Name: 수술 상처에 상처 Exudate 생물 화학 중재자를 수집하고 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 58 s
Description: 학습하세요 수술 상처에서 상처 삼출액을 수집하고 생화학적 매개체를 측정하는 방법을. On-Q 시스템을 수정하여 염증 및 통증 매개체를 분석하고 혈청 사이토카인과의 상관관계를 연구할 수 있습니다.

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박사 카르발료의 작품은 여성의 건강과 아동 건강 및 보건 국립 연구소 (5K12 HD043452)의 인간 개발 연구소의 연구의 Office에서 연구 보조금에 의해 지원되었다. 박사의 고뇌는 I-흐름 (레이크 포레스트, 캘리포니아)에서 공급 (ON-Q PainBuster 후 옵 통증 완화 시스템)하고 기금을 (생화학 assays)을 받았습니다.

1. 연구 프로토콜 <ul><li> 기관 검토위원회 승인 및 서면 정보 동의를 구합니다. </li><li> 연구 행위에 대해 적절한 수술 인구를 선택합니다. 이 방법론은 cesarean 배달 상처에 적용되었지만 대부분의 수술 상처가 적절한 것입니다. </li><li> 귀하의 연구 참여에 대한 포함 및 제외 기준을 고려하십시오. 수술 상처 감염의 높은 속도로 환자와 절차가 적합하지 않을 수 있습니다. </li><li> 잠재적 인 confounders을 방지하기 위해 모든 환자에 대한 마취 및 수술 후 관리를 표준화. </li></ul> 2. Nociceptive 및 염증성 생물 화학 중재자 컬렉션 <ul><li> 폐쇄 (다른 조직 레이어로 간주 될 수 있습니다)을 상처 직전에 피하 층에 ON-Q SilverSoaker (I-흐름, 레이크 포레스트, CA)와 ON-Q PainBuster를 삽입합니다. ON-Q PainBuster 고통 구호 시스템은 지속적으로 두 ML / H의 속도로 정상적인 생리 기능을 제공합니다. 통신사가 빗 할 수 있습니다로 ined 또는 국소 마취제와 비 steroidal 안티 - inflammatories과 같은 관심 마약에 비교했다. </li><li> 지정된 시간 지점에서 상처 exudate의 흡인 할 수 있도록이 시스템에 표준 세 방향 꼭지를 포함시킵니다. 지속적인 주입이 응고에서 카테터을 방지하고 exudate 샘플을 생산하기 위해 시스템의 안정성을 향상시킵니다. exudate의 흡인이 어려운 경우 (가지 경우 약 5 %), 상처 위에 부드럽게 밀어 (예를 들어, 환자를 앉아하거나 드러 누어) 피사체의 위치를 변경 0.5-1 ML 정상적인 생리에 찬 물을 사용하거나이 박탈 고려 카테터 1-2cm. </li><li> 프로토콜 (예, 1, 4, 6, 24, 및 cesarean 배달 후 48 시간)에 의해 지정된 시간 지점에서, 기음과 상처 exudate 1 ML를 철회 할 수 있습니다. proteinase 억제제의 30 μl를 포함하는 폴리에틸렌 컵에 exudate를 전송합니다. 우리는 우리의 목적을 위해 완벽한 Proteinase 억제제 (Bioscience 로슈, 팔로 알토 (Palo Alto), CA)를 사용했습니다. </li><li&gt; 연구 프로토콜에 의해 지정된 동일한 시간 간격으로, 혈액의 10 ML를 수집합니다. 우리는 리튬 헤파린을 포함하는 혈액 수집 관을 사용했습니다, 우리 기관에서이 녹색 얹은 유리 튜브입니다. 혈액 샘플에 proteinase 억제제의 추가 300 μl를 추가합니다. </li><li> 컬렉션의 1 시간 이내에 10 분 3,000 rpm으로 얼음과 원심 분리기에 샘플을 넣어. </li><li> -20 ° C.에서 표준 microcentrifuge 튜브 및 저장소에 혈청과 상처 supernate과 장소를 제거 </li></ul> 3. 검정 분석 <ul><li> 일단 모든 연구 exudate과 혈청 샘플은 해동과 동시에 샘플을 분석, 수집 및 저장됩니다. </li><li> 우리는 크린 시토 킨과 멀티 플렉스 면역 분석법을 사용하여 chemokines을 측정했습니다. 멀티 플렉스 immuno-검정 기술은 우리가 작은 (50 μl) 볼륨 샘플에서 분석 수많은 analytes을 할 수 있습니다. 멀티 플렉스가 엘리사를 얻은 사람들과 비교 결과를 생산하고 있습니다. 우리는 17 플렉스 바이오 PlexTM 시스템 (BioRad, Herc을 사용한우리의 분석을위한 ules, CA). 이 분석은 종양 괴사 인자 α (TNFα), 인터페론 α (INFα), 인터루킨 1β (IL-1β), 인터루킨 2 (IL-2), 인터루킨 4 (IL-4), 인터루킨 5 (IL-5를 측정 할 수 있습니다 ), 인터루킨 6 (IL-6), 인터루킨 7 (IL-7), 인터루킨 8 (IL-8), 인터루킨 (IL-10), 인터루킨 12 (IL-12), 인터루킨 13 (IL-13), 인터루킨 17 (IL-17), 과립구 콜로니 자극 인자 (G-CSF), 과립 세포 대 식세포 집락 자극 인자 (GM-CSF), 단핵구 chemoattractant 단백질 1 (MCP-1) 및 대 식세포 염증성 단백질 1 (MIP-1β). 신경 성장 인자는 바이오 플렉스 아민 커플 링 키트 17 플렉스 판에 추가하여 NGF DY256 항체를 측정 하였다. </li><li> 좋은 품질 분석을 위해 각 측정은 복제에서 변경해야합니다. 각 analyte 표준 곡선은 (0.20의 농도에서, 0.78, 3.13, 12.5, 50, 200, 800, 3200 PG / ML 플러스 제조업체에서 제공하는 참조 analytes를 사용하여 생성됩니다정상 생리에 대한 제로 표준). 표준 곡선은 각 실행에 포함되어 및 샘플 농도는 바이오 플렉스 Manager 소프트웨어를 사용하여 계산됩니다. </li><li> 물질 P 및 프로스타글란딘 E2의는 높은 감도 엘리사 키트를 사용하여 측정 하였다. 우리는이 분석을 위해 분석 설계 주식회사 (앤 아버, 미시간)를 사용했습니다. 제조업체의 사양에 따라 복제의 분석을 수행합니다. </li></ul>

