Name: 쥐과 잇몸 세포의 분리, 처리 및 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-07-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: 학습하세요 쥐 잇몸 조직의 분리 및 단일 세포 현탁액 제조 방법을 통해 유세포 분석을 수행하는 기술입니다. 이 방법은 면역학 연구에서 세포 집단 변화를 신속하게 분석할 수 있습니다.

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이 연구는 AW, AHH에 젊은 연구자 (GIF 영)에 대한 독일 이스라엘 재단과 박사 I에 이스라엘 과학 AHH로 재단 (제 11분의 1,418) 및 (제 12분의 1,933)에서 교부금에 의해 지원되었다 . AHH 및 AW에 치과 의학의 히브리어 대학 Hadassah 대학에서 Cabakoff 연구 기금 기금.

사전에 준비 : <ul><li> PBS + 2 % FCS </li><li> 콜라게나 유형 II와 DNase의 유형 I의 1 MG / ML (샘플 당 1 ML) 2 ㎎ / ml의 PBS + 2 % FCS </li><li> 멸균 수술기구 </li><li> 0.5 M EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 솔루션 </li></ul> 1. 위의 잇몸 절제 기법 <ol><li> 승인 IACUC 지침을 사용하여 쥐를 안락사. </li><li> 뺨과 날카로운 / 무딘 똑바로 가위로 하악 무스 등 구강의 양쪽을 잘라. </li><li> 하악을 아래로 당깁니다. </li><li> 표준 가위 분의 어금니 뒤에 가상의 선 1mm의 소프트 및 하드 조직을 잘라. 가위 구개 뼈 (그림 2A, 파란색 선)의 평면에 수직 연출합니다. </li><li> 소프트 및 하드 조직에게 앞니 (그림 2A, 파란색 선) 뒤에 2mm를 절개. </li><li> 입의 앞쪽 부분을 아래로 당깁니다. 비강이 단계 이후에 관찰된다. </li><li> 가위를 배치구개에 평행, 비강으로 한 잎을 넣어, 다른 날은 현관에서 절개한다. 후방 절개 (그림 2A, 녹색 선)까지 잘라냅니다. 상악의 양쪽에서이 단계를 반복합니다. 끝에서 상악은 두개골의 나머지 부분 (그림 2B)에서 분리된다. </li><li> , 상악를 제거 중간 봉합 (그림 2, 검은 점선)에 잘라 치조골에 도달 할 때까지 각 헤미 - 상악의 구개 조직을 잘라. </li><li> Adson 집게 (치아 제외)과의 앞쪽에 국경에서 치은 조직 (두 헤미 - 상악) 껍질. </li><li> PBS + 2 % FCS와 함께 접시에 절제 잇몸를 놓습니다. </li></ol> 2. 잇몸 처리 <ol><li> 1 ML PBS와 함께 조직 배양 접시 (35 × 10 ㎜)에 절개 잇몸을 넣고 + 2 % FCS, 콜라게나 유형 II와 DNase의 유형 I. 1 MG / ML 2 MG / ML </li><li> N ° 15 불임 수술 블레이드와 잘 조직을 말하다. </li><li> TR접시에서 15 ML 원뿔 시험관 조직을 ansfer. </li><li> 1 ML PBS + 2 % FCS와 동일한 테스트 튜브로 전송과 함께 접시에 남아있는 조직 / 세포를 씻으십시오. </li><li> 37 20 분 셰이커 인큐베이터에 품어 ° C, 200 rpm으로 (추천 : 예열 인큐베이터). </li><li> 37 또 다른 10 분 ° C, 200 rpm으로 20 개의 EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 0.5 M의 μL와 부화를 추가합니다. </li><li> 12 PBS + 2 % FCS와 ML 4에서 원심 분리기까지 테스트 튜브를 채울 ° C, 8 분 400 XG (추천 : 사전 냉기 원심 분리기). </li><li> 2 ML PBS + 2 % FCS로 뜨는 세포를 resuspend를 제거합니다. </li><li> 70 μm의 셀 스트레이너와 샘플을 필터링을 통해 흐름을 저장합니다. </li><li> 4 ° C, 5 분 320 XG에 원심 분리기. </li><li> 300 μL PBS + 2 % FCS로 뜨는 세포를 resuspend를 제거합니다. </li><li> 세포를 (약 5-10 × 10 5 세포는 단일 상악에서 예상되는) 계산. </li></ol> 3. 세포와 세포 내 항체유동 세포 계측법 분석을위한 염색 그것은 소등와 후드 내부에서 작업 할 것을 권장합니다. 그것은 지속적인 추운 환경에서 세포를 유지뿐만 아니라 필요한 모든 재료하는 것이 중요합니다. <ol><li> 100 μL의 총 부피 1 X 10 6 세포 당 선택한 각 항체의 0.2-0.5 μg을 추가하여 세포 분자에 세포를 얼룩. </li><li> 소용돌이 짧게. </li><li> 4 ° C.에 어둠 속에서 15 분 동안 튜브를 품어 </li><li> 2 ML PBS + 2 % FCS와 세포를 씻으십시오. </li><li> 4 ° C, 5 분 320 XG에 원심 분리기. </li><li> 추가 뜨는 세포를 resuspend를 대기음, 현명한 드롭, 500 μL 차가운 BD는 Cytoperm / Cytofix 소용돌이로 교반하면서. </li><li> 4 40 분 ° 어둠 속에서 C에 대한 튜브를 품어. </li><li> 소용돌이 짧게. </li><li> 1 ML 차가운 BD 파마로 두 번 세포를 씻으 / 4시 7 분 800 XG에 버퍼와 스핀을 씻으 ° C. </li><li> 300 μL를 제외하고 뜨는을 대기음. </li><li> 에 의해 세포 내에서 세포를 얼룩100 μL의 총 부피 1 X 10 6 세포 당 선택한 각 항체의 1 μg을 추가 할 수 있습니다. </li><li> 소용돌이 짧게. </li><li> 4 ° C.에 어둠 속에서 30 분 알을 품다 </li><li> 1 ML 차가운 BD 파마로 두 번 세포를 씻으 / 4시 7 분 800 XG에 버퍼와 스핀을 씻으 ° C. </li><li> 300 μL 차가운 BD 파마 / 워시 버퍼를 추가하여 상층 액과 세포를 resuspend을 대기음. </li><li> 소용돌이 짧게. </li><li> FACS 튜브 필터링을하는 동안 현탁액을 전송합니다. </li><li> 분석까지 어둡고 추운 환경에서 튜브를 유지합니다. </li></ol>

