Name: 허혈성 쥐 폐의 혈관 신생 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 36 s
Description: 배우세요 쥐의 왼쪽 폐동맥 결찰을 통한 허혈성 폐 혈관 신생 유도 방법을. 형광 측정과 조직학 분석으로 기관지 혈관 신생을 평가하여 폐 병리 및 치료 전략 연구에 활용할 수 있습니다.

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우리는 폐의 캐스팅에 지원 한 박사 Adlah Sukkar, MD의 작품을 인정합니다. 이 작품은 NHLBI, HL088005로 운영되었습니다.

쥐에서 수행 모든 프로토콜은 존스 홉킨스 대학 동물 관리 및 사용위원회와 NIH의 지침에 따라 승인되었습니다. 가능하면 동물은 수술 외과 사이트의 오염을 최소화하기 위해 수술 영역에서 별도의 지역에 준비해야합니다. 1. 마취 / 무통 <ol><li> 3퍼센트 isoflurane과 함께 주입 유도 챔버에서, 장소 쥐 (할렌, 인디애나 폴리스, IN Sprague Dawley 남성의 쥐, 125~150그램). </li><li> 3퍼센트 isoflurane 마취와 코 콘과 환풍기에 연결된 수술 보드에 anesthetized 쥐를 놓습니다. 모든 절차에 대한 무균 기술을 사용합니다. 멸균 운영 필드를 보장하기 위해 쥐를 내리면 t. </li></ol> 2. 삽관 법 <ol><li> 외과 테이프를 사용하여 부정사 위치에 부속을 고정. </li><li> 코 콘에서 쥐를 제거 패딩 집게로 혀를 확장합니다. </li><li> 가이드로 무딘 금속 stilet와 14 게이지 intracath을 사용합니다. 에 뒤에 슬라이드기관에 ngue. </li><li> 기관에 흰색 플라스틱 intracath을 떠날 금속 stilet를 제거합니다. 쥐 호흡하며 공기가 튜브를 통하여 흐르는 확인하십시오. </li><li> 카테터에 직접 어댑터 코 콘을 교체, 환풍기 (, 8 ML / kg 갯벌 볼륨, 설치류 환풍기 모델 683, 하버드 장치, Holliston, 매사추세츠 90 숨 / 분)에 쥐를 연결합니다. </li><li> Puralube (버틀러 Schein, 더블린, OH) 눈에 수의학 연고를 적용 할 수 있습니다. </li></ol> 3. Thoracotomy <ol><li> 장소 쥐 오른쪽 아래, 외과 테이프를 사용하여 부속을 고정. </li><li> 왼쪽 흉곽 영역을 면도. </li><li> 작은 진공과 초과 털을 제거합니다. </li><li> Povidone - 요오드 swabstick (Dynarex 공사, Orangebur, NY)에 의해 다음 알코올로 닦고하여 살균 필드를 확인합니다. 이 과정을 두 번 이상 (3 스크럽 총)을 반복합니다. </li><li> 필드의 중앙에 메스 멸균 해부 가위 또는 멸균과 횡 방향의 절개를합니다. </li><li> 리터를 해부 퉁명아래 갈비 (마지막 층은 갈비를 덮고 얇은 막입니다)에 조직과 지방의 에어. </li><li> 3 늑간 공간을 결정하기 위해 갈비뼈를 계산합니다. </li><li> 멸균 45 ° Graefe 집게를 사용하여 3, 4 번째 갈비뼈 사이의 무딘 절개를합니다. </li><li> , 갈비뼈 구분 기호를 삽입 부드럽게 개방 유지하기 위해 봉합에 열려있는 폐의 전체 시각화와 무효, 장소 테이프를 만드는 당긴다. </li></ol> 4. 좌측 폐동맥의 결합 <ol><li> 90 ° Graefe의 포셉으로 오른손으로 다시 왼쪽 폐를 이동합니다. </li><li> 뒤몽 패턴을 # 5 바로 집게를 사용하여, 왼쪽 손으로 왼쪽 폐 동맥과기도를 잡아. 왼쪽 폐동맥기도 위에 누워 것입니다. 포셉은 테이블에 직접 수직 있는지 확인합니다. 또한, 그것은 가장 말초 위치 (실질에 가장 가까운)에서 좌측 폐동맥 왼쪽 / mainstem의 기관지을 수령 것이 가장 효과적입니다. 이 왼쪽 기동과 옆 환기 왼쪽 폐를 밀어 넣습니다. </li><li> 뒤몽을 사용패턴 # 5 45 °의 자연 국경에서 왼쪽 mainstem의 기관지에서 왼쪽 폐동맥을 분리 곡선 포셉. 이 분리 라인은 두 개인 구조 사이의 얇고 흰 나타납니다. </li><li> 혈관을하지 않고 동맥에서 바로 분리, 부드럽게 분리를 따라 함께 개최 포셉 팁을 끼 웁니다. </li><li> 포셉의 팁이 가시적 왼쪽 폐 동맥과 왼쪽 mainstem의 기관지를 분리 할 때까지 계속합니다. 팁의 작은 점은 완전히 통해 있어야합니다. 혈액 포셉의 끝에서 시각화 할 수 있다면, 그것은을 통해 완전히되지 않고 결합을 시도하지 않아야합니다. 일단 공간을 통해 왼쪽 폐동맥 포셉의 곡선에 누워 것입니다. 이 위치에 잡아. </li><li> 부드럽게 직선 무딘 집게 그립 (왼쪽)을 공개하고 사전 절단 봉합 (~ 2~3인치, 폴리 프로필렌 봉합사 크기 6-0, Myco 의료, 캐리, NC)의 조각을 잡아. </li><li> 좌측 폐동맥와 g를 데리고 곡선 포셉을 엽니 다랩의 봉합. 