Name: 마우스 Aortocaval 누관의 기술적 측면 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-07-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: 배우세요 마우스에서 봉합 없이 대정맥루를 만드는 간단한 기법을. 25게이지 바늘을 사용하여 허혈 없이 지혈하고 도플러 초음파로 혈류를 확인하는 이 방법은 재현성이 높아 다양한 실험에 활용됩니다.

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이 작품은 국민 건강 보조금 R01-HL095498 연구소뿐만 아니라 자원과 VA 코네티컷 헬스 케어 시스템, 웨스트 헤이븐, 코네티컷의 시설의 사용에 의해 부분적으로 지원되었다.

1. 마취 및 수술 전 절차 <ol><li> 전신 마취의 유도 해당 기관 애니멀 케어 및 사용위원회의 승인을 얻을 수 있습니다. 십주 세 남성 C57/black 마우스는 마취입니다. isoflurane을 기화기를 통해 0.8 L / 플렉시 유리 상자 분 산소 isoflurane을 4 %를 제공하고 내부에 마우스를 놓습니다. 외과 의사에 의해 선호하는 경우 또는, 복강 내 마취를 사용할 수 있습니다. </li><li> 마취 유지 발가락 핀치에 반응의 부족에 의한 마취 확인 후, 마우스 실리콘 마스크와 앙와위에서 작업 테이블에 배치됩니다. isoflurane을가 적절한 마취 수준을 유지하기 위해 2 %로 감소됩니다. </li><li> 머리 제거 복부 머리는 머리 제거제를 사용하여 낮은 복부에 목에서 제거됩니다. 면도기를 사용하여 남아있는 머리 도플러 초음파 검사를 방해 할 수 있기 때문에 머리 제거하는 것이 좋습니다. </li></ol> 2. 수술 Ultrasoun디 <ol><li> 초음파의 목적 도플러 초음파 검사는 해부학 적 및 생리적 변화를 확인하기 위해 수술 후 결과와 비교 될 수있는 기본 수준의 결과를 기록하는만큼 사전 AVF 수술로 수행됩니다. </li><li> 관찰 점 정맥, 위에 및 인프라 신장 대정맥 (IVC) 및 복부 대동맥 펄스 도플러와 B-모드를 모두 사용하여 검사합니다. </li><li> 측정 각 혈관의 B-모드를 사용하여 직경을 측정합니다. 또한, 최대 속도 (동맥의 최대 수축기 속도) 및 파형은 위에서 설명한 측정 각 점에 ​​기록됩니다. </li></ol> 3. 수술 절차 <ol><li> 마우스 준비 국소 소독제와 절개 사이트를 준비하고, 멸균 장갑과 악기 외과 드레이프를 사용하는 등 수술 중 적절한 무균 기술 등을 지속적으로 </li><li> 개복술 정중선 복부 절개 F 이루어집니다바로 치골 위 간 ROM 하단. </li><li> 대동맥과 IVC의 노출. 견인기가 삽입되어 창자의 모든 복강 밖으로 끌려 오른쪽과 생리 식염수로 적신 거즈에 싸서 보관. 대동맥과 IVC의 전체보기를 얻을 수있는 복막과 낮은 결장을 연결하는 막 해부. 이 방법으로 열렸하고 얻는 경우 방광에 압력을 적용합니다. </li><li> 천자 사이트 노출 빵꾸 사이트 대동맥 분기에 왼쪽 신장 정맥에서의 거리 세 반 사이에 분기 될 것입니다. (그림 1)은 구멍이 될 수 있도록 대동맥의 왼쪽 여백을 해부하다. 대동맥은 IVC 뒤에 45도 정도 위치 그리고 그것은 왼쪽에 추가 후방 절개해야한다는 점에 유의하십시오. (그림 2)이 수술의 가장 중요한 점은 대동맥과 IVC 사이 해부하지 않습니다. 멀리 그들로부터 보관하십시오. </li><li> AOR의 클램프 사이트 노출고마워 주변 조직에서 infrarenal 대동맥 해부. 오른쪽에 그 지류 함께 왼쪽과 왼쪽 신장 정맥 IVC를 손상하지 않도록주의하십시오. </li><li> 대동맥의 클램핑 미세 클립을 적용하여 근위 대동맥 클램프. </li><li> 대동맥의 회전 구멍이 대동맥 약간 윗면 (그림 2)에서 수행 할 수 있도록 대동맥 주변의 결합 조직을 잡고, 대동맥 회전합니다. </li><li> IVC를 통해 대동맥 구멍 25 G 바늘을 사용하여 IVC에 이르기까지 회전 위치, 구멍 대동맥에 대동맥을 유지. 성공하면 (그림 2), 바늘 얇은 IVC 벽을 통해 볼 수 있습니다. </li><li> 지혈 근육을 포함한 복막 조직을 당겨, 대동맥 구멍 사이트를 래핑합니다. IVC에 대동맥을 압축, 그것은 응고 AVF (그림 3)이 있으므로.하지 마십시오 </li><li> 대동맥 드 클램핑 확인 후차 지혈의, 대동맥 드 클램프. 추가 출혈이 발생할 수 있지만 위에서 설명한 추가적인 압축을 중지 할 수 있습니다. 드 클램핑시 동맥혈 대신 어두운 정맥 혈류의 IVC로 흐르는 볼 수 있습니다. </li><li> 복부의 폐쇄 그것의 자연적인 위치로 장을 반환 복부를 닫습니다. </li></ol> 4. 수술 후 절차 <ol><li> 수술 후 관리 복부의 폐쇄 후 isoflurane을가 중지됩니다. 진통과 상처 치료 등 수술 후 치료는 기관 애니멀 케어 및 사용위원회에서 권장하는 지침에 따라 적용됩니다. 진통을 위해 우리는 수술 후 24 시간 동안 intrasmuscularly 0.1 ㎎ / ㎏ 매 12 시간에서 부 프레 노르 핀을 사용합니다. </li><li> 수술 후 초음파 수술 후 첫날에, 도플러 초음파 AVF를 확인하기 위해 수행됩니다. 또한, 다른 변수는 수술 전의 변경 사항을 확인하는 측정값. </li></ol>

