Name: 애벌레의 Zebrafish의 Forebrain Electrophysiological 기록 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-24T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min
Description: 배우세요 애벌레 제브라피시 전뇌에서 세포외 전기생리학적 기록 방법을. 이 기술은 뇌 활동을 실시간으로 모니터링하여 간질 발작 연구와 유전자 변형 분석에 활용됩니다.

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저자는 실험실에서 zebrafish를 확립하기 위해 초기 노력에 피터 카스트로와 매튜 Dinday 감사드립니다. 이 작품은 건강 유리카 기금 (# R01NS079214-01)의 국립 연구소에 의해 자금을 지원했다.

1. 계란 생산 및 수집 <ol><li> Zebrafish 축산는 이전 8 설명한 표준 절차를 따릅니다. 간단히, 성인 zebrafish는 장소에 디바이더와 탱크를 사육에 자리 잡고 있습니다. 방에 불이 다음 아침에 왔을 때, 디바이더는 탱크와 생선이 방해받지 결합 시간의 약 20-60 분 수 있습니다 사육에서 제거됩니다. </li><li> 번식 탱크에서 달걀은 스트레이너에 수집 달걀 물에 헹구어 있습니다. 달걀은 다음 달걀 물과 페트리 접시으로 전송됩니다. Unfertilized 달걀과 잔해가 전송 피펫을 사용하여 제거됩니다. </li><li> 보육에 수집 된 계란 (28-32 ° C)를 포함하는 장소 페트리 접시. 계란 이틀 후 수정을 (dpf) 주변, 부화 후, 전송 피펫과 융모막 및 기타 이물질을 제거합니다. </li><li> 원하는 일에 후 수정을 (3-8 dpf)는 실온에서 실험실 벤치에서 자유롭게 수영 유충과 장소를 포함하는 페트리 접시를 제거합니다. </li></ol><ol><li> micropipette의 풀러를 사용하여 1.2 mm OD 붕규산 유리는 바보 퍼티 램프 위에 누워하여 150mm 페트리 접시 또는 빈 피펫 상자에 두 개의 바늘과 가게에 모세관 당긴다. 바늘 사전에 당겨 수 있습니다. 다른 OD 유리 모세 혈관이 가능한 앰프 headstage의 종류에 따라 사용할 수 있습니다. </li><li> Nalgene 주사기 필터 (4 mm)과 Microfil 필라멘트 (워너 정밀 계측기) 첨부와 1 ML의 주사기를 사용하여 세포 녹화 솔루션 (2 M NaCl)과 Backload microelectrode. 남은 몇 또는 전혀 거품이 될 때까지 바늘 끝 방향으로 bolus를 흔들어하거나 누릅니다. </li></ol> 3. 한천의 고정 <ol><li> 계란 물에 1.2 % 낮은 녹는 점 한천의 새로운 솔루션을 준비합니다. ~ 37 ° C.에서 물 목욕 세트의 장소 한천 솔루션 </li><li> 냉장고에 기록 챔버 및 장소 (5-10 분)와 coverslip을 준비합니다. 녹음 챔버 matc해야합니다H는하는 전기 생리학의 장비에 사용됩니다. 우리는 워너 악기 (모델 RC-26GLP)에서 로우 프로파일 공개 다이아몬드 목욕 이미징 챔버를 사용합니다. </li><li> 파스퇴르 또는 전송 피펫, 깨끗한 페트리 접시 판에 달걀 물을 작은 물방울에 놓으 애벌레의 zebrafish을 사용합니다. 이 비말에, 마취 (0.02 % tricaine)과 전신 마비 에이전트 (1 MG / ML α-bungarotoxin)를 포함하는 솔루션의 비말을 추가합니다. </li><li> 운동의 손실 (5-10 분)에 대한 zebrafish를 모니터링합니다. </li><li> 냉동실에서 coverslip / 녹음 챔버를 제거합니다. stereomicroscope의 무대에 챔버를 놓습니다. 전송 피펫 사용 비말과 coverslip / 녹음 챔버로 전송 솔루션 (물고기)에 1.2 % 낮은 녹는 점 아가로 오스의 여러 ML을 섞는다. </li><li> 피펫 팁 또는 고급 무딘 바늘, 물고기의 등 부분은 아가로 오스 겔 표면에 노출 될 수 있도록 stereomicroscope 아래에 위치 애벌레을 사용합니다. 다음 평면 주걱 전송에게 한천 B를 사용하여 강화 (5-10 분)에 아가로 오스 허용전기 생리학의 유정에서 설정 기록 챔버에 고정. </li></ol> 3. 세포 필드 레코딩 <ol><li> 녹음 챔버에 zebrafish 기록 매체 2-5 ML을 추가합니다. 약물 변경 사항은 약 1 ML / 분의 속도로 레코딩 솔루션을 필요 perfuse 챔버 경우. 녹화 솔루션의 어떠한 산소가 필요하지 않습니다. </li><li> 3 차원 micromanipulator에 장착 증폭기 headstage에 microelectrode를 (약 1 μm 팁 직경 MΩ 2-7)를 넣습니다. micromanipulator은 움직임과 조정의 범위를 허용 할 수있는 적절한 위치에 있는지 확인합니다. 무대에서 내려 높은 현미경의 전망의 비행기, 그리고 위하고 약간 zebrafish의 머리 앞의 지점으로 낮은 정밀 조정을 사용하여에 microelectrode 팁을 가져와. </li><li> &quot;전류 클램프&quot;모드 제로 전극의 앰프를 갖추고 있습니다. </li><li> 그냥 s를 만지고 있도록 정밀 조정 할 낮은 전극 팁을 사용하여약간 forebrain 앞의 zebrafish의 urface. </li><li> 이 zebrafish의 피부를 구멍까지 미세 조정 단계를 사용하면 전극 팁을 부활 시켰습니다. forebrain에 몇 미크론를 해결 한 후 전극을 향상 할 수 있도록 허용합니다. </li><li> Axoscope 소프트웨어를 사용하여 전류 클램프 모드에서 전기 활동을 기록합니다. 데이터는 10 kHz에서의 샘플링 속도에서 획득됩니다. </li></ol>

