Name: 베이지 / Brite 셀에 Stromal 혈관 세포의 분리와 차별화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-28T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 22 s
Description: 배우세요 쥐 지방 조직에서 기질 혈관 세포를 분리하고 베이지/브라이트 세포로 분화시키는 방법을. 이 기법은 대사 질환 연구와 비만 치료에 활용될 수 있습니다.

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우리는 토론, 기술 지원 및 원고에 대한 편집 지원 Haruya 오노, Kosaku 시노다, 루이스 샤프, 에미 Tomoda, 로렌 루이즈 감사드립니다. 이 작품은 돌파구 바이오 메디컬 연구 및 Asubio 알약 주식회사에서의 프로그램에서 SKULA에 NIH (DK087853)에서 보조금 코펜하겐과 EU FP7 프로젝트 DIABAT (건강-F2의 대학에서 SHARE 박사 장학금이 지원 한에 의해 지원되었다 리자 매드슨와 Karsten Kristiansen에 -2011-278373). 우리는 또한 DERC 센터 보조금 (NIH P30 DK063720)을 인정합니다.

1. 소화 매체를 준비 조직 당 5 마우스 (약 1 ML / 1g의 지방 조직) 당 5 ML하십시오. <ol><li> 소화 효소에 무게 : - Collaginase D : 1.5 U / ML (1108874103, 1 G, 로슈, 70334223) - Dispase II : 2.4 U / ML (04,942,078,001, 0980 MG / lyo, 로슈, 11466200) </li><li> 25 ML PBS를 추가하고 분해하기 위해 잘 섞는다 </li><li> 10 mm의 최종 농도에서 조직의 소화 직전에 CaCl 2를 추가 </li></ol> 2. 마우스에서 지방 조직을 해부 <ol><li> 절개는 신중하게 수행해야하고, 즉시 생쥐 후 (6~8주 세) 희생되어 있습니다. 을 열기 전에 마우스 모피에 뿌려 에탄올로 살균 작업 할 수 있습니다. 깨끗한 PBS, 별도의 interscapular BAT와 피하 사타구니 와트에 직접 조직을 놓으십시오. </li><li> interscapular BAT의 경우 : 최대 직면 뒷쪽으로 배치 마우스를 뒷면과 목의 모든 길을 따라 자르면. 갈색지방 조직이 바로 어깨 (interscapular) 사이의 피부에서 볼 수 있습니다. BAT는 두 엽, 모양의 나비로 볼 수 있습니다. BAT를 덮고 흰 지방의 얇은 층은 신중하게 제거 할 것입니다. </li><li> 피하 와트 (사타구니 와트)의 경우 : 피부를 제거합니다. 사타구니 와트는 내부의 고환을 향해 허벅지 아래로 거의 뒷면에 시작과 함께 가고, 양쪽의 피부 바로 아래에 자리 잡고 있습니다. </li></ol> 3. 지방 조직을 잘라 소화 <ol><li> 빠르게 머리, 골격 근육 및 조직 섹션에서 결합 조직처럼 모든 오염을 제거합니다. </li><li> PBS로 분해 매체를 희석하고 건조 판에 배치하지 않는 종이에 신속하게 조직을 말린다. </li><li> 소화 매체 (사전 소화에 CaCl 2 추가) 및 작은 조각으로 조직을 잘게 썬 고기를 추가합니다. 5 ML의 피펫과 등을 아래로 pipetting하여 잘 섞는다. 소화 m의 나머지 50 ML 튜브에 다진 조직을 전송edium은 아래로 pipetting과가 더 섞는다. </li><li> 다이제스트 37 ° C 40-50 분 150 rpm으로 일정하게 교반을 갖추고 있습니다. 소화가 잘되어 가고 이상 - 소화을 방지하기 위해 있는지 확인하기 위해 최선을 10-15 분을 확인합니다. </li></ol> 참고 : 올바른 소화 매체와 시간이 중요합니다. 조직이 잘 소화해야하지만, 초과 소화는 세포를 손상시킬 수 있습니다. 4. 필터 세포 현탁액 <ol><li> 5 ML 전체 매체 (DMEM/F12가 포함 된 10 %의 FPS와 P / S)를 추가하여 소화를 중지합니다. 