<ol><li>Arizon, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Langerhans+cells+down-regulate+inflammation-driven+alveolar+bone+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Langerhans cells down-regulate inflammation-driven alveolar bone loss.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109, 7043-7048 (2012).</li>
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<li>Jotwani, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mature+dendritic+cells+infiltrate+the+T+cell-rich+region+of+oral+mucosa+in+chronic+periodontitis%3A+in+situ%2C+in+vivo%2C+and+in+vitro+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mature dendritic cells infiltrate the T cell-rich region of oral mucosa in chronic periodontitis: in situ, in vivo, and in vitro studies.</a> J. Immunol. 167, 4693-4700 (2001).</li>
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</ol>

저자는 공개 아무것도 없어.

하나의 마우스에서 얻은 상악 치은 조직은 우리가 이전 1 설명한대로 세포와 세포 내 분자를 표현하는 T 및 B 림프구의 하위 인구뿐만 아니라, 자신의 능력을 분석하기에 충분합니다. 그럼에도 불구하고, 희소 한 세포 집단 (예를 수지상 세포에 대한) 관심이 있으며, 그것은 2-3 생쥐 수영장 조직에 권장됩니다. 참고로, 바람직하는 경우, 그것은 할 수 있습니다 다음, 구개 치은 조직 및 소비세 치은 (단계 1.8-1.9의 변경)에 모두 껍질. 또한 하악 잇몸이뿐만 아니라 수집 될 수 있음을 언급한다 여전히, 그 분리는 더 복잡하고 분석을 방해 할 수있는 다른 조직을 포함 할 수 있습니다. 잇몸에 면역 세포를 연구하는 일반적인 기술은 면역과 면역입니다. 이 기술은 잇몸을 통해 표적 분자 / 세포의 분포의 시각화를 활성화하고 다양한 분야의 심사의는 특정 영역을 연구하기 위해 필요합니다. 특정 세포의 생리적 지역화 치은 처리에 의한 유동 세포 계측법에 의해 결정될...

