Name: 길이, 비 침습적을위한 안구의 앞쪽 상공 회의소에 이식 생체에 영상 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 54 s
Description: 배우세요 생쥐 눈의 전방에 췌도 섬을 이식하고 공초점 현미경으로 장기간 비침습적 실시간 영상을 획득하는 방법을. 이 기술은 당뇨병 연구에서 이식 조직의 생존과 통합을 평가하는 데 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

우리는 Drs을 인정합니다. Camillo Ricordi, Antonello Pileggi, R. Damaris Molano, 스테판 Speier 유익한 토론 다니엘 Nyqvist. 우리는 또한 비디오 녹화와 관련하여 도움이 Eleut 헤르 난 데스와 디에고 에스피노사 - Heidmann 기술 지원 및 마이크 발데스와 마가렛 Formoso 감사드립니다. 바이런 말도 나도는 편집 기록, 최종 비디오를 제작했다. 연구 지원은 당뇨병 연구소 재단 (에서 제공 한 <a href="http://www.DiabetesResearch.org" target="_blank">www.DiabetesResearch.org</a> ), NIH / NIDDK / NIAID (MHA에 F32DK083226, AC에 대한 NIH RO3DK075487, PO.B.에 U01DK089538). PO.B에 대한 추가 연구 지원은 Karolinska Institutet, 스웨덴 연구위원회, 스웨덴 당뇨병 재단, 가족 Erling - 페르손 재단, 가족 Knut와 앨리스 발렌 버그 재단, 활기찬 Skandia 보험 회사 (주)에서 자금을 통해 제공되었다 ( Karolinska Inst에서 당뇨병의 FP7 - 228933-2), 전략적 연구 프로그램itutet, 노보 Nordisk 재단, 그리고 부두 폰 Kantzow의 재단.