부드럽게 포셉의 곡선에 상대적으로 상승 운동에 좌측 폐동맥과 왼쪽 mainstem의 기관지 사이의 공간을 통해 봉합사를 당겨. </li><li> 사각형 매듭과 왼쪽 폐, 봉합의주의 싹둑 나머지 부분을 occluding 아래로 묶어주세요. </li><li> (파란색 모노 필라멘트) 폴리 프로필렌으로 두 번 갈비뼈와 봉합을 보유하는 무딘 집게를 사용하여 닫기 갈비 크기주의하지로하는 것 19mm, hemostat에 바늘을 (Myco 의료, 캐리, NC) 절단 8분의 3 원 역에 첨부 4-0 봉합 피부 (단 갈비). </li><li> 느슨한 광장 매듭을 완료, 긍정적 인 엔드 - 날숨 압력 (따위가 나오기 시작, 2-5 cmH 2 O)에, 장소를 폐를 부풀려, 단단히 폐 후 안전한 매듭을 hyperinflate하고, 봉합의 나머지 부분을 snipping 전에 다른 모든 매듭을합니다. 따위가 나오기 시작에서 제거하고 폐는 붕괴하지 않도록 30 초에 표시합니다. 5 물방울 Bupivicaine을 (APP 제약, Schaumbur, IL) 적용됩니다. </li><li> 닫기 상처를 조직 접착제를 삽입하여 피부와 함께 피부를 밀어은 전용 다시 사용면 팁 작은 주걱의 D. 이후 절개의 위치 24 시간마다 8 시간이나 동물이 정상적인 활동을 다시 시작 때까지 Bupivicaine (2.0 밀리그램 / kg 피하)를 제공합니다. 이 지역의 피하 층은 매우 얇은으로, 이것 자체로는 치료해야 쉽지 않다. 조직 접착제가 적용되고 피부가 두명이 경우 또한 피하 층을 닫습니다. </li><li> isoflurane 가스를 해제하지만, 자발적인 움직임을 반환 할 때까지 실내 공기에 1-2 분 동안 쥐를 환기하고 있습니다. 환풍기에서 tracheal 튜브를 분리하고 쥐를 제거하기 전에 자발적 호흡이되어 있는지 확인합니다. </li><li> 면봉 및 모니터 운동 및 복구와 눈에서 Puralube을 닦아주십시오. (0.05 MG / kg intraperitoneal, 버틀러 Schein, 더블린 OH) buprenorphine 히드로 클로라이드를 삽입. 수술 후 48 시간에 대한 진통제 매 12 시간 배달을 계속합니다. </li></ol> 5. 왼쪽 경동맥 동맥 Cannulation 기관지 perfus의 크기를 평가하려면좌측 폐동맥의 결합 후 원하는 시간 지점에서 허혈성 왼쪽 폐의 이온은, 대동맥으로 왼쪽 경동맥을 통해 표시 마이크로를 삽입. 1-2 위와 같이 쥐를 준비합니다. <ol><li> 목을 따라 중간 선을 잘라 기관과 왼쪽 경동맥 (microsphere 분사 사이트)를 나타 내기 위해 해부 퉁명. </li><li> 25g 바늘, 4 방향 꼭지, 1 ML의 주사기에 연결된 용기로 PE20 튜브 (Becton 디킨슨, MD를 스파크)의 heparinized 생리, 무딘 팁이 가득 카테터를 삽입합니다. </li><li> 물 sonicator에서 30 초 동안, 마이크로 (Invitrogen, 유진, 또는 X 10 6 영역 / ML 15 μm 진홍의 폴리스티렌 형광 마이크로, 1) 장소 병. </li><li> 병, 소용돌이를 제거하고 20g 바늘을 통해 1 ML 해밀턴 유리 주사기 (해밀턴 회사, 리노 NV)에 0.5 ML (50 마이크로을)를 그립니다. </li><li> 4 방식 꼭지에 해밀턴 주사기를 첨부 주사기 펌프 (속도로 마이크로을 불러 일으킬 : 500 μl / 분, 지니 플러스, 켄트 과학, Torringt) 코네티컷 있습니다. </li><li> 500 μl / 분에서 heparized 생리의 1 ML과 해밀턴 주사기와 수세식 장치를 제거합니다. </li><li> 전체 가슴 thoracotomy을 수행하고 아래 대정맥을 severing하여 쥐를 ...에게서 피를 뽑다. </li><li> 왼쪽 폐와 관심의 다른 조직을 제거합니다. </li><li> 조직에서 마이크로 압축을 풀려면 일어난 과다 출혈 후 쥐의 전체 좌측 폐를 타고 2M 코 (4-6 ML)에 배치합니다. 55 ° C의 물을 욕조에 장소와 조직 소화 밤새 둡니다. , 구슬을 씻어 소용돌이 (10 초)과 원심 분리기를 (; 10 분 20 ° C 2,000 RPM) 십대 초반 80 (0.25 %)를 추가합니다. , 표면에 뜨는을 제거합니다 2 ethoxyethyl 초산 (1 ML), 소용돌이를 추가하고 1 시간에 서 보자. 소용돌이 정지 및 원심 분리기 (2,000 RPM, (20 ° C 10 분 용) 히타치 F-2500 형광 분광 광도계를 사용하여 큐벳과 방법으로 형광, 장소를 포함하는 2 ethoxyethyl 초산 수용액 층 (여기 612/emission 618를 제거합니다. , Digilab, Holliston, MA). </li></ol>

