Name: 차단 혈액 시스템을 사용하여 준비 및 더블 복용 버피 코트의 혈소판 제품의 병원체 불 활성화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-07T11:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 40 s
Description: 배우세요 INTERCEPT 혈액 시스템을 사용하여 더블 복용 버피 코트 혈소판 농축액을 준비하고 병원체를 불활성화하는 방법. 이 기술은 혈소판 수혈의 안전성과 가용성을 향상시킵니다.

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출판 기금은 Cerus 사, 가로 채기 피 시스템 제조업체가 제공됩니다.

1. 전체 혈액 수집 <ol><li> 450 ML의 상단에있는 자원 봉사 기증자로부터 온 혈액을 수집 / 하단의 컬렉션은 지역 혈액 수집 가이드 라인에 따라 설정합니다. </li><li> 전체 피를 원심 분리 및 분리하기 전에 냉각 판에 2 시간의 최소 저장됩니다. </li></ol> 2. 버피 코트 준비 <ol><li> 적혈구, 버피 코트, 그리고 플라즈마 : 3 층에 혈액을 분리하는 하드 스핀을 사용하여 전체 혈액을 원심 분리기. 사용 원심 분리기 매개 변수 ± 2 ° C. 22 11 분에 4,880 RCF했다 </li><li> 수집 용기에 버피 코트를 떠나지, 상단 위성 가방과 바닥 위성 가방에 적혈구 (RBC)에 플라즈마를 표현하기 위해 자동화 된 혈액 분리기를 사용하십시오. 버피 코트는 각각 약 48 ML 37 %입니다에 대한 볼륨 및 혈소판 범위를 의미 타겟팅 할 수 있습니다. </li><li> 버피 - 코트 22 ± 2 ° C.에서 혈소판 교반기에 하루 아침에 저장됩니다 </li></ol><ol><li> 멸균 연결 7 버피 코트 및 병렬 라인 열차 구성에서 SSP + 혈소판 첨가제 솔루션 (PAS) 300 ML은 기차 길이를 감소, PAS는 열차의 맨 위에 있어야합니다. PAS 및 제 버피 코트 사이에 선을 고정. </li><li> 버피 코트 단위 사이의 무균 연결을 열고 버피 코트가 마지막 용기에 배출 할 수 있습니다. </li><li> 용접 및 PAS 및 제 버피 코트 사이의 클램프를 엽니 다. 첨가제 솔루션의 삼분의이 순차적으로 버피 코트 컨테이너의 각을 씻어 할 수 있습니다. 두 번 이상 남아있는 PAS의 절반을 사용하여 각 시간을 반복합니다. </li><li> 평균 버피 코트 풀 볼륨 약 600 ML해야합니다. 각 버피 코트의 대상 볼륨과 혈소판이 충족되면 플라즈마 비율은 32 수 - 47% 나중에 그 과정에서 가로 챌 병원체 불 활성화 처리를 위해 필요에 따라. </li><li> 빈 SSP +와 버피을 삭제 하시겠습니까코트 용기. </li><li> 최적의 혈소판 복구를 들어, 원심 분리하기 전에 1 시간 동안 교반에 수영장을 유지. </li><li> 멸균은 버피 코트 수영장에 통합 leukoreduction 필터와 혈소판 스토리지 컨테이너를 연결합니다. </li><li> 정지 혈소판 (9 분 20 초에 462 RCF)에서 적혈구를 분리 할 수​​있는 버피 코트 수영장의 &quot;부드러운 스핀&quot;을 수행합니다. 혈소판 저장 용기에 leukoreduction 필터를 통해 자동으로 혈액 분리기를 사용하여 혈소판 현탁액을 표현한다. </li><li> 420 ML 볼륨, 2.5-7.0 X 10 11 혈소판 복용하고, ≤ 4 X 10 6 / ML 붉은 세포 - 이전에 설명 된 처리 요구 사항은 혈소판 정지가 차단 300 ML 처리 사양을 충족하는지 확인합니다. </li></ol> 4. 치료를 차단 <ol><li> 수집 후 1 일의 끝 (하루 0 수거의 날입니다) 전에 차단 치료를 수행합니다. </li><li> 차단 처리 세트 포장을 푸는투명한 플라스틱 주머니에서 듀얼 저장 용기가있는. </li><li> 멸균은 도청 처리 세트에 amotosalen 컨테이너의 튜브에 혈소판 정지 컨테이너를 연결합니다. </li><li> 지역 요구 사항에 따라 적절한 혈액 제품 식별을 차단 처리 설정 저장 용기 라벨을 지정합니다. </li><li> 혈소판을 잡아와 조명 컨테이너에 흐름에 amotosalen 솔루션을 수 있도록 먼저 amotosalen 컨테이너에 하단의 캐뉼라을 깰. 혈소판은 조명 컨테이너에 amotosalen 컨테이너를 통해 흐를 수 있도록 amotosalen 컨테이너의 상단 캐뉼라를 해봐. </li><li> 부드럽게 혈소판과 amotosalen 혼합물을 혼합 amotosalen 컨테이너에 조명 컨테이너에서 공기를 표현한다. </li><li> 튜브의 4cm에 대해 작성, 튜브에 혈소판 혼합물의 작은 금액을 표현한다. 