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Odorants에 Arthropod 응답을 수직 T-미로 초이스 분석
Odorants에 Arthropod 응답을 수직 T-미로 초이스 분석
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JoVE Journal Neuroscience
Vertical T-maze Choice Assay for Arthropod Response to Odorants

Odorants에 Arthropod 응답을 수직 T-미로 초이스 분석

Full Text
15,405 Views
06:13 min
February 14, 2013

DOI: 10.3791/50229-v

Lukasz Stelinski1, Siddharth Tiwari1

1Entomology and Nematology Department,University of Florida

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

수직, T-미로 olfactometer는 절지 동물의 행동 반응을 시금에 설명되어 있습니다. olfactometer은 두 잠재적 인 냄새 필드에 대상이 때 실험은 실험 대상으로 수행 선택권을 측정 할 수 있습니다. 모두 인력과 odorants의 반발이 장치와 함께 측정 할 수 있습니다.

이 절차의 전반적인 목표는 냄새 물질에 대한 반응으로 CID 행동을 측정하는 것입니다. 이것은 먼저 서로 다른 냄새 선택이 다른 공간 영역과 관련된 수직 TMA를 만들어 수행됩니다. 두 번째 단계는 CID를 테마즈에 도입하는 것입니다.

다음으로, CID는 미로의 어느 팔을 선택하는지 확인하기 위해 설정된 시간 동안 관찰되고 선택 사항이 기록됩니다. 궁극적으로, 수직 TEMAS 선택 분석은 냄새 물질에 대한 곤충의 행동 반응을 밝히는 데 사용됩니다. 분광계는 곤충의 자연적인 행동을 이용하여 다양한 유인제 및 구충제에 대한 곤충의 반응을 테스트합니다.

첫 번째 단계로, 실험 어셈블리 및 분석이 이루어질 수 있는 온도 제어실 또는 환경 챔버를 찾으십시오. 맞춤형 2포트 후각계의 조립으로 실험 설정의 구성을 시작합니다. 후각계는 30cm 유리관으로 구성되어 있으며, 두 개의 별도 포트로 분기되어 있으며 테프론 스트립이 테이즈를 형성합니다.

각 반쪽은 두 가지 선택 스타일의 후각계의 팔과 유사하여 테스트 대상이 두 개의 잠재적인 냄새 필드 중에서 선택할 수 있습니다. 최적의 광 확산을 위해 불투명 용기를 사용하여 실험 어셈블리를 둘러쌉니다. TMAs Olfactometer를 수직으로 장착한 후 형광등 900 luxe 전구 아래에 놓고 곤충 흡입구를 후각계에 연결합니다.

냄새 소스는 고체상 마이크로 추출 소스 챔버에 보관됩니다. 테프론 유리관 커넥터를 사용하여 후각계 암을 냄새 발생원에 연결합니다. 다음으로, 공기 공급 시스템을 일정한 압력을 받는 가습 및 탄소 정화 공기의 외부 공급원에 연결합니다.

냄새 발생원을 준비하려면 원하는 화학 샘플을 적절한 용매에 용해시키십시오. 이것을 면 심지에 피펫으로 만듭니다. 또한 대조군을 만들기 위해서만 면 심지에 용제를 함침시킵니다.

처리된 면 심지를 실험실 티슈에 감싸고 제어하여 유리 제품의 심각한 오염을 방지합니다. 샘플이 필요한 경우 소스 챔버 중 하나에 넣습니다. 냄새로 테스트하기 전에 T MA 후각계에서 Cates를 깨끗한 공기와 깨끗한 공기, 솔벤트 대 깨끗한 공기에 노출시킵니다.

이는 테스트 대상자에게 위치 편향 또는 효과적인 용매가 없는지 확인하는 역할을 합니다. 깨끗한 공기와 깨끗한 공기를 테스트하려면 공기 공급 시스템에 연결된 두 개의 펌프를 통해 빈 소스 챔버를 통해 정화 및 가습된 공기의 흐름을 시작합니다. 후각계의 양쪽 암을 통해 공기 흐름을 분당 0.1리터로 유지합니다.