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<li>Dixon, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+don%27t+fistulas+mature%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Why don't fistulas mature?</a> Kidney International. 70 (8), 1413-1422 (2006).</li>
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</ol>

대퇴 AVF, 6, AVF 8 대동맥 caval AVF를 경정맥하는 7 경동맥 등의 쥐 AVF를 설명했습니다 몇 가지 보고서가 있습니다. 9, 10 쥐에 비해 쥐 쉽게 수술을 허용, 마우스보다 몇 배 더 크다 마우스입니다. 그럼에도 불구하고, 마우스 유전자 변형과 변형을 활용하기 위해 절차는 마우스 모델을 포함하도록 확장해야합니다. 몇 가지 이전에 게시 된 보고서는 생쥐의 AVF 모델을 도입하지만,이 보고서는 일반적으로 큰 크기의 바늘을 사용하여, 마우스 오른쪽 단추로 양면 심장 마비에 대한 모델을 개발하는 상황에있다 구즈는 우리와 유사한 기술을 보도했다 11-13;. 그러나의 해당 보고서 저자는 arteriotomy를 닫습니다 봉합을 사용했다. 13 우리는 분자 분석을위한 단백질과 RNA의 연속 추출 잠재적 인 간섭을 피하기 위해 봉합사를 사용하지 마십시오. 또한 봉합 arteriotomy을 닫는 과도한 적용...