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</ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

테스트 모든 종의 좌측 폐동맥의 결합은 허혈성 폐의 강력한 조직 neovascularization로 연결됩니다. 우리는 쥐 모델에서 수술 방법의 세부 사항을 제시하고 있습니다. 우리의 결과는 혈관 주조, 조직 병리학에서 생산 및 생체 라벨에 기관지 동맥 세포 분열 따위에 의해 번식을 명시하고 폐 실질을 perfuse. 따라서, 기관지 혈관 신생의 메커니즘은 만성 폐 thromboembolism의 인간의 상태를 패러랠 동물 모델에서 공부 할 수 있습니다. 또한이 임상 적으로 관련성이 높은 작은 동물 모델은 인간의 실험을 계속할 수있는하지 형태와 neovascularization의 기능을 연구 할 수있는 기회를 제공합니다. 나열된 수술 절차는 수술 경험이있는 동물 기술자가 신속하게 이러한 기술을 습득 할 수 있도록 충분한 세부 사항을 제공합니다. 우리의 관측 Sprague Dawley 남성에서 주로되었습니다 있지만쥐 (75~1백g)는 다른 변종은 연구 동등하게 적...

폐의 조직 혈관 신생은 잘 인식됩니다. 이러한 천식 2, 간질 폐 섬유증이 3 암 4 및 만성 폐 thromboembolism 5의 전신 vasculature과 폐 실질 폐 proliferates 주변과 침공과 같은 질병 상태에서. 그러나, 조직의 차동 활성화보다는 폐 순환을 공부하는 동물 모델은 몇 가지 있습니다. 아마도 성인 포유 동물의 폐에 조직 neovascularization의 가장 재현 모델은 만성 폐 동맥 국소 빈혈을 유도 한 후 발생하는 것입니다. 5-7 인간 좌측 폐동맥 폐쇄에 대한 반응은, 개 8, 돼지 9, 양 10, 기니 돼지 11, 쥐 1, 12, 13 및 마우스 14 기관지 동맥뿐만 아니라 갈비 사이 동맥의 급속한 확산이다. 전신 neovasculari에 대한 책임 메커니즘폐 국소 빈혈 후 폐의 zation은 대부분 알 수없는 널리 연구되지 ​​않았습니다. 좌측 폐동맥 폐쇄 후 쥐의 기관지 혈관 신생의 시간 코스는 신중하게 Weibel 1의 histologic 작품에 설명되어 있습니다. 쥐에이 작품 확장, 저희 연구실이 과정에서 중요한 성장 요인뿐만 아니라 폐에서이 neovasculature의 physiologic 결과 모두에 초점을 맞추고있다. 결과가 CXC 케모카인의 CINC-3은 초기 국소 빈혈 후에 CXCR2에 중화 항체를 쥐를 치료 올라간다 보여, CINC-3 수용체는 혈관 신생 13 attenuates. 십사일 폐 국소 빈혈의 발병 후 새로 설립 된 기관지 vasculature 수가 크게 증가 단백질 투자율 15 이상으로 표시했습니다. 왼쪽 폐 기능은 diffusing 용량과 폐 볼륨 15 감소 감소 일반 게재되지 않았습니다. neovasculature가 공동있을 수 있습니다 있지만만성 폐 국소 빈혈 동안 폐 조직의 보존에 ntributed, 그것은 정상하고 폐 기능의 지속적인 감소에 기여할 수는 없습니다 나타납니다. 아마도이 모델의 가장 호기심 측면 중 하나는 혈관을 proliferating의 공간적 분포에 관한 것이다. 국소 빈혈로 인한 폐 실질 조직 내에서의 성장 요인의 출시에도 불구하고, neovasculature이 상대적으로 큰 업스트림 기관지 동맥에서 유래 된 것입니다. 정상적인 기관지 동맥은 대동맥에서 작은 지점으로 발생하고 카리나의기도 트리를 침공. 따라서 성장 요인 arteriogenesis의 초기 단계를 유도하는하여 메커니즘은 명확하지 않습니다. 우리는 쥐가 인간과 비슷한 혈관 해부학 적으로 폐 국소 빈혈 동안 전신 혈관 신생을 담당하는 메커니즘을 연구 할 수있는 독특한 기회를 제공하는 것이 좋습니다. 좌측 폐동맥의 완전한 방해가 인간의 과목에서 드문이지만하면,증가 기관지 vascularity는 유사 환자에서 유도 할 것으로 보인다 폐동맥 폐쇄 (16)의 어떤 사이트와 크기입니다. 따라서, 우리는 쥐의 왼쪽 폐 동맥과 혈관 신생의 정도를 수량화 할 수있는 수단을 ligate 할 수있는 수술 방법에 대한 자세한 설명을 제공합니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 : </td><td> 회사 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> buprenorphine 히드로 클로라이드, Puralube </td><td> 버틀러 Schein </td><td></td><td></td></tr><tr><td> bupivicaine </td><td> APP 제약 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Povidone - 요오드 swabstick </td><td> Dynarex 공사 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 폴리 프로필렌의 봉합 크기 6 대 0으로 8분의 3 원 역 절단 바늘 </td><td> Myco 의료 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> PE20 튜브 </td><td> Becton 디킨슨 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 15 μm 진홍의 폴리스티렌 fluorospheres </td><td> Invitrogen </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 한 ML 해밀턴 유리 주사기 </td><td> 해밀턴 회사 </td><td> &lt;/ TD&gt; <td></td></tr><tr><td> 장비 : </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 램프의 요정 플러스 주사기 펌프 </td><td> 켄트 과학 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 형광 분광 </td><td> Digilab </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 쥐 환풍기 모델 683 </td><td> 하버드 장치 </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 표 1. 특정 시약 및 장비 표. </td></tr></tbody></table>