다음 절차는 2 단계로 입체경에서 수행되며, 첫 번째 단계는 캐뉼라로 섬을로드 포함하고 두 번째 단계는 ACE에 실제 이식입니다. 동물에서 수행 모든 절차는 마이애미 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다. 1. 이식을위한 정맥의로드 섬 <ol><li> 축소 서클 요리를 회전하여 센터 배양 접시에있는 섬입니다. </li><li> &quot;저수지&quot;에서 캐뉼라를 분리하고 깨끗한 표면에 캐뉼라와 연결 튜브를 놓습니다. 저장소는 필터 (그림 1a)없이 300 μl 일회용 플라스틱 피펫 팁으로 만든 할 수 있습니다. </li><li> 저수지에 aspirating 때 섬의 지속적인 흐름을 보장하기 위해 저수지에서 기포를 제거. 저수지를 플러싱하는 것은 발 페달을 사용하여 핸즈프리 동력 주사기 - 드라이버를 앞으로 운전하면됩니다(그림 1b, C). 이것은 또한 저수지 (예 : 생리, PBS 또는 문화 미디어로 살균 솔루션으로 사전로드)로 섬의 열망을 허용하도록 주사기에 공간을 할 것입니다. </li><li> 부드럽게 저수지에 섬의 원하는 금액을 대기음. 사람들이 저수지를 입력하고 하단을 향해 함께 남아있게됩니다 섬은 소용돌이 경향이 있습니다. 흡인이 발 페달을 사용하여 이전 버전과 동력 주사기 - 드라이버를 구동하여 이루어집니다. </li><li> 연결 튜브를 통해 저수지에 캐뉼라를 다시 연결하십시오. </li><li> 배양 접시에 다시 캐뉼라 팁을 놓고 캐뉼라로 다음 튜브에 저수지의 섬을 플러시. 당신은 부드럽게 (도청) 튜브 (그림 1D) &quot;을 flicking&quot;에 의해 튜브 / 캐뉼라를 백업 채울 때 섬이 함께 남아 있는지 확인합니다. 캐뉼라를 밖으로 내보냈 아르 앞서 섬의 모든 기포 전이나 후에 중지합니다. 확실하지 않은 경우, 섬이 남아 공기로 캐뉼라의 뒷면을 입력으로 중지앞서 섬의 거품은 ACE의 섬의 역류 (역류)을 방지 할 수 있습니다. 밤새 분산됩니다. </li><li> 이 단계에서, 당신은 ACE (다음 단계 참조)에 섬을 삽입 할 수 있습니다. </li></ol> 2. 눈의 앞쪽 상공 회의소에 작은 섬 이식 <ol><li> 입체경 아래 따뜻한 패드에 anesthetized 마우스를 배치합니다. </li><li> 산소 / isoflurane 마취 기계에 연결 마취 &quot;마스크&quot;에 마우스의 코를 놓습니다. 마스크 1 ML 일회용 플라스틱 피펫 팁 (필터없이)으로 만든과 좁은 끝 (그림 2A, B)를 통해 마취 튜브에 연결되어 있습니다. </li><li> 부드럽게 손가락과 엄지 손가락 무료 손과 &quot;팝업&quot;더 나은 노출과 접근이 용이합니다 (그림 2C)를 밖으로 눈을 사용하여 이식 할 눈의 눈 뚜껑을 철회. 이에 과도한 압력에 의해 마우스의 호흡을 방해하지 않고 완벽하게 연습을 필요로합니다목이나 머리에 혈액 흐름을 차단. </li><li> 일회용 인슐린 주사기 (29 - 31G)를 사용 메스로 신중하게 각막 만 끝을 관통하고 하나의 측면 절개를합니다. ACE (그림 2D)의 아웃 분사 동안 섬의 환류을 최소화하기 위해 각막과 limbus의 꼭대기 사이의 중간 지점에 절개를합니다. </li><li> 조심스럽게 절개를 통해 캐뉼라 (섬과 미리로드) 삽입합니다. </li><li> 천천히 캐뉼라의 섬을 추출하고 홍채의 상단에이를 입금. ACE에 과도한 압력 축적으로 인해 작은 섬 역류를 방지하려면 절개로 사분면의 맞은 편에 가능한 한 작은 볼륨 (들)로 한때 thrusts에있는 섬을 꺼냅니다. 이것은 더 캐뉼라 (단계 1.6 참조)로드하는 동안 튜브에 섬을 압축하여 보장 할 수 있습니다. </li><li> 천천히 ACE의 캐뉼라를 철회. 섬의 큰 볼륨 시장을 대표로 인해 작은 섬 환류로 주입 된 경우, 특히 중요한 단계입니다확인 ACE 내부에 구축 피할 수 있습니다. 캐뉼라 주위의 절개를 통해 과도한 압력을 출시 할 ACE 내부하면서 작은 섬 역류를 최소화 / 제거하려면 부드럽게 캐뉼라를 회전 할 수 있습니다. 당신이 캐뉼라를 철회하고, 필요한 경우, ACE의 완전히 retracting하기 전에 압력이 가라까지 캐뉼라를 기다려야 시도로 환류의 흔적이 있는지 확인합니다. </li><li> 멸균 PBS 또는 식염수에 이식 눈을 씻어. </li><li> 처음 48 시간에 대한 수술 진통제 (피하 0.05-0.1 밀리그램 / kg)에 buprenorphine를 삽입. </li><li> 바로 이식 후 이식 눈에 에리스로 마이신의 안과 항생제 연고를 적용 할 수 있습니다. </li><li> 마취에서 회복을 허용 할 수있는 가온 케이지에 다시 동물을 놓으십시오. </li></ol>

