Name: 퇴행성 관상 재관류에 의한 돼지 심장의 Decellularization 절차 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 30 s
Description: 배우세요 돼지 심장의 퇴행성 관상 재관류를 이용한 세포 제거법으로 심장 세포외기질 스캐폴드를 제조하는 방법입니다. 이 기술은 심장 조직 공학 및 재생의학 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

저자는 Brogan, 손님 미셸 위버, 그리고 순영이 Lippert을 인정하고 싶습니다. 본 연구를위한 기금은 NIH 그랜트 R03EB009237뿐만 아니라 국민의 생명 이미징 및 생물 공학 연구소와 T32HL076124-05에서 NIH 교육 교부금 T32EB001026-06에 의해 제공되었다.

1. 조직 준비 및 실험 설정 <ol><li> 즉시 도살장 또는 연구 시설에서 안락사 이후 초과 피가 묻은 손을 씻어 수확 돼지의 기관. 심방과 대동맥을 그대로 유지 초과 지방 및 조직의 마음을 잘라. 거리에 대동맥에서 폐동맥을 분리 할 지방 트림. 조직에 상처가있는 경우, 적절하게 폐기하십시오. </li><li> 냉동고 종이에 개별적으로 마음을 정리하고 완전한 냉동을 보장하기 위해 최소 24 시간에 -80 ° C의 냉동고에있는 모든 조직을 저장합니다. </li><li> 할 때 사용 (보통 미만 3 개월), 밤 4 ° C.에서 4 L의 비커에 잠겨 1 형 물에 해동 한 그대로 냉동 돼지의 심장 준비 </li><li> 마음이 완전히 해동 한 후, 심장이 건조 두드려 마음을 무게, 그리고 무게를 기록합니다. 시장 무게 돼지의 심장은 약 3백75-4백50g 무게해야합니다. </li><li> 가시 감속기의 ¼ &quot;끝으로 크기를 18 Masterflex 관을 연결합니다. 가시 감속기를 넣고대동맥 내부 튜브. 단지 팔 머리 트렁크 아래의 장소 2 호스 클램프 또는 대동맥 주위 안전한 우편 관계. 감속기와 튜브는 대동맥 밸브 위에 유지해야하며, 관상 동맥이 (그림 1) perfused 할 수 있도록. </li><li> 유형 I 물 튜브를 채우기 위해 30 또는 60 ML의 주사기를 사용합니다. 대략 중간 지점에 Masterflex 롤러 펌프의 카트리지 내에 튜브를 삽입합니다. 유입 물 2.5 L로 가득 4 L의 비커의 바닥에있는 튜브의 끝과 튜브를 확보 잠기. </li><li> 물이 담겨있는 비커에 심장과 기포를 제거하는 주요 펌프를 놓으십시오. 거품이 튜브가 삽입되어있는 대동맥에서 오는 관찰하는 경우 대동맥 추가 관계로 재배치 또는 보안해야 할 수 있습니다. 밀폐 씰은 decellularization 프로세스 (그림 2)에 적절한 압력을 유지하는 것이 중요합니다. </li><li> 0.2 % Trypsin/0.05 % EDTA/0.05 % 할머니 3 L를 포함하는 4 L의 비커를 놓고판을 저어 37에 따뜻하게에 ° C decellularization 과정의 준비 3 솔루션입니다. </li></ol> 2. 조직 린스 <ol><li> 올바른 튜​​브 크기가 선택되어 있도록, 400 ML / 분의 유량으로 펌프를 설정합니다. 15-25 분 동안 I 물을 입력으로 마음을 플러시. 펌프가 시작되면서 마음은 팽창과 심실에서 혈액을 발산한다. 신선한 솔루션은 모든 5-10 분 대체, 또는 심장에서 제거 혈액의 양에 따라 필요합니다. 혈액은 심장에서 했소하지 않는 경우, 필요에 따라 튜브와 클램프를 조정합니다. </li><li> 펌프를 중지하고 배 인산로 가득 별도의 비커에 마음을 전송할는 식염 (PBS)를 버퍼. 튜브는 솔루션에 잠수 한 후, 펌프를 시작하고 700 ML / 분으로 유량을 향상시킬 수 있습니다. 마음이 솔루션마다 5 분을 변경, 15 분에 대한 솔루션 유지됩니다. 각 솔루션 변경 사항은 조직과 튜브가 이동하는 동안 일시적으로 중지 할 펌프가 필요합니다새로운 비커합니다. </li><li> 10 분에 I 물을 입력하고 750 ML / 분으로 유량을 증가 심장을 전송합니다. </li></ol> 3. Decellularization 및 솔루션 재관류 <ol><li> 37 세 할머니 0.2 % Trypsin/0.05 % EDTA/0.05 %를 포함하는 비커에 마음을 전송 ° C. 1200 ML / 분에 펌프 속도를 증가하고 펌프를 시작합니다. 