허혈성 쥐 폐의 혈관 신생

Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

성인 폐는 전신 기관지 동맥과 폐동맥 동맥을 통해 흐르는 전체 정맥 반환 모두에 의해 perfused 있습니다. 대부분의 폐 pathologies에서는 향상된 폐 관류에 대한 필요에 응답하고 강력한 neovascularization을 보여주는 작은 조직 vasculature입니다. 폐 동맥 방해에 의해 유도 폐 혈관 국소 빈혈은 사람의 급속한 전신 동맥 혈관 신생뿐만 아니라 여러 동물 모델에서 결과로 표시되었습니다. 쥐의 기관지 동맥 확산의 시간 코스의 histologic 평가는 신중하게 Weibel 1 설명되었지만, 새로운 혈관의 조직 성장을위한 책임이 메커니즘은 명확하지 않습니다. 우리는 기관지 neovascularization로 연결 쥐에서 좌측 폐동맥의 국소 빈혈을 일으킬 외과 세부 정보를 제공합니다. 혈관 신생의 정도의 정량화는 폐 내의 두 혈관 침대의 존재로 인해 추가 과제를 제공합니다. 방법표시 microsphere 주사에 따라 기능 혈관 신생을 결정하기 위해 제공됩니다.

혈관 캐스트 : 쥐의 좌측 폐동맥의 국소 빈혈의 효과의 결과는 그림 1에 설명되어 있습니다. 표시하면 기관지 vasculature의 메타 크릴 레이트 캐스트와 28일 LPAL 후 왼쪽기도 트리의 광범위한 vascularity입니다. 이 캐스트를 얻으려면 조직 vasculature는 내림차순으로 대동맥에 역행, 메타 크릴 레이트 혼합물 (빨간색)로 주입하였으며, 기관은 cannulated과 흰색 실리콘 기반 소재로 주입되었다. 이 혈관 캐스트 폐의 기관지 혈관 신생의 놀라운 시각화를 제공합니다. 특히 주목할만한 왼쪽 폐의 크고 고통스러운 상류 기관지 혈관이 있습니다. 이 이미지에 표시되지 않지만, 오른쪽 기관지가 정상, 외로운, 오른쪽 기관지 동맥을 제외하고 대형 선박의 근본적 결여입니다. 조직학 :기도 vascularization의 변화는 histologic 섹션 그림 2에 표시됩니다 왼쪽 폐에 시각화. Bronch...

폐는 전신 기관지 동맥과 폐동맥 동맥 모두에서 perfused 있습니다. 대부분의 폐 pathologies에서는 강력한 neovascularization을 보여주는 작은 조직 vasculature입니다. 폐 혈액 흐름의 중단이 활발 기관지 혈관 신생을 촉진합니다. 우리는 기관지 neovascularization을 촉진 좌측 폐동맥의 국소 빈혈을 일으킬 외과 세부 정보를 제공합니다.

The  adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire  venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung ...

