아래로 1 cm 크기의 피부 절개를 실시하십시오. 절개창을 통해 경피성 포스트를 삽입하고 이를 척추 후궁(lamina)에 장착하여 필요한 척수 부위를 노출시킨 후 척추 후궁 절제술을 완료하십시오. 일체형 리트랙터 블레이드를 삽입하고 이를 데릭에 부착하십시오.극돌기를 위쪽으로 당기면서 조직을 견인합니다. 극간인대와 황색인대를 절제하고 척추궁 절제술을 완료합니다. 캐뉼라는 30게이지 바늘과 30게이지 탄성 튜브, 그리고 하나의 외부 가동형 시스(sheath)와 하나의 내부 고정형 시스로 구성된 두 개의 금속 시스로 이루어져 있습니다.마이크로 인젝터 펌프에 연결된 Hamilton 루어 락을 사용하며, 주사 바늘 플랜지와 시스의 근위단에 위치하는 24 gauge 외강 캐뉼라를 원위단에 장착하여 척수를 노출시키기 위해 근위단을 처리합니다. 먼저, methyl prednisone을 일시 투여(bolus)합니다. 그 다음, 경막을 척수에서 들어 올리기 위해 조심스럽게 배치합니다.Woodson 치과용 도구와 11번 메스 날을 사용하여 경막에 2.5 centimeter 절개창을 만듭니다. 그다음 4-0 nulon 봉합사를 사용하여 경막을 박리층으로부터 젖히고 이를 심층 척추 주변 근육에 고정합니다. 척수 주변에 수술용 패티를 배치합니다.그런 다음 플랫폼 레일 시스템의 상단을 먼저 부착하고, 곤돌라를 두 개의 바 위에 올린 뒤 유니버설 조인트에 Z 드라이브를 장착합니다. 다음으로, 캐뉼라가 장착된 상태로 마이크로 드라이브에 배치하고 마이크로 주입 플랫폼의 유니버설 조인트를 사용하여 관상면 및 시상면 각도를 조절하여, 캐뉼라 배치 시 척수 주입 표면에 수직인 궤적을 확보합니다. 그런 다음 바늘을 dorsal root entry zone 또는 dres의 내측에 위치시키고, 유연한 튜빙만 노출되도록 단단한 금속 외피 슬리브를 위로 당겨 올립니다.사전 보정된 마이크로 인젝터 펌프를 사용하여 표적 부위에 주입합니다. 그 다음, 캐뉼라 주입 경로를 통해 세포가 역류하는 것을 방지하기 위해 바늘을 1분 동안 더 그대로 둡니다. 바늘을 제거한 후, 척수 등쪽 표면의 가시적인 혈관을 피하기 위해 吻측-미측(rostral-caudal) 축을 따라 2~4mm 떨어진 다음 표적 부위로 정위 고정 장치를 이동시킵니다.척수 고정 장치를 조심스럽게 제거한 후, 4-0 neural suture를 사용하여 경막을 수밀 방식으로 봉합합니다. 심층 근육층과 근막층을 Vicryl 봉합사로 봉합한 후, 3-0 nylon 봉합사를 사용하여 피부를 봉합합니다. 마취에서 회복되면 기관 삽관 튜브를 제거하고 2시간 동안 동물을 모니터링합니다. 수술 후 통증 완화를 위해 transdermal fentanyl 패치를 동물의 등에 3일 동안 부착합니다.또한, 필요한 경우 수술 후 최대 3일 동안 부프레노르핀을 투여하십시오. 그런 다음 동물을 개별 케이지로 옮기고 최소 하루에 한 번씩 관찰하십시오. 신경학적 이환율을 평가하기 위해 음식 섭취, 배변 및 미세 영양 행동 데이터를 수집합니다.이전에 기술한 바와 같이, 시술의 안전성은 동물이 수술 전 기저 상태로 회복되는 능력에 의해 결정됩니다. 일시적인 신경학적 결손은 품종 및 시술 방법에 따라 일부 차이가 있을 수 있으나, 대부분 수술 후 1일에서 7일 사이에 해소되어야 합니다. 영구적인 이환도는 본 시술 후 동물이 IACUC 기본 종료 시점에 도달할 때까지 해소되지 않는 지속적인 신경학적 결손으로 정의됩니다.세포 생존력, 세포 이동 및 주입 정확도와 같은 중요한 데이터를 확인하기 위해 면역화학법과 같은 다른 방법들을 사용할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

과학에 국내 및 미니어처 돼지의 사용은 최근 몇 년 동안 크게 증가하고 있습니다. 삽관법, transurethral 방광 catheterization, 대퇴 동맥 및 정맥 catheterization뿐만 아니라 transcardial 재관류를 수행하는 방법을 시연함으로써, 우리는 더 이상 생명 의학 연구에 괴팅겐 minipigs의 가치를 높이는 것을 목표로하고 있습니다.