세포는 거의 동질해야합니다. pipetting으로 잘 섞는다. </li><li> 10 분 700 XG에 원심 분리기. </li><li> SVF는 이제 튜브의 바닥에 갈색 펠렛으로 볼 수 있습니다. 상단과 액체 층의 대부분에있는 기름 성숙한 지방 세포 층을 대기음 - 펠렛을 유지하고 10 ML 완전한 중간에 용해. 잘 섞는다. </li><li> 새로운 50 셀 스트레이너 (50-70 μm의 직경을) 장소<html> ML 튜브와 세포 현탁액을 필터링합니다. </li></ol> 5. 판 셀 <ol><li> 10 분 700 XG에서 15 ML 튜브와 원심 분리기에 세포 현탁액을 전송합니다. </li><li> 10 ML 완전한 매체에 매체를 대기음하고 다시 일시 중지 펠릿. 피펫 잘 섞는다. </li><li> 필요한 얼마나 많은 접시 견적. 이 다양하고 펠렛의 크기에 따라 달라집니다 수 있습니다. 일반적인 규칙은 사타구니 와트 5 마우스와 BAT 한 10cm 판에서 10cm 플레이트 2입니다. </li><li> 완전한 중간에 콜라겐 코팅 요리에 플레이트 세포 (R &amp; D) </li><li> 1-2 시간 전지, 대기음 매체를 도금 후, 두 번 PBS로 씻어와 신선한 매체를 추가 할 수 있습니다. 이 적혈구, 면역 세포 및 기타 오염 물질을 제거 할 수 있습니다으로이 단계는 중요합니다. </li></ol> 6. 셀을 차별화 <ol><li> 유지 보수 및 유도 매체를합니다. </li></ol> 유지 보수 매체 추가 된 미디어를 작성하십시오 다닐 &quot;&gt; 인슐린, 최종 conc 5. μg / ML (5 MG / ML 주식, 산성화 물 산도에게 2.5를 준비하는 10 ML H 2 O의 아세트산의 *** 100 μl. 산성화 물에 인슐린을 분해. 스토어 재고에서 -20 ° C) 3,3 &#39;,5-Triiodo-L-thyronine (T3), 최종 conc. 1 나노 미터 (10 μM 재고, ***는 1N NaOH에 T3 분해 및 10 μM 주식을하기 위해 매체를 추가 할 수 있습니다. 시그마 고양이 # T-2877) 4 번 스토어 ° C, 일주일 동안 좋은 유도 매체 다음 화합물을 포함하는 유지 보수 매체 : 인도 메타 신, 최종 conc. 125 μM (에탄올 0.125 M 주식, 시그마 고양이 # I-7378). 인도 메타 신은 60로 가열해야 ° C 용해되어 있어야합니다. Dexamethasone, 최종 conc. 2 μg / ML (에탄올의 2 밀리그램 / ML 양말, 시그마 고양이 # D-1756) 3 - 이소 부틸-1-methylxanthine (IBMX), 최종 conc. 0.5 ㎜ (DMSO의 0.25 M 재고, 시그마 고양이 # I-5879) Rosiglitazone, 최종 conc. 0.5 μM(DMSO 10 MM 주식, 시그마 고양이 # R-2408) 참고 : 때마다 중간 신선한 유도하십시오. <ol start="2"><li> 전체 미디어에서 95~97%의 합류 (합류하지만 너무 포장되지 않음)에 기본 adipocytes 성장 </li><li> 유도 매체 (일 0)와 함께 정기적으로 전체 매체를 변경 </li><li> 48 시간 (2 일) 후, rosiglitazone (0.5 μM)와 유지 보수 매체로 매체를 변경 </li><li> 추가 48 시간 (4 일) 후, 추가 2-3 일 동안은 rosiglitazone과 신선한 유지 보수 매체 (1 μM)로 변경합니다. 6-7일 유도 매체를 추가 한 후, 세포가 완전히 지방 세포를 성숙하고 차별화되어 있으며 기름 방울로 가득합니다. 작은 물방울이 유도 한 후 3-4일 주위에 나타납니다. </li></ol> 참고 : 변경 매체는 세포가 완전히 구별 모든 2~3일 때까지. 전지는 지금 수확하고 Ucp1와 인접의 mRNA 표현 될 수있다R 갈색 지방 세포에 특정한 유전자가 qRT-PCR로 측정 할 수 있습니다. 서양 얼룩은 단백질을 감지하는 데 사용됩니다.