<ol><li>Clark, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stressing+zebrafish+for+behavioral+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Reviews+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Stressing zebrafish for behavioral genetics.</a> Reviews in Neuroscience. 22 (1), 49(2011).</li>
<li>Rinkwitz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+an+integrative+system+for+neurogenomics+and+neurosciences%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: an integrative system for neurogenomics and neurosciences.</a> Progress in Neurobiology. 93 (2), 231(2011).</li>
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</ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

여기에 제시된 세포 녹화 방법은 뇌 활동의 매우 민감하고 빠른 분석이 가능합니다. 이 음반은 일반적으로 간질 환자 11 12 쥐 모델에서 비정상적인 전기 방전 (즉, 발작)의 존재를 평가하는 데 사용 electroencephalographic (EEG) 모니터링 유사합니다. 여기에 표시된대로 세포 녹음, 약리 조작과 함께 사용할 수 있습니다. 레코딩 이러한 유형의도 유전자 변형 zebrafish 잠재적 인 간질 phenotypes을 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 돌연변이 zebrafish는 ENU mutagenesis의 화면 (Zebrafish 국제 리소스 센터를 참조에서 확인 많은 유전자 변이에 일반적으로 사용할 수 있습니다 <a href="http://zebrafish.org/zirc/home/guide.php" target="_blank">http://zebrafish.org/zirc/home/guide.php을</a> ) 또는 신흥 Tol2 유전자 변형 7 아연...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 (선택 사항) </td></tr><tr><td> 아가로 오스 낮은 녹는 </td><td> 피셔 - 과학 </td><td> BP1360-100 </td><td> 1.2 %에서 배아 미디어에서 디졸브 </td></tr><tr><td> 기록 미디어 </td><td> 피셔 - 과학 </td><td> BP3581, P330-3, BP410-1, BP214-500, D16-1, C77-500 </td><td> 1 ㎜ NaCl, 2.9 MM KCl, 10 MM의 HEPES, 1.2 MM MgCl 2, 10 MM 덱스 트로 오스, 2.1 MM CaCl 2 1 N NaOH로 약 7.3로 산도를 </td></tr><tr><td> Tricaine </td><td> 은빛 연구소 </td><td> MS-222 </td><td> 0.02 % </td></tr><tr><td> α-bungarotoxin </td><td> Bioscience Tocris </td><td> 2133 </td><td> 1 MG / ML </td></tr><tr><td> 모세관 유리 튜브 </td><td> 워너 악기 </td><td> G120TF -3 </td><td> MΩ이 -7의 저항에 당겨 </td></tr><tr><td> 패치 클램프 증폭기 </td><td> 워너 악기 </td><td> PC-505B </td><td> 우리는 전류 클램프 모드에서 워너 증폭기를 사용하여, 이득은 2K로 설정 2 MV / PA 및 베셀 필터에서 설정합니다. 비교 모델은 제조업체의 지침에 따라 사용할 수 있습니다. </td></tr><tr><td> 필터 / 앰프 </td><td> 백조 기술 </td><td> FLA-01 </td><td> 10-20에서 설정 게인; 1 2K로 설정 컷 - 오프 주파수, 노치 필터에 우리는 백조 사전 증폭기를 사용합니다. 비교 모델은 제조업체의 지침에 따라 사용할 수 있습니다. </td></tr><tr><td> 축삭 A / D 보드와 Axoscope 소프트웨어 </td><td> 분자 장치 </td><td> 축삭 Digidata 1320A, Axoscope 8.2 </td><td> 데이터는 간격이없는 수집 모드를 사용 Axoscope에 수집, 10 kHz에서에서 샘플링. 비교 모델 및 프로그램은 제조업체의 지침에 따라 사용할 수 있습니다. </td></tr><tr><td> 달걀 물을 </td><td&gt; 인스턴트 오션 </td><td></td><td> 3g 인스턴트 오션 바다 소금, 10 ML 탈 이온수 2 ML 0.1 % 메틸렌 블루 </td></tr></tbody></table>

