허혈성 쥐 폐의 혈관 신생

이 절차의 전반적인 목표는 좌측 폐동맥을 결찰하는 것입니다. 이것은 먼저 마취된 쥐에게 삽관을 하고 인공호흡을 함으로써 이루어집니다. 다음으로 개흉술을 시행하고 좌측 폐동맥을 결찰합니다.

결찰 후 흉부는 닫히고 쥐는 회복 할 수 있습니다. 궁극적으로, 좌측 폐의 신생혈관형성 정도는 조직의 형광 수준을 측정하거나 다른 조직학적 방법을 통해 평가할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 폐의 기관지 순환의 생체 내 발달 및 신생혈관화를 연구할 수 있는 기회를 제공한다는 것입니다.

이것은 인공호흡하는 폐에서 이 새로운 혈관 구조의 복잡한 3D 구조를 연구할 수 있는 기회를 제공합니다. 이것은 현재 내피 세포 증식과 화학주성 또는 튜브 형성을 연구하는 체외 연구를 수행하는 WHO를 형성하는 대부분의 연구자가 수행하는 것과는 매우 다릅니다. 일반적으로 이 절차를 처음 접하는 개인은 좌측 폐동맥과 왼쪽 기관지 사이를 절개하는 데 어려움을 겪을 것입니다.

제가 드릴 수 있는 유일한 조언은 연습하고, 인내심을 갖고, 이 비디오를 자주 보면서 수술 방식에 약간의 조정이 있는지 확인하라는 것입니다. 이 절차를 시연하는 사람은 제 연구실의 기술자인 John Jenkins입니다. 먼저 마취된 쥐를 수술 보드에 올려놓고 마취를 계속하기 위해 콧방울을 부착한 다음 플라스틱 카테터로 동물을 삽관하고 쥐를 인공호흡기에 연결합니다.

눈에 연고를 바른 후 쥐를 오른쪽에 놓고 부속지를 테이프로 감습니다. 수술 부위의 털을 제거하고 베타딘과 알코올을 반복해서 문질러 피부를 정돈한다. 준비가 되면 피부를 가로 절개합니다.

다음으로 뭉툭한 지방과 조직 층을 해부하여 흉곽을 드러냅니다. 일단 노출되면 세 번째 늑간 공간을 확인하고 집게를 사용하여 세 번째와 네 번째 갈비뼈 사이를 뭉툭하게 절개합니다. 개구부에 갈비뼈 분리기를 삽입하고 폐가 보일 때까지 갈비뼈를 부드럽게 당겨 엽니다.

개구부를 고정합니다. 먼저 오른손으로 왼쪽 폐를 뒤로 움직입니다. 그런 다음 곧은 집게로 왼쪽 폐동맥과 기도를 왼쪽으로 잡습니다.

좌측 폐동맥은 기도 위에 있어야 하며 겸자는 테이블과 수직이어야 합니다. 정렬이 완료되면 조각된 집게를 적절하게 사용하여 자연 경계에서 왼쪽 주줄기 기관지에서 동맥을 분리합니다. 이 분리선은 두 개의 개별 구조 사이에서 얇고 흰색으로 나타납니다.

선박을 통과하지 않도록 주의하십시오. 분리를 따라 집게의 끝을 밉니다. 좌측 폐동맥이 겸자의 곡선에 놓일 때까지 이런 식으로 계속하십시오.

왼손으로 곧은 집게를 부드럽게 풀고 미리 자른 봉합사 조각을 잡습니다. 구부러진 집게를 열고 봉합사를 잡을 수 있을 만큼 동맥을 요람합니다. 집게의 곡선을 기준으로 위쪽 동작으로 봉합사를 부드럽게 당깁니다.

일단 통과하면 봉합사를 조여 좌측 폐동맥을 막고 집게로 고정하면서 남아 있는 봉합사를 잘라냅니다. 갈비뼈를 봉합합니다. 피부를 느슨하게 봉합하지 않도록 주의하십시오.

나중에 갈비뼈를 닫을 사각형 매듭을 묶습니다. 인공호흡기 호기선을 잠시 막아 폐를 과팽창시킨 다음 봉합사를 조입니다. 끝을 잘라내기 전에 또 다른 전체 매듭을 만들어 봉합사를 고정합니다.

말단 호기식 압력을 제거하고 폐가 무너지지 않도록 30초 동안 관찰합니다. 마지막으로 5방울을 바른다. 부피바카인, 조직 접착제로 피부를 닫습니다.

불소 가스의 isof를 끄되 자연 호흡이 안정된 상태로 돌아올 때까지 실내 공기로 1-2분 동안 쥐를 계속 환기시킵니다. 다음으로, 인공호흡기에서 기관관을 분리하고 쥐를 제거하기 전에 쥐가 자발적으로 호흡하고 있는지 확인합니다. 다음 24시간 동안 주기적으로 국소 진통제를 투여하십시오.

마지막으로 눈에서 연고를 닦아내고 원하는 시간에 회복될 때까지 동물을 모니터링합니다. 허혈 표지된 미세구를 주입할 수 있는 후 지점을 주입할 수 있습니다. 기관지 관류의 정도를 평가하기 위해 소량 주입 펌프를 사용하여 표지된 미세구를 일정한 속도로 좌측 경동맥에 전달합니다.

카테터를 뭉툭한 25게이지 바늘과 4방향 마개에 연결합니다. 시작하려면 앞에서 설명한 수술 준비를 따르십시오. 준비가 되면 뭉툭한 목을 따라 정중선을 절개합니다.

조직을 절개하여 기관과 좌측 경동맥을 드러냅니다. 경동맥 아래에 있는 두 개의 봉합사를 지나 격리되면 근위 봉합사를 단단히 묶습니다. 그런 다음 동맥을 작게 절개하고 식염수로 채워진 카테터를 삽입합니다.

업스트림 봉합사로 이것을 제자리에 고정합니다. 이 혈관 깁스는 폐의 기관지 혈관 신생에 대한 놀라운 시각화를 제공합니다. 좌측 동맥 결찰술 후 28일 후, ation 후 3일 후 좌측 폐에서 기도 절편이 표시됩니다.

기도벽 내에 위치한 적혈구로 채워진 두 개의 두드러진 기관지 혈관에 주목하십시오. 삽입물은 기관지 동맥의 증식하는 내피 세포를 보여주기 위해 염색되어 있습니다. 이 예는 결찰 후 14일 후에 취한 왼쪽 폐 절개를 보여줍니다.

이 시점에서 기관지 혈관의 크기가 증가한 것과 전신 관류의 정도를 평가하는 데 사용된 위축된 폐동맥 형광이 순진한 쥐의 왼쪽 폐에서 거의 감지되지 않았다는 점에 주목하십시오. 그러나 쥐의 왼쪽 폐에서 측정된 실질적이고 유의하며 일관된 수치가 있었다. 결찰 후 14일 후에 공부한 후 한 번 마스터했습니다.

이 기술은 제대로 수행되면 한 시간 이내에 완료할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 쥐를 삽관하고, 개흉술을 수행하고, 폐동맥을 성공적으로 결찰하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 결과 변수에 따라 좌측 경동맥을 캐뉼레이션하고 관류 분석을 위해 표지된 미세구를 주입할 수 있어야 합니다.