Name: 세균 Prostatitis의 손쥐 모델에 촉각 Allodynia 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: 학습하세요 세균성 전립선염에서 촉각 통각과민을 측정하는 방법을. UPEC 감염을 통한 수컷 생쥐 모델에서 von Frey 필라멘트를 이용한 행동학적 통증 평가 기법을 익히고, 만성 골반 통증 메커니즘 연구에 활용하세요.

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이 연구는 NIH / NIDDK에서 부여 1K01DK079019A2 (PT)에 의해 지원되었다.

1. 마우스 접종에 대한 박테리아 준비 다음은 무균 조건 하에서 수행되어야합니다. <ol><li> 모자와 하나 17 × 100 밀리미터 폴리 프로필렌 튜브를 타고 신선한 Luria 국물 (LB) 미디어 3 ML를 추가합니다. autoclaved 팁을 사용하면, 스트레인 CP1 2의 일부 냉동 박테리아 글리세롤 주식을 가지고 LB 미디어를 포함하는 관에 문화의 작은 수량을 전송할 수 있습니다. 산소는 여전히 튜브를 입력 할 수 있도록 튜브 캡을 교체 - 문화 에어로빅 조건 하에서 성장해야합니다. 37 번 장소 튜브 ° 하루 아침에 220 rpm으로 흔들어 보육의 C. </li><li> 그 다음날, 3 ML의 LB 미디어와 함께 새로운 튜브에 밤 문화의 5 μl를 전송하고 37 ° C.에서 보육 밤의 정적 조건 하에서 성장 </li><li> 날 AA 50 ML 튜브에 3 전송 문화의 40 μl는 40 ML의 LB 미디어 각을 포함. 37 ° C 정적 보육의 하룻밤의 장소. </li><li> 켜, 4 ° C.에 원심 분리기를 설정일단 원심 분리기 최종 온도에 도달, 40 ML Nalgene의 원심 분리기 튜브에 각각 40 ML 문화를 전송할 수 있습니다. </li><li> 필요에 따라 LB 미디어와 함께 볼륨을 조절 - 원심 분리기의 균형을 튜브를 무게. 20 분에 6,000 rpm으로 튜브를 봐. </li><li> 조심스럽게 표면에 뜨는 제거하고 부드럽게 40 ML 멸균 PBS에서 박테리아 펠렛을 일시 중지합니다. </li><li> PBS와 단계 1.5를 반복합니다. </li><li> 표면에 뜨는을 대기음, 500 μl 멸균 PBS에서 박테리아를 일시 중지합니다. 1.5 ML의 microfuge 관에 솔루션을 전송합니다. 정지 10 μl를 타고 얼음처럼 차가운 PBS의 990 μl에 희석. 접종에 필요한 볼륨을 확인하려면 OD 420의 NM을 읽어 분광 광도계를 사용합니다. 의 적절한 볼륨을 확인하려면 얼음처럼 차가운 PBS가 펠릿을 중지 할 수 : OD 420의 나노 번호 (ML)를 타고 박테리아 펠렛 [예의 예상 볼륨을 뺍니다. OD 420 nm 정도 = 0.545, 펠렛 약 0.075 ML. 0.545-0.075 = 0.470]. </li><li> 10 박테리아 정지 μl와 디를 제거990 μl 얼음처럼 차가운 PBS의 류트. OD 420의 나노를 참조하십시오. 목표는 1.000의 희석 정지 ± 0.010을위한 OD 420의 nm의 값을 달성하는 것입니다. 귀하의 희석의 수가이 목표를 초과하면, 정지에 더 많은 볼륨을 추가하고 또 다른 읽기를. 수 아래 인 경우 0.990는 원하는 반응을 얻을 때까지 중지 및 반복 OD 420의 나노 읽기 스핀 다운. </li></ol> 2. 동물 감염 마우스 (5-7주 세, 그룹 당 10)가 잭슨 연구소 (바 하버, ME)에서 구입했다. <ol><li> 마우스는 Plexiglas 챔버에서 isoflurane 1~4%의 흡입에 의한 anesthetized하고 휴식하고있는 때까지 모니터링한다. </li><li> 한 번에 하나의 마우스는 유리 해밀턴 주사기 (1.5-2.0 cm의 길이)의 수정 된 30 G 바늘에 부착 된 폴리에틸렌 (PE10) 카테터와 catheterization에 의해 박테리아의 기지에 이루어집니다. 