<ol><li>Carvalho, B., Clark, D. J., Angst, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+and+Systemic+Release+of+Cytokines%2C+Nerve+Growth+Factor%2C+Prostaglandin+E2%2C+and+Substance+P+in+Incisional+Wounds+and+Serum+Following+Cesarean+Delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pain%22%5BJournal%5D)">Local and Systemic Release of Cytokines, Nerve Growth Factor, Prostaglandin E2, and Substance P in Incisional Wounds and Serum Following Cesarean Delivery.</a> J. Pain. 9, 650-657 (2008).</li>
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</ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

위에서 설명한이 방법은 상처 exudate에서 생화학 염증과 nociceptive 중재자를 감지 할 수있을만큼 민감한 것으로 발견되었습니다. 여러 시간 지점에서 샘플링하면 우리는 시간이 지남에 따라 이러한 중재자의 변화. 1,2 우리는 순차적으로 수술 상처 exudate의 염증과 nociceptive 중재자의 릴리스 프로파일을 측정 할 수있는 다른 사람의 수술 상처 분석을 인식하지를 관찰 할 수있다. 수술 절개 사이트에서 상처 exudate 컬렉션의 우리의 방법의 결과는 피하 상처 중재자의 릴리스 생화학 중재자 자료 intraarticular 또는 기타 신체 충치 다를 수 있습니다 제안하는 엉덩이 관절, 7,8에서 배수를 활용 연구 다릅니다. 또한, 배수에서 얻은 결과는 상처에 출혈에 의해 실마리를 못 찾고 될 수 있으며, 따라서 그들은 정확하게 현지 생화학 중재자 자료를 반영하지 않을 수 있습니다. 사이의 가난한 상관 관계상처 혈청 수...