이 절차의 전반적인 목표는 좌측 폐동맥을 결찰하는 것입니다. 이것은 먼저 마취된 쥐에게 삽관을 하고 인공호흡을 함으로써 이루어집니다. 다음으로 개흉술을 시행하고 좌측 폐동맥을 결찰합니다.결찰 후 흉부는 닫히고 쥐는 회복 할 수 있습니다. 궁극적으로, 좌측 폐의 신생혈관형성 정도는 조직의 형광 수준을 측정하거나 다른 조직학적 방법을 통해 평가할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 폐의 기관지 순환의 생체 내 발달 및 신생혈관화를 연구할 수 있는 기회를 제공한다는 것입니다.이것은 인공호흡하는 폐에서 이 새로운 혈관 구조의 복잡한 3D 구조를 연구할 수 있는 기회를 제공합니다. 이것은 현재 내피 세포 증식과 화학주성 또는 튜브 형성을 연구하는 체외 연구를 수행하는 WHO를 형성하는 대부분의 연구자가 수행하는 것과는 매우 다릅니다. 일반적으로 이 절차를 처음 접하는 개인은 좌측 폐동맥과 왼쪽 기관지 사이를 절개하는 데 어려움을 겪을 것입니다.제가 드릴 수 있는 유일한 조언은 연습하고, 인내심을 갖고, 이 비디오를 자주 보면서 수술 방식에 약간의 조정이 있는지 확인하라는 것입니다. 이 절차를 시연하는 사람은 제 연구실의 기술자인 John Jenkins입니다. 먼저 마취된 쥐를 수술 보드에 올려놓고 마취를 계속하기 위해 콧방울을 부착한 다음 플라스틱 카테터로 동물을 삽관하고 쥐를 인공호흡기에 연결합니다.눈에 연고를 바른 후 쥐를 오른쪽에 놓고 부속지를 테이프로 감습니다. 수술 부위의 털을 제거하고 베타딘과 알코올을 반복해서 문질러 피부를 정돈한다. 준비가 되면 피부를 가로 절개합니다.다음으로 뭉툭한 지방과 조직 층을 해부하여 흉곽을 드러냅니다. 일단 노출되면 세 번째 늑간 공간을 확인하고 집게를 사용하여 세 번째와 네 번째 갈비뼈 사이를 뭉툭하게 절개합니다. 개구부에 갈비뼈 분리기를 삽입하고 폐가 보일 때까지 갈비뼈를 부드럽게 당겨 엽니다.개구부를 고정합니다. 먼저 오른손으로 왼쪽 폐를 뒤로 움직입니다. 그런 다음 곧은 집게로 왼쪽 폐동맥과 기도를 왼쪽으로 잡습니다.좌측 폐동맥은 기도 위에 있어야 하며 겸자는 테이블과 수직이어야 합니다. 정렬이 완료되면 조각된 집게를 적절하게 사용하여 자연 경계에서 왼쪽 주줄기 기관지에서 동맥을 분리합니다. 이 분리선은 두 개의 개별 구조 사이에서 얇고 흰색으로 나타납니다.선박을 통과하지 않도록 주의하십시오. 분리를 따라 집게의 끝을 밉니다. 좌측 폐동맥이 겸자의 곡선에 놓일 때까지 이런 식으로 계속하십시오.왼손으로 곧은 집게를 부드럽게 풀고 미리 자른 봉합사 조각을 잡습니다. 구부러진 집게를 열고 봉합사를 잡을 수 있을 만큼 동맥을 요람합니다. 집게의 곡선을 기준으로 위쪽 동작으로 봉합사를 부드럽게 당깁니다.일단 통과하면 봉합사를 조여 좌측 폐동맥을 막고 집게로 고정하면서 남아 있는 봉합사를 잘라냅니다. 