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</ol>

제작자들은 더 경쟁 금융 이익이 없다는 점 선언합니다.

여기 마우스의 기본 양식 adipocytes에 베이지 색 / brite 세포의 개발을 연구 할 수있는 신뢰할 수있는 셀룰러 시스템을 제시한다. 같은 몇 가지 가능한 불후의 세포 라인에 비해,이 시스템은 생체의 흰색 지방의 갈변으로 향상된 관련성을 제공 할 것으로 예상됩니다. 이러한 기본 adipocytes의 연구는 몇 가지 장점을 제공하더라도,이 또한 고려하는 것이 중요 일부 제한 사항 및 문제를 존재합니다. 첫째,이 시스템은 세포의 분화의 효력에 크게 의존합니다. 이러한 Ucp1 및 Cidea과 같은 갈색 지방 선택적 유전자의 표현은 특히 차별화에 따라 달라집니다. 예를 들어, PPARγ의 agonists와 BMP7도 따라서 adipogenesis을 강화, &quot;브라우닝&quot;효과는 상당히 차별화의 유사한 정도와 셀에 액세스해야합니다. 또한, 같은 지방 선택적 갈색의 표현을 정규화, 인물 1D와 E에</...

<html> 비만은 크게 증가하고 세계이며, 지금은 공중 보건 1 가장 심각한 문제 중 하나를 간주됩니다. 이 조건은 지출에 대한 에너지 흡입 상대의 misbalance과 흰색 지방 조직 (와트)의 지질로 저장 초과하는 에너지의 결과에 관련되어 있습니다. 갈색 지방 조직은 열을 생산하기 위해 과도한 에너지를 발산 할 수있는 능력을 가지고있는 동안 확대 와트는 증가 몸 질량 및 무게와 연결되어 있습니다. 따라서 BAT은 춥고 비만 2,3 모두에 대한 보호 역할 할 수 있습니다. 이것은 단백질 1 (UCP1)를 uncoupling에 의해 미토콘드리아의 전자 교통 uncoupling에 의해 달성된다. 이 단백질은 BAT 3 thermogenesis를 nonshivering의 상징으로 간주됩니다. 최근 몇몇 연구는 성인 인간이 기능 BAT 4-8이 있으며, 따라서 인간의 BAT의 조작은 비만과 관련 질병과의 전투에서 잠재적 인 치료 개입 할 수 있다는 밝혔다. jove_content는 &quot;&gt; 현재 증거가 갈색 adipocytes의 두 종류가 동물에 존재임을 나타냅니다;&quot;고전 &quot;또는&quot;기존의 &#39;갈색 지방은 태아 단계에서 개발 및 interscapular 지역과 다른 주변 조직에 헌신 갈색 지방 창고를 형성 반면. , 갈색 지방 (그래서 brite 또는 베이지 색 세포라고도 함)의 &quot;inducible&quot;형태는 사후 산후 단계에서 개발과 흰색 지방 조직에 사이 사이에 나타납니다. 갈색 adipocytes의 두 종류도 다른 발달 기원으로 구분되어 있습니다. 기존의 동안 갈색 adipocytes가 Myf5 전구체 myoblastsic 같은으로부터 발생, 와트 사이 사이 inducible 베이지 / brite 전지는 비 Myf5 계보 (Lineage) 9,10에서 발생. 또한,이 세포 유형의 규제 경로는 Myf5 파생 갈색과 다를 수 가능성이 adipocytes 11. 베이지 색 세포 (흰색 지방의 예 &quot;브라우닝&quot;)의 개발은 만성 감기에 노출과에 대한 응답으로 활성화 할 수 있습니다β3-adrenoceptor-agonists 또는 성인 12-14에서 PPARγ의 agonists. 베이지 / brite 전지는 전체 에너지 균형의 조작을위한 유망 치료 표적이 될 가능성이 잠재적으로 비만 치료의 일부가 될 수 있습니다, 따라서, 환경 단서는 베이지 색의 개발을 제어하는​​하여 정확한 분자 메커니즘 및 신호 전달 경로를 이해하는 것이 중요합니다 세포. 흰색 지방의 갈변의 분자 제어를 이해하려면, 체외 실험에서 가장 preadipocytes 아니라 비동기 적으로 이루어집니다의 차별화로 적합하며 원위치 15 세포를 감지하기가 어렵습니다 수 있습니다. 지방 세포 개발에 연구가 지금까지 이러한 3T3-L1, 3T3-F442A 또는 HIB1와 같은 세포 라인에 주로 수행 된 있지만, 이러한 세포 라인은 베이지 색 세포의 분자 서명을 부족 나타납니다. 한편, 피하 와트로부터 격리 기본 adipocytes는 proces을 요점을 되풀이 할 가능성이 가장 높은셀 자치 패션의 흰색 지방의 갈변의 s입니다. 여기 지방 조직에서 stromal-혈관 분수의 효과적인 격리와 PPARγ의 agonists에 대한 응답으로 흰 지방의 갈변을 유도를위한 프로토콜을 제공합니다. Rosiglitazone은 이러한 세포의 갈변의 특히 효과적인 중재자로 표시되었습니다. 이전 16 제안으로 휴대폰이 시스템은 베이지 색 / brite 세포의 개발을 연구 할 수있는 신뢰할 수있는 셀룰러 시스템을 제공하는 데 사용할 수 있습니다.