잇몸은 치아의 치경부 부분을 둘러싸고있는 연부 조직과 폐포 과정 (그림 1)을 다룹니다. 치은 더 점막 상피 세포와 결합 조직 (또한 점막하 또는 고유 층라고도 함)로 분리 할 수​​ 있습니다 저작 점막의 유형입니다. 치은 및 인접 치아의 해부학 적 구조는 박테리아가 지속적으로 로컬 면역 체계를 도전 플라크 (바이오 필름)을 상주하고 발전 할 수 있습니다. 치주 질환 2를 칭했다 조건 - 결과적으로 염증 반응은 특정 상황에서 파괴되고 잇몸에 개발하고 있습니다. 기본적으로, 플라크에 의한 치주 병변은 치은염과 치주염으로 나눌 수 있습니다. 치은염은 잇몸에 국한되는 로컬 염증 반응의 가역적 인 상태를 나타냅니다. 치주염은, 다른 한편으로는, 돌이킬 수없는 파괴적인 과정이다하는 부착 장치 (치조골, 치주인대, 백악질과 치은은 3) 파괴된다. 잇몸이 치주 질환 4시 등의 이펙터와 유도 두 사이트를 제공하기 위해 제안되었다. 인간의 연구는 치과 플라크에 대한 응답으로, 면역 효과기 세포와 분자가 동적으로 침투하거나 출발 잇몸 5-7 것을 제안했습니다. 이 활동은 치주 파괴 8,9에 중요한 역할을하는 것으로 나타났다. 인간의 조직 작업이 병적 과정에 대한 귀중한 정보를 제공하는 연구에 의해 생성 된 데이터는 중요한, 윤리적 기술 및 실험 한계를 가지고 반면. 형질 전환 생쥐를 이용한 통해 생체 개입 10 인과 실험을 허용 실험 모델의 개발. 그 결과로, 치주 질환에 관여하는 메커니즘에 대한 우리의 지식은 지난 20 년간 크게 증가했다. 그럼에도 불구하고, 치주 질환의 복잡성으로 인해,이조직의 파괴를 촉진 지역 면역 반응의 특성에 관한 지속적인 논의. 치주 질환시 치은 중앙 면역 세포의 기능에 대한 이해의 부족이있다. 그것은 질병, 잇몸의 표적 조직에서 발생하는 병적 인 염증 이벤트를 공부 때문에 필수적이다.

<table><tbody><tr><td>콜라겐 분해 효소 유형 II</td><td>Worthington Biochemical Corp.</td><td>CLS-2</td><td></td></tr><tr><td>DNAse I</td><td>SIGMA</td><td>DN25-1G</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>SIGMA</td><td>E6758-100G</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's PBS</td><td>SIGMA</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 혈청 </td><td>Biological Industries</td><td>04-121-1</td><td>열 불활성화</td></tr><tr><td>진공 구동 필터</td><td>제트 Biofil</td><td>FPE-204-500</td><td></td></tr><tr><td>5ml 폴리스티렌 둥근 바닥 튜브</td><td>BD 팔콘</td><td>352052</td><td></td></tr><tr><td>세포 여과기 70 &mu; m</td><td>SPL Lifesciences</td><td>93070</td><td></td></tr><tr><td>조직 배양 접시 35&#215; 10mm</td><td>NUNC</td><td>153066</td><td></td></tr><tr><td>BD Cytofix/Cytoperm</td><td>BD</td><td>554714</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 CD11c 항체</td><td>Biolegend</td><td>117305</td><td>Clone N418</td></tr><tr><td>안티 마우스 CD45.2 항체</td><td>Biolegend</td><td>109819</td><td>Clone 104</td></tr><tr><td>안티 마우스 CD4 항체</td><td>Biolegend</td><td>100413</td><td>Clone GK1.5</td></tr><tr><td>안티 마우스 CD8a 항체</td><td>Biolegend</td><td>100733</td><td>클론 53-6.7</td></tr><tr><td>안티 마우스 CD3 항체</td><td>Biolegend</td><td>100214</td><td>클론 17A2</td></tr><tr><td>안티 마우스 CD326 (Ep-CAM) 항체</td><td>Biolegend</td><td>118219</td><td>클론 G8.8</td></tr><tr><td>안티 마우스 CD207 (랑게린) 항체</td><td>Imgenex</td><td>DDX0362D</td><td>Clone 929F3.01</td></tr><tr><td>안티 마우스 I-Ad (MHC-II) antobody</td><td>Biolegend</td><td>115010</td><td>클론 39-10-8</td></tr><tr><td>LSR II 유세포분석기</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FlowJo 소프트웨어 v 7.6.5</td><td>트리 스타</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