<ol><li>Weigert, R., Sramkova, M., Parente, L., Amornphimoltham, P., Masedunskas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+microscopy%3A+a+novel+tool+to+study+cell+biology+in+living+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Intravital microscopy: a novel tool to study cell biology in living animals.</a> Histochem. Cell Biol. 133 (5), 481-491 (2010).</li>
<li>Leibiger, I. B., Caicedo, A., Berggren, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+in+vivo+imaging+of+pancreatic+%3F-cell+function+and+survival+-+a+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol.+%28Oxf%29%22%5BJournal%5D)">Non-invasive in vivo imaging of pancreatic ?-cell function and survival - a perspective.</a> Acta Physiol. (Oxf). , (2011).</li>
<li>Wang, Y., Maslov, K., Kim, C., Hu, S., Wang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+photoacoustic+and+fluorescence+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Trans+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Integrated photoacoustic and fluorescence confocal microscopy.</a> IEEE Trans Biomed. Eng. 57 (10), 2576-2578 (2010).</li>
<li>Ntziachristos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Going+deeper+than+microscopy%3A+the+optical+imaging+frontier+in+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Going deeper than microscopy: the optical imaging frontier in biology.</a> Nat. Methods. 7, 603-614 (2010).</li>
<li>Aswathy, R. G., Yoshida, Y., Maekawa, T., Kumar, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+quantum+dots+for+deep+tissue+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal+Chem%22%5BJournal%5D)">Near-infrared quantum dots for deep tissue imaging.</a> Anal. Bioanal Chem. 397 (4), 1417-1435 (2010).</li>
<li>Ghoroghchian, P. P., Therien, M. J., Hammer, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+fluorescence+imaging%3A+a+personal+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev.+Nanomed+Nanobiotechnol%22%5BJournal%5D)">In vivo fluorescence imaging: a personal perspective.</a> Wiley Interdiscip Rev. Nanomed Nanobiotechnol. 1 (2), 156-167 (2009).</li>
<li>Prescher, A., Mory, C., Martin, M., Fiedler, M., Uhlmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+FTY720+treatment+on+postischemic+pancreatic+microhemodynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Effect of FTY720 treatment on postischemic pancreatic microhemodynamics.</a> Transplant Proc. 42 (10), 3984-3985 (2010).</li>
<li>Leblond, F., Davis, S., Valdés, P., Pogue, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-clinical+whole-body+fluorescence+imaging%3A+Review+of+instruments%2C+methods+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Photochem.+Photobiol.+B%22%5BJournal%5D)">Pre-clinical whole-body fluorescence imaging: Review of instruments, methods and applications.</a> J. Photochem. Photobiol. B. 98 (1), 77-94 (2010).</li>
<li>Toso, C., Vallee, J. P., Morel, P., Ris, F., Demuylder-Mischler, S., Lepetit-Coiffe, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+magnetic+resonance+imaging+of+pancreatic+islet+grafts+after+iron+nanoparticle+labeling%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Clinical magnetic resonance imaging of pancreatic islet grafts after iron nanoparticle labeling.</a> Am. J. Transplant. 8 (3), 701-706 (2008).</li>
<li>Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+laser+scanning+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Two-photon laser scanning fluorescence microscopy.</a> Science. 248 (4951), 73-76 (1990).</li>
<li>Wang, B. G., Konig, K., Halbhuber, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+microscopy+of+deep+intravital+tissues+and+its+merits+in+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microsc%22%5BJournal%5D)">Two-photon microscopy of deep intravital tissues and its merits in clinical research.</a> J. Microsc. 238 (1), 1-20 (2010).</li>
<li>Denk, W., Delaney, K. R., Gelperin, A., Kleinfeld, D., Strowbridge, B. W., Tank, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomical+and+functional+imaging+of+neurons+using+2-photon+laser+scanning+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Anatomical and functional imaging of neurons using 2-photon laser scanning microscopy.</a> J. Neurosci. Methods. 54 (2), 151-162 (1994).</li>
<li>Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choreography+of+cell+motility+and+interaction+dynamics+imaged+by+two-photon+microscopy+in+lymphoid+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Choreography of cell motility and interaction dynamics imaged by two-photon microscopy in lymphoid organs.</a> Annu. Rev. Immunol. 26, 585-626 (2008).</li>
<li>Khorshidi, M. A., Vanherberghen, B., Kowalewski, J. M., Garrod, K. R., Lindstrom, S., Andersson-Svahn, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+transient+migration+behavior+of+natural+killer+cells+imaged+in+situ+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Integr.+Biol.+%28Camb%29%22%5BJournal%5D)">Analysis of transient migration behavior of natural killer cells imaged in situ and in vitro.</a> Integr. Biol. (Camb). 3 (7), 770-778 (2011).</li>
<li>Matheu, M. P., Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoimaging%3A+studying+immune+system+dynamics+using+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Immunoimaging: studying immune system dynamics using two-photon microscopy.</a> Cold Spring Harb. Protoc. 2011, pdb.top99(2011).</li>
<li>Celli, S., Albert, M. L., Bousso, P. Visualizing the innate and adaptive immune responses underlying allograft rejection by two-photon microscopy. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCelli%2C+S+%22Nat.+Med%22">Nat. Med</a>. , (2011).</li>
<li>Fan, Z., Spencer, J., Lu, Y., Pitsillides, C., Singh, G., Kim, P., et al. In vivo tracking of 'color-coded' effector, natural and induced regulatory T cells in the allograft response. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFan%2C+Z+%22Nat.+Med%22">Nat. Med</a>. 16 (6), 718-722 (2010).</li>