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> 시약 </td></tr><tr><td> Collaginase D </td><td> 로슈 </td><td> 11088874103 </td><td></td></tr><tr><td> Dispase II </td><td> 로슈 </td><td> 04942078001 </td><td></td></tr><tr><td> CaCl 2 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DMEM 매체 </td><td> 어부 </td><td> 10017-CV </td><td> 나트륨 pyruvate없이 2,5 g / L 포도당 및 L-글루타민과 함께 </td></tr><tr><td> 인슐린 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> T3 (3,3 &#39;,5-Triiodo-L-thyronine) </td><td> 시그마 </td><td> T-2877 </td><td></td></tr><tr><td> 인도 메타 신 </td><td> 시그마 </td><td> I-7378 </td><td></td></tr><tr><td> Dexamethasone </td><td> 시그마 </td><td> D-1756 </td><td></td></tr><tr><td> IBMX </td><td> 시그마 </td><td> I-5879 </td><td></td></tr><tr><td> Rosiglitazone </td><td> 시그마 </td><td> R-2408 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 장비 </td></tr><tr><td> 콜라겐 코팅 요리 </td><td> BD </td><td> 354450 </td><td> 10cm 플레이트 </td></tr><tr><td> 70 μm 필터 </td><td> BD 팔콘 </td><td> 352350 </td><td> 셀 스트레이너, 70 μm 나일론 1/ea </td></tr></tbody></table>

베이지 / brite 셀에 stromal 혈관 세포의 분리와 차별화

Isolation and Differentiation of Stromal Vascular Cells to Beige/Brite Cells

브라운 adipocytes는 미토콘드리아의 호흡 사슬을 풀다 및 열 등의 화학 에너지를 발산 할 수있는 능력을 갖추고 있습니다. 흰 지방 조직 (그래서 베이지 색 또는 brite 세포라고도 함)의 UCP1 - 긍정적 인 갈색 adipocytes의 개발은 매우 같은 만성 감기에 노출 또는 PPARγ의 agonists의 환경 단서의 다양한 의해 유도되며, 따라서,이 세포 유형에 대한 치료 대상으로 잠재력이있다 비만 치료. 대부분의 불후의 지방 세포 라인 문화에 흰색 지방의 &quot;브라우닝&quot;의 과정을 요점을 되풀이 할 수는 없지만, 기본 adipocytes는 brite / 베이지 색 세포 개발의 분자 제어를 연구하기위한 신뢰할 수있는 셀룰러 시스템을 제공 피하 화이트 지방 조직에서 stromal 혈관 분율 (와트)에서 분리 . 여기 주요 preadipocytes을 효과적으로 격리와 문화에 베이지 / brite 셀에 차별화를 유도를위한 프로토콜을 설명합니다. 브라우닝 효과는 갈색 지방 선택 마르크의 표현에 의해 평가 될 수있다같은 UCP1과 같은 ERS.