수술 절개 후, 거주 및 염증 세포를 마이그레이션하는 프로와 항 염증성 크린 시토 킨, prostanoids, neuropeptides과 고통을 시작하고 유지하기위한 중요한 chemokines을 뗍니다. 특정 사이트 생화학 마커를 수집하는 3,4 능력을 결정하는 것이 중요합니다 혈청 및 수술 상처의 수준 사이의 관계는, 중재자 자료와 수술 통증 사이의 복잡한 관계를 이해하고, 수술 상처의 생화학에 전신 및 주변 약물 관리 모두의 효과를 평가 할 수 있습니다. 연구 생화학 중재자의 체계적 측정에 초점을 맞추고하고 특정 사이트 출시 간주되지 않았습니다. 크린 시토 킨과 chemokines의 5,6 세럼 측정은 현지 수술 상처 생화학 이벤트 반영하며, 수술 부상하는 글로벌 조직 응답을 표시하지 않을 수 있습니다. 이 문서는 전나무했다이 방법에 대한 자세한하고 독특한 시각적 설명을 제공세인트 고통이 저널에 2008 년 참조.이 목성 기사의 1 목적은 방법의 독특하고 시각적으로 향상된 설명을 제공하는 것입니다.

수술 상처에 상처 exudate 생물 화학 중재자를 수집하고 측정

Collecting And Measuring Wound Exudate Biochemical Mediators In Surgical Wounds

우리는 수술 상처 부위에서 생화학 염증과 nociceptive 중재자를 수집하고 측정 할 수있는이 방법을 설명합니다. 특정 사이트 생화학 마커를 수집하는 혈청 및 수술 상처의 수준 사이의 관계를 이해하는 것이 중요합니다, 중재자 자료, 고통, 진통제 사용 및 관심의 다른 결과 사이의 연관 관계를 파악하고, 수술 상처 조직 및 주변 약물 관리의 효과를 평가 생화학. 이 방법론은 척추 마취를 선택 cesarean 배달을 진행하고 건강한 여성에 적용되었습니다. 우리는 환자의 통증 점수와 최대 48 시간 후 cesarean 배달에 대한 진통제 소비와 같은 시간 간격으로 상처 exudate 및 혈청 중재자을 측정했습니다. 이 방법 사용 우리는 신경 성장 인자 (NGF), 프로스타글란딘 E2 (PG-E2) 물질 P, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, 등의 다양한 생화학 중재자를 감지 할 수있었습니다 IL-8,IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, TNFα, INFγ, G-CSF, GM-CSF, MCP-1과 MIP-1β. 이 인간 수술 상처 bioassay를 적용 연구 상처 혈청 시토 킨 농도 나 시간이 릴리스 프로파일 사이에 상관 관계가 발견되지 않은 (J 고통 2008, 9. (7) :650-7) 1 우리는 또한 식별 할 기술의 유틸리티를 기록. 상처 시토 킨 콘텐츠에 약물로 인한 변경 사항 (Anesth Analg 2010, 111:1452-9) 2.

이 방법 사용 우리는 상처 exudate와 플라즈마의 IL-5를 제외하고 위에서 설명한 모든 생화학 중재자를 감지 할 수있었습니다. 1,2 일부 추가 크린 시토 킨은 (TNFα IL-4, IL-17, 플라즈마에서 발견되지 않은 INFγ , GM-CSF).보고 연구 측정 크린 시토 킨과 chemokines의 1 시간 코스는 24 시간 관찰 기간 동안 지속 된 처음 몇 시간 내에 대지 .. 1,2는하지만, NGF는 동안 꾸준히 증가에 도달, 일관했다 PGE2는 1 시간 내에 만족하고 지속적으로 감소하는 반면. 24 시간 수집 기간은 1 특히 주목할만한 결과는 현저하게 IL-10의 수준을 감소하고와 호환 국소 마취제 bupivacaine과 배우는 상처에 약물 P의 수준을 증가 할 때 전체 프로 약물의 염증 효과 (그림 1) 2. 다른 연구에서 우리는 cesarean 드 후에 진통제 소비를 보여 주었다제복 ...

이 문서는 cesarean 배달 후 수술 상처 부위에서 생화학 염증과 nociceptive 중재자를 수집하고 측정하기위한 방법에 대한 자세한 및 시각적 설명을 제공하고 있습니다. 이 인간 bioassay는 상처 혈청 시토 킨 농도와 상처 크린 시토 킨, chemokines 및 neuropetides에서 마약 매개 변화 사이의 상관 관계를 결정하는 데 사용되었습니다.

수술 상처에 상처 Exudate 생물 화학 중재자를 수집하고 측정

We describe a methodology by which we are able to collect and measure biochemical inflammatory and nociceptive mediators at the surgical wound site. ...