<li>Sabek, O., Gaber, M. W., Wilson, C. M., Zawaski, J. A., Fraga, D. W., Gaber, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+human+islet+vascularization+using+a+dorsal+window+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Imaging of human islet vascularization using a dorsal window model.</a> Transplant Proc. 42 (6), 2112-2114 (2010).</li>
<li>Coppieters, K., Martinic, M. M., Kiosses, W. B., Amirian, N., von Herrath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+the+in+vivo+imaging+of+autoimmune+diabetes+development+in+the+pancreas+by+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A novel technique for the in vivo imaging of autoimmune diabetes development in the pancreas by two-photon microscopy.</a> PLoS One. 5 (12), e15732(2010).</li>
<li>Martinic, M. M., von Herrath, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+the+pancreas+during+development+of+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of the pancreas during development of diabetes.</a> Immunol Rev. 221, 200-213 (2008).</li>
<li>Mostany, R., Portera-Cailliau, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Method+for+2-Photon+Imaging+of+Blood+Flow+in+the+Neocortex+through+a+Cranial+Window%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A Method for 2-Photon Imaging of Blood Flow in the Neocortex through a Cranial Window.</a> J. Vis. Exp. (12), e678(2008).</li>
<li>Palmer, G. M., Fontanella, A. N., Shan, S., Hanna, G., Zhang, G., Fraser, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+optical+molecular+imaging+and+analysis+in+mice+using+dorsal+window+chamber+models+applied+to+hypoxia%2C+vasculature+and+fluorescent%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">In vivo optical molecular imaging and analysis in mice using dorsal window chamber models applied to hypoxia, vasculature and fluorescent.</a> 6 (9), 1355-1366 (2011).</li>
<li>Jain, R. K., Munn, L. L., Fukumura, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+tumour+pathophysiology+using+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Dissecting tumour pathophysiology using intravital microscopy.</a> Nat. Rev. Cancer. 2 (4), 266-276 (2002).</li>
<li>Taylor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+response+of+capillary+endothelium+to+changes+in+intravascular+pressure%2C+as+seen+in+the+rabbit%27s+ear+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22Aust.+J.+Exp.+Biol.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">The response of capillary endothelium to changes in intravascular pressure, as seen in the rabbit's ear chamber.</a> Aust. J. Exp. Biol. Med. Sci. 31 (5), 533-543 (1953).</li>
<li>Shan, S., Sorg, B., Dewhirst, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+rodent+mammary+window+of+orthotopic+breast+cancer+for+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc.+Res%22%5BJournal%5D)">A novel rodent mammary window of orthotopic breast cancer for intravital microscopy.</a> Microvasc. Res. 65 (2), 109-117 (2003).</li>
<li>Speier, S., Nyqvist, D., Cabrera, O., Yu, J., Molano, R. D., Pileggi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+in+vivo+imaging+of+pancreatic+islet+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Noninvasive in vivo imaging of pancreatic islet cell biology.</a> Nat. Med. 14 (5), 574-578 (2008).</li>
<li>Speier, S., Nyqvist, D., Kohler, M., Caicedo, A., Leibiger, I. B., Berggren, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+high-resolution+in+vivo+imaging+of+cell+biology+in+the+anterior+chamber+of+the+mouse+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Noninvasive high-resolution in vivo imaging of cell biology in the anterior chamber of the mouse eye.</a> Nat. Protoc. 3 (8), 1278-1286 (2008).</li>
<li>Falck, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Site+of+production+of+oestrogen+in+the+ovary+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Site of production of oestrogen in the ovary of the rat.</a> Nature. 184, Suppl 14. 1082(1959).</li>
<li>Bickford-Wimer, P., Granholm, A. C., Bygdeman, M., Hoffer, B., Olson, L., Seiger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+fetal+cerebellar+and+cortical+tissue+transplanted+to+the+anterior+eye+chamber+of+athymic+rats%3A+electrophysiological+and+structural+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Human fetal cerebellar and cortical tissue transplanted to the anterior eye chamber of athymic rats: electrophysiological and structural studies.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84 (16), 5957-5961 (1987).</li>
<li>Adeghate, E., Donath, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+findings+in+long-term+pancreatic+tissue+transplants+in+the+anterior+eye+chamber+of+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Morphological findings in long-term pancreatic tissue transplants in the anterior eye chamber of rats.</a> Pancreas. 5 (3), 298-305 (1990).</li>
<li>Abdulreda, M. H., Faleo, G., Molano, R. D., Lopez-Cabezas, M., Molina, J., Tan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution%2C+noninvasive+longitudinal+live+imaging+of+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">High-resolution, noninvasive longitudinal live imaging of immune responses.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. , (2011).</li>
<li>Unutmaz, D., Xiang, W., Sunshine, M. J., Campbell, J., Butcher, E., Littman, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+primate+lentiviral+receptor+Bonzo%2FSTRL33+is+coordinately+regulated+with+CCR5+and+its+expression+pattern+is+conserved+between+human+and+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">The primate lentiviral receptor Bonzo/STRL33 is coordinately regulated with CCR5 and its expression pattern is conserved between human and mouse.</a> J. Immunol. 165 (6), 3284-3292 (2000).</li>
<li>Pileggi, A., Molano, R. D., Berney, T., Cattan, P., Vizzardelli, C., Oliver, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+oxygenase-1+induction+in+islet+cells+results+in+protection+from+apoptosis+and+improved+in+vivo+function+after+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Heme oxygenase-1 induction in islet cells results in protection from apoptosis and improved in vivo function after transplantation.</a> Diabetes. 50 (9), 1983-1991 (2001).</li>
</ol>