카테터는 바늘의 허브에 삽입됩니다. 마우스 plac입니다에드는 마취상의 등쪽 표면에 코 콘을 사용하여 유지. </li><li> 마우스의 음경은 음경 요도의 입구의 윤활에 사용되는 부드러운 압력과 면봉에 윤활제의 자유 양에 의해 압출입니다. </li><li> 10 μl 인산염은 버퍼 1 개 10 8 박테리아를 포함하는 염분은 catheterization 다음 anesthetized 마우스의 요도에 소개되어 있습니다. </li><li> 세균 첨부 파일을 허용하고 즉각적인 배뇨을 방지하기 위해 세균 소개 한 후 마우스가 Plexiglas 챔버에서 15 분 동안 anesthetized 상태로 유지됩니다. </li><li> 마우스들은 케이지에 다시 배치하고 24 시간 모니터링하고 있습니다. </li></ol> 3. 동작 테스트 마우스는 사전 감염 (기준)과 일 3, 7, 14, 21, 감염 후 28 테스트되었습니다. 라고 hyperalgesia와 촉각 allodynia은 복부 11,12과 발바닥 R에 적용 폰 프라이의 필라멘트를 사용하여 테스트되었습니다뒷다리 앞발로 땅을 차다 13 egion. 테스트는 시간의 하루 고정에 perfomed 된 표준 방법론과 모든 동물의 한 실험 테스트는 고용했다. 그룹의 눈이 멀어 테스트는 동물 모델에서 동작 기반의 통증 테스트의 한계를 방지하기 위해 활용되었다. 0.04의 힘, 0.16, 0.4, 1.0 및 4.0 g (Stoelting, USA)와 다섯 개인 폰 프라이의 필라멘트가 탈퇴 응답의 복부 및 주파수에 적용되었다가 계산되었습니다. <ol><li> 새 환경 순응의 30 분 기간 후, 마우스는 스테인레스 스틸 와이어 그리드 바닥 - 집에서 만든 개인 Plexiglas 챔버 (6 × 10 x12 cm)에 배치됩니다. </li><li> 라고 hyperalgesia와 촉각 allodynia은 다섯 폰 프라이의 필라멘트를 사용하여 테스트되었습니다. 각 필라멘트는 총 10 회에 5 초의 상호 자극 간격으로 1-2 초에 대해 적용하고, 머리카락이 힘의 오름차순으로 테스트되었습니다. </li><li> 각 필라멘트는 전립선의 일반적인 주변에 낮은 복부 지역에 적용되고주의 desensitization을 피하​​거나 효과 &quot;를 맺어야&quot;이 지역 내의 다른 지역을 자극하는 촬영되었습니다. 필라멘트는 10 배의 총 stimulations 사이에 최소 5 초 간격으로 1-2 초에 대해 힘의 순서를 증가에 적용되었습니다. </li><li> 행동의 세 가지 유형은 필라멘트 자극에 긍정적 인 반응으로 간주됩니다 : 복부 1) 날카로운 철회, 2) 즉시 핥아 또는 필라멘트 자극의 지역을 긁적, 3) 점프. </li><li> 응답 주파수는 긍정적 인 반응의 비율 (10 중에 10 = 50 % 예를 들어 5 응답)로 계산 및 데이터가 응답 주파수의 평균 비율 ± SE로보고되었다 </li><li> 25 개 이상의 긍정적 총 기본 응답과 동물은 연구에서 제외됩니다. </li><li> 촉각 allodynia는 0.04의 힘, 0.16, 0.4, 1.0 및 4.0 g과 폰 프라이의 필라멘트를 사용하여 뒷다리 손 안에 발바닥 지역에서 테스트되었습니다. 중간 50 % 탈퇴 임계 값 (5)이 위, 아래를 사용하여 평가 한필라멘트가 약간 구부러 때까지 테스트가 0.04 g 필라멘트로 시작 방법은 뒷다리 손 안에 발바닥 표면에 수직 적용. 필라멘트는 긍정적 인 반응이 관찰 될 때까지 오름차순으로 테스트되었습니다. 필라멘트에 대한 긍정적 인 반응은 테스트 손 안에 앞발로 땅을 차다이나 핥아의 날카로운 철회 중 하나로 정의되었다. 긍정적 인 반응이 기록되었을 때 다음 약한 필라멘트가 적용되고, 부정적인 응답이 관찰 된 경우, 다음 강한 필라멘트가 적용되었습니다. </li><li> 설명 실험과 방법론은 검토 및 승인 노스 웨스턴 대학 동물 의료 의해위원회를 사용하고 있습니다. </li></ol>