쥐과 잇몸 세포의 분리, 처리 및 분석

Isolation, Processing and Analysis of Murine Gingival Cells

우리는 정확하게 분리 및 유동 세포 계측법 및 분자 연구를위한 쥐 치은 조직을 처리하는 기술을 개발했습니다. 치은이 치주 질환을 일으킬 수 있습니다 구강 바이오 필름에 대한 숙주 면역 반응에 관여하기 때문에 면역 메커니즘을 연구하는 독특하고 중요한 조직이다. 또한 치조골 조직에 치은의 근접도 염증 상태에서 뼈의 리모델링을 공부 가능하게합니다. 우리의 방법은 우리가 이전에 1을 보여 같은 랑게르한스 세포와 T 조절 세포로도 희귀 한 세포 집단의 분석을 허용 면역 세포의 다량을 얻을 수 있습니다. 치주 질환시 치조골의 손실에 관련된 지역의 면역 반응을 연구하는 고용 쥐 때문에 다양한 면역 실험 도구의 가용성 유리합니다. 그럼에도 불구하고, 그들의 작은 크기와 쥐 잇몸에 상대적으로 불편 접근으로 인해 많은 연구가 생의 검사를 피할 수의 중요한 조직. 이 작품에서 설명하는 방법은 희망 치주 질환시 경구 면역 시스템과 그 역할을 우리 과소을 증가 잇몸 분석을 용이하게 할 수 있습니다.

잇몸 세포 유동 세포 계측법 분석의 예를 제시한다. 2 마우스에서 풀링 된 치은 세포 LSR II 흐름 cytometer에에서 실행 FlowJo 소프트웨어를 사용하여 분석 하였다. 그림 3A는 사이드 분산 형 (SSC) 대 앞으로 분산 형 (FSC) 플롯 순진 생쥐에서 치은 세포의 분포를 보여 주었다. 식별 할 수 게이팅 전략 (I) 림프구 (II) 단핵구 / 돌기 세포 그리고 (iii) 과립구가 표시됩니다. 비교 목적을 위해, 우리는 또한 P.에서 정제 잇몸 세포를 설명 FACS 플롯을 제시 gingivalis는 이십일일 우리가 이전에 (그림 3B) 기술로 실험 치주염의 설정에서 경구 투여 후 쥐를 감염. 순진 생쥐에 비해 다양한 면역 세포 인구의 증가는 쉽게 감염된 생쥐에서 발견 할 수 있습니다. 다음으로, 우리는 조혈 마커 CD45 (그림 4A)를 표현하는 세포 게이트에 의해 처리 된 치은에있는 면역...

이 연구는 단일 셀 문화를 생산하기 위해 마우스 구강의 잇몸 조직을 분리하고 처리 할 수​​있는 효율적인 방법을 설명합니다. 그 결과 세포는 더욱 유동 세포 계측법 분석 및 분자 연구에 사용할 수 있습니다.

We have developed a technique to precisely isolate and process murine gingival tissue for flow cytometry and molecular studies. The gingiva is a unique ...