갈비뼈를 봉합합니다. 피부를 느슨하게 봉합하지 않도록 주의하십시오.나중에 갈비뼈를 닫을 사각형 매듭을 묶습니다. 인공호흡기 호기선을 잠시 막아 폐를 과팽창시킨 다음 봉합사를 조입니다. 끝을 잘라내기 전에 또 다른 전체 매듭을 만들어 봉합사를 고정합니다.말단 호기식 압력을 제거하고 폐가 무너지지 않도록 30초 동안 관찰합니다. 마지막으로 5방울을 바른다. 부피바카인, 조직 접착제로 피부를 닫습니다.불소 가스의 isof를 끄되 자연 호흡이 안정된 상태로 돌아올 때까지 실내 공기로 1-2분 동안 쥐를 계속 환기시킵니다. 다음으로, 인공호흡기에서 기관관을 분리하고 쥐를 제거하기 전에 쥐가 자발적으로 호흡하고 있는지 확인합니다. 다음 24시간 동안 주기적으로 국소 진통제를 투여하십시오.마지막으로 눈에서 연고를 닦아내고 원하는 시간에 회복될 때까지 동물을 모니터링합니다. 허혈 표지된 미세구를 주입할 수 있는 후 지점을 주입할 수 있습니다. 기관지 관류의 정도를 평가하기 위해 소량 주입 펌프를 사용하여 표지된 미세구를 일정한 속도로 좌측 경동맥에 전달합니다.카테터를 뭉툭한 25게이지 바늘과 4방향 마개에 연결합니다. 시작하려면 앞에서 설명한 수술 준비를 따르십시오. 준비가 되면 뭉툭한 목을 따라 정중선을 절개합니다.조직을 절개하여 기관과 좌측 경동맥을 드러냅니다. 경동맥 아래에 있는 두 개의 봉합사를 지나 격리되면 근위 봉합사를 단단히 묶습니다. 그런 다음 동맥을 작게 절개하고 식염수로 채워진 카테터를 삽입합니다.업스트림 봉합사로 이것을 제자리에 고정합니다. 이 혈관 깁스는 폐의 기관지 혈관 신생에 대한 놀라운 시각화를 제공합니다. 좌측 동맥 결찰술 후 28일 후, ation 후 3일 후 좌측 폐에서 기도 절편이 표시됩니다.기도벽 내에 위치한 적혈구로 채워진 두 개의 두드러진 기관지 혈관에 주목하십시오. 삽입물은 기관지 동맥의 증식하는 내피 세포를 보여주기 위해 염색되어 있습니다. 이 예는 결찰 후 14일 후에 취한 왼쪽 폐 절개를 보여줍니다.이 시점에서 기관지 혈관의 크기가 증가한 것과 전신 관류의 정도를 평가하는 데 사용된 위축된 폐동맥 형광이 순진한 쥐의 왼쪽 폐에서 거의 감지되지 않았다는 점에 주목하십시오. 그러나 쥐의 왼쪽 폐에서 측정된 실질적이고 유의하며 일관된 수치가 있었다. 결찰 후 14일 후에 공부한 후 한 번 마스터했습니다.이 기술은 제대로 수행되면 한 시간 이내에 완료할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 쥐를 삽관하고, 개흉술을 수행하고, 폐동맥을 성공적으로 결찰하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 결과 변수에 따라 좌측 경동맥을 캐뉼레이션하고 관류 분석을 위해 표지된 미세구를 주입할 수 있어야 합니다.