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</ol>

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UPEC와 마우스 전립선의 감염은 세균 prostatitis, CP / CPPS의 pathogenesis 또는 만성 염증에 predisposing 이벤트로 참여 할 수 있습니다 이벤트의 생체 모델링에서 할 수 있습니다. 방법은 여성 비뇨기의 요로 감염이 7,14에 UPEC 모델에 문학의 큰 몸에 세균 준비 및 떨어 뜨림 조 추첨에 대해 설명했다. 모델은 잠재적 인 백신 후보와 면역 변조의 메커니즘을 테스트 pathogenesis을 공부에 대한 폭 넓은 적용이 있습니다. 객관적 방식으로 통증이 동작을 수행 할 수있는 능력은 감염 유발 통증 pathogenesis 연구와 잠재적으로 고통 치료학을 제작하고 테스트하기위한 잠복기 모델로 할 수 있습니다. 마우스 감염 모델의 성공을 결정하는 중요한 단계가 있습니다. 진동 및 정적 문화와 3 일 문화 방법은 UPEC에 중요하다고 알려져있다 pili 최적의 표현을 위해 수행됩니다상피 세포에 부착. 이 U...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> 문화 튜브 </td><td> BD 팔콘 </td><td> 352059 </td></tr><tr><td> LB 국물 밀러 </td><td> EMD </td><td> EM1.10285.0500 </td></tr><tr><td> Nalgene의 원심 분리기 튜브 </td><td> 열 </td><td> 3118-0050 </td></tr><tr><td> Isoflurane </td><td> 버틀러 Schein </td><td> NDC 11695-6776-1 </td></tr><tr><td> 카테 테르 바늘 30g의 </td><td> 해밀턴 </td><td> 91,030 </td></tr><tr><td> PE10 튜브 </td><td> BD intramedic </td><td> 427400 </td></tr><tr><td> 본 프라이의 필라멘트 </td><td> Stoelting </td><td> 58025-31 </td></tr></tbody></table>

세균 prostatitis의 손쥐 모델에 촉각 allodynia 측정

Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis

Uropathogenic 대장균 (UPEC)는 요로 감염 및 세균 prostatitis 1 중요한 역할을 병원균입니다. 우리는 최근에 UPEC는 만성 골반 통증 2, 만성 prostatitis / 만성 골반 통증 증후군 (CP / CPPS) 3,4의 기능의 개시에 중요한 역할을하는 것으로 나타났습니다. 임상 관련 UPEC하여 전립선의 감염은 조직 손상과 autoimmunity 5 메커니즘의 개시를 포함 할 수 있습니다 메커니즘을 통해 만성 통증을 시작하고 설정할 수 있습니다. 전립선에 UPEC의 pathogenesis를 이해하는 데 도전 조작에 전립선의 상대적 어려움입니다. 우리는이를 통해 전립선의 오름차순 감염을 수립 남성 생쥐에 UPEC의 임상 부담이 제공하는 이전에 설명 intraurethral 감염 방법 6을 활용. 여기, 우리는 학사 학위를 표준화에 대한 우리의 프로토콜을 설명뿐만 아니라 박테리아의 기지에 anesthetized 남성 쥐를 catheterizing 절차 등 cterial inoculum 7. CP / CPPS는 주로 촉각 allodynia (4)의 존재에 의해 특징입니다. 동작 테스트는 언급 내장 통증 8-10으로 인한 피부 hyperalgesia의 개념을 기반으로했다. 내장 조직에 짜증 초점은 일반적으로 비 고통스러운 자극 (allodynia)에 대한 과장된 반응을 허용하는 피부 통증 임계 값을 감소시킵니다. 기본 내장 고통의 강도를 증가하는 경향이 이상 반응의 피부 결과 정상적인 힘의 응용 프로그램입니다. 우리는 UPEC 박테리아와 하나의 감염에 대한 응답으로 시간이 지남에 촉각 allodynia를 정할 폰 프라이 섬유를 활용 NOD / ShiLtJ 마우스에 방법을 설명합니다.

<html> 우리는 세균 감염시 만성 통증의 존재에 대한 NOD / ShiLtj와 C57BL/6J 수컷 쥐를 조사했다. 남성 마우스 (5~7주 이전)은 요도 (그림 1)에 생리 나 세균과 배우는되었습니다. 생리 - 배우는 C57BL/6J 마우스와 UPEC에 감염된 C57BL/6J 마우스의 폰 프라이의 필라멘트와 골반 지역의 기계적 자극이 실험의 28 일 코스 (그림 1) 동안 변경되지 않은 응답 주파수하게되었습니다. 반면, UPEC에 감염된 NOD 마우스는 상당히 큰있었습니다 골반 자극에 반응을 전시 일 28 일 (P &lt;0.05, 그림 3)까지 크게 상승 있었다. 세균 감염 뒷다리 앞발로 땅을 차다 (데이터 미도시)의 발바닥 지역의 촉각 감도의 변경 사항 없음있었습니다. tp_upload/50158/50158fig1....