이 절차의 전반적인 목표는 추가적인 유세포 분석을 위해 미린 잇몸(mirin gingiva)을 정밀하게 분리하고 처리하는 것입니다. 이는 먼저 세심한 방식으로 잇몸을 외과적으로 분리함으로써 달성됩니다. 그 다음, 절제된 조직을 처리하여 단일 세포 현탁액을 생성합니다.그런 다음 항체를 이용한 세포 외 및 세포 내 염색을 수행합니다. 마지막으로, 유세포 분석기로 시료를 분석합니다. 결과적으로 유세포 분석을 통해 잇몸 내의 서로 다른 세포 집단과 면역학적 자극에 노출된 후 조직에서 발생하는 세포 변화를 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.OC 화학이나 단일 형광 분석과 같은 다른 방법들과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은, 수많은 세포를 분석할 수 있는 빠르고 간단한 방법이라는 점이며, 여러 변수의 동시 분석뿐만 아니라 추가 실험을 위한 다양한 세포 유형의 분리가 가능하다는 것입니다. 이 방법은 미생물이 치은 항상성에 어떻게 영향을 미치는지, 그리고 치주염 실험 모델에서 이것이 염증 유발 골손실과 어떤 관련이 있는지와 같은 면역학 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 우리는 치주염 동안 RI 세포의 역할을 다루기 시작했을 때 처음으로 이 방법에 대한 아이디어를 얻었습니다. GVA 가속 기술은 MU one J gva의 크기가 작고 접근성이 상대적으로 불편하여 습득하기 어렵기 때문에, 이 방법에 대한 시각적 시연이 매우 중요합니다.먼저 텍스트 프로토콜에 따라 배지 용액과 멸균된 수술 도구를 준비합니다. 소속 기관의 동물실험윤리위원회(IACUC)에서 승인한 방법에 따라 마우스를 안락사시킨 후, 날카롭고 끝이 뭉툭한 직선 가위를 사용하여 뺨과 하악지를 포함한 구강 양측을 절개하고, 표준 가위를 입천장 뼈 평면에 수직으로 향하게 하여 하악을 아래로 당깁니다. 제3대구치 뒤쪽 1mm 지점의 가상선을 따라 연조직과 경조직을 절단합니다.다음으로, 절치 뒤쪽 2 mm 지점에서 연조직과 경조직에 절개를 가합니다. 그런 다음 가위를 입천장과 평행하게 유지한 상태로 구강 앞부분을 아래로 당겨 비강을 노출시킵니다. 지혈제 하나를 비강에 넣고, 다른 하나를 사용하여 전정 부위를 절개하여 후방 절개 부위까지 자릅니다.상악골을 두개골에서 분리하기 위해 상악골의 반대편에도 동일하게 절개합니다. 그다음 중앙을 절개하고, 가위와 포셉을 사용하여 각 상악골 반쪽에서 구개 조직을 다듬어 치조골이 드러나게 합니다. 전방 경계에서 잇몸 조직을 벗겨내어 PBS와 2% fetal calf serum 또는 FCS가 담긴 플레이트에 넣습니다. 잇몸 조직을 처리하기 위해 이를 1 mL PBS, 2 mg/mL collagenase type II 및 1 mg/mL DNase가 담긴 배양 접시로 옮깁니다.15번 멸균 외과용 메스로 조직을 절개합니다. 조직을 잘게 다진 후 15 milliliter 원추형 시험관으로 옮깁니다. 플레이트에 남아 있는 조직 세포를 1 milliliter의 P-B-S-F-C-S로 세척하여 시험관에 옮깁니다.조직을 37 °C, 200 RPM으로 예열된 진탕 배양기에서 20분 동안 배양하십시오. 그런 다음 0.5 M EDTA 20 µL를 첨가하고 10분 더 배양합니다. 다음으로, P-B-S-F-C-S를 12 mL까지 채운 후 시료를 4 °C, 400 ×g에서 8분 동안 원심분리하십시오.상층액을 제거한 후, 세포를 2 mL의 PBS-FCS에 현탁합니다. 4 °C, 320 ×g에서 5분간 원심분리하여 통과액을 회수한 후, 샘플을 70 µm 세포 스트레이너로 여과합니다. 