애벌레의 zebrafish의 forebrain electrophysiological 기록

Forebrain Electrophysiological Recording in Larval Zebrafish

간질은 미국에서 3 백만 명에 이르는 사람들과 최대 50,000,000명 전 세계적으로 영향을 미칩니다. 자연 부당한 발작의 발생으로 정의, 간질은 뇌 또는 유전자 변이에 대한 모욕의 결과로 획득 할 수 있습니다. 동물 모델 압류에 대한 노력은 주로 활용 설치류의 모욕 (convul​​sant 약물, 자극 또는 뇌 손상)과 유전자 조작을 (안티센스 최저, 상동 재조합 또는 transgenesis) 획득했습니다. Zebrafish는 쥐 기반 간질 연구에 귀중한 대안을 제공 할 수 척추 모델 시스템 1~3아르. Zebrafish는 척추 동물의 유전자 또는 개발 연구에서 널리 사용되며, 포유 동물에 대한 유전 적 유사성의 높은 학위를 전시 및 알려진 인간 단일 유전자 간질 변이 ~ 85 %를 homologs을 표현한다. 때문에 자신의 작은 크기 (길이 4~6mm)로, zebrafish의 유충은 초기 개발 및 arra 동안 100 μl의 낮은 유체 볼륨에 유지 할 수 있습니다멀티 잘 접시에 yed. 시약은 배아는 약물 관리를 단순화하고 테스트 화합물 4 생체 검사에서 빠른 있도록 개발 된 솔루션에 직접 추가 할 수 있습니다. 합성 oligonucleotides (morpholinos), mutagenesis, 아연 손가락 nuclease와 유전자 변형 접근 방식은 빠른 속도로 5-7 zebrafish의 유전자 최저 또는 돌연변이를 생성하는 데 사용할 수 있습니다. 이 속성은 zebrafish 연구 한테 그런 간질과 같은 신경 질환의 연구에서 동물에 비해 전례없는 통계 전력 분석 이점을 여유. 간질 연구를위한 &quot;금 표준&quot;중앙 뇌 구조 (즉, 발작), 효율적으로 애벌레의 zebrafish의 뇌 활동을 기록하는 방법에 발생한 이상 전기 방전을 감시하고 분석하는 것입니다 때문에 여기에 설명되어 있습니다. 이 방법은 기존의 세포 녹화 기술의 적응이며, 그대로 zebrafish 애벌레의 뇌 활동의 안정적인 장기 모니터링 할 수 있습니다. 에스충분한 녹음은 유전자 변형 물고기에 기록 convul​​sant 마약과 자연 발작의 목욕 응용 프로그램에 의해 유도 급성 발작에 표시됩니다.