이 튜브와 조명 컨테이너 모두에서 혈소판이 병원체 inactivati​​을 받다 보장치료. </li><li> 조명 컨테이너와 amotosalen 컨테이너 사이의 튜브를 밀봉합니다. 조명 컨테이너에서 연장 튜브의 약 4cm보다 더를 남겨 없습니다. 제거하고 폐기 빈 혈소판과 amotosalen 용기를하고 샘플링 파우치에 클램프를 닫습니다. </li><li> 왼쪽에있는 큰 칸에있는 조명 컨테이너와 오른쪽에있는 작은 구획의 주최자와 조명기로 처리 세트를 놓습니다. </li><li> 조명기에 기부 ID, 제품 코드, 및 가공 세트 로트 번호를 입력 휴대용 바코드 장치를 사용합니다. 금속 커버를 닫고 조명기 그래픽 인터페이스에 메시지가 표시되면, 서랍을 닫습니다. 조명을 시작하려면 &quot;시작&quot;을 누르십시오. </li><li> 조명 후, 조명기에서 처리 세트를 제거합니다. 조명기가 자동으로 처리 혈소판 장치 (들)에 대한 치료 보고서를 인쇄합니다. </li><li> 주최자의 용기 포장을 푸는와 P에 목을 매latelets 및 가공 세트, 조명 컨테이너의 출구에서 캐뉼라을 아프게하고, 혈소판은 화합물 흡착 장치 (CAD) 용기에 흐를 수 있습니다. </li><li> 플라즈마 추출기를 사용하여 조명 컨테이너에 CAD 컨테이너에서 공기를 표현, CAD 웨이퍼를 구부리 않도록주의를 즐길 수도 있습니다. </li><li> CAD 컨테이너의 입구 포트에 근처에있는 튜브를 밀봉합니다. 제거하고 빈 조명 컨테이너를 폐기하십시오. </li><li> 최소 6 시간의 혈소판 교반기에 첨부 된 저장 용기와 CAD 컨테이너,하지만 이상 16 시간을 놓으십시오. 이 ≤ 2 μm의 농도에 잔류 amotosalen의 감소가 발생합니다. </li><li> CAD 치료 후 교반기에서 혈소판 단위를 제거합니다. 혈소판을 잡아. 캐뉼라을 해제하고 혈소판의 저장 용기로 유동 할 수 있습니다. </li><li> CAD 컨테이너에 저장 용기에서 공기를 표현한다. 잔여 혈소판 농축 흐름 다시 저장 용기에 의한하자중력. Y-피팅 위의 튜브를 밀봉하고 빈 CAD 컨테이너를 제거합니다. </li><li> 필요에 따라 저장 용기 사이 재배포 볼륨입니다. 볼륨 조정은 저장 용기의 무게에 의해 만들어집니다. 몇 센티미터에 저장 용기의 입구 위의 각 스토리지 컨테이너에 튜브를 밀봉, 5.2에 설명 된대로이 최종 제품에서 멸균 샘플을 확보 용이하게한다. </li></ol> 5. 제품 샘플링 <ol><li> 일상적인 QC 테스트의 경우 최종 저장 용기는 저장 용기의 샘플링 주머니를 사용하여 한 번에 맛보실 수 있습니다. 이렇게하려면 혈소판 장치가 잘 혼합되도록 한 후 주머니에 클램프를 열고 여러 번 당겨 요. 주머니는 혈소판이 가득 한 후 튜브를 밀봉합니다. 적절한 실험실 튜브에 혈소판 샘플을 전송하고 즉시 assays을 수행합니다. </li><li> 이러한 검증 연구로, 저장의 과정을 통해 여러 시간 지점에서 샘플을 구하려면 무균 연결혈소판 저장 용기의 튜브에 새로운 샘플링 컨테이너. 혈소판이 잘 샘플링 컨테이너에 전송하기 전에 혼합되어 있는지 확인합니다. </li></ol> 6.에서 체외 기능 평가 <ol><li> 이 검증 연구를 들어, 체외 평가에서 CAD 처리 (1 일 또는 2 일, CAD 기간에 따라 다름) 후 다시 4 일에 수행 된 (또는 5 일)과 일 7. 체외 측정에서 볼륨, 혈소판 수, pH를, 포함 혈액 가스 (PO 2, PCO 2), 포도당, 젖산, 그리고 회전. </li><li> 볼륨 첨가제 솔루션에서 혈소판의 비중으로 1.01 g / ML을 사용하여 무게에 의해 결정되었다. </li><li> 헤모글로빈 오염은 색상 차트로 비교를 사용하여 시각적으로 평가되었습니다. </li><li> 회전은 시각적으로 산출 된 것입니다. </li><li> 다른 assays의 방법론에 대해 &quot;장비의 표&quot;를 참조하십시오. </li></ol> 7. 대표 결과 d를 생산하는 과정ouble 복용 버피 코트 혈소판은 볼륨과 혈소판에 대한 목표 사양을 충족 개별 버피 코트의 생산을 시작합니다. 이 최종 공정에서는 정품 확인을 통해 개별 버피 코트의 혈소판을 측정 할 실질적인하지 않습니다, 우리는 우리가 지속적으로 대상 볼륨과 혈소판을 충족 할 수 있도록하기 위해 버피 코트를 최적화하기 위해 별도의 노력을 사업으로 시작했다. 표 1에 도시 된 바와 같이, 우리의 최적화 된 버피 코트 46에서 볼륨 및 혈소판 모두 ± 2 ML 37 ± 3 %, 각각의 대상 값으로 호의를 비교했다. 풀링 후, 버피 코트 풀의 볼륨과 혈소판은 각각 부드러운 회전 원심 분리하기 전에 약 600 ML 20 %해야합니다. 표 2에 도시 된 바와 같이, 우리의 버피 코트의 수영장 615 평균 ± 5 ML을, 혈소판 수치가 19 평균 ± 1 %입니다. 