괴팅겐 Minipig의 기본 외과 기술 : 삽관법, 방광의 Catheterization, 대퇴 선박 Catheterization, 그리고 Transcardial 재관류

출처: Unger, M. D., et al., 돼지의 요추 등근 신경절 접근 및 주사를 위한 추궁 절개술. J. Vis. 경험. (2017년)이 비디오는 대류 강화 전달을 사용하여 표적 신경 치료 전달을 위해 요추 후근 신경절에 접근하기 위해 마취된 돼지의 추궁 절개술 절차를 보여줍니다.

돼지 모델에서 요추 등근 신경절에 표적 주입을 위한 추궁 절개술

이 비디오는 미니피그에서 부드러운 피질 검사 배열의 이식과 장기 피질 기록을 보여줍니다. 이 연구는 미니피그의 청각 피질에 배열을 외과적으로 이식하고 기준선 및 소리 자극으로 유발된 뉴런 활동 전위를 모두 기록하는 데 필요한 단계를 간략하게 설명합니다.

Minipigs의 피질 전기생리학 기록을 위한 소프트 전기 피질 판독 어레이의 경막하 이식

자가조립 펩타이드(SAP)와 신경전구세포(NPC)를 성장 인자와 함께 사용하여 경추 척수 손상을 치료하는 것은 재생과 회복을 촉진하는 유망한 접근 방식입니다. 경추 SCI의 타박상/압박 동맥류 클립 랫 모델과 수액 주입 및 NPC 이식을 포함하는 복합 치료가 확립되었습니다.

실험 경추 척수 손상의 신경 전구체 세포 및 자기 조립 펩티드의 시너지 사용

척수 손상은 심각한 이환율과 사망률이 높은 원인 외상 조건이다. 본 연구에서 우리는 구체적으로 신경 줄기 세포를 이식 하였다 마우스 척수 손상의 타박상 모델을 설명한다.

척수 손상의 실험 Contusive 모델에서 신경 줄기 세포 이식

여기에서는 생체 내 돼지 허리 받침 모델을 사용하여 경정맥 나사를 평가하는 방법을 소개합니다.

수술 용 나사를 이용한 마취, 수술 및 수확 방법<em&gt; In Vivo</em&gt; 돼지의 허리 척추 모델

척수 미세 순환은 척수 손상에 중추적 인 역할을합니다. 대부분의 방법은 미세 순환 표적 치료의 발달을 위해 필수적인 척수 미세 순환의 실시간 평가를 허용하지 않습니다. 여기에서, 우리는 허혈 / 재퍼퓨전의 큰 동물 모델에서 레이저 도플러 - 흐름 바늘 프로브를 사용하여 프로토콜을 제안한다.

허혈/재관류의 돼지 모델에서 척수 미세 퍼퍼퓨전의 실시간 평가

여기에서는 후궁 절제술을 제거하는 쥐의 개방성 척수 손상을 모델링하는 새롭고 빠른 기술에 대해 설명합니다. 측면 반절부는 현미경을 통해 보면서 수행됩니다. 이 기술은 다재다능하며 다른 동물의 척수의 경추, 흉부 및 요추 영역에도 사용할 수 있습니다.

쥐의 개방성 척수 손상 모델링을 위한 최소 침습적이고 빠른 척수 측면 반절제 기술

최소 침습 기술과 간단한 실험실 장치는 실험 동물에 대한 수술 손상을 줄이고 해부학적 형태 유지를 허용하여 척수 손상 모델의 재현성을 향상시킵니다. 이 방법은 신뢰할 수있는 결과와 재현 가능한 절차가 질병 배상 메커니즘의 조사를 용이하게하기 때문에 가치가 있습니다.

최소 침습 기술을 기반으로 한 마우스 타박상 척수 손상 모델 설정

이 수술 프로토콜은 표적 치료를 제공하기 위해 설치류의 척추 경막하 공간에 척수강내 카테터를 삽입하는 단계별 가이드입니다.

치료 전달을 위한 설치류 척수의 경막하 공간에 접근

학습하세요 척수 내 생물학적 치료제의 안전하고 정확한 전달을 위한 외과적 기법을 괴팅겐 미니피그를 이용하여 시연합니다. 이 방법은 유연한 카뉼라와 안정화 플랫폼을 사용하여 정확한 표적화와 안전성을 보장합니다.

치료의 척추 배달을위한 수술 기법 : 괴팅겐 Minipigs의 절차의 데모

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