PO.B. 상용 서비스 플랫폼으로 눈의 앞쪽 챔버를 사용하는 것이다 생명 공학 회사 Biocrine의 창립자 중 하나입니다. AC는이 기술을 보호 특허에 있습니다.

손쥐 췌장 섬은 이전에 33 설명한 바와 같이, 밀도 기울기에 정화에 이어 collagenase의 소화를 사용하여 분리 하였다. 절연 섬은 이식 전에 하룻밤 배양 하였다. 이것이 필요하지 않을 수도 있지만,이 섬은 격리 절차에서 복구 할 수 있도록하는 것이 좋습니다. 가 / 강력한 섬을 생존의 이식을 보장하므로이 이식이 당뇨병 수신자에 수행 할 때 중요합니다. 이식은 산소 / isoflurane 혼합물 (1.5-3 %) 효과에 흡입으로 일반화 마취하에 수행됩니다. 다른 흡입 또는 주입 anesthetics (예 케타민) 사용할 수 있습니다. 주입 마취를 사용하는 경우, 프로토콜에 2.2 단계를 건너 뛰십시오. 절차를 수행하는 동안 저체온증을 방지하기 위해 열 소스를 사용하여 anesthetized 동물을 제공합니다. 일반적으로 avascular 공동으로 절개를 할 때 일부 마우스에서는 혈관을 깰 수 있습니다rnea. 예를 들어, 누드 마우스...