말기 신장 질환 환자에서 신 대체 요법에 대해 선택한 가장 일반적인 옵션은 혈액 투석이다. 혈액 투석에 대한 액세스는 동정맥루 (AVF), 혈관 이식, 또는 일시적으로 카테터에 의해 수행됩니다. AVF 액세스의 기본 모드이지만, AVF 완벽 멀리 아직도이다. 일년 차 AVF의 개통 요금은 내막 증식으로 인해 많은 실패와 만 60~65% 수 있습니다. 일반 AVF 형성과 부적응 형성의 분자 생물학 및 생리학은 저조한 특징 남아있다. 등 많은 누공 형성의 규제의 이해를 첨부 이득 AVF 결과의 개선을 얻을 수있다. 1-3 정맥 이식과 AVF 유사하게 동맥 환경에 정맥을 노출하지만 동맥의 흐름 정맥의 노출은 일반적으로 수술 우회 직접 모델입니다 정맥 이식편. 4, 5의 맥락에서 연구되고, 몇 가지 중요한 디가있다그들 사이 fferences. 정맥 이식편은 AVF 증가 혈액의 흐름과 전단 응력의 결과로 종종 병 말초 작은 동맥에 배수 반면 AVF가 우심방으로 배수로서 첫째, 말초 유출 침대의 저항은 AVF에 훨씬 낮습니다. 둘째, AVF의 정맥 사지에 혈액이 정맥과 정맥 이식편의 순수 동맥 내용에 비해 낮은 산소로 이어지는 동맥 혈액의 혼합이 될 수 있습니다. 셋째, AVF에있는 정맥은 동맥 침대에 정맥 이식편의 전체 전위에 비해 그 혈관 venorum과 신경 신경 분포의 보존에 이르는, 그 침대에서 제거되지 않습니다. AVF는 일반적으로 하나를 가지고 반면 마지막으로, 문합의 수는 일반적으로 정맥 이식편의 두입니다. 본 연구에서는, 우리는 AVF의 연구에 사용될 수 있습니다 aortocaval 루의 마우스 모델을 소개합니다.

<table><tbody><tr><td>Vevo 770 초음파 기계</td><td>Visualsonics</td><td>20-60 Mhz 스캔 헤드; RMV-704</td><td></td></tr><tr><td>혈관 클램프</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5424</td><td></td></tr><tr><td>집게 적용</td><td>클램프 Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5410</td><td></td></tr><tr><td>25 게이지 바늘</td><td>Becton Dickinson</td><td>BD PrecisionGlide 바늘 25G x 7/8 #305124</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스 aortocaval 누관의 기술적 측면

Technical Aspects of the Mouse Aortocaval Fistula

마우스 동정맥루를 만드는 기술적 인 측면을 설명합니다. 전신 마취하에, 복부 절개가 이루어지며, 대동맥과 대정맥 (IVC)이 노출됩니다. 근위 infrarenal 대동맥 원위부 대동맥은 각각 클램프 배치 및 바늘 구멍에 대한 해부 있습니다. 특별한주의 대동맥과 IVC 사이의 박리를 방지하기 위해 지급됩니다. 대동맥을 체결 한 후, 25 G 바늘은 IVC에 구멍 대동맥의 양쪽 벽에 사용됩니다. 주변의 결합 조직은 지혈 압축에 사용됩니다. AVF 성공적으로 생성 IVC의 박동 동맥의 혈액 흐름을 보여줍니다. 성공적인 AVF의 추가 확인은 수술 후 도플러 초음파에 의해 달성 될 수있다.

연습 후, 첫 번째 수술 후 하루 생존은 95 % 이상 일반적으로, 수술 후 7 일째에, 생존은 91.3 %였다 그림 1과 2는 관상 단면도에있는 이상적인 천자 사이트를 보여준다;. 구멍의 배치 사이트는 과도한 출혈없이 좋은 생존을 확보하는 것이 중요합니다. 수술 중 사망 및 조기 수술 후 사망은 일반적으로 출혈로 인해 수 있습니다. 이 대동맥과 IVC 사이하거나 불충분 한 지혈 압력의 과도한 박리 발생하는 경향이있다. 그림 3은 압축하지 않고 좋은 지혈을 허용하기 전에 지혈을 위해 압력을 적용하는 결합 조직에 찔린 사이트를 포장의 중요성의 개략도를 보여줍니다 AVF. 우리의 경험에서, 모든 기술적 성공 AVF는 셋째 날에 초음파로 확인 될 수있다; AVF가 존재하는 것으로 이중에서 확정되면, AVF는 일반적으로 적어도 하루에 28까지 안정 될 것이다 그림 4.성공적인 AVF 형성 전형적인 도플러 초음파 결과를 보여줍니다. 파형의 변화는...

목표는 간단하고 재현성 동정맥루를 생산하는 것입니다. 이 방법은 봉합 또는 접착제 접착제를 사용하지 않습니다. 따라서 시료 분석을 위해 이물질 최소한의 함께 사용할 수 있습니다.

