Peptide:MHC Tetramer-based Enrichment of Epitope-specific T cells

Francois P. Legoux; James J. Moon

doi:10.3791/4420

JoVE Journal
Immunology and Infection

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JoVE Journal Immunology and Infection

Peptide:MHC Tetramer-based Enrichment of Epitope-specific T cells

펩타이드 : 에피토프 특정 T 세포의 MHC Tetramer 기반 강화

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13:58 min

October 22, 2012

DOI: 10.3791/4420-v

Francois P. Legoux¹, James J. Moon¹

¹Center for Immunology and Inflammatory Diseases, and Pulmonary and Critical Care Unit,Massachusetts General Hospital and Harvard Medical School

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

에피토프 특정 T 세포의 낮은 주파수 인구를 분리하고 유동 세포 계측법을 기준으로 결과를 분석 MHC tetramers 및 자기 microbeads :이 프로토콜은 펩타이드의 사용을 설명합니다. 이 방법은에서 관심 내생 T 세포 인구의 직접적인 연구를 수

다음 실험의 전반적인 목표는 마우스의 내인성 T 세포 레퍼토리에서 희귀 에피토프 특이적 T 세포를 식별하는 것입니다. 이는 먼저 수확된 림프구 세포를 펩타이드 MHC 사합체 시약으로 염색하여 달성되며, 이 시약은 관련 항원결정기 특이적 T 세포를 형광 라벨링합니다. 그런 다음 이러한 사량체로 표지된 세포는 사량체의 형광 태그에 특이적인 항체에 접합된 자기 마이크로비드로 염색됩니다.

다음으로, 자기적으로 표지된 세포는 사량체 결합 에피토프 특이적 T 세포에 대한 샘플을 농축하기 위해 자화된 컬럼을 통과합니다. 마지막으로, 원하는 실험용 세포 마커를 위해 세포를 염색하고 다중 매개변수 유세포 분석을 수행하여 희귀 사량체가 풍부한 항원결정기 특이적 T 세포 집단을 검출하고 정량화합니다. TCR 형질전환 T세포 입양 전달 시스템과 같은 다른 기존 방법에 비해 이 기술을 사용하는 주요 이점은 면역 체계 내에서 자연적으로 발달하는 항원결정기 특이적 T 세포의 실제 다클론 집단에 대한 연구가 수행된다는 것입니다.

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