더블 선량 혈소판의 conc의 부드러운 회전 원심 분리 결과차단 혈액 시스템 DS 처리 설정을 사용 병원체 불 활성화에 대한 입력 요구 사항을 충족합니다 entrate. 차단 치료를 위해 주요 입력 매개 변수는 볼륨, 혈소판 수, 플라즈마 비율 및 RBC 내용이 포함되어 있습니다. 또한, 우리는 버피 코트 수영장에 비해 혈소판 농축액에있는 혈소판의 ≥ 75 %를 복구하는 것을 목표로하고 있습니다. 지역 요구 사항에 따라, 백혈구 (WBC) 오염은 &lt;1x10 6 / 단위 수 있어야합니다. 혈소판의 검증에 집중이 가로 치료뿐만 아니라 백혈구 오염 및 표 3에 도시 된 바와 같이 혈소판 복구 목표에 대한 주요 매개 변수를 만났다. 병원체 불 활성화에 대한 요격 과정은 하나의 가로 채기 처리 설정을 사용하여 두 번 복용 혈소판 농축액에 수행됩니다. 처리 세트는 처리 장치가 경로의 완성에 두 개인의 치료 혈소판 투여로 분할 할 수 있도록이 통합 저장 용기를 포함ogen의 불 활성화 과정. 유럽 ​​가이드 라인은 테스트 단위의 75 %가 ≥ 200x10 9 혈소판을 포함 할 것을 요구 당 치료 dose1, 스웨덴 지역의 요구 사항이 테스트 단위의 75 %가 포함&gt; 복용량 당 240x10 9 혈소판이 필요합니다. 차단 치료 후 평균 혈소판 내용은 265이었다 ± 22 X10 9 (n은 = 24). 또한, 단위의 88 %가 만족 또는 치료 복용량 당 240x10 9 혈소판을 초과,이은 유럽 지침 및 스웨덴어로 규정 모두에서 잘 수 있습니다. 이중 복용량 버피 코트의 준비와 각각 차단 처리 프로세스의 그림을위한 그림 1 &amp; 2를 참조하십시오. 이 확인을 위해, 우리는 혈소판의 체외 특성의이 차단 처리 (개별 저장 용기에 분할 한 후 예를 들면) 이후에 중점을 측정, 매개 변수는 저장 용량이 7 일 동안 측정 하였다. 평균과 표준 편차는에 수집 된혈소판 투여 량, 산도, PO 2, PCO 2, 젖산 생산과 포도당 소비. 그림 3은 저장 후 7 일 이상 차단 치료 후 분할 제품의 각 차단 치료와 평균 혈소판 복용하기 전에 두 번 복용 혈소판 농축액의 혈소판 투여를 시작하는 의미를 보여줍니다. 저장 중 혈소판 손실은 약 9 %이다. 이 감소는 기존 혈소판의 저장 기간 동안 혈소판의 예상 손실의 차이가 있습니다.이 표 4는 하나의 단위로 처리 및 분할 후 차단 혈소판의에서 체외 특성을 요약 한 것입니다. 유럽​​ 요구 사항에 따라, 혈소판의 pH는 유통 기한의 끝 부분을 통해 6.4 이상 남아 있어야합니다. 처리 과정에서 혈소판의 pH가 약간 혈소판 농도, 양, 그리고 혈소판 스토의 가​​스 투과성을 기반으로 떨어 집중분노의 컨테이너. 그림 4는 저장 7 일에 걸쳐 분할 혈소판 제품의 pH를 보여줍니다. 저장하는 동안 pH는 안정적이고 잘 처리 요구 사항 내에서 유지. 으로 인물 5A 및 5B, 혈소판 O이 소비와 CO 2 생산에 표시된 저장 후 7 일 동안 PL2410 컨테이너에서 차단 혈소판에 의해 계속 호흡을 나타냅니다. 숫자는 6A 및 6B 스토리지 7 일 동안 젖산과 포도당 수준을 보여 . 혈소판 포도당 소비와 젖산 생산은 스토리지의 7 일 동안 서로 일치합니다. 5 단위는 포도당 수준 이하 1.11 mmol / L을 (포도당 분석에 대한 낮은 제한)했다. 특히, 볼륨, 혈소판 수, 플라즈마 비율, 빨간색 파, 버피 코트의 준비와 풀링을 검증 제작 혈소판 그런 일이 도청 치료에 대한 입력 기준을 충족 집중ood 세포 오염. 최종 단위는 혈소판 복용과 산도 등의 스토리지를 7 일 동안 유효성 검사 기준을 만났습니다. <table border="1"><tbody><tr><td> 매개 변수 </td><td> 대상 범위 </td><td> 결과 ± SD 평균 </td></tr><tr><td> 볼륨 (ML) </td><td> ~ 48 </td><td> 46 ± 2 </td></tr><tr><td> 혈소판 (%) </td><td> ~ 37 </td><td> 37 ± 3 </td></tr><tr><td> 풀링하기 전에 시간을 잡아 </td><td> 교반기에서 숙박 </td><td> 교반기에서 숙박 </td></tr></tbody></table> 개인 버피 코트 (N = 19)의 표 1. 특성. <table border="1"><tbody><tr><td> 매개 변수 </td><td> 대상 범위 </td><td> 결과 ± SD 평균 </td></tr><tr><td> 볼륨 (ML) </td><td> ~ 600 </td><td> 615 ± 5 </td></tr><tr><td> Hematocrit (%) </td><td> ~ 20 </td><td> 19 ± 1 </td></tr><tr><td> 원심 분리하기 전에 시간을 잡아 </td><td> 교반기에서 1 시간 </td><td> 교반기에서 1 시간 </td></tr></tbody></table> 버피 코트 풀 (N = 12)의 표 2. 