한천 - 임베디드 zebrafish 애벌레의 forebrain에 기록 electrographic 발작과 같은 방전의 예는 그림 1에 표시됩니다. 또는 1 밀리미터 picrotoxin (B에, 8 dpf),이 샘플에서 큰 진폭 멀티 스파이크 버스트 방전은 convul​​sant 약의 목욕 응용 프로그램을, 40 밀리미터 pilocarpine (6 dpf의)에 의해 evoked했다. 이 음반에 고정하고 한천 - 임베디드 zebrafish는 지속적으로 90 분에에 모니터링하고 있습니다. 물고기는 최대 24 시간까지에 대해 이러한 녹음 조건 하에서 가능한 상태로 유지됩니다. 약물은 입욕 매체와 30-45 분 이내에 애벌레의 zebrafish forebrain 활동을 유도 할 수있는 한천로 일반적으로 확산에 추가됩니다. 이 방법은 애벌레로 약물 솔루션의 비교적 작은 볼륨 (2-5 ML)와 함께 사용할 수는 지속적으로 살포를 필요로하지 않고 정적 목욕 구성 필요한 경우에 기록 할 수 있습니다. 패널 C에서 ...

애벌레의 zebrafish forebrain에서 세포 필드 잠재력을 기록하는 간단한 방법이 설명되어 있습니다. 방법은 강력한를 제공합니다<em&gt; 생체 내</em&gt; 읽기에서의 활동 압수 같은. 이 기술은 간질 관련 유전자 또는 convul​​sant 약의 투여에 의해 evoked 발작을 들고 유전자 변형 zebrafish의 애벌레와 함께 사용할 수 있습니다.

애벌레의 Zebrafish의 Forebrain Electrophysiological 기록

Epilepsy affects nearly 3 million people in the United States and up to 50 million people worldwide. Defined as the occurrence of spontaneous unprovoked ...