세포를 300 µL의 PBS-FCS에 재현탁합니다.마지막으로, 낮은 온도와 소등 상태의 후드 내에서 총 부피 100 µL의 세포 수를 측정하고, 선택한 각 항체를 1 × 10⁶ cells당 0.2~0.5 µg씩 첨가한 후 짧게 볼텍싱합니다. 샘플을 4 °C의 암소에서 15분 동안 배양한 후, 2 mL의 PBS-FCS를 첨가하고 320 ×g, 4 °C에서 5분간 원심분리합니다. 세포를 고정하기 위해 상층액을 흡입하여 제거한 다음, 볼텍싱하면서 차가운 BD cyto perms 500 µL를 한 방울씩 첨가하여 세포를 재현탁합니다.세포 효과 단계에서는 튜브를 4°C의 암소에서 40분 동안 배양한 후 볼텍싱합니다. 이어서 BD perm wash 버퍼 1 mL를 첨가하고, 4°C에서 800 ×g로 7분 동안 원심 분리합니다. 세척 과정을 반복한 후, 세척 버퍼 300 µL만 남기고 모두 흡입하여 제거합니다.그다음 총 100 µL의 부피에서 세포를 세포내 염색하기 위해, 1 × 10⁶개의 세포당 선택한 항체를 각각 1 µg씩 첨가합니다. 짧게 볼텍싱한 후 암소에서 30분 동안 배양합니다. 이전과 동일하게 세포를 2회 세척하고 모든 상층액을 제거한 후, 신선하고 차가운 BD perm wash buffer 300 µL에 세포를 재부유시킵니다.짧게 볼텍싱한 후, 현탁액을 fax 튜브에 여과합니다. fax 분석을 수행할 때까지 튜브를 얼음 위나 냉장고의 암소에 보관하십시오. 두 마리의 naive 마우스로부터 수집한 잇몸 세포 혼합물입니다.LSR two 유세포 분석기로 분석을 수행하였으며, FlowJo 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하였습니다. 여기에 제시된 측방 산란광(side scatter) 및 전방 산란광(forward scatter) 도표는 세포의 분포를 보여줍니다. 림프구, 단핵구, 수지상 세포 및 과립구의 식별을 위한 게이팅 전략이 비교 목적으로 표시되어 있습니다.이 그림은 실험적 치주염 환경에서 경구 투여 21일 후 P gingivalis에 감염된 마우스로부터 정제된 잇몸 세포를 나타내는 FACS 플롯입니다. 여기에 표시된 미감염(naive) 마우스와 비교하여 감염된 마우스에서 다양한 면역 세포 집단의 증가를 쉽게 확인할 수 있습니다. 처리된 잇몸 내의 면역 세포는 조혈 마커인 CD 45를 발현하는 세포를 게이팅하여 식별합니다.이 세포들은 본 그림에 표시된 것과 같이 CD3 양성 T 세포로 추가 분리되었습니다. 호중구는 LY6G 및 CD11b 분자의 발현에 따라 식별되었습니다. 마지막으로, MHC class II 양성 CD11c 양성 세포를 게이팅하고 EPAM 및 RIN CD207의 발현을 확인하여 랑게르한스 세포와 상피성 수지상 세포 하위 집합을 식별하였습니다. 이 기술을 숙달하고 본 절차를 적절히 따르면 3.5시간에서 5시간 이내에 완료할 수 있습니다.개발 후 단일 세포 유전자 발현과 같은 추가적인 질문에 답하기 위해 실시간 PCR과 같은 다른 방법들을 수행할 수 있습니다. 이 기술은 면역학 분야의 연구자들이 치주 연구 분야에서 다양한 자극에 대한 G GVA의 국소 반응을 탐구할 수 있는 길을 열어주었습니다. 또한, 이 기술을 통해 실험적 치주염의 병인에서 G GVA의 면역 및 비면역 세포의 역할을 규명할 수 있었습니다.이 영상을 시청하고 나면, 유세포 분석을 위한 세포 외 및 세포 내 바이러스 염색을 수행하기 위해 소변 GVA를 분리하고 처리하여 단일 세포 현탁액을 얻는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