특성. <table border="1"><tbody><tr><td> 매개 변수 </td><td> 목표 </td><td> 결과 ± SD 평균 </td></tr><tr><td> 볼륨 (ML) </td><td> 370-420 </td><td> 404 ± 8 </td></tr><tr><td> 혈소판 수 (X10 9 / 단위) </td><td> 250-700 </td><td> 577 ± 62 </td></tr><tr><td> 혈소판 복구 (%)를 평균 </td><td> ≥ 75 </td><td> 75 ± 4 </td></tr><tr><td> 플라즈마 비율 (%) </td><td> 32-47 </td><td> 38 ± 1 </td></tr><tr><td> RBC (X10 6 / ML) </td><td> ≤ 4 </td><td> 1.2 ± 0.4 </td></tr><tr><td> WBC (X10 6 </s&gt; / 단위 이상) </td><td> ≤ 1 </td><td> 0.11 ± 0.1 </td></tr><tr><td> 차단 (시간) 전에 시간을 잡아 </td><td> 일 1 ≤ 끝 </td><td> 일 1 ≤ 끝 </td></tr></tbody></table> 두 번 복용 혈소판의 표 3. 특성 (n은 = 12)을 중점을두고 있습니다. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> 평균 ± SD </td><td> 최소 </td><td> 최대 </td></tr><tr><td> 볼륨 (ML) </td><td> 199 ± 16 </td><td> 182 </td><td> 236 </td></tr><tr><td> 혈소판 수 (X10 9 / 단위) </td><td> 265 ± 22 </td><td> 225 </td><td> 292 </td></tr><tr><td> 산도 (22 ° C) </td><td> 6.9 ± 0.1 </td><td> 6.8 </td><td> 7.0 </td></tr><tr><td> PO 2 (kPa) </td><td> 21.4 ± 4.8 </td><td> 12.8 </td><td> 27.3 </td></tr><tr><td> PCO 2 (kPa) </td><td> 4.3 및 PLusmn, 0.4 </td><td> 3.3 </td><td> 4.9 </td></tr><tr><td> 락트산 (mmol / L) </td><td> 9.1 ± 1.7 </td><td> 6.8 </td><td> 12.4 </td></tr><tr><td> 포도당 (mmol / L) </td><td> 5.3 ± 0.9 </td><td> 3.7 </td><td> 6.5 </td></tr></tbody></table> 차단 치료 혈소판의 1 일 / 2 (싱글 단위, N = 24)의 표 4. 특성. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig1.jpg" /> 그림 1. 7 버피 코트의 수영장에서 더블 선량 혈소판 농축 생산. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig2.jpg" /> 그림 2. 차단 혈액 시스템과 더블 선량 혈소판 농축액의 병원체 불 활성화. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig3.jpg" /> 그림 3. 전과에 대한 혈소판 투여 량을 평균차단 치료 후 7 일 (N 도청 이전 = 12; 차단 한 후 N = 24). <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig4.jpg" /> 그림 4. 도청 처리 (N = 24) 이후에 혈소판 산도 ± SD를 의미합니다. <img alt="그림 5A" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig5a.jpg" /> 그림 5A는. 도청 처리 (N = 24) 이후 PO 2 ± SD를 의미합니다. <img alt="그림 5B" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig5b.jpg" /> 도 5B는. 도청 처리 (N = 24) 이후 PO 2 ± SD를 의미합니다. <img alt="그림 6A" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig6a.jpg" /> 그림 6A는. 도청 처리 (N = 24) 이후 젖산 수준의 ± SD를 의미합니다. <img alt="그림 6B" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig6b.jpg" /> 그림 6B는. 및 포도당 수준을 의미plusmn, SD 차단 처리 후 (N = 24).