intravital 현미경의 발전은 체외 연구 1에 의해 예측하지 생리 현상을 보여 왔습니다. 이것은 살아있는 동물로 체외 방법에 기존하여 얻은 결과를 번역에 도전을 강조 표시합니다. 지난 10 년 간, 생활 동물 조직의 시각화는 상당히 이미징 modalities 2, 3, 4, 5, 6에 기술 진보에 의해 개선되었다. 이 비 invasively 대상 조직의 길이 방향 시각화를 사용하는 실험 동물 모델에서 가능한 응용 프로그램과 생체 이미징 접근에 대한 필요성을 가했다 있습니다. 이러한 자기 공명 영상 및 양전자 방출 단층 촬영이나 bioluminescence와 같은 이미징 기술은 신체 7-8, 9에서 깊은 장기 / 조직의 비 침습적 영상을 사용했습니다. 그러나 이러한 기술을 사용 O에도 불구하고, 높은 배경 신호와 낮은 공간 해상도로 인해 휴대 해상도 하나를 달성 할 수 없습니다F 고 대비 자료 나 조직 별 발광을 4. 이것은 두 광자 형광 공 촛점 현미경 (10)의 도래와 함께 해결되었습니다. 두 광자 현미경은 intravital 이미징 연구 시각화하고 전례가없는 세부 사항 11, 12로 휴대 이벤트를 정할 수있었습니다. 이 건강과 질병 13, 14, 15, 16의 주요 생물학적 과정의 특성을 이끌었습니다. 선구 intravital 이미징 연구가 주로 excised 조직 (예 : 림프절)의 생체 조건에서 &quot;없잖아?&quot;동안, 다른 연구는 시츄 17, 18, ​​19, 20, 21 이미지 노출 대상 조직에 침투 방법을 사용했습니다. 다른 연구는 또한 침습적 방법과 생체 22, 23, 24, 25 제한된 영상 해상도와 관련된 제한을 회피하기 위해 &#39;창 챔버 모델 &quot;을 사용했습니다. 창 챔버 모델에서 투명 창 챔버는 수술 diffe의 피부에 이식되어동물의 임대 위치 (등쪽이나 귀 피부, 유방 지방 패드, 간, 등) (예 : 마우스, 쥐, 토끼). 이 방법이 명확하게 생체 이미징에 높은 해상도를 수 있지만, 챔버 이식 해 침습적 수술을 필요하며 몇 주 또는 몇 달 22여 종 방향 이미징 연구를 수용 할 수없는 경우가 있습니다. 그것은 최근 눈의 앞쪽 챔버에, 즉 최소한 침략 절차, 이식과 고해상도 공 촛점 현미경을 결합하는 (ACE)로 &quot;자연 몸 창&quot;을 제공하는 입증 된 강력하고 생체 이미징 플랫폼 26, 27의 다양한. ACE에 이식이 조직 28, 29, 30의 다양한 생물학적 측면을 연구하기 위해 지난 몇 수십 년 동안 사용되었습니다, 그리고 고해상도 영상과의 최근 조합은 단일 셀 해상도로 췌장 섬의 생리를 공부 활성화 비 invasively 및 길이 방향 &lt;&gt; 26, 27 논의하게 될 것입니다. 이 방법은 동물 모델에서 제 1 형 당뇨병 (게시되지 않은 데이터)의 개발 기간 동안 면역 반응을 연구하는 데 사용되었습니다. 또한 각각 ACE의 췌장 꽃 봉오리 또는 개별 신장 glomeruli, (게시되지 않은 데이터)에 이식하여 신장 기능의 연구에서, 췌장 개발을 공부뿐만 아니라하는 데 사용되었습니다. 이 방법을 사용하는 최근의 보고서는 더 췌장 췌장 이식 31 일 이후 면역 반응을 연구하기위한 응용 프로그램을 보여 주었다. 중요한 것은,이 연구는 수행 할 천연 바디 창 제공하는 눈의 앞쪽 챔버에 그 이식을 보여 주었다 : 생체에 이식 된 조직 (1) 길이, 비 침습적 영상을, (2) 생체에서의 세포 표현형 및 생존 능력을 평가하기 위해 cytolabeling 현장, 대상 조직에 면역 세포에 침투 (3) 실시간으로 추적하고, 국소 응용 프로그램 또는 안구 내 주사로 (4) 지역 개입했습니다. 여기, 우리는 D췌장 섬을 사용하여 눈의 앞쪽 챔버 내로 이식을 수행하는 방법을 emonstrate.

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 설명 / 의견 </td></tr><tr><td> IsoTHESIA (Isoflurane) </td><td> Buttler 동물 건강 공급 </td><td> 11695-6775-2 </td><td> 99.9 % Isoflurane / ML </td></tr><tr><td> Ketaset (케타민 HCL) </td><td> 요새 닷지 동물 건강 </td><td> 0856-2013-01 </td><td> 대체 injectable 마취 </td></tr><tr><td> Beprenex (Buprenorphine HCL) </td><td> Reckitt Benckiser 건강 (UK) (주) </td><td> 12496-075-7-1 </td><td> 0.3 MG / ML </td></tr><tr><td> 에리스로 마이신의 안과 연고의 USP, 0.5 % </td><td> 애 크런 </td><td> 17478-070-35 </td><td> 이식 눈에 prophylactically 적용 </td></tr><tr><td> 0.9 %의 나트륨 염화물 (식염) </td><td> Hospira 주식회사 </td><td> 0409-7983-03 </td><td> IV 주입하십시오. 불모의 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Gibco </td><td> 10010-023 </td><td> 1X. 불모의 </td></tr><tr><td> CMRL 중간 1066 </td><td> Cellgro </td><td> 98-304 - CV </td><td> 보충, CIT의 수정. 섬에 대한 선호하는 미디어 </td></tr></tbody></table>