On-Q 통증 버스터 시스템은 수술 부위에 마취제를 정확하게 전달하기 위해 개발되었습니다. 그러나 연구원들은 이 장치를 수정하여 상처의 분비물을 분석할 수 있습니다. 이 분석을 시작하기 위해 외과의는 상처 봉합 직전에 On-Q 시스템을 피하층에 삽입합니다.수술 스트립과 투명 테이프로 On-Q를 피부에 고정한 후 장치에 일반 식염수, 국소 마취제 또는 연구 약물로 채웁니다. 그런 다음 3방향 정지 콕이 이 시스템에 통합되어 주어진 시간에 지정된 시점에서 상처 삼출액의 흡인을 허용합니다. 첫째, 밀리리터의 삼출액은 주사기 공정을 사용하여 흡인하고 향후 사용 또는 분석을 위해 저장할 수 있습니다.안녕하세요, 제 이름은 스탠포드 대학 메디컬 센터 마취과의 브렌던 카발로입니다. 오늘은 수술 상처에서 상처 삼출물과 생화학적 매개체를 수집하고 측정하는 절차를 보여드리겠습니다. 우리는 이 절차를 사용하여 제왕절개 분만을 위한 연구 프로토콜에 명시된 대로 일정한 시간 간격으로 수술 상처에서 부위 특이적 통각 및 염증 매개체를 연구할 것입니다.자, 이제 시작하겠습니다. 수술 팀은 상처 봉합 직전에 On-Q 통증 버스터 통증 완화 시스템을 피하층에 삽입하여 절차를 시작합니다. 그런 다음 on Q를 수술 스트립과 투명 테이프 드레싱으로 피부에 고정합니다.on Q는 최대 100ml의 생리식염수, 국소 마취제 또는 연구용 약물로 채워져 있습니다. 이 시스템은 시간당 2밀리리터의 속도로 생리식염수 또는 국소 마취제를 피하로 상처 속으로 지속적으로 전달합니다. 이러한 지속적인 전달은 카테터가 응고되는 것을 방지하고 삼출물 샘플을 생성하는 시스템의 신뢰성을 향상시킵니다.다음으로, 3방향 스톱 콕(three-way stop cock)이 이 시스템에 통합되어 프로토콜에 의해 지정된 시점의 지정된 시점에 상처 삼출물의 흡인을 허용합니다. 우리는 1ml의 상처 삼출물을 30마이크로리터의 proteinase 억제제가 들어 있는 폴리에틸렌 컵에 넣습니다. 이 경우 제왕절개 분만 후 1시 6시간 및 24시간에 삼출액을 채취하십시오.동시에 간격을 두고 리튬 헤파린이 들어 있는 녹색 상단 혈액 채취 튜브에 10ml의 혈액을 수집합니다. 그런 다음 혈액 샘플을 3000RPM에서 10분 동안 원심분리합니다. 그런 다음 혈청 supinate를 300 microlit의 proteinase inhibitor에 첨가합니다.상처 삼출액도 원심분리기이며 수피네이트는 상처와 혈청 샘플을 제거한 다음 표준 마이크로 원심분리기 튜브에 넣고 섭씨 영하 20도에서 보관합니다. 모든 채취물이 처리되면 혈청과 상처 삼출물 모두에서 생화학적 매개체의 수치가 측정됩니다. 지금까지 제왕절개 상처에서 상처 생화학적 매개체를 측정하고 수집하는 방법을 보여드렸습니다.그러나 그 문제에 관해서는 다른 수술 상처에 이것을 적용할 수 있습니다. 이 기법은 약 5%의 환자에서 상처 삼출액을 생성하는 데 매우 신뢰할 수 있는 것으로 확인되었지만, 상처 삼출액을 흡인하는 데 약간의 어려움이 있을 수 있습니다. 상황을 개선하기 위해 우리가 사용하는 기술은 환자의 자세를 앉는 자세에서 눕는 자세로 바꾸거나 그 반대로 바꾸는 것입니다.또한 복부와 상처를 부드럽게 밀어 넣습니다. 1cc의 생리식염수 세척을 사용할 수 있으며, 때로는 상처 삼출물을 생성할 수 있도록 카테터를 1-2cm 빼내야 합니다. 그게 다야.시청해 주셔서 감사드리며 공부에 행운을 빕니다.

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의학

특정 시간 지점에서 수술 상처를 생화 학적 중재자를 수집하고 측정하는 기술.