비커에 솔루션을 순환 할 수있는 비커의 바닥에 배치 저어 줄을 사용하십시오. 마음은 3 시간 총 37 ° C에서 0.2 % Trypsin/0.05 % EDTA/0.05 % 할머니 3 솔루션에 남아 있어야합니다. 1 시간 후, 1500 ML / 분에 펌프 속도를 향상시킬 수 있습니다. 추가 시간 후, 1800 ML / 분에 펌프 속도를 향상시킬 수 있습니다. 조직은 천천히 조건 조직을로 증가 관류 속도를 받게과 혈관의 파열을 방지합니다. 마음은 프로토콜이 단계에서 크기로 팽창 거의 두 번합니다. 조직 회에 걸쳐 심방에서 꼭대기까지 진행, 자연 색상을 잃게됩니다전자 프로토콜 (그림 3). </li><li> 각 솔루션 재관류 후, 린스 두 단계는 세포 파편, 화학 잔류 물, 그리고 원조 세포 용해를 제거하는 수행됩니다. 각 린스은 10 분으로 구성되어 전 10 분 뒤에 물이 상온에서 2 배 PBS 솔루션을 씻어 유형에 씻어. 각 헛된 솔루션을 헹굼 추가, 침수 마음을 포함하고있는 비커 안에 perfusate를 순환, 원래 비커의 용액의 제거로 구성되어 있습니다. 다음 0.2 % Trypsin/0.05 % EDTA/0.05 % 할머니 3 해결책 후, perfuse 1900 ML / 분의 물과 1950 ML / 분에서 2 배 PBS를 perfuse. </li><li> 3퍼센트 상온에서 튼 X-100/0.05 % EDTA/0.05 % 할머니 3의 솔루션으로 마음을 전송합니다. 2000 ML / 1 시간 분, perfuse 솔루션에 펌프 속도를 향상시킬 수 있습니다. 비커의 용액을 제거하고 신선한 솔루션으로 교체 2100 ML / 분에 펌프 속도를 높일 수 있으며, 추가 시간 반 동안 신선한 솔루션을 perfuse, 총 시간을 가져3퍼센트 튼 X-100/0.05 % EDTA/0.05 % 할머니 3 2.5 시간합니다. </li><li> 2180 ML / 10 분 각각에 대한 분에 2150 ML / 분, 배 PBS에서 유형 I 물에 조직을 씻어. </li><li> 실온에서 4 % 나트륨 Deoxycholate 솔루션에 마음을 전송합니다. 2200 ML / 분, 3 시간에 perfuse 솔루션에 펌프 속도를 향상시킬 수 있습니다. </li><li> 에서 유형 I 물에 조직을 씻어 배 PBS 2200에서 각 솔루션 5-10 분 후 솔루션을 변경하는 15 분마다에 대한 ML / 분. 설명 재관류 단계는 두 번 헹굼 단계를 수행, 4 ° C에서 하루 아침에 첨부 된 튜브로 마음을 저장하여 여러 일 동안 분할 및 유형 I 물에 잠겨 할 수 있습니다. </li><li> 다음 날, 5 분 ML / 분 1,500에서 1X PBS로 씻어 5 분 뒤에, 750 ML / 분에서 유형 I 물로 씻어 수행합니다. 프로토콜은 다음 적절한 솔루션에 설명 된 유속으로 계속 될 수 있습니다. </li></ol> 4. 소독 및 최종 처리 <ol><li> 0.1 % perac로 마음을 전송etic 산 / 2200 ML / 분에서 4 %의 에탄올 솔루션과 1.5 시간에 대한 perfuse 솔루션입니다. </li><li> 조직에 대한 최종 린스는 모두 2200 ML / 분에서 수행됩니다. 유형 I 물에 두 개의 5 분 세차 다음 15 분을 위해 1X PBS로 조직을 Perfuse. 린스의이 시리즈는 솔루션 재관류 절차를 완료하기 위해 한번 더 반복됩니다. </li><li> 펌프를 끄고 마음을 배수하는 솔루션에서 마음을 제거합니다. 대동맥의 인연을 끊고, 모든 튜브를 제거하고 1 시간에 소모 할 수있는 빈 비커에 마음을 놓으십시오. 초과 액체는 정기적으로 배수해야합니다. 완전히 마음 (그림 4) 배수하기 위해 흡수 패드에 마음을 놓는다. </li><li> 물 대부분이 제거되면 심장 세포 외 기질 (C-ECM)의 무게를 기록합니다. 심장은 decellularization 과정에서 초기 체중의 약 20~25%을 잃게 할 것으로 예상 할 수 있습니다. </li><li> 오른쪽과 왼쪽 심실뿐만 아니라, DNA quantificati에 대한 심실 중격을 관통 해부와 조직 학적 처리 위해서는 조직 전체 decellularization (그림 5) 확인합니다. </li><li> lyophilization 전에 최소한 2 시간에 -80 ° C에서 C-ECM을 멈춰 봐. </li></ol>

