2013년 5월 5일
우리는 쉽게 동소 쥐의 간 이식에 대한 "빠른 링커"장치의 디자인을 설명합니다.
최근 JoVE에 게재된 비디오 논문에서 저희는 쥐 간 이식을 보다 쉽게 수행하기 위한 퀵 링커(quick linker) 장치의 사용법을 설명했습니다. 이 장치는 시중에서 구할 수 없으나, 전문적인 기술 없이도 제작이 가능합니다. 본 비디오에서는 일반적인 실험실 재료를 사용하여 전체 키트를 설계하고 제작하는 방법을 설명합니다.
영상을 시청해 주십시오. 정위 쥐 간 이식을 위한 퀵 링커 키트는 어프로ks메이터 1개, 하대정맥(vena cava)용 링 1개, 그리고 간문맥(vena portal)용 작은 링 1개로 구성됩니다. 10번 메스 날을 테이프로 나무판 위에 고정하고, 링의 중심을 현미경 아래에 놓습니다. 링은 메스 날의 홈으로부터 직선 거리로 1.2 centimeter 위치에 있어야 합니다.
고속 회전 드릴에 다이아몬드 비트를 장착하고 2 mm 깊이의 구멍을 뚫습니다. fuser iconic 다이아몬드 비트를 사용하여 구멍을 넓힙니다. 180~240 g 무게의 쥐의 포털 핸들을 위해 구멍의 직경은 2.6 mm가 되어야 합니다.
스텐실에 표시된 대로 손잡이의 외형을 설계하십시오. 그림 1에 나와 같이 드릴을 소형 벤치 그라인더로 변형하고, 외형 바깥쪽의 블레이드 부분을 제거하십시오. 마지막으로 저속 회전 브러시를 사용하여 해당 부품의 모서리를 둥글게 다듬으십시오.
어프로كس이메이터(approximator)는 현미경 하에서 직선형 외과용 클램프 또는 코커스 포셉(caucus forceps) 한쪽 가지의 절반 부분을 수정하여 제작합니다. 고속 미니 벤치 그라인더를 사용하여 손잡이가 완전히 미끄러져 들어갈 수 있도록 양쪽에 대칭형 홈을 만듭니다. 긴 암(arm) 부분에 세로 슬릿을 내고, 긴 암의 중심과 적절하게 배치된 손잡이가 동일한 축상에 있는지 확인합니다.
긴 팔의 끝부분 중심을 향하도록 노치를 설계하십시오. 가지(branch)는 가능한 한 가늘게 만듭니다. 마지막으로 저속 회전 브러시로 조각의 모서리를 다듬으며, 종아리 캘리퍼스는 쥐의 체중과 계통에 따라 다르게 적용합니다.
하지만 랜드(land)는 항상 약 4 mm로 유지해야 합니다. 구경 범위는 표 1을 참조하십시오. 미세한 Polyline 튜빙을 준비하고 10번 메스로 한쪽 끝을 둥글게 다듬습니다.
가장자리에서 0.5 millimeters 떨어진 곳에 홈을 설계하십시오. 이제 홈까지 내려가도록 조심스럽게 절개하십시오. 튜브에 전체 두께의 노치(nick)를 한두 개 만드십시오.
이 도구들은 이식편 준비 및 이식 과정 중에 칼프(calf)를 조작하는 데 도움이 됩니다. 마지막으로 가장자리에서 4 mm 지점에서 칼프를 절단합니다. 본 영상에서는 문맥용 링과 칼프, 간하대정맥용 링과 칼프, 그리고 근접기로 구성된 키트를 제작하는 방법을 설명하였습니다.
이 도구들은 calf 삽입을 도와 간 재이식을 용이하게 합니다. 모든 금속 부품은 융합 직후에 제거되므로, 선택한 링의 크기나 모양의 변형에 관계없이 키트를 무제한으로 재사용할 수 있습니다. 근사치 측정기(approximator)와의 정렬이 가장 중요한 요소입니다.
또 다른 중요한 요인은 홈의 두께로, 0.5 millimeters보다 얇아서는 안 됩니다. 예를 들어, 하단 사진의 경우 올바르게 형성된 반면, 상단 사진에서는 두 세그먼트 사이의 금속 브리지가 너무 얇아 측정 단계 이후의 최종 브러싱 단계에서 파손으로 이어질 수 있습니다.
아무런 문제가 발생하지 않는다고 가정하면 기기들은 잠재적으로 영구적으로 지속될 수 있습니다.
본 논문은 정위성 쥐 간 이식을 용이하게 하는 "퀵-링커(quick-linker)" 장치의 설계 및 사용법에 대해 설명합니다. 이 장치는 일반적인 실험실 재료를 사용하여 제작할 수 있어 연구자들이 쉽게 활용할 수 있습니다.
정위성 쥐 간 이식은 간 치료제 및 외과적 기술을 평가하기 위한 중요한 전임상 모델로 남아 있습니다. 퀵-링커(quick-linker) 장치는 일반적인 실험실 재료를 사용하여 이식 도구를 저비용으로 자체 제작할 수 있게 함으로써 모델 접근성을 향상시킵니다. 이는 수술 재현성을 높이고 질환 모델 생성 시의 기술적 변동성을 줄임으로써, 초기 발견 단계에서의 기전적 위험 제거(mechanistic de-risking)를 지원합니다.
퀵-링커 장치는 타겟 검증 및 리드 화합물 발굴 단계에서 강력한 모델 생성을 지원함으로써 신약 발굴 워크플로우에 통합됩니다.