이 절차의 전반적인 목표는 온전한 애벌레 얼룩말 물고기의 전뇌에서 세포 외 필드 기록을 얻는 것입니다. 이것은 먼저 aros 블록에서 애벌레 얼룩말 물고기를 고정시킴으로써 수행됩니다. 다음으로, 기록 마이크로 전극을 전뇌에 배치하여 직접 시각화합니다.마지막 단계는 전뇌의 전기적 활동을 기록하는 것입니다. 궁극적으로, 결과는 손상되지 않은 제브라피시 유충에서 비정상적인 전기 발작 활동을 모니터링하는 데 사용할 수 있습니다. 제가 이 방법에 대한 아이디어를 처음 떠올린 것은 앞서 설명한 표준 절차를 따르는 제브라피시 사육이 유충 제브라피시에서 발작을 유발할 수 있다는 것을 입증하려고 했을 때였습니다. 간단히.성체 제브라피쉬는 칸막이가 있는 번식 탱크에 설치됩니다. 다음날 아침에 방의 불이 켜지면 칸막이가 제거되고 물고기가 20 분에서 60 분 동안 방해받지 않고 짝짓기를 할 수 있습니다. 그런 다음 탱크에서 알을 모아 달걀 물과 함께 페트리 접시로 옮기고 이송 피펫으로 파편을 제거한 다음 이제 알을 인큐베이터에 넣고 약 2 일 후에 알이 부화합니다.부화하면 이송 피펫으로 코리온과 기타 파편을 제거한 다음 원하는 발달 시점에 도달할 때까지 유충을 인큐베이터로 되돌립니다. 준비 과정에서 마이크로 피펫 풀러를 사용하여 1.2mm 외경의 규산염 보 유리 모세관을 바늘로 당깁니다. 바늘을 퍼티 경사로 위의 150mm 페트리 접시에 보관하십시오.이제 포장하고 마이크로 전극에 두 개의 몰 염화나트륨 용액을 로드합니다. 4mm 주사기 필터와 부착된 필라멘트가 있는 1리터 주사기를 사용하여 기포가 거의 또는 전혀 남지 않을 때까지 바늘 끝 근처의 덩어리를 두드립니다. 달걀 물에 1.2%LMP 한천을 섞은 신선한 용액을 준비하고 섭씨 37도의 수조에서 녹여 보관합니다.다음으로, 적절한 녹음 챔버가 있는 커버 슬립을 준비하고 5-10분 동안 냉동실에 넣습니다. 이 예에서는 깨끗한 페트리 접시 플레이트에 있는 로우 프로파일 개방형 다이아몬드 수조 이미징 챔버를 사용하여 전사 피펫을 사용하여 유충 해브라 한 마리, 물고기를 달걀 물방울에 담그십시오. 다음으로, 마취제와 마비제가 함유된 용액 한 방울을 5-10분 동안 섞습니다.얼룩말 물고기가 움직임을 잃었는지 모니터링합니다. 그런 다음 냉동실에서 커버 슬립과 녹음실을 제거합니다. 실체 현미경 스테이지에 챔버를 챔버에 놓습니다.전사 피펫을 사용하여 물 속의 물고기에 몇 밀리리터의 아그로스를 넣고 마이크로 피펫 팁 또는 미세한 무딘 바늘을 사용하여 함께 섞습니다. 물고기의 등쪽 측면이 아그로스 정지 표면에 노출되도록 유충을 배치합니다. 아그로스가 굳어지면 평평한 주걱을 사용하여 유충이 있는 어그로 블록을 전기 생리학 장비에 설치된 기록 챔버로 옮깁니다.리그에서 2-5밀리리터의 제브라피시 기록 매체를 기록 챔버에 추가합니다. 약물 변경이 필요한 경우 분당 약 1ml의 속도로 기록 용액으로 챔버를 관류하면 산소화가 필요하지 않습니다. 다음으로, 3차원 마이크로 매니퓰레이터에 장착된 증폭기 헤드 스테이지에 마이크로 전극을 삽입합니다.로드되면 microm 매니퓰레이터의 이동 및 조정 범위가 양호한지 확인하십시오. 그런 다음 마이크로 전극 팁을 view s에서 높은 현미경의 view무대에서 높은 곳에서 코스 조정을 사용하여 제브라피시 머리 바로 위와 약간 앞 지점으로 내립니다. 마이크로 전극을 제자리에 놓고 ampliifier를 현재 cl에 놓습니다.amp 모드를 선택하고 시야에서 전극을 영점 화합니다.코스 조정을 사용하여 전극 팁을 내려 전뇌보다 약간 앞에 있는 제브라피시 표면에 닿도록 합니다. 그런 다음 미세 조정 단계를 통해 얼룩말 물고기의 피부에 구멍을 뚫을 때까지 전극 끝을 전진시킵니다. 구멍이 뚫리면 마이크로 피펫이 천천히 가라앉도록 하여 전극을 몇 미크론 전뇌로 전진시킵니다.이제 aScope 소프트웨어를 사용하여 전기 활동을 기록하십시오. 전류 클램프 모드에서는 10kHz의 샘플링 속도로 데이터를 수집합니다. 이 물고기는 24시간 동안 약물을 투여하고, 2-5밀리리터 용량으로 약물을 첨가하고, 약물이 한천을 통해 얼룩말 물고기로 확산될 때까지 30-45분 동안 기다립니다.4개의 뇌. 정적 수조 구성이 허용되어 지속적인 관류가 필요하지 않습니다. 이러한 방법을 사용하면 시신경 툼에서 세포 외 기록도 얻을 수 있습니다.전기 발작과 같은 방전은 수정 후 8일의 전뇌에서 기록되었으며, 제브라피쉬 유충, 큰 진폭의 다중 스파이크 파열은 경련 약물인 40밀리몰 필로카르핀의 목욕 적용에 의해 취소되었습니다. 경련 약물로도 비슷한 폭발이 일어났다. 리톡신은 1밀리몰에 적용됩니다.수정 후 3일째에 유전자 변형 제브라 피쉬에서 자발적인 폭발 분비물이 관찰되었습니다. 이 동물에서 1-2 세포 단계에서 모르포 올리고뉴클레오타이드 주사를 사용하여 발작 및 자폐증과 관련된 소아 형태의 간질인 결절성 경화증 복합체에 대한 유전자의 발현을 녹다운했습니다. 올바르게 수행하면 이 절차를 30분 이내에 완료할 수 있습니다.

forebrain-electrophysiological-recording-in-larval-zebrafish

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 프로토콜은 성체 제브라피쉬에서 전기생리학을 수행하는 절차를 설명합니다. 이 방법은 생체 내에서 신경 활동을 측정하는 데 사용할 수 있습니다.

성체 제브라피시 전기생리학: 생체 내 뉴런의 세포 외 전기 활동을 측정하는 방법

이 비디오는 마비된 제브라피시 유충에서 구심성 뉴런의 전기 신호를 측선 신경절 근처에 마이크로피펫을 배치하고 신호 캡처를 위해 느슨한 밀봉을 형성하여 기록하는 방법을 보여줍니다. 세포외 용액은 이 과정에서 신경 세포의 생존력을 유지합니다.