<ol><li>Ott, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+and+orthotopic+transplantation+of+a+bioartificial+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Regeneration and orthotopic transplantation of a bioartificial lung.</a> Nat. Med. 16, 927-933 (2010).</li>
<li>Ott, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion-decellularized+matrix%3A+using+nature%27s+platform+to+engineer+a+bioartificial+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Perfusion-decellularized matrix: using nature's platform to engineer a bioartificial heart.</a> Nat. Med. , (2008).</li>
<li>Petersen, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+lungs+for+in+vivo+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered lungs for in vivo implantation.</a> Science. 329, 538-541 (2010).</li>
<li>Uygun, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+reengineering+through+development+of+a+transplantable+recellularized+liver+graft+using+decellularized+liver+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix.</a> Nat. Med. , (2010).</li>
<li>Wainwright, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+cardiac+extracellular+matrix+from+an+intact+porcine+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Preparation of cardiac extracellular matrix from an intact porcine heart.</a> Tissue Eng. Part C Methods. 16, 525-532 (2010).</li>
<li>Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+tissue+and+whole+organ+decellularization+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">An overview of tissue and whole organ decellularization processes.</a> Biomaterials. 32, 3233-3243 (2011).</li>
<li>Gilbert, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+tissue+and+organ+decellularization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+cellular+biochemistry%22%5BJournal%5D)">Strategies for tissue and organ decellularization.</a> Journal of cellular biochemistry. , (2012).</li>
<li>Gilbert, T. W., Sellaro, T. L., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularization+of+tissues+and+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Decellularization of tissues and organs.</a> Biomaterials. 27, 3675-3683 (2006).</li>
<li>Akhyari, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+quest+for+an+optimized+protocol+for+whole-heart+decellularization%3A+a+comparison+of+three+popular+and+a+novel+decellularization+technique+and+their+diverse+effects+on+crucial+extracellular+matrix+qualities%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">The quest for an optimized protocol for whole-heart decellularization: a comparison of three popular and a novel decellularization technique and their diverse effects on crucial extracellular matrix qualities.</a> Tissue Eng. Part C Methods. 17, 915-926 (2011).</li>
<li>Weymann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+evaluation+of+a+perfusion+decellularization+porcine+heart+model--generation+of+3-dimensional+myocardial+neoscaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+journal+%3A+official+journal+of+the+Japanese+Circulation+Society%22%5BJournal%5D)">Development and evaluation of a perfusion decellularization porcine heart model--generation of 3-dimensional myocardial neoscaffolds.</a> Circulation journal : official journal of the Japanese Circulation Society. 75, 852-860 (2011).</li>
<li>Cortiella, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+acellular+natural+lung+matrix+on+murine+embryonic+stem+cell+differentiation+and+tissue+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Influence of acellular natural lung matrix on murine embryonic stem cell differentiation and tissue formation.</a> Tissue Eng. Part A. 16, 2565-2580 (1089).</li>
<li>Remlinger, N. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrated+xenogeneic+decellularized+tracheal+matrix+as+a+scaffold+for+tracheal+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Hydrated xenogeneic decellularized tracheal matrix as a scaffold for tracheal reconstruction.</a> Biomaterials. 31, 3520-3526 (2010).</li>
<li>Sellaro, T. L., Ravindra, A. K., Stolz, D. B., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+of+hepatic+sinusoidal+endothelial+cell+phenotype+in+vitro+using+organ-specific+extracellular+matrix+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Maintenance of hepatic sinusoidal endothelial cell phenotype in vitro using organ-specific extracellular matrix scaffolds.</a> Tissue Eng. 13, 2301-2310 (2007).</li>
<li>Wainwright, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Right+ventricular+outflow+tract+repair+with+a+cardiac+biologic+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%2C+tissues%2C+organs%22%5BJournal%5D)">Right ventricular outflow tract repair with a cardiac biologic scaffold.</a> Cells, tissues, organs. 195, 159-170 (2012).</li>
</ol>