외과 듀엣으로 Nociceptive 및 염증성 중재자를 수집 및 측정

이 비디오는 GFP 발현 호중구를 가진 면역 저하 형질전환 마우스의 감염 부위에서 호중구 모집 역학을 연구하기 위한 생체 내 이미징을 보여줍니다. 발광 박테리아를 주입하여 감염을 일으키는 것과 관련이 있습니다. 이는 감염 부위에 호중구가 동원되도록 유도하며, 이미징을 통해 추적이 이루어집니다.

Murine 모델에서 감염 부위의 호중구 모집 역학 및 박테리아 부담 모니터링

여기는 실시간, 비-침략 적, 발광 녹 농 균의 biofilm 상처 감염의 모니터링을 위한 털 쥐를 활용 하 여 새로운 당뇨병 murine 모델에 설명 합니다. 이 메서드는 다른 세균성 종 및 다 종 biofilms를 포함 하 여 유전자 변형된 미생물의 감염을 평가 하 고 antibiofilm 전략의 효능 테스트에 적용할 수 있습니다.

라이트 사이드에와 서: Vivo에서 당뇨병 털 Murine 모델에 만성 상처에서 녹 농 균 Biofilm 감염의 모니터링

여기서, 2개의 뮤린 상처 치유 모델이 기술되고, 하나는 세포 및 사이토카인 상처 치유 반응을 평가하기 위해 고안되고 다른 하나는 상처 폐쇄의 속도를 정량화하도록 설계된다. 이 방법은 가난한 상처 치유의 각종 양상에 의하여 기계장치를 결정하기 위하여 당뇨병과 같은 복잡한 질병 모형으로 이용될 수 있습니다.

등지성 폴리비닐 알코올 스폰지 이식 및 절제 꼬리 피부 상처 모델을 사용하여 급성 상처 치유의 평가.

이 프로토콜은 마우스에서 양자, 전체 두께 절제적 상처를 생성하는 방법과 이후에 형태 분석을 위해 상처를 모니터링, 수확 및 준비하는 방법을 설명합니다. 여기에는 직렬 조직학적 섹션을 사용하여 형태학적 결함을 정의하고 정확하게 정량화하고 감지하는 방법에 대한 심층적인 설명이 포함되어 있습니다.

뮤린 흥분 상처 치유 모델 및 조직학적 형태화 상처 분석

여기에서, 우리는 마우스에 있는 상처 감염에서 세균성 분산을 평가하기 위한 ex vivo 및 생체 내 방법을 기술합니다. 이 프로토콜은 국소 항균 및 항 생물막 요법의 효능을 테스트하거나 다른 세균성 균주 또는 종의 분산 용량을 평가하는 데 활용 될 수 있습니다.

뮤린 상처에서 생물막 분산 평가

여기서는 전형염색 접근법과 결합된 전 생체 내 인간의 피부를 사용하여 상처 수리를 평가하기 위한 최적화된 기술을 시연합니다. 이 방법론은 잠재적인 상처 치료의 평가를 위한 전임상 플랫폼을 제공합니다.

인간 Ex 생체 내 상처 모델 및 피부 수리를 정확하게 평가하기 위한 전산 염색 접근법

항생제에 내성이 있는 만성 상처는 의료 시스템에 큰 위협이 됩니다. 생물막 감염은 완고하고 적대적이며 기능적 상처 봉합 부족을 유발할 수 있습니다. 우리는 생물막에 감염된 전층 만성 상처의 임상적으로 관련된 돼지 모델을 보고합니다. 이 모델은 기계론적 연구뿐만 아니라 중재 테스트에도 강력합니다.

생물막 감염 및 보이지 않는 상처의 돼지 모델

상처는 전 세계적인 보건 문제를 나타냅니다. 이 연구는 상처 측정 변동성을 최소화하기 위해 디지털 플레니메트리를 활용한 표준화된 사진 부스를 개발했습니다. 14일 동안 생쥐의 상처를 모니터링한 결과, 처음에는 상처 부위와 둘레가 증가한 후 점차 봉합되는 것으로 나타났습니다. 이 방법론은 전임상 모델에서 상처 봉합 동역학을 평가하는 데 도움이 될 수 있습니다.

마우스 모델에서 상처 봉합 동역학을 평가하기 위한 디지털 플레니메트리

이 연구는 연속 및 간헐적 압력 설정에서 72시간 동안 압력 및 체액 수집을 평가하여 음압 상처 치료 시스템과 상처 드레싱 재료의 호환성을 평가하도록 설계된 벤치탑 모델을 제시합니다.

상처 드레싱 재료와 음압 상처 치료 시스템의 호환성을 평가하기 위한 벤치탑 모델 개발

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