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</ol>

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버피 코트의 혈소판은 여러 처리 단계를 필요로하는 혈소판 단위를 생산 전체 비용에 반영해야합니다 인사 시간, 소모품, 장비 및 폐기물 등의 사후 수집 비용에 따른 모든 책임은 사용자에게 있습니다. 각 버피 코트에서 혈소판 수율을 (버피 코트 볼륨 이랑 혈소판을 최적화를 통해) 개선하면 일곱 버피 코트의 수영장에서 두 번 복용 버피 코트 혈소판 단위의 생산이 가능합니다. 이 최적화가 수행 될 때, 버피 코트의 수는 혈소판 투여의 고정 번호를 생산하는 데 필요한 감소 될 수있다,이를 버피 코트의 전반적인 활용도를 개선하고 추가 혈소판의 생산 (PCS) 중점을 가능하게한다. 인사 시간뿐만 아니라 풀링 세트, 혈소판 첨가제 솔루션, 살균 연결 웨이퍼, 필터 세트, 및 원심 분리 절차 등의 소모품 및 장비 비용은 최대 50 %까지 감소된다. 혈소판 생산을 최적화하고, 생을 관련 비용을 절감 할뿐만 아니라S 풀링 방식은 우리뿐만 아니라 우리의 수혈을받는 사람에게 향상된 보호 기능을 제공 할 수 있도록 차단 듀얼 스토리지 컨테이너 처리 세트와 함께 사용하기위한 입력 요구 사항을 충족 혈소판 농축액 (PC)를 생성 할 수 있습니다. 병원체 불 활성화에 대한 도청 피 시스템은 핵산 복제 및 질병을 일으킬 수없는 렌더링 병원균을 방지 covalently 상호 링크 DNA와 RNA에 amotosalen와 자외선 A (UVA) 빛을 사용합니다. 3 그것은 효과적으로 바이러스, 세균 등의 병원균의 광범위한 스펙트럼을 inactivates , 기생충 및 오염 기증자 백혈구. 4-6 도청은 새로운 테스트가 개발하고 궁극적으로 구현하는 상당한 재정적 투자를 필요로하는 동안 역사적으로 상당한 지연을 포함 신흥 병원균에 대한 현재 테스트 패러다임에 대한 대안을 제공하는 경우 테스트 사용할 수 있습니다. 7,8는 또한 중복 안전 measu에 대한 대안을 제공 할 수 있습니다이러한 세균 검출 9 감마 방사선으로 고해상도. 또한 10-12, 도청은 우리가 두 번 투여 혈소판 단위를 취급 할 수있는 우리의 생산 효율성을 장점과 우리가 예산을 준수하는 데 도움이됩니다. 가로 더블 복용 버피 코트 방법은 혈액 센터 워크 플로우의 다양한 적용 할 수 있습니다. 예로서, 전체 혈액 컬렉션 500 ML로 증가 될 수있다; 컬렉션은 22 밤새 저장 될 수 있습니다 ° C 분리하기 전에. 또한, 다른 버피 코트 풀링 방법이 가능합니다 (예를 들어 문어 방법 대신 기차 방법) 및 / 또는 자동 장치 (예 TACSI) 남아있는 붉은 세포에서 두 번째 원심 분리하여 혈소판 정지의 분리에 활용 될 수있다 . 증가 혈소판 내용이 필요한 경우, 여러 기술 혈소판 수, 전체 혈액의 하룻밤 배양, a​​djus에 따라 기증자의 사전 선택 등의 이용이 가능합니다원심 분리 설정 tment, 또는 7 대신 8 버피 코트의 풀을 활용. 풀링의 제한으로 인해 현재 사용할 수 있고 원심 분리기의 버킷 용량 설정, 버피 코트 수영장의 총 볼륨은 약 600 ML해야합니다. 이 프로토콜에 설명 원심 분리 과정과 설정은 7 버피 코트의 수영장에 대한 차단 매개 변수를 충족하는 제품을 얻을 수 있도록 최적화되었습니다. 수영장에서 버피 코트의 숫자가 수정되는 경우 원심 분리 설정을 수정해야합니다. 일부 국가에서는 최소 혈소판 복용은 높은 있으며, QC 요구 사항은 스웨덴에 비해 더 엄격한 수 있습니다. 따라서, 우리의 결과는 보편적 적용되지 않을 수 있습니다. 이러한 국가에서는 사전에 차단 치료에 두 번 복용 PC는 가로 채서 처리 및 분할 후 지역의 요구 사항을 충족하기 위해 혈소판의 큰 숫자를 포함해야합니다. 때문에 최대 혈소판 콘텐츠 및 치료 볼륨 구경R 도청는 각각 7x10 11 혈소판과 420 ML이며, 차단 처리 요구 사항을 초과 또는 두 치료 복용으로 분할 할 충분한 혈소판 콘텐츠를 단위의 비율은, 이러한 혈소판 복용, QC 기준에 대한 로컬 요구 사항 등의 요소에 따라 달라집니다 버피 코트 최적화 결과, 생산의 안정성. 더블 선량 PC는 차단 처리 요구 사항을 초과하는 경우에는 수동으로 요구 사항을 충족하도록 조정하고 이후 처리 될 수 있습니다. 7 버피 코트 수영장이 차단 후 두 번 복용 제품에 부족한 혈소판을 산출에 몇 차례에서, 우리는 도청 치료를 수행 할 수 없습니다 선출한다. 또는 다른 혈액 센터는이를 통해 모든 단위에 병원체 불 활성화를 수행, 단일 선량 차단 처리 세트 (대형 볼륨 세트를 IE)로 PC를 취급하고 하나의 큰 치료 용량으로 PC를 저장하도록 선택할 수 있습니다. 우리가 만날 수 있도록 우리QC 요구하고 병원체 가능한 한 우리의 혈소판 단위의 많은, 우리가 풀링 할 때, 수영장에서 5.6x10 11 혈소판의 최소 혈소판 내용에 발생합니다, 기증자 혈소판 수치에 따라 버피 코트를 선택 비활성화. 이 도청 치료 후이 치료 용량을 생산하기에 충분한 혈소판 내용을 보장합니다. Google의 확인은 7 전체 혈액 파생 된 버피 코트 단위가 성공적으로 풀링 및 혈소판에 대한 차단 프로세스를 처리, 제조 (스웨덴어 요구 사항과 유럽 지침) 및 환자 지원을위한 허용 기준을 충족 2 병원체 inactivated 혈소판 제품에 발생 될 수 있다는 설명 임상 실습 가이드 라인과 스웨덴의 표준 혈소판 주입 방법에 따라 혈소판 수혈을 필요로하는.