마우스 침샘에서 줄기 세포의 격리를 위해 최적화된 프로토콜이 설명되어 있습니다. 방법은 효소와 소화 기계를 고용하고, 줄기 세포의 특징과 세포를 포함하는 salispheres의 절연을 수 있습니다.

마우스 침샘에 줄기 세포의 분리

이 비디오는 마우스 모델에서 치은 면역 세포 네트워크의 분리 절차를 보여줍니다. 효소 소화는 부착된 치아와 뼈에서 잇몸 조직을 방출하고, 이는 더 기계적으로 소화되어 치은에서 면역 세포를 방출합니다. 분리된 세포는 면역학 실험을 할 준비가 되었습니다.

쥐 치아 블록에서 치은 면역 세포 네트워크 분리

우리는 분리, 표현형 특성화 및 쥐의 잇몸에서 면역 세포의 기능 분석을위한 기술을 설립했다.

절연, 특성화 및 잇몸 면역 세포 네트워크의 기능 시험

기본 microglia murine 두뇌에서의 격리에 대 한 프로토콜 제공 됩니다. 이 기술은 신경 상황의 현재 이해를 발전에 에이즈. 조밀도 기온 변화도 원심 분리와 자력 분리 매우 순수한 샘플의 충분 한 수확량을 생산 하기 위해 결합 됩니다. 또한, 우리 microglia의 특성에 대 한 단계를 설명합니다.

특성화 및 조밀도 기온 변화도 원심 분리 하 여 마우스 기본 Microglia의 절연

세부 사항에 microglial 함수를 이해 하는 노력 microglia 성숙한 vivo에서 속성 정리 microglial 문화 모델의 부족에 의해 방해 되어 있다. 이 프로토콜 정의 매체 조건 하에서 높은 없는 성숙한 쥐 microglia의 강력한 생존을 유지 하기 위해 설계 된 절연과 문화 접근을 설명 합니다.

절연 및 동적 홍보 설치류 Microglia의 문화 Ramified 혈 청 자유로운 매체에 있는 외관

이 프로토콜 인간의 치과 여 포에서 추출한 치아 줄기 세포의 변이 유전 공학에 설명 합니다. 적용된 비 바이러스 성 수정 전략 치료 줄기 세포 제품의 개선 위한 기초 될 수 있습니다.

절연, 특성화 및 예측에 관한 기반 유전자 조작 인간 치과 여 포 줄기 세포의

눈물 샘 (LG)에는 α-평활 근 액 틴를 발현 하는 두 가지 세포 유형 (α Sma)이 있습니다. MECs는 많은 선 조직에서 발견 되는 외 배 엽 기원 이며, 심 낭은 내 배 엽 기원의 혈관 평활 근 세포입니다. 이 프로토콜 뮤 린 LGs에서 MECs 및 심 낭을 분리 합니다.

성인 뮤 린 눈물과 턱 밑 동맥에서 Myoepithelial 세포의 고립

여기에서는 마우스 CNS로부터 다중 신경교 세포 집단의 시험관 내 분리를 위한 프로토콜을 제시합니다. 이 방법을 사용하면 국소 미세아교세포, 희소돌기아교세포 전구체 세포 및 성상세포를 분리하여 다양한 배양 시스템에서 각각의 표현형을 연구할 수 있습니다.

여러 중추 신경계 영역에서 쥐 아교 세포의 해부 및 분리

여기서 우리는 전통적인 방법에 록 억제제 Y-27632를 추가하여 인간 칭기발 상피 세포의 격리 및 배양에 대한 변형된 방법을 제시한다. 이 방법은 더 쉽고 시간이 많이 걸리며 줄기 세포 특성을 향상시키며 실험실과 임상 응용 분야에서 더 많은 수의 고잠재 상피 세포를 생성합니다.

Y-27632를 사용하여 1차 인간 칭기발 상피 세포의 격리 및 배양

현재 프로토콜은 지속적으로 성장하는 마우스 절개, 마우스 어금니 및 인간 치아로부터 단세포 RNA-seq 분석에 적합한 단일 세포를 격리하는 빠르고 효율적이며 부드러운 방법을 제시합니다.

마우스와 인간의 치아에서 단일 세포의 신속한 격리

학습하세요 쥐 잇몸 조직의 분리 및 단일 세포 현탁액 제조 방법을 통해 유세포 분석을 수행하는 기술입니다. 이 방법은 면역학 연구에서 세포 집단 변화를 신속하게 분석할 수 있습니다.

쥐과 잇몸 세포의 분리, 처리 및 분석

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