깨어 마우스로 CNS의 치료학의 비강 관리

이 절차의 전반적인 목표는 마취 없이 마우스의 비강 내 전달을 사용하여 중추 신경계에 약물을 투여하는 것입니다. 이것은 먼저 마우스를 핸들링에 적응시킴으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 변형된 목덜미 손잡이를 사용하여 동물의 머리를 고정하는 것입니다.

다음 약물 방울을 피펫터로 비강 내에 투여합니다. 마지막 단계에서 마우스는 보상과 함께 케이지로 돌아갑니다. 이 기술의 주요 장점은 비강 내 투여가 전신 노출 없이 중추 신경계에 약물을 표적으로 한다는 점과 약물의 깨어 있는 비강 내 전달을 통해 마취 없이 마우스에서 만성 치료가 가능하다는 것입니다.

이 방법은 신경 질환 치료를 위한 약물 개발의 핵심 질문에 답하는 데 사용할 수 있습니다. 일반적으로 이 방법을 처음 접하는 사람은 머리의 움직임을 방지하기 위해 입을 단단히 잡기가 어렵기 때문에 어려움을 겪을 것입니다. 적절한 그립을 위한 손가락의 배치가 중요하고 텍스트와 사진으로 설명하기 어렵기 때문에 이 방법의 시각적 시연은 매우 중요합니다.비강 투여 2-4주 전에 각각 2-3일에 걸쳐 다음 단계를 수행하여 마우스가 다음 단계로 이동하기 전에 스트레스의 징후가 없는지 확인합니다.

첫 번째 환호 단계의 경우 2-3분 동안 마우스를 손바닥에 놓습니다. 케이지에서 1피트 이상 올라갈 수 없습니다. 다음으로, 마우스를 손바닥에 3분 동안 놓고 머리부터 꼬리까지 부드럽게 쓰다듬어 동물이 자유롭게 움직일 수 있도록 합니다.

동물이 쓰다듬는 것을 견디면 3분 동안 쥐를 손바닥에 놓고 엄지와 검지를 사용하여 동물의 목 뒤쪽 피부를 가볍게 꼬집습니다. 다음 적응 단계에서는 30초 동안 목덜미를 잡고 마우스를 들어 올립니다. 그런 다음 동물을 케이지 꼭대기에서 30초 더 쉬게 한 후 다시 홀드를 반복합니다.

이제 먼저 주로 사용하는 손의 엄지와 검지를 사용하여 마우스의 꼬리를 잡고 비강 내 그립을 연습합니다. 그런 다음 가운데 반지와 새끼손가락으로 동물의 몸 아랫부분을 케이지에 가볍게 고정합니다. 쥐가 막대를 가볍게 잡고 동물을 쭉 뻗어 목덜미를 더 잘 잡을 수 있습니다.

주로 사용하지 않는 손의 엄지와 중지를 사용하여 목과 어깨 뒤의 목덜미를 마우스로 단단히 꼬집고 등 위쪽의 느슨한 피부를 위로 당겨 견갑골을 가로질러 텐트를 만듭니다. 그런 다음 주로 사용하지 않는 손의 검지를 마우스의 머리에 가능한 한 코에 가깝게 빠르게 놓고 피부를 뒤로 당깁니다. 동시에 최적의 위치를 위해 엄지와 중지를 머리 쪽으로 밉니다.

이상적으로는 마우스가 머리를 수직 또는 수평으로 움직일 수 없어야 합니다. 다음 세션에서는 방금 시연한 대로 비강 내 그립을 수행합니다. 이번에는 동물을 뒤집어 복부 쪽이 천장을 향하고 목이 바닥과 평행하도록 합니다.

마우스가 거꾸로 된 비강 내 그립에 익숙해지면 팁이 비어 있는 마이크로 피펫을 각 콧구멍 가까이에 잠시 놓는 연습을 합니다. 마지막으로, 6마이크로리터의 식염수를 먼저 1개의 나레에만 투여한 다음, 다음 세션에서는 비강 내 약물 투여를 시작하기 전에 다음 섹션에서 더 자세히 설명한 비강 내 약물 전달 절차를 사용하여 둘 다에 투여합니다. 먼저 쉽게 접근할 수 있도록 케이지와 투여 기구를 배치합니다.

그런 다음 케이지에서 첫 번째 마우스를 제거하고 방금 시연된 비강 내 그립을 사용하여 동물을 들어올립니다. 다음으로, 주로 사용하는 손을 사용하여 마이크로 피펫에 6마이크로리터의 약물을 로드합니다. 채워진 피펫의 끝을 마우스의 왼쪽 콧구멍 근처에 45도 각도로 놓습니다.

그런 다음 약물을 천천히 배출하여 팁에 부피의 약 절반이 있는 작은 방울을 형성하고, 마우스가 방울을 흡입한 직후 마우스가 흡입할 수 있을 만큼 마우스의 콧구멍에 충분히 가깝게 드롭릿을 배치하고, 피펫 팁에서 나머지 약물을 배출하여 마우스가 약 2-3초 후에 동일한 콧구멍을 통해 흡입할 수 있는 또 다른 작은 방울을 형성합니다. 이 자세로 마우스를 15초 동안 유지한 다음 같은 방식으로 오른쪽 콧구멍에 약물을 투여합니다. 이제, 2 분 동안 케이지 위에 마우스를 다시 놓고 투여 후 정확히 2 분 후에 첫 번째 콧 구멍에 한 번에 하나 또는 두 개의 마우스를 투여 한 번에 투여 한 것처럼 약물을 양쪽 콧 구멍에 다시 전달하십시오. 이 샘플 일정은 마우스가 전체 용량의 약물을 투여받은 후에 따를 수 있습니다.

동물을 우리로 되돌립니다. 각 순응 또는 비강 내 투여 세션 후, 스트레스를 줄이기 위해 긍정적 인 강화로 생쥐에게 cheerio와 같은 간식을 제공해야하며, 동물을 우리로 돌려 보내기 전에 항상 둥지를 원래 상태로 복원하고, 집단 수용 동물을 투여 할 때 케이지 식민지에서 케이지 식민지로 냄새가 전달되지 않도록 케이지 간 장갑을 교체해야합니다. 공격적인 케이지 짝짓기 행동을 유도할 수 있습니다. 한 번에 숙달되면 한 사람이 한 번에 두 개 이상의 마우스로 이 절차를 시도하는 동안 1시간 내에 15-20마리의 마우스에게 약물을 비강 내 투여할 수 있습니다.

생쥐가 실수로 우리를 바꾸는 것을 방지하기 위해 예방 조치를 취하는 것이 중요합니다. 이 비디오를 시청한 후에는 마취 없이 마우스에서 비강 내 분만을 사용하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 중추 신경계에 약물을 표적으로 삼습니다.

생쥐와 함께 작업할 때는 알레르기 항원에 노출되지 않도록 N95 마스크와 장갑을 착용하는 등 항상 예방 조치를 취하는 것을 잊지 마십시오.