<table><tbody><tr><td colspan="4">전혈 헌혈, 1차 분리 및 혈소판 제조</td></tr><tr><td>채혈 팩</td><td>Fenwal</td><td>R6485</td><td>상단/하단 세트</td></tr><tr><td>자동 부품 추출기</td><td>Fenwal</td><td>Optipress-II</td><td></td></tr><tr><td>혈액 혼합 및 균형 시스템</td><td>Baxter</td><td>Easymix V3</td><td></td></tr><tr><td>혈소판 백혈구 여과 세트</td><td>Fenwal</td><td>K4R7042</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>Hettich</td><td>Roto Silenta 63 RS</td><td>버전 5.5</td></tr><tr><td>혈소판 첨가액 - SSP+</td><td>MacoPharma</td><td>SSP2030U</td><td>300 ml</td></tr><tr><td>멸균 튜브 융착기</td><td>Terumo</td><td>T-SCD</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">INTERCEPT 처리 &amp;amp; 보관</td></tr><tr><td>INTERCEPT 처리 세트</td><td><a href="http://www.interceptbloodsystem.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> 세루스(Cerus)</a></td><td>INT2503</td><td>이중 저장(Dual Storage, DS) 세트</td></tr><tr><td>INTERCEPT 조명 장치</td><td><a href="http://www.interceptbloodsystem.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Cerus</a></td><td>INT100</td><td></td></tr><tr><td>PC 샘플 팩</td><td>Fenwal</td><td>FTX 1122</td><td></td></tr><tr><td>배양기</td><td>Helmer</td><td>PC2200/PC3200</td><td></td></tr><tr><td>교반기</td><td>Helmer</td><td>PF48H/PF96H</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">~에 대한 평가 &lt;em&gt;체외(in vitro)&lt;/em&gt; 혈소판 기능</td></tr><tr><td>혈액 가스 분석기</td><td>복사계</td><td>ABL 735</td><td>pH, 혈액 가스 및 젖산 측정에 사용됨</td></tr><tr><td>화학 시스템</td><td>Ortho Clinical Diagnostics</td><td>Vitros 5.1</td><td>포도당 측정에 사용됨</td></tr><tr><td>혈액 분석기</td><td>Boule Medical AB</td><td>Medonic CA620-Cellguard</td><td>혈소판 수치 측정에 사용됨</td></tr><tr><td>유세포 분석기</td><td>BD</td><td>FACSCanto</td><td>백혈구 측정에 사용됨</td></tr></tbody></table>

차단 혈액 시스템을 사용하여 준비 및 더블 복용 버피 코트의 혈소판 제품의 병원체 불 활성화

Preparation and Pathogen Inactivation of Double Dose Buffy Coat Platelet Products using the INTERCEPT Blood System

혈액 센터는 극대화 생산에 발생하는 혈액 제품 기부 수율뿐만 아니라, 수혈 전송 질병으로부터 보호 등의 수혈 환자에 대한 안전성 가능한 가장 높은 수준을 보장하는 등 많은 도전에 직면하고 있습니다. 이것은 소모품, 장비, 폐기물 등 중 개인 비용 등의 운영 비용을 최소화 fiscally 책임 방식으로 수행해야합니다. 몇 가지 방법은 혈소판이 수혈에 중점을 생산 할 수 있습니다. 가장 일반적인 중 하나는 하나의 치료 혈소판 단위 (단위 당 또는 현지 규정에 따라 ≥ 2.0 X10 11 혈소판) 반년 혈액 기부까지에서 버피 코트 층을 풀링하여 준비되어있는 버피 코트 방식입니다. &quot;더블 복용량&quot;전체 혈액 유래 혈소판을 생산하기위한 절차는 최근에 개발되었습니다. 준비하기위한 새로운 방법입니다 여기에 제시된이중 복용량 전체 혈액 유래 혈소판은 7 버피 코트와 이후 병원체 불 활성화에 대한 요격 피 시스템과 이중 복용량 단위를 치료 수영장에서 중점을두고 있습니다. 차단은 바이러스, 박테리아, 기생충 및 기증 혈액에 존재 할 수 있습니다 오염 기증자 화이트 셀을 비활성화하기 위해 개발되었습니다. , 듀얼 저장 용기 (이하 &quot;DS 세트&quot;)로 설정 절편 처리를 이용하여 두 번 복용 버피 코트 방식을 차단 페어링하면함으로써 환자 안전을 극대화, 혈액 센터는 단일 병원체 불 활성화 처리 세트에서의 이중 복용량 단위의 각을 치료 할 수 있습니다 비용을 최소화하면서. 이중 복용량 버피 코트 방법은 적은 버피 코트가 필요하며 단일 복용 버피 코트 혈소판 단위의 준비 및 치료에 비해 50 % (예를 들면 풀링 세트, 필터 세트, 혈소판 첨가제 솔루션 및 멸균 연결 웨이퍼)까지하여 소모품의 사용을 감소 . 기타 비용 절감 적은 폐기물, 적은 장비 maintenan을 포함CE, 낮은 전력 요구 사항, 인사 시간을 단축하고, 낮은 수집 비용은 apheresis 기술에 비해.

이 문서는 전체 혈액 기부에서 준비 병원체 불 활성화에 대한 요격 피 시스템과 치료를 두 번 복용 버피 코트의 혈소판 중점을 생산 외 레브로 대학 병원에서 사용하는 프로세스를 설명합니다.<em&gt; 체외에서</em최종 혈소판 단위의&gt; 품질 스토리지의 7 일 동안 평가하고 있습니다.

혈액 센터는 수혈용 혈액 제제 기증분으로부터 생산 수율을 극대화하는 것뿐만 아니라, ...을 보장하는 것을 포함하여 많은 과제에 직면해 있습니다.