모든 관찰이 표준 온도와 상대 습도에서 수행되는지 확인하십시오. 이제 챔버에 약 20개의 SIDS를 배치하여 이 제어 테스트를 시작합니다. 100초에서 300초 사이의 미리 결정된 간격 동안 SIDS를 관찰합니다.

무게는 그들이 환경에 반응할 수 있게 해줍니다. 시간이 경과한 후 테스트 환경에 대한 CID의 응답을 기록합니다. 점수: 디바이더의 가장 낮은 지점 위에 있는 T aze의 왼쪽 부분으로 교차하는 각 SLI에 대해 왼팔을 선택하고 오른팔에 대해서도 유사하게 점수를 매깁니다.

다른 선택이 없는 경우 릴리스 암을 선택합니다. 모든 응답이 기록되면 흡인기기를 사용하여 CID를 수집합니다. 소스 챔버 중 하나에 용매 심지를 도입하여 용매 공기와 깨끗한 공기에 대해 유사한 테스트를 수행합니다.

제어 실행 후 관측치에 대해 다른 CID 집합을 사용합니다. 각 생물학적 분석을 시작할 때 후각계의 암 중 하나에 냄새 소스를 무작위로 할당하여 냄새 테스트를 시작합니다. 잠재적인 위치 편향을 제거하기 위해 최소 10명의 피험자가 분석할 때마다 이 위치를 반대로 합니다.

다시 말하지만, 기류, 온도 및 습도가 변경되지 않았는지 확인하십시오. 실행당 챔버에 하나 이상의 사테를 도입합니다 여기에서 테스트를 위해 약 10개가 소개됩니다. 냄새 조합당 최소 30명에서 최대 120명의 테스트 대상의 반응을 테스트합니다.

100-300초 동안 사테를 관찰하여 행동 반응을 보일 수 있도록 합니다. 시간 간격은 미리 설정해야 합니다. 피험자가 냄새 또는 대조암 선택 또는 릴리스 암 선택으로 후각계 암에 들어갈 때 냄새 선택에 점수를 매겨 피험자의 암 선택을 기록합니다.

마지막으로, 모든 관찰 결과가 기록되면 다른 냄새 처리를 위한 설정을 사용하기 전에 흡인기를 사용하여 CID를 제거하고 후각계와 연결 튜브를 2% SOAP 용액으로 철저히 세척한 다음 유리 구성 요소를 화씨 200도에서 24시간 동안 굽습니다. 이 플롯은 감귤류 숙주 식물의 휘발성 물질에 대한 아시아 감귤류의 반응과 청정 공기 대조군의 반응을 선택했습니다. 이 플롯은 감귤류 휘발성 물질에 대한 아시아 감귤류의 반응을 선택했습니다 대 감귤류 휘발성 물질 co는 디메틸 디 설파이드와 함께 방출되었습니다.

문자로 레이블이 지정된 열은 서로 통계적으로 유의하게 다르며 신뢰도가 95%보다 큽니다. 분산에 대한 일원 분석에 따르면 tui's가 뒤따릅니다. 솔직히, 중요한 차이 테스트 Well factos는 디자인에서 매우 널리 사용되며 종종 조사중인 특정 곤충 문제를 위해 설계되어 조정됩니다.

현재 기사는 수직 방향 t masal의 디자인과 사용에 대해 설명합니다. 다양한 냄새에 대한 곤충의 반응을 측정하는 데 사용되는 반사계.

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생화학 문제 72 분자 생물학 기본 프로토콜 특수 기술 : 곤충학 행동 Eukaryota 유기 화학 물질 화학 작업과 용도 생명 과학 (일반) 행동 과학 Arthropod 행동 화학 생태 olfactometer chemotaxis 후각 명소 반발 odorant T-미로 psyllid Diaphorina citri 곤충 anthropod 곤충 모델

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