길버트 박사는 연구가 완료하는 동안 ACell 주식회사에서 과학 자문위원회에 있었는데, 최근 연구 및 개발의 부사장이되었다. ACell, Inc는 방광 매트릭스을 판매하고 본 연구에 상업적 관심이 없습니다.

현재 연구는 돼지의 마음의 일관되고 효율적인 decellularization에 대한 방법론을 설명했다. 프로토콜은 이전에 다음 ID로 출판 보고서 1 변형 등의 반복적 인 결과를 제공 흐름에 더 이상 노출 증가 압력을, 포함되어 있습니다. 그 결과 decellularized 조직은 조직이 성공적으로 decellularization에 게시 된 기준을 모두 만났다. 자주 솔루션으로 변경되며, 변경된 사항은 조직에 세포 물질의 재 도입을 제한하기 위해 수행되었으며, 각 decellularization 에이전트에 노출 기간은 ECM에 부정적 영향을 줄이기 위해 최소화했다. 프로토콜의 시작 단계 동안, 재관류 율이 점차 조건 조직을로 증가하고 프로토콜의 이후 단계에서 높은 유량을 허용했다. 초기 단계에서 에어컨 조직을하지 않고 마음의 vasculature는 심장의 재관류가 불가능하고, 파열 할 수 있습니다. proto열은 그 효율성으로 인해 사용되었고, 어떤 주장이 다른 프로토콜을 통해 그 우수성...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 / 재료의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 </td></tr><tr><td> 트립신 </td><td> Gibco </td><td> 15,090 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) </td><td> 어부 </td><td> BP120-500 </td><td></td></tr><tr><td> 앤 3 </td><td> 시그마 </td><td> S2002-500G </td><td></td></tr><tr><td> 트리톤 X-100 </td><td> 시그마 </td><td> X100-1L </td><td></td></tr><tr><td> 10X PBS </td><td> 어부 </td><td> BP399-20 </td><td></td></tr><tr><td> 나트륨 Deoxycholate </td><td> 시그마 </td><td> D6750-500G </td><td></td></tr><tr><td> Peracetic 산 </td><td> Pfaltz와 바우어 </td><td> P05020 </td><td> 35% CAS # 79-21-0 </td></tr><tr><td> 에탄올 </td><td> Pharmco </td><td> 111000200 </td><td></tD&gt; </tr><tr><td> Masterflex 펌프 드라이브 </td><td> 콜 Parmer </td><td> SI-07524-50 </td><td></td></tr><tr><td> Masterflex 관 </td><td> 콜 Parmer </td><td> 96400-18 </td><td> 크기 18 </td></tr><tr><td> 가시 감속기 </td><td> 콜 Parmer </td><td> EW-30612-20 </td><td></td></tr><tr><td> 4L 비커 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 02-540T </td><td></td></tr></tbody></table>

