Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

Ivan Liadi; Jason Roszik; Gabrielle Romain; Laurence J.N. Cooper; Navin Varadarajan

doi:10.3791/50058

JoVE Journal
Immunology and Infection

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JoVE Journal Immunology and Infection

Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

T 세포 양적 높은 처리량 단일 세포 세포 독성 분석

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09:28 min

February 2, 2013

DOI: 10.3791/50058-v

Ivan Liadi¹, Jason Roszik², Gabrielle Romain¹, Laurence J.N. Cooper², Navin Varadarajan¹

¹Department of Chemical and Biomolecular Engineering,University of Houston , ²Division of Pediatrics, Research Unit 907,University of Texas MD Anderson Cancer Center

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

우리는 종양 대상 세포와 incubated 때 T 세포의 세포 독성을 측정 할 수있는 단일 셀 높은 처리량 분석을 설명합니다. 이 방법은 spatially 정의 비율에서 T 세포와 대상 세포를 한정하는 하위 nanoliter 우물 (~ 100,000 우물 / 배열)의 조밀 한, 탄성 배열을 사용하고 이펙터 - 대상 활용 및 후속 apoptosis를 모니터링하는 형광 현미경에 연결된다.

이 실험 시스템은 단일 세포 수준에서 T 세포 매개 세포 독성을 모니터링하기 위한 고처리량 방법론을 제공합니다. 먼저, effector T 세포와 종양 표적 세포를 형광 염료 사멸로 표시합니다. 두 세포 유형을 모두 나노 웰 어레이에 로드하고 전체 칩을 cyt green 및 형광 표지된 nexin을 포함하는 배지에 담그십시오. 5.

괴사성 세포와 세포사멸 세포를 모두 식별하기 위해 이제 초기 사전 이미지를 기록하여 분석 시작 시 유정 점유율과 세포 생존율을 결정합니다. 6시간의 배양 후 두 번째 이미지를 기록합니다. 그런 다음 자동 이미지 분석을 사용하여 자동차 양성 T 세포에 의한 EL 4 CD 19 양성의 항원 특이적 용해를 정량화합니다.

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