주요 adipocytes의 브라우닝은 mRNA의 Ucp1의 표현과 qRT-PCR로 다른 갈색 지방의 특정 또는 선택적으로 유전자를 측정하여 액세스 할 수 있습니다. 그림 1에 제시하는 것은 사타구니 와트 - 파생 주요 adipocytes에서 유전자 발현 데이터입니다. 세포는 각각 50 nm의 500 nm의에서 rosiglitazone 두 가지 복용의 면전에서 차별화 유도했다. 셀의 하위 집합을 수확하기 전에 4 시간 10 μM에서 forskolin로 치료했다. 이것은 세포의 주기적-AMP (CAMP)를 유도하고 Ucp1 표현을 포함 thermogenic 유전자 프로그램을 활성화합니다. 그림 1A에 도시 된 바와 같이, rosiglitazone은 견고 Ucp1 mRNA의 표현을 유도. Forskolin 처리 (캠프) 추가 rosiglitazone 유발 UCP1 식을 증대...

마우스의 흰색 지방 조직으로부터 격리 기본 흰색 preadipocytes는 베이지 색 / brite 세포로 구분 할 수 있습니다. 여기에 제시된 것은 백색 지방의 &quot;브라우닝&quot;의 분자 규정을 연구 할 수있는 신뢰할 수있는 셀룰러 모델 시스템입니다.

베이지 / Brite 셀에 Stromal 혈관 세포의 분리와 차별화

Brown adipocytes have the ability to uncouple the  respiratory chain in mitochondria and dissipate chemical energy as heat.  Development of UCP1-positive ...