퇴행성 관상 재관류에 의한 돼지 심장의 decellularization 절차

Procedure for Decellularization of Porcine Heart by Retrograde Coronary Perfusion

크게 비계의 기본 구조를 유지하면서 재관류 기반 전체 오르간 decellularization은 최근, 특정 사이트 세포 외 기질 공사장 공중 발판을 만들 수있는 수단으로 조직 공학 분야에 대한 관심을 얻었습니다. 현재까지이 방식은 심장, 폐, 간 1-5을 포함한 장기 시스템의 다양한 활용되었습니다. 쉽게 접근 할 수 혈관 네트워크가없는 조직에 대한 이전 decellularization 방법은 세제, 산, 또는 주변 세포 환경 6-8에서 세포와 핵 구성 요소를 제거하는 수단으로 효소 트리트먼트 솔루션에 조직의 장시간 노출시 의존하고 있습니다. 그러나, 솔루션의 능력에 따라 이러한 방법 힌지의 효과는 확산을 통해 조직을 침투합니다. 대조적으로, 자연 혈관 시스템을 통해 기관의 재관류 효과적으로 확산 거리와 decellularizati의 촉진 수송을 감소조직에서 조직과 세포의 구성 요소에 에이전트 있습니다. 여기, 우리는 완전히 관상 동맥 재관류 역행을 통해 그대로 돼지의 심장을 decellularize하는 방법을 설명합니다. 프로토콜은 그대로 심장의 3 차원 구조를 완벽하게 decellularized 심장 세포 외 기질 (C-ECM) 비계를 굴복. 우리의 방법은 효소, 세제, 그리고 세포의 용해 및 제거에 도움 hypertonic과 hypotonic 린스와 커플 링 산 일련의를 사용했습니다. 프로토콜은 세포 물질의 제거에 도움 튼 X-100과 나트륨 deoxycholate 솔루션 다음 행렬의 세포를 분리하는 트립신 솔루션을 사용했습니다. 설명 프로토콜은보다 큰 2 L / 오랜 시간 동안 분 재관류 속도를 사용합니다. 세포 파편의 오염없이 조직에 대리인의 교통편을 허용 및 솔루션 변경과 결합 높은 유량은 조직의 린스 효과 보장. 설명 방법은 nati의 모든 핵 물질을 제거응용 프로그램의 다양한 사용할 수있는 특정 사이트 심장 ECM 비계를 만들고, 돼지의 심장 조직이 있어요.

전체 돼지의 마음에 decellularization의 효과는 자연적으로 크기의 차이, 압력 및 선박 배열로 인해 다릅니다. 따라서 파생 된 세포 외 기질 공사장 공중 발판의 정확한 구성은 마음에서 마음으로 동일하지 않습니다. 설명 프로토콜의 완성은 세포 물질의 손실을 나타내는 흰색 또는 반투명 나타납니다 마음을 얻을 것입니다. 그러나, 널리 조직이 몇 양적 매개 변수 팔의 조합에 따라 &quot;decellularized&quot;로 간주 될 수 있다는 가능합니다. 성공적인 decellularization 프로토콜은 조직의 MG 당 두 번 좌초 DNA (그림 6)의 50 미만 NG와 함께 매트릭스를 생성합니다. 매트릭스의 주입시 호스트 면역 반응을 방지하기 위해, 나머지 DNA는 200m 미만의 기본 쌍 (그림 7)를 포함해야합니다. 이러한 연구 결과를 확인하려면 Hematoxylin과 Eosin 염색은 핵의 부재를 공개해야심실과 심실 간 중격 <...

신속하고 완벽하게 역행 재관류를 통해 그대로 돼지의 심장에서 세포 구성 요소를 제거하는 방법이 설명되어 있습니다. 이 방법은 여러 임상 응용 프로그램에서 사용하기 위해 가능성이있는 사이트 특정 심장 세포 외 기질 비계를 산출.