마우스 Aortocaval 누관의 기술적 측면

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta ...

본 절차의 전체적인 목표는 성공적인 대동맥-대정맥 누공을 만드는 것이며, 이는 먼저 천자 부위 근처의 대동맥을 주의 깊게 박리함으로써 수행됩니다. 다음으로, 대동맥-대정맥 누공의 희망 위치 근위부에서 대동맥을 클램프로 고정합니다. 그런 다음 25 gauge 바늘을 사용하여 좌측 대동맥에서 하대정맥으로 천자를 실시합니다.마지막으로, 대동맥-하대정맥 누공(aorta caval fistula)을 폐쇄하지 않고 지혈을 수행합니다. 최종적으로 도플러 초음파를 사용하여 하대정맥 혈류의 증가를 확인합니다. 대동맥-하대정맥 문합술과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 짧은 시간 내에 완료할 수 있는 간단한 방법이며, 수술 전 시간과 훈련이 필요한 봉합사를 사용하지 않는다는 점입니다.펄스 도플러를 사용하여 B 모드로 신장 상부 및 하부의 하대정맥(IVC)과 복부 대동맥의 기선 기록을 측정하고, 각 측정 지점에서 각 혈관의 직경과 최대 속도 및 파형을 측정합니다. 모든 수술 기구와 혈관 클램프를 오토클레이브로 멸균하여 절차를 시작합니다. 10주령의 C 57 black 수컷 마우스를 0.8 liters per minute의 유량으로 4% isof fluorine을 사용하여 마취시킵니다.산소를 공급하며, 발가락 꼬집기(toe pinch)로 진정 수준을 확인합니다. 마우스를 앙와위(supine position)로 눕힙니다. 실리콘 마스크를 장착하고 2% isof fluorine을 투여합니다.화학 제모제를 사용하여 목부터 하복부까지의 털을 제거합니다. 먼저, 70% ethanol로 수술 부위를 소독합니다. 수술 현미경 하에, 간의 하단 가장자리부터 치골 바로 위까지 정중선 절개를 실시합니다.견인기를 삽입하여 복강에서 장 전체를 제거합니다. 그런 다음 식염수에 적신 거즈로 장을 감싸 우측에 놓습니다. 후복막과 하행결장을 연결하는 막을 박리하여 대동맥과 하대정맥(IVC)이 완전히 보이도록 합니다.방광이 확장되어 방해가 된다면 압력을 가해 밀어냅니다. 다음으로, 좌측 신정맥에서 대동맥 분지점까지 거리의 1/2에서 3/4 지점에 표시를 합니다. 대동맥의 좌측 가장자리를 박리하여 천자할 수 있도록 준비합니다.대동맥은 하대정맥(IVC)보다 약 45도 뒤쪽에 위치하므로, 후방 및 좌측으로 박리해야 합니다. 대동맥과 하대정맥 사이를 박리하지 않도록 주의하며, 좌측의 하대정맥과 우측의 좌신정맥 및 그 분지들이 손상되지 않도록 신장하

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

우리는 마우스의 복부 대동맥의 한 부분이 단지 allogeneic 또는 syngeneic받는 사람의 신장 동맥 아래에 orthotopically 이식되는 기술을 설명합니다. 이 기술은 균일 한 크기의 큰 동맥의 이식이 유리한 것으로 간주되는 연구에 유용 할 수 있습니다.

혈관 질병의 연구에 대한 마우스의 Orthotopic 대동맥 이식

이 비디오는 동종면역 유도 혈관 거부 반응을 연구하기 위해 마우스 대동맥 삽입 모델을 생성하는 방법을 보여줍니다. 마취된 기증자 마우스를 앙와위 자세로 눕힌 후, 하부 대동맥(IAA)을 주변 구조와 조심스럽게 분리합니다. 분지 혈관이 결찰되고 IAA의 양쪽 끝이 고정되어 절제 전에 혈류를 방지합니다. 그 후, 공여자의 IAA를 동종 수용 마우스에 이식하고, 문합을 통해 혈류를 회복시켜 동종면역에 의한 혈관 거부 반응을 조사합니다.