이 절차의 전반적인 목표는 일차 지방세포를 분리하고 배양에서 베이지색 또는 밝은 세포로의 분화를 유도하는 것입니다. 첫 번째 단계는 생쥐의 지방 조직을 해부하는 것입니다. 다음으로, 조직은 콜라겐 분해 효소로 소화됩니다.기질 혈관 분획이 분리되면 세포가 플레이트됩니다. 마지막 단계는 세포가 베이지색 또는 밝은 세포로 분화되도록 유도하는 것입니다. 궁극적으로, 갈색 지방 세포 특이적 유전자의 발현이 증가했음을 보여주기 위해 분석 방법이 사용됩니다.이 방법은 갈색 지방 조직의 주요 질문을 해결하는 데 도움이 될 수 있으며, 이는 분자 메커니즘이 밝은 세포 또는 be 세포의 발달을 조절하는 것입니다. 이 기술의 의미는 비만 및 기타 생활 습관병 치료로 확장됩니다. 인간의 갈색 지방 조직의 조작은 잠재적인 치료 개입으로 사용될 수 있기 때문에 첫 번째 단계는 소화 매체를 준비하는 것입니다.그런 다음 안락사 후 지방 조직을 제거합니다. 먼저, 견갑골 간 갈색 지방 조직이나 박쥐의 등을 따라 목까지 잘라 분리합니다. 갈색 지방 조직의 두 엽은 어깨 사이의 피부 바로 아래에서 찾을 수 있습니다.다음으로, 박쥐를 덮고 있는 얇은 백색 지방층을 조심스럽게 제거합니다. 일단 분리되면 조직을 깨끗한 PBS에 직접 놓습니다. 서혜부 백색 지방 조직 또는 와트는 양쪽 피부 바로 아래에 있습니다.그것은 허벅지 안쪽으로 뻗어 고환을 향해 아래로 뻗어 있습니다. 티슈를 제거하고 깨끗한 PBS에 넣습니다. 다음 단계는 박쥐 샘플과 젖은 샘플 모두에 적용됩니다.조직 섹션에서 머리카락, 골격근 및 결합 조직과 같은 모든 오염 물질을 신속하게 제거합니다. 다음으로, PBS로 박리 매체가 희석되는 것을 방지하기 위해 종이 타월로 조직을 빠르게 건조시키고 마른 판에 놓습니다. 소화 매체를 추가하고 조직을 작은 조각으로 다집니다.다음으로, 조직을 나머지 소화 매체가 들어 있는 50ml 튜브로 옮깁니다. 튜브를 섭씨 37도의 인큐베이터에 넣고 40-50분 동안 계속 교반하여 소화시킵니다. 10-15분마다 확인하여 소화가 잘 되고 있는지 확인하고 과도한 소화를 방지하십시오.조직이 잘 소화되면 소화를 멈춥니다. 5ml의 완전한 배지를 첨가하고 잘 혼합하면 세포가 거의 완전히 균질화되어야 합니다. 다음으로, 샘플을 700배 G에서 10분 동안 원심분리합니다.기질 혈관 분획은 이제 튜브 바닥의 갈색 펠릿으로 볼 수 있어야 하며, 위쪽의 기름지고 성숙한 지방 세포층과 대부분의 액체 층을 흡인해야 합니다. 다음으로 펠릿을 10밀리리터에 녹이고 매체를 완성하고 잘 섞습니다. 혼합이 완료되면 새 50ml 튜브 위에 셀 스트레이너를 놓고 세포 현탁액을 여과합니다.여과된 세포 현탁액을 15ml 튜브로 옮기고 700배 G로 10분 동안 원심분리합니다. 다음으로, 배지를 흡입하고 펠릿을 다시 현탁시킵니다. 10ml의 완전한 중간 피펫에 넣고 필요에 따라 세포를 잘 혼합합니다.일반적으로 5마리의 쥐는 10cm 접시의 서혜부 와트 접시 2개와 박쥐 접시 1개를 산출합니다. 도금 후 1-2시간. PBS로 미디엄 워시를 두 번 흡입하고 새 미디엄을 추가합니다.이 단계는 적혈구, 면역 세포 및 기타 오염 물질을 제거할 수 있으므로 중요합니다. 유지 보수 및 유도 매체는 미리 준비됩니다. 1차 지방세포가 95-97%confluence로 성장하면 유도 배지로 규칙적인 완전한 배지를 변경합니다.48시간 후 배지를 0.5마이크로몰 RO 글리타존을 함유한 유지 배지로 변경합니다. 추가 48시간 후, 추가로 2-3일 동안 1마이크로몰 RO 글리타존을 포함하는 새로운 유지 관리 매체로 변경합니다. 여기에서 볼 수 있듯이 유도 배지를 처음 첨가한 후 6-7일 후에 유도 후 약 3-4일 후에 방울이 나타납니다.세포는 성숙한 지방 세포로 완전히 분화되어야 하며 기름 방울로 채워져야 합니다. 이제 세포를 수확하여 추가 분석에 사용할 수 있습니다. 일차 지방세포의 갈변은 여기에서 볼 수 있듯이 Q-R-T-P-C-R에 의해 갈색 지방 특이적 또는 선택적 유전자의 mRNA를 측정하여 평가할 수 있습니다.RO glitazone, 강력하게 유도 된 UCP one mRNA 발현 FORSKOLIN 치료는 여기에서 cyclic A MP로 지정되었습니다. RO 글리타존이 UCP 1 발현을 유도하여 더욱 증강되었습니다. 씨디아. 또 다른 갈색 지방 선택적 유전자도 용량 의존적 방식으로 강력하게 증가했다. RO 글리타존 치료는 또한 갈색 지방과 백색 지방 모두에 대한 FABP 4 및 지방 생성 마커의 발현을 증가시켰습니다.이 갈변 효과는 단순히 지방 형성 자체의 향상 때문이 아닙니다. UCP 1 및 CDIA 발현의 유도는 여전히 유의했기 때문에 mRNA 수치가 FABP 4로 정규화되더라도 이 웨스턴 블롯은 UCP 1의 단백질 수치 증가를 확인시켜줍니다. 이 동영상을 시청한 후에는 배양에서 지방세포를 분리하는 방법과 이러한 세포를 베이지색 또는 밝은 세포로 분화하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

isolation-differentiation-stromal-vascular-cells-to-beigebrite

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

2001 년, UCLA의 연구자들은 성체 줄기 세포의 인구의 분리는 지방 조직에서 지방 유래 줄기 세포 나부터 ASC라고 기술. 이 문서는 콜라게나 제를 사용 설명서, 소화 효소의 프로토콜을 사용 lipoaspirates에서부터 ASC의 분리를 설명.

인간 Lipoaspirates에서 지방 유래 줄기 세포를 수동으로 분리

재생 애플리케이션에 이상적이다 인간의 골격 근육 항구 여러 멀티 혈통 전구체 집단 내에서 혈관. 내막 근육 조직에서 혈관 내피 세포, 혈관 주위 세포 매체 및 외막 세포 외막에서이 분리 방법은 혈관의 세 층 구조에서 각각 세 능성 전구 세포 집단의 동시 정제를 허용한다.