본 영상에서는 7개의 버피코트(Buffy coat) 풀을 사용하여 2배 용량 혈소판 농축액을 제조하고, 이후 intercept로 처리하는 과정을 보여드립니다. 이 영상을 시청하신 후에는 병원체 불활성화 2배 용량 혈소판 농축액을 제조하는 방법에 대해 충분히 이해하시게 될 것입니다. 먼저 도식적인 개요를 제시한 후, 시연을 이어가겠습니다.기증받은 전혈 7단위의 첫 부분을 원심 분리 및 분리하여 부피와 헤마토크리트 목표치를 충족하는 7단위의 버피코트(buffy coat)를 얻습니다. 버피코트들을 연결하고 풀링한 후 원심 분리합니다. 그런 다음 혈소판 현탁액을 잔류 적혈구로부터 분리하여 병원체 및 백혈구를 불활성화하기 위한 2배 용량의 혈소판 농축액을 제조합니다.2배 용량의 혈소판 농축액은 핵산을 가교 결합시키는 Intercept 시스템을 사용하여 처리합니다. 최종적으로 이 절차를 통해 pH, glucose, lactate, PO₂, PCO₂ 및 혈소판 수치 평가를 통해 7일의 보관 기간 동안 허용 가능한 시험관 내 품질을 가진 두 개의 치료용 혈소판 용량을 얻을 수 있습니다. 혈액 센터의 기술자가 해당 절차를 시연할 것이며, 처리 요구 사항에 대해 설명하겠습니다.먼저, 2배 용량의 혈소판 농축액이 300에서 420 mL의 인터셉트(intercept) 처리 규격을 충족하는지 확인하십시오. 혈소판 용량은 2.5에서 7 × 10¹¹개여야 하며, 적혈구 수는 mL당 4 × 10⁶개 미만이어야 합니다. 450 mL 상하단 수집 세트에 수집된 전혈 7단위로 이 절차를 시작하십시오.혈액 단위를 원심분리 컵에 넣고, 제조사의 지침에 따라 실온에서 4,880 RCF로 11분 동안 브레이크 설정 B 5로 강하게 원심분리합니다. 원심분리가 끝나면 혈액은 적혈구, 버피 코트(buffy coat), 혈장 세 층으로 분리됩니다. 혈장은 상단 위성 백에, 적혈구는 하단 위성 백에 각각 옮겨 담으며, 약 48 mL의 버피 코트와 37% 헤마토크릿(hematocrit)은 채혈 용기에 남겨둡니다.Buffy coat를 실온의 혈소판 교반기에 두고 하룻밤 동안 보관하십시오. 7개의 buffy coat와 300 milliliters의 SSP 및 혈소판 첨가액을 무균 연결하십시오. 첨가액이 상단에 위치하도록 직렬 구성으로 배치한 후, 여기에서 보여주는 것과 같이 첨가액과 첫 번째 buffy coat 사이의 라인을 클램프로 고정하십시오. Buffy coat 유닛 사이의 융착 부위를 열어 마지막 buffy coat 용기로 배출되도록 하십시오.다음으로, 첨가제 용액과 첫 번째 버피 코트(buffy coat) 사이의 클램프와 용접 부위를 열고, 클램프를 닫기 전에 각 버피 코트 용기를 순차적으로 헹굴 수 있도록 첨가제 용액의 약 3분의 1(약 100 milliliters)이 통과하게 합니다. 매번 약 100 milliliters의 첨가제 용액을 사용하여 이 세척 과정을 두 번 더 반복합니다. 풀링된 버피 코트 용기를 빈 용기들로부터 분리합니다. 첨가제 용액을 포함한 버피 코트 풀(pool)의 부피는 약 600 milliliters가 되어야 합니다.혼합된 버피코트(Buffy coats)를 교반기에 넣고 실온에서 1시간 동안 처리합니다. 그 다음, 통합 류코 감소 필터(leco reduction filter)가 장착된 혈소판 저장 용기를 버피코트 혼합액이 담긴 백에 연결합니다. 혼합된 버피코트와 혈소판 저장 용기를 원심분리기에 넣고 462 RCF에서 9분 20초 동안 원심분리합니다.원심 분리 후, 혈소판 현탁액을 Luca reduction filter를 통해 혈소판 보관 용기에 분출합니다. 그 결과 420 mL에 약 7×10¹¹개의 혈소판이 포함된 2배 용량 혈소판 농축액이 생성되며, 이는 Intercept를 이용한 병원체 불활성화를 거칠 수 있습니다. 이 2배 용량 혈소판 농축액은 Antoin 용기, 조사 용기 및 이중 보관 용기로 구성된 Intercept 처리 세트를 사용하여 처리합니다.혈소판 현탁액 용기를 인터셉트 처리 세트의 아민(Amin) 용기에 연결하십시오. 그런 다음 혈소판을 걸어줍니다. 아민 용기의 하단 캐뉼라를 제거하여 용액이 조명 용기로 흐르게 하십시오.그런 다음 Amin 용기의 상단 캐뉼라를 파괴하여 혈소판이 Amin 용기를 통해 조명 용기로 흐르게 합니다. 혈소판과 am tosin 혼합물을 부드럽게 섞어줍니다. 조명 용기를 가볍게 짜서 내부의 공기를 배출합니다.조명 컨테이너에서 밖으로 뻗어 나온 튜브의 길이가 4 cm를 넘지 않도록 조명 컨테이너와 amato 컨테이너 사이의 튜브를 밀봉하십시오. 