고정된 제브라피시 유충에서 구심성 뉴런의 전기 신호 모니터링

이 비디오에서는, 우리는 복잡한 신경 회로를 유지하는 뇌 전체 준비에서 확인 된 하나의 뉴런에서 전기 활동을 기록하는 방법을 보여줍니다. 우리는 성선 자극 호르몬 분비 호르몬 (GnRH의) 신경 세포가 유전자 손상 뇌의 준비 식별을위한 형광 단백질로 태그 된 유전자 변형 물고기를 사용합니다.

형질 전환 생선의 본래 뇌에서 발견 뉴런의 전기적 활동을 기록

이 논문은 성인 제브라 피쉬는, 고정 삽관 및 녹음 및 손상 동물에서 신경 활동의 조작을 허용하는 생체 전기 생리학 실험에 사용 할 수있는 방법에 대해 설명합니다.

온전한 성인 Zebrafish의의 뇌에 전기 생리학 기록

이 원고는 제브라 피쉬 배아 및 유충의 척수 신경 세포에서 전기 생리 녹음하는 방법을 설명합니다. 준비는 현장에서 뉴런을 유지하고 자주 최소 절개를 포함한다. 이 방법은 초기 애벌레 단계를 통해 초기 전기 흥분의 인수, 척추 신경의 다양한 전기 생리학 연구 할 수 있습니다.

Zebrafish의<em&gt; 시츄</em&gt; 척수 척추 감각과 운동 뉴런 전기 생리 녹음 준비

여기서, 우리는 DEPDC5 유전자의 일시적인 억제로 인한 간질의 제브라피시 모델의 개발 및 특성화를 위한 프로토콜을 제시한다.

간질의 제브라피시 모델의 행동 및 생리학적 분석

여기, 선물이 애벌레 zebrafish에서 빛 갖는 electroretinogram 응답의 측정을 간소화 하는 프로토콜. 소설 원뿔 모양의 스폰지 팁 전극에 electroretinogram를 사용 하 여 신뢰할 수 있는 결과 낮은 비용으로 달성 하기 쉽게 하는 애벌레 zebrafish에 시각적 개발의 연구를 만들기 위해 도울 수 있다.

스폰지 팁 전극 A 소설 원추형을 사용 하 여 애벌레 Zebrafish에 기록 하는 Electroretinogram

여기서 우리는 생체 내 최대 애벌레와 청소년 단계에서 제브라피시 배아 뇌를 이미지화하는 방법을 제시합니다. 전기 생리학적 접근법에서 채택된 이 미세침습 절차는 성숙한 뉴런의 세포 및 세포 세포 이하 세부 사항에 대한 액세스를 제공하며 뇌 기능 및 약물 개입을 특성화하기 위한 광유전학 및 신경 약리학과 결합될 수 있습니다.

두개골과 피부 제거에 의해 깨어 얼룩말 물고기 애벌레와 청소년에서 완전히 활성 뇌 조직의 생체 내 이미징

여기에 제시된 것은 3차원 형광 현미경을 사용한 유충 제브라피쉬의 생체 내 전뇌 이미징을 위한 프로토콜입니다. 실험 절차에는 샘플 준비, 이미지 획득 및 시각화가 포함됩니다.

생체 내 3차원 형광 현미경을 사용한 제브라피쉬 유충의 전뇌 이미징

여기에서는 성인 제브라피쉬의 등쪽 전뇌에서 이광자 칼슘 이미징을 수행하는 프로토콜을 제시합니다.

행동하는 성인 제브라피쉬의 전뇌 활동에 대한 Two-Photon Calcium Imaging

여기에서는 컨포칼 현미경을 사용하여 GCaMP 칼슘 지표를 발현하는 형질전환 제브라피쉬의 뇌 영역에서 신경 활동을 조사하기 위한 자세한 프로토콜을 제시합니다.

생체 내 부분적으로 구속된 유충 제브라피시에서 감각 자극에 의해 유도된 신경 활동의 공초점 형광 이미징

배우세요 애벌레 제브라피시 전뇌에서 세포외 전기생리학적 기록 방법을. 이 기술은 뇌 활동을 실시간으로 모니터링하여 간질 발작 연구와 유전자 변형 분석에 활용됩니다.

애벌레의 Zebrafish의 Forebrain Electrophysiological 기록

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