인간의 골격 근육에서 혈관 유래 다 능성 전구체의 분리

림프절 기질 세포의 분리는 섬유아세포 망상 세포, 림프 및 혈액 내피 세포를 얻기 위한 효소 분해 및 기계적 분해를 포함하는 다단계 절차입니다. 설명된 절차에서는 짧은 분해와 자동화된 기계적 분해를 결합하여 생존 가능한 림프절 기질 세포의 표면 마커 저하를 최소화합니다.

쥐과 림프절 기질 세포의 분리

인간 지방 유래 기질 세포 내의 전사 이질성은 세포 표면 마커와 골 형성 유전자를 사용하여 단일 세포 수준에서 정의할 수 있습니다.  우리는 골형성 잠재력이 증가된 세포 하위 집단의 분리를 위해 유세포 분석을 활용하는 프로토콜에 대해 설명하며, 이는 두개안면 골격 재건을 향상시키는 데 사용될 수 있습니다.

분리 및 인간의 농축 향상된 골 연장술에 대한 기질 세포를 지방이 유래

인간의 심장 조직 심근 재생에 적합 할 수있는 다 능성 혈관 주위 전구체 세포 집단을 항구. 주연 세포와 CD34 + CD146 - - 외막 세포, 인간 심근에서 여기에 설명 된 기술은 원시 혈관, 즉 CD34 + CD146와 연관된 두 능성 간질 세포 집단의 동시 분리 및 정제를 허용한다.

인간의 심장 조직에서 혈관 주위 능성 전구체 세포 집단의 분리

이 문서에서는, 우리는 분리 하 고 마우스 긴 뼈에서 골 수 기질 세포와 조 혈 줄기 세포 분화 방법 제시. 두 개의 서로 다른 프로토콜에는 저조한 다른 세포 인구 확장 및 차별화 osteoblasts, adipocytes, osteoclasts에 적합 되 게 됩니다.

절연, 문화, 및 골 수 기질 세포와 생쥐에서 Osteoclast 창시자의 차별화

지방 조직 혈관 창시자에서 흰색과 베이지색 adipocytes의 차별화는 비만에 대사 개선 위한 잠재력을 맺는 다. 우리는 CD34 + CD31 + 인간의 지방에서 내 피 세포 격리 및 후속 시험관에 확장 및 차별화 흰색과 베이지색 adipocytes에 프로토콜을 설명합니다. 여러 다운스트림 응용 프로그램을 설명 합니다.

절연, 확장, 및 Adipogenic CD34 + CD31 + 인간의 Omental 및 피하 지방 조직에서 내 피 세포의 유도

이 프로토콜은 형광 활성화 세포 분류 또는 면역자기 비드 분리를 통해 쥐 복강 내 백색 지방 조직(WAT) 저장소에서 지방 형성 및 섬유 염증성 기질 세포 하위 집단을 분리하는 기술적 접근 방식을 설명합니다.

Isolation of Adipogenic and Fibro-Inflammatory Stromal Cell Subpopulations from Murine Intra-Abdominal Adipose Depots

이 프로토콜은 지방전구세포를 얻고 시험관 내에서 지방세포 분화를 달성하기 위해 쥐 지방 조직에서 기질 혈관 분획(SVF)의 반자동 분리를 설명합니다. 콜라게나제 분해를 위해 조직 해리제를 사용하면 실험 변동이 줄어들고 재현성이 높아집니다.

조직 해리기를 사용하여 쥐 백색 지방 조직에서 기질 혈관 분획의 반자동 분리

여기에서는 쥐 뼈, 골수, 흉선 및 단일 세포 다생물체학(single-cell multiomics)과 호환되는 인간 흉선 조직에서 기질 세포를 분리할 수 있는 프로토콜을 제시합니다.

조혈 장기에서 기질 세포 분리(Stromal Cell Isolation from Hematopoietic Organs)

여기서는 마우스 혈관선상에서 원발 주변 세포를 분리, 정제, 배양하는 프로토콜을 제시하며, 달팽이 측벽 질환을 연구하기 위한 산화 스트레스 및 세포 노화의 시험관 내 모델을 구축하는 방법을 제시합니다.

신생아 마우스에서 혈관선상균의 1차 경계 세포 분리 및 배양

배우세요 쥐 지방 조직에서 기질 혈관 세포를 분리하고 베이지/브라이트 세포로 분화시키는 방법을. 이 기법은 대사 질환 연구와 비만 치료에 활용될 수 있습니다.

베이지 / Brite 셀에 Stromal 혈관 세포의 분리와 차별화

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