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

physiologic angiogenesis 그 부족 일반 성인 vascularized 포유류의 조직은 학습하는 데 사용됩니다 수술 개입에 노출되지 않았습니다 (I) 개시 및 시험 요원의 intraperitoneal 관리 다음 angiogenesis의 개발, 그리고 체계적인 관리 아래와 angiogenesis의 (2) 수정 테스트 에이전트를 선택했습니다.

쥐 장간막의 Angiogenesis 분석

뇌 조직으로의 혈류를 일시적으로 차단하는 수술인 중대뇌동맥 폐색을 받은 쥐부터 시작하십시오.이것은 허혈성 뇌졸중을 유발하여 뇌 조직 손상을 초래합니다.다음으로 막힌 부분을 제거하여 혈류를 회복합니다.연구 관련성을 보장하기 위해 신경학적 결손을 보이는 쥐를 선택합니다.그런 다음 실험군에는 시험약을 투여하고 다른 그룹에는 식염수를 주입합니다.약물과 식염수 투여를 반복합니다.시험 약물은 혈관신생을 촉진하여 새로운 혈관을 형성합니다.이는 손상된 뇌 조직으로의 혈액 공급을 향상시키고 뇌졸중 영향을 줄입니다.다음으로 쥐를 마취하고 온열 담요를 사용하여 체온을 유지합니다.며칠 후 두 그룹 모두에 대해 MRI 스캔을 수행합니다.MRI 이미지에서 식염수 주입 그룹의 더 밝은 영역은 뇌졸중 영향 부위를 나타냅니다.한편, 실험군의 밝기 감소는 약물 유발 혈관신생을 시사한다.