퇴행성 관상 재관류에 의한 돼지 심장의 Decellularization 절차

Perfusion-based  whole organ decellularization has recently gained interest in the field of  tissue engineering as a means to create site-specific ...

이 절차의 전반적인 목표는 역행성 증식을 통해 온전한 돼지 심장에서 세포 성분을 빠르고 완전하게 제거하여 부위 특이적 심장 세포외 기질 골격을 생성하는 것입니다. 이것은 온전한 돼지 심장의 대동맥인 캐뉼러팅(cannulating)을 통해 이루어집니다. 다음으로 튜브를 연동 펌프에 부착하고 조직을 낮은 유속으로 물과 소금 용액으로 세척합니다.그런 다음 심장에 일련의 세제와 효소 용액을 점차적으로 증가시키는 유속으로 관류하여 세포 성분을 제거합니다. 마지막 단계는 소독액을 관류하는 것입니다. 튜브를 제거하고 처리를 위해 심실 벽을 잘라냅니다.최종적으로 심장을 분석하여 조직에서 세포 및 핵 물질이 완전히 제거되었는지 확인합니다. 튜브의 정확한 위치가 실험 성공의 열쇠이기 때문에 캐뉼레이션 및 초기 풍량 단계를 배우기가 어렵기 때문에 이 방법의 시각적 시연이 중요합니다. 돼지 장기는 안락사 직후 도살장이나 연구 시설에서 얻습니다.먼저 과도한 피를 헹굽니다. 다음으로, 심방과 대동맥을 그대로 유지하면서 과도한 지방과 조직의 심장을 잘라냅니다. 추가적인 지방을 제거하여 폐동맥과 대동맥을 분리하십시오.다듬은 후에는 각 심장을 냉동고로 개별적으로 싸서 영하 80도에서 최소 24시간 동안 보관하여 완전히 얼립니다. 사용할 준비가 되면 1형 물을 채운 4리터 비커에 심장을 담가 심장을 해동하고 밤새 섭씨 4도로 두십시오. 심장이 완전히 해동된 후 패드를 덧대어 말리고 무게를 기록합니다.시판 체중 돼지의 심장 무게는 약 375-450g입니다. 심장이 준비되면 크기 18 마스터 플렉스 튜빙을 미늘 감속기의 1/4인치 끝에 연결합니다. 다음으로, 미늘 감속기와 튜브를 대동맥 내부에 삽입합니다.두 개의 호스 cl을 놓습니다.amps 또는 상완두형성 몸통 바로 아래의 대동맥 주위에 지퍼 타이를 고정합니다. 감속기와 튜브는 관상동맥이 관류될 수 있도록 대동맥 판막 위에 있어야 합니다. 다음으로, 주사기를 사용하여 튜브에 1형 물을 채우고 대략적인 중간 지점에서 마스터 플렉스 롤러 펌프의 카트리지에 삽입합니다.다음으로, 2.5리터의 물을 채운 비이커 바닥에 심장과 함께 튜브의 유입 끝을 담그고 고정합니다. 이 절차의 가장 어려운 측면은 심장의 적절한 캐뉼레이션과 절차 전반에 걸쳐 적절한 펌프 속도를 유지하는 것입니다. 우리는 시술 전반에 걸쳐 조직에 기포가 있는지 육안으로 검사하고 시술 전반에 걸쳐 심실에서 적절한 삼출액을 유지함으로써 실험

procedure-for-decellularization-porcine-heart-retrograde-coronary

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

이 비디오에서는 고립된 쥐 심장의 Langendorff 역행 관류를 수행합니다. 시술 중, 상행 대동맥에 삽입된 캐뉼라를 사용하여 관상 동맥을 통해 관류 용액으로 역행하여 심장의 심장 활동을 유지합니다. 이 모델은 심장의 심장 병리 생리학을 연구하는 데 사용됩니다.

Langendorff 역행성 심장 관류: 고립된 쥐 심장을 관류하는 생체 외 기술

이 비디오에서는 심장 이식을 위해 돼지 모델에서 심장을 추출하는 단계별 프로토콜에 대해 설명합니다.