전립선의 감염은 만성 prostatitis의 골반 통증을 중재에 기여 요소가 될 수 있습니다. 우리는 표준화 된 박테리아 inoculum, 시간이 지남에 따라 마우스에 촉각 allodynia을 측정하는 남성 마우스 및 방법론의 요도에 박테리아의 기지의 준비에 대한 절차를 설명합니다.

세균 Prostatitis의 손쥐 모델에 촉각 Allodynia 측정

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are pathogens that play an important role in urinary tract infections and bacterial prostatitis1. We have recently ...

이 절차의 전반적인 목적은 전립선의 박테리아 감염으로 인한 마우스의 촉각 이질통을 측정하는 것입니다. 이것은 먼저 마취 하에 놓인 수컷 마우스에 설치하기 위해 박테리아 현탁액을 준비함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 마우스의 음경을 부드럽게 돌출시킨 다음 요도 내 카테터를 삽입하는 것입니다.다음으로 박테리아가 주입되어 쥐 전립선의 상행 감염을 시작합니다. 마지막 단계는 감염 후 촉각 이질통을 측정하는 것입니다. 궁극적으로, 골반 부위에 적용된 브레이 섬유에 대한 증가된 반응 빈도는 세균성 전립선염에 대한 반응으로 골반 부위의 향상된 촉각 elo DIA를 보여주는 데 사용됩니다.호르몬 유발 경로 전립선염 또는 자가면역 전립선염과 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 전립선 질환 발병에 정말 중요한 임상적으로 관련이 없는 박테리아와 자연 상승 감염 방법론을 사용하는 경우, 일반적으로 이 방법을 처음 사용하는 개인은 vray 섬유 자극에 대해 지속적으로 긍정적인 반응을 등록할 수 없기 때문에 어려움을 겪을 것입니다. 이 프로토콜의 모든 절차는 기관 및 정부 지침에 따라 수행되어야 합니다. 통각과민 및 촉각 이질통에 대한 검사는 한 명의 실험자가 모든 동물을 검사하는 표준 방법론을 사용하여 하루 중 고정된 시간에 수행됩니다.집단에 대한 맹검 검사는 동물 모델에서 행동 기반 통증 검사의 한계에 맞서기 위해 활용되어야 합니다. 실험에 참여한 모든 동물에 대한 기준선 측정값을 얻으려면 먼저 5주에서 7주 된 수컷 마우스를 30분 동안 실험실에 적응시킨 다음 각 마우스를 스테인리스 스틸 와이어 그리드 바닥이 있는 개별 플렉시 유리 챔버에 넣어 촉각 이질통을 테스트합니다. 0.04, 0.16, 0.4, 1.0, 4.0g의 힘으로 개별 폰 프레이 필라멘트를 전립선 부근의 하복부에 바릅니다.각 필라멘트를 1-2초 동안 힘의 증가 순서로 적용하고 자극 사이에 최소 5초 간격으로 총 10회 적용합니다. 둔감화나 감기 효과를 피하기 위해 이 영역 내의 다른 영역을 자극하도록 주의하십시오. 세 가지 유형의 행동이 필라멘트 자극에 대한 긍정적인 반응으로 간주됩니다.복부의 날카로운 후퇴 하나, 필라멘트 자극 부위의 즉각적인 핥기 또는 긁는 두 개. 3. 점프는 응답 빈도를 긍정적 반응의 백분율로 계산하고 데이터를 응답의 평균 백분율로 보고합니다. 빈도 더하기 - 표준 오류.25개 이상의 양성 기준선 반응을 가진 동물은 이질통 반응

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

Electronic von Frey 측정은 염증 사건 전후에 지속적으로 가해지는 압력 자극에 대한 설치류의 기계적 인출 임계값의 변화를 빠르고 정확하게 측정할 수 있기 때문에 고전적인 von Frey 필라멘트에 대한 효과적이고 개선된 대안입니다.

전자 폰 프레이 장치를 사용하여 생쥐의 뒷발에서 촉각 감도의 변화를 측정합니다.