허혈성 뇌졸중의 쥐 모델에서 시험약의 혈관신생 효과 평가

고립 된 혈액 관류 폐 준비는 폐 표면에 미세 혈관의 네트워크를 시각화하는 것이 가능합니다. 여기에서 우리는 실시간 형광 이미징을 사용하여 격리 된 폐의 단일 미세 혈관의 투과성을 정량화하는 방법을 설명합니다.

고립 된 혈액 관류 쥐 폐 준비에 단일 미세 혈관 투과성의 양을

국소 혈관 신생을 자극하는 장기 특이적 미세환경의 재현은 손상된 조직의 성공적인 재생을 위해 필수적입니다. 이 보고서는 폐 특이적 미세환경이 성체 쥐의 혈관 신생과 폐포 재생을 조절하는 방법을 탐구하기 위해 살아있는 쥐의 폐 표면에 피브린 젤을 이식하는 새로운 방법을 보여줍니다.

마우스 폐에 섬유소 젤의 주입은 폐 관련 신생 혈관 연구에

이 프로토콜은 쥐의 경동맥에 관내 부상의 원인이 이제부터는 신생 내막의 증식을 유도하는 풍선 카테터를 사용합니다. 이 부상에 대한 응답으로 혈관 재 형성의 메커니즘을 연구하는 잘 확립 된 모델입니다. 또한 널리 잠재적 인 치료 방법의 유효성을 결정하는데 사용된다.

쥐 경동맥의 혈관 풍선 부상과 관내 관리

신장 기능의 회복을위한 약물의 투여는 현지화 및 치료 화합물의 분포 컨트롤이 필요합니다. 여기, 우리는 구체적으로 쥐에 약물의 신장 내 전달을위한 간단한 방법을 설명합니다. 이 절차는 쉽고없이 사망률과 높은 재현성으로 수행 될 수있다.

쥐의 신장에 생물의 혈관 배달

여기에서, 중요한 뒷다리 허혈 실험 모형은 혈관 신생 치료의 효과를 평가하기 위하여 기능적, 적학 및 분자 시험의 건전지에 선행됩니다.

힌들보 리 허 혈의 뮤린 모델에서 치료 혈관 신생 평가

산소 유발 망막병증(OIR)은 미숙아 및 증식 성 당뇨병 망막증의 망막병증과 같은 허혈성 망막 질환을 모델링하고 신생아 질환에 대한 항 혈관 신생 약물을 평가하는 개념 증명 연구의 모델로 사용될 수 있다. OIR는 정량화 될 수있는 망막에서 견고하고 재현 가능한 신생 혈관화를 유도합니다.

설치류에 있는 허혈성 망막 질병을 위한 산소 유도한 망막병증 모형

여기에서는 결과를 개선하는 데 도움이 되는 쥐 폐 이식 모델에 대한 최적화를 제시합니다. 체중에 따른 커프스 사이즈 가이드, 4차 늑간 공간을 확인하기 위한 측정 전략, 상처 봉합 및 BAL(기관지폐포 세척) 체액 및 조직 수집 방법을 제공합니다.

온난 허혈/재관류 손상의 쥐 폐 이식 모델: 결과 개선을 위한 최적화

이 프로토콜은 마우스 모델에서 폐 허혈 재관류 손상을 연구하는 데 사용할 수 있는 실현 가능하고 신뢰할 수 있으며 재현 가능한 좌폐 고막 클램핑 방법을 설명합니다.

Murine Left Pulmonary Hilar Clamp 폐 허혈 재관류 손상 모델

자가 혈전을 사용하여 폐색전증의 최소 침습 랫드 모델을 확립하기 위한 자세한 방법론이 설명됩니다. 경색 부위를 정량화하고 폐동맥 나무를 시각화하기 위한 추가 방법도 제공됩니다.

자가 혈전을 이용한 폐색전증의 최소 침습적 쥐 모델 확립

배우세요 쥐의 왼쪽 폐동맥 결찰을 통한 허혈성 폐 혈관 신생 유도 방법을. 형광 측정과 조직학 분석으로 기관지 혈관 신생을 평가하여 폐 병리 및 치료 전략 연구에 활용할 수 있습니다.

허혈성 쥐 폐의 혈관 신생

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