동종면역 유도 혈관 거부 반응을 연구하기 위한 마우스 대동맥 삽입 모델

우리는 우리의 마우스 이식 arteriosclerois (GA) 같은 근친 교배 균주의받는 사람에 마우스 선박 세그먼트의 개재를 포함 모델에 대한 프로토콜을 설명합니다. 용기 기증자에 추가 유전자 변화를 교잡에 의해, 모델은 GA에 특정 유전자의 효과를 평가할 수 있습니다.

이식 동맥 경화에 대한 마우스 모델

우리는 성인 마우스에서 대뇌 정맥 고혈압 안정적인 모델을 생성하는 방법을 설명한다. 이 모델은 광범위 래트에서 설명되고 시험되었다. 마우스에서이 새로운 상대 유전자 변형 동물을 사용할 수있는 가능성을 열어하여 모델의 애플리케이션을 넓게.

성인 마우스 정맥 ​​고혈압 모델 : 외부 경정맥 정맥 문합에 경동맥.

우리는 마우스의 대동맥 삽입 이식을 위한 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜의 목표는 동맥의 동종면역 반응 및 그에 따른 장기 이식 실패에 기여하는 동맥 변화와 관련된 병리학적 과정 및 치료 전략을 연구할 수 있는 모델을 제공하는 것입니다.

동종 유도 혈관 거부 및 이식 동맥 경화 마우스 모델

여기에서 우리는 임상적으로 관련된 문합 구성이 통합된 동정맥루(AVF) 부전의 쥐 모델을 제시합니다. 이 모델은 병태생리학을 연구하고 가능한 치료 개입을 테스트하는 데 사용할 수 있습니다.

동정맥루 실패의 소설 쥐 모델 : 세부 수술

하대정맥(IVC)을 통해 대동맥을 뚫어 마우스에 대동맥강 누공을 만든 후, 약물이 포함된 용액을 동일한 바늘을 통해 IVC에 주입한 다음 배양합니다. 이 방법은 외부 경로에 비해 정맥 내피에 더 강력한 약물 전달을 가능하게 합니다.

마우스 동정맥루 내피에 관내 약물 전달

우리는 orthotopic 대동맥 이식 모델 마우스에 슬리브 기술을 사용 하 여 현재. 혈관 질환의 연구에 사용할 수 있는 매우 빠른 문 합 방법 이다.

대동맥 이식-교육용 비디오의 마우스 모델에서 소매 기법을 사용 하 여

대반 카발 누공은 두 벽을 통해 뮤린 적외선 대인 대공을 열등한 정맥으로 뚫고 열등한 정맥 카바의 부분 결찰을 통해 유출에 협착증을 생성하여 만들어졌습니다. 이 재현 가능한 모델은 중앙 정맥 협착증을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

유출 협착증을 가진 Aortocaval 누공을 사용하여 중앙 정맥 협착증의 뮤린 모형

이 프로토콜은 쥐 총장골 동정맥루 생성의 수술 단계를 자세히 설명합니다. 우리는 혈액 투석 접근 관련 사지 병태생리학을 연구하기 위해 이 모델을 개발했습니다.

혈액 투석 접근 관련 손 기능 장애의 쥐 모델

이 프로토콜은 반복적인 약물 치료를 위해 경정맥 카테터를 갖는 혈관 접근 포트의 아포리포단백질 E(ApoE) 결핍 마우스에서 안지오텐신 II 방출에 의해 복부 대동맥류를 유도하기 위한 삼투압 펌프의 연속 이식을 기술한다. 3D 초음파에 의한 동맥류 발달 모니터링은 등쪽 임플란트에도 불구하고 효과적으로 수행됩니다.

안지오텐신 II의 마우스 모델에서 중앙 정맥 카테터에 의한 약물 치료 유도 복부 대동맥류 및 3D 초음파에 의한 모니터링

배우세요 마우스에서 봉합 없이 대정맥루를 만드는 간단한 기법을. 25게이지 바늘을 사용하여 허혈 없이 지혈하고 도플러 초음파로 혈류를 확인하는 이 방법은 재현성이 높아 다양한 실험에 활용됩니다.

마우스 Aortocaval 누관의 기술적 측면

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