우리는 아편 유발 통각 과민과 생쥐의 관용의 개발을 검토하는 프로토콜을 설명합니다. 순진과 모르핀 처리 된 동물의 열 및 기계적 통각 반응의 측정을 바탕으로, 그것은 고통의 감도 (통각 과민)의 증가를 정량화 및 만성 아편 관리와 관련된 진통제 (허용 오차)이 감소 할 수 있습니다.

열 및 기계를 침해 수용성 모달리티를 사용하여 마우스의 모르핀에 의한 통각 과민과 진통 공차의 평가

신경 병증 성 통증은 체성 시스템에 영향을 미치는 장애 또는 질병의 결과이다. 생쥐의 신경 병증 성 통증의 "팔목 모델은"좌골 신경의 주요 지점 주위에 폴리에틸렌 커프스의 주입으로 구성되어 있습니다. 기계적 이질통은 본 프레이 필라멘트를 사용하여 테스트된다.

마우스의 신경 병증 성 통증의 좌골 신경의 바지를 접 모델

만성 전립선 염 / 만성 골반 통증 증후군의 전임상 모델을 유도하기 위해 신생아 산모의 분리, - 우리는 생애 초기 스트레스 패러다임을받은 남성 C57BL / 6 마​​우스의 전립선에 perigenital 기계적 감도와 비만 세포 활성화를 측정한다.

신생아 모자 분리의 마우스 모델에서 Perigenital 감도 및 전립선 비만 세포 활성화의 평가

여기에 제공된 프로토콜은 만성 허혈 후 통증(CPIP)의 동물 모델을 확립하는 단계를 상세히 설명합니다. 이것은 인간 복잡한 지역 고통 증후군 유형-I를 모방하는 잘 인식된 모형입니다. 기계적 및 열적 과민성은 CPIP 래트 모델에서 관찰된 캡사이신 유도 노시펜스 거동뿐만 아니라 추가로 평가된다.

쥐에 있는 복잡한 지역 고통 증후군 타입-I를 위한 만성 포스트 허혈 고통 모형

요통의 예방 및 관리를 위한 새로운 치료적 개입을 개발하기 위해 동물 모델은 번역 관점에서 이러한 치료법의 메커니즘과 효과를 조사해야 합니다. 현재 프로토콜은 쥐의 기계적 민감도를 평가하기 위한 표준화된 방법인 BMS 테스트를 설명합니다.

만성 요통의 기계론적 조사를 위한 쥐의 등 기계적 민감도 평가

마우스에서 요통 모델의 간단하고 신속한 유도를 위한 방법은 요로 플라스미노겐 활성제의 인대 내 주입을 사용하여 여기에서 제공됩니다.

우로키나아제(Urokinase)형 플라스미노겐 활성제(Plasminogen Activator)에 의한 생쥐 요통 모델

부분 좌골 신경 결찰술은 열 및 기계적 자극에 대한 과장된 반응을 특징으로 하는 오래 지속되는 만성 신경병성 통증을 유발합니다. 이 신경병성 통증 마우스 모델은 일반적으로 통증 관리를 위한 혁신적인 치료법을 연구하는 데 사용됩니다. 이 기사에서는 표준화 및 재현성을 개선하기 위한 수술 절차에 대해 자세히 설명합니다.

부분 좌골 신경 결찰: 새로운 치료법의 항통각수용 효과를 연구하기 위한 만성 신경병성 통증의 마우스 모델

여기에서는 Trypanosoma evansi에 감염된 마우스의 통각을 평가하기 위한 프로토콜을 제시하며, 전자 von Frey 장치를 도구로 사용하여 뒷발과 내장의 기계적 역치를 측정합니다.

Trypanosoma evansi-Infected Mice의 Allodynia 및 통증을 평가하기 위해 Mouse Grimace Scale과 관련된 Electronic von Frey

이 프로토콜은 마우스에서 무릎 통각 과민을 측정하는 방법을 설명합니다. 우리는 급성 무릎 통증의 마우스 모델과 골관절염(OA) 모델의 예를 보여줍니다.

Pressure Application Measurement를 사용한 마우스의 무릎 통각 과민 평가

학습하세요 세균성 전립선염에서 촉각 통각과민을 측정하는 방법을. UPEC 감염을 통한 수컷 생쥐 모델에서 von Frey 필라멘트를 이용한 행동학적 통증 평가 기법을 익히고, 만성 골반 통증 메커니즘 연구에 활용하세요.

세균 Prostatitis의 손쥐 모델에 촉각 Allodynia 측정

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