빈 컨테이너들을 제거하여 폐기하십시오. 프로세싱 세트를 조명기 안에 배치하되, 조명 컨테이너는 왼쪽의 큰 구획에, 오거나이저는 오른쪽의 작은 구획에 넣으십시오.기증 ID를 스캔하십시오. 제품 코드 및 처리 과정을 확인하십시오. 로트 번호를 조명 장치에 설정하십시오.금속 덮개와 서랍을 닫습니다. 시작 버튼을 눌러 조사를 시작합니다. 조사기는 조사 용기 내의 혈소판 아민 혼합물에 제어된 양의 UVA 광선을 제공합니다.아민은 혈소판 제제에 존재할 수 있는 병원균의 핵산 염기쌍 사이에 결합합니다. 빛을 조사하면 영구적인 교차결합이 형성되어 DNA 또는 RNA가 서로 고정되며, 이로 인해 병원균이 더 이상 복제되지 않아 혈액 제제 수혜자에게 질병을 일으키지 못하게 됩니다. 조사가 완료되면 처리 세트를 제거하십시오.다음으로, 오거나이저에서 컨테이너를 꺼내 혈소판 및 처리 세트를 겁니다. 조명 컨테이너 출구의 캐뉼라를 꺾어 혈소판이 CAD 컨테이너로 흐르게 합니다. CAD 컨테이너 내부에는 혈액 제제 내 잔류 아민 수치를 감소시키는 고정된 다공성 폴리스티렌 비드가 부착된 웨이퍼가 들어 있습니다.CAD 웨이퍼가 휘어지지 않도록 주의하십시오. CAD 용기 내의 공기를 조명 용기로 배출합니다. CAD 용기의 유입구 포트 근처에서 튜브를 밀봉하십시오.비어 있는 조명 용기를 제거하여 폐기합니다. 저장 용기가 부착된 CAD 용기를 혈소판 교반기에 넣고 6시간에서 16시간 동안 둡니다. 이렇게 하면 잔류 amlin의 농도가 2 µM 이하로 감소하게 됩니다.CAD 처리가 끝난 후, 교반기에서 혈소판 단위들을 꺼내어 매달고, CAD 컨테이너 출구 쪽의 캐뉼라를 꺾어 혈소판이 두 개의 보관 용기로 흘러 들어가게 합니다. 그 다음, 보관 용기 내의 공기를 배출합니다. Y-피팅 윗부분의 튜브를 밀봉하고 CAD 컨테이너를 제거합니다.그 결과, 인 비트로(in vitro) 혈소판 기능을 평가하기 위해 병원균이 불활성화된 두 개의 혈소판 농축액이 준비되었습니다. 혈소판 용량, pH, PO₂ , 젖산 생성 및 포도당 소비량을 측정하였습니다. 혈소판 농축액은 저장 7일까지 분석되었습니다.이 그림은 차단 처리 전 이중 용량 혈소판 농축액의 평균 시작 혈소판 용량과, 보관 7일까지 처리된 각 분할 제품의 평균 혈소판 용량을 보여줍니다. 여기서 볼 수 있듯이, 보관 중 혈소판 손실은 약 9%였습니다. 이러한 감소는 일반 혈소판의 보관 중 예상 혈소판 손실과 차이가 없습니다. 유럽 요건에 따라, 혈소판의 pH는 유효 기간 종료 시까지 6.4 이상으로 유지되어야 합니다.처리 과정 중, 혈소판 농축액의 pH는 혈소판 농축액의 부피와 혈소판 보관 용기의 가스 투과성에 따라 약간 저하됩니다. 이 그림은 7일간의 보관 기간 동안 분할 혈소판 제품의 pH를 보여주며, 보관 중 pH는 안정적으로 유지되어 처리 요구 사항 범위를 잘 유지하고 있습니다. 보관된 혈소판 내에서는 유산소 대사가 계속 일어나야 하며, 이는 환자에게 수혈된 후 혈소판이 체내에서 기능할 수 있는 능력을 나타내는 지표가 됩니다.혈소판의 O2 소비량과 CO2 생성량은 PL 24 10 용기 내의 차단 혈소판이 7일간의 보관 기간 동안 지속적으로 호흡하고 있음을 나타냅니다. 마찬가지로, 보관된 혈소판에서는 무산소 대사가 계속되어야 합니다. 따라서 포도당 소비와 젖산 생성 또한 수혈 후 혈소판의 기능 수행 능력을 보여주는 지표가 됩니다.이 두 도표는 7일간의 보관 기간 동안의 젖산 및 포도당 수치를 보여줍니다. 혈소판의 포도당 소비량과 젖산 생성량은 서로 일치합니다. 7일의 보관 기간 동안, 5개 단위에서 포도당 수치가 포도당 분석의 하한선인 1.11 millimoles per liter 미만으로 나타났습니다.버피 코트(Buffy coat) 조제 및 풀링 검증을 통해 인터셉트(Intercept) 처리 입력 기준, 특히 부피, 혈소판 수, 혈장 비율 및 적혈구 오염도를 충족하는 혈소판 농축액을 생성하였습니다. 최종 단위들은 혈소판 용량 및 pH를 포함하여 7일간의 보관 기간 동안 검증 기준을 충족했습니다. 단일 용량 혈소판 농축액을 생성하는 기존의 버피 코트 조제 방법과 비교하여 이 기술의 주요 장점은 혈액 채집으로부터 성분 회수율을 극대화하고, 2배 용량 기술을 사용하여 운영 비용을 절감하며, 수혈 전파성 병원균을 불활성화함으로써 환자의 안전성을 향상시킨다는 점입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

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