돼지 심장 절제술: 심장 이식을 위해 돼지 심장을 추출하는 프로토콜

이 비디오는 산소가 함유된 영양이 풍부한 관류액 용액으로 분리된 돼지 심장을 관류하여 보존하는 현장 기술을 설명합니다. 이 기술을 사용하면 생리학적 조건에서 심장 성능을 종합적으로 평가할 수 있습니다.

Ex situ heart perfusion: 고립된 돼지 심장 기능을 보존하는 기술

이 메서드는 decellularization의 삼투성 충격 및 최소한의 기관 매트릭스 중단 이온 세제의 관류에 따라 간단한 프로토콜을 사용 하 여 복잡 한 단단한 기관 수 있습니다. 그것은 흐름 역학 및 세포질 파편 유출의 실시간 모니터링으로 가압된 주머니 안에 인간의 마음에 대 한 소설 decellularization 기법으로를 구성 됩니다.

거꾸로 방향 가압된 주머니 안에 전체 인간의 마음의 decellularization

Normothermic 전 situ 심장 관류 (ESHP) 치는, 반 생리 적인 상태에서 마음을 유지 합니다. 작업 모드에서 수행 될 때 ESHP 심장 기능 및 장기 생존을 기증자의 정교한 평가 수행할 수 있는 기회를 제공 합니다. 여기, 우리는 ESHP 동안 심근 성능 평가 대 한 우리의 방법을 설명합니다.

작업 모드에 Situ 심장 관류 Ex normothermic: 심장 기능 및 대사 평가

여기에서, 우리는 새로운 심장 보호 전략을 조사하기 위하여 확고하게 확립되고 이용된 정형포피성 심혼 이식의 전임상 대형 동물 (돼지) 모형을 기술합니다.

정형외 심장 이식의 전 임상 돼지 모델

우리는 선행 관류 기술에 의해 고품질의 개별 마우스 심장 세포를 격리하기위한 simple 방법을 개발했습니다. 이 방법은 Langendorff가 없으며 심실 및 심방 심근 세포 또는 심장 섬유아세포 또는 선조와 같은 간질 세포를 분리하는 데 유용합니다.

마우스에서 심근세포 절연을 위한 영양 관류 방법

우리는 돼지 이종성 심장 이식 모델에서 전체 심장 동종이식편에 치료제를 전달하기 위한 규범발열 ex vivo sanguinous perfusion system을 활용하기 위한 프로토콜을 제시한다.

심장 동종이식편에 치료제를 전달하기 위한 돼지 이질성 심장 이식 프로토콜

이 프로토콜은 맞춤형 관류 생물 반응기에서 플랩 혈관 구조를 통해 나트륨 도데 실 설페이트 세제의 관류에 의한 혈관 화 된 돼지 플랩의 외과 적 조달 및 후속 탈세포화를 설명합니다.

맞춤형 관류 생물 반응기에서 돼지 혈관 플랩의 조달 및 관류-탈세포화

관상동맥 질환에 대한 선별 검사는 확장된 기준을 가진 기증자 심장의 조달을 증가시킬 수 있습니다. ex-situ heart perfusion 동안 재현성 있는 관상동맥 조영술을 수행하기 위한 프로토콜이 돼지 모델에서 본원에 설명되어 있다.

돼지 모델에서 Ex-Situ Heart Perfusion 중 관상 동맥 조영술

본 프로토콜은 동종이식편의 체외 관류를 활용하여 순환기 사망 후 기증 후 심장 이식의 고충실도 돼지 모델을 설명합니다.

순환기 사망 후 기증에 따른 정형소 심장 이식의 고충실도 돼지 모델

배우세요 돼지 심장의 퇴행성 관상 재관류를 이용한 세포 제거법으로 심장 세포외기질 스캐폴드를 제조하는 방법입니다. 이 기술은 심장 조직 공학 및 재생의학 연구에 활용됩니다.

퇴행성 관상 재관류에 의한 돼지 심장의 Decellularization 절차

더 많은 동영상 탐색