길이, 비 침습적을위한 안구의 앞쪽 상공 회의소에 이식<em&gt; 생체에</em실시간으로 단일 셀 해상도&gt; 영상

Transplantation into the Anterior Chamber of the Eye for Longitudinal, Non-invasive In vivo Imaging with Single-cell Resolution in Real-time

Intravital 영상은 생물학적 연구에 필수적인 도구로 떠오르고있다. 이 과정에서 많은 이미징 기술이 아닌 invasively 동물에서 다른 생물학적 과정을 연구하기 위해 개발되었습니다. 그러나, 기존의 intravital 이미징 modalities의 주요 기술적 인 제한은 단일 셀 해상도 기능으로 비 침습적, 길이 방향의 영상을 결합 할 수 없다는 것입니다. 우리는 눈 앞 챔버 내로 이식은 생체 내 세포 해상도 비 침습적, 세로 이미지 수있는 다양한 실험 플랫폼을 제공하는 등 상당한 제한을 circumvents 방법을 여기에 표시됩니다. 우리는 마우스에 이식 절차를 설명하고, 즉 임상 관련성, 췌장 췌장 이식과 모델을 사용 대표적인 결과를 제공합니다. 눈의 앞쪽 챔버 내로 이식 조직의 다양한 직접 시각화를 지원하는 것 외에도,이 방법은 애추 할 수있는 플랫폼을 제공합니다수행하여 N 약물의 장기 후속 및 대상 조직의 모니터링. 때문에 눈 혜택 이식 요법뿐만 아니라 앞쪽에 챔버로의 다양성, 조직 / 세포 이식의, 이건 정말 신호 전달과 암이나 면역 질환 개발과 같은 생리와 pathophysiological 과정을 공부하고 생체 응용 프로그램에서 다른 확장합니다.

&quot;좋은&quot;이식을 정의하는 몇 가지 매개 변수가 있습니다. 좋은 이식은 비디오에서 볼 수 있듯이 절개 할 때 출혈이없이 진행이 하나입니다. 출혈은 ACE (그림 3A)에 메스 (바늘) 만 팁을 관통하여 예방 / 최소화합니다. 이 또한 홍채의 접촉과 주사를 방지하는 데 도움이됩니다. 또한 시간 (그림 3C, D)을 통해 각막의 변화를 유발하지 않고 잘 치유 될 소형 절개를 보장합니다. 성공적인 이식에 대한 또 다른 중요한 점은 ACE의 환류 출력으로 인해 손실없이 섬의 총 원하는 금액을 이식 할 수 있습니다. 같은 프로토콜 단계 1.6에서 언급이는 ACE (그림 3B)의 최종 캐뉼라의 철회 아웃시 절개를 밀봉하기 위해 기포를 사용하여, 적어도 가능한 볼륨에서 꺼내기 섬 및 적용 가능한에 의해 최소화 할 수 있습니다. 또한, 전을 제공<html> 학생 및 limbus의 가장자리 사이의 홍채의 상단에 slets은 생체</...

안구 이식 및 공 촛점 현미경을 결합 새로운 접근 방식은 이식 조직 내에서 단일 셀 해상도 세로, 비 침습적 실시간 이미징을 가능하게<em&gt; 생체 내</em&gt;. 우리는 마우스 눈의 앞쪽 챔버에 췌장 섬을 이식하는 방법을 보여줍니다.

Intravital imaging has emerged as an indispensable tool in biological research.  In the process, many imaging techniques have been developed to study ...

안녕하세요, 저는 마이애미 대학교 밀러 의과대학 당뇨병 연구소의 Doretta입니다. 이번 영상에서는 마우스 안구의 내부 챔버로 췌도 세포를 이식하는 방법을 시연하겠습니다. 이 절차는 두 단계로 진행됩니다.첫 번째 단계는 분리된 췌도 세포를 캐뉼라에 적재하는 것이며, 두 번째 단계는 실제 이식 과정입니다. 기구 및 시약에 대한 자세한 내용은 동반된 텍스트를 참조하십시오. 여기서는 다음 비디오에서 중점적으로 다룰, 시린지가 장착된 전동 시린지 드라이버와 저장조 및 캐뉼라 부착물을 강조하여 보여드립니다.먼저 캐뉼라에 아이렛(eyelet)을 로딩하는 것으로 시작합니다. 모든 과정은 실체현미경 하에서 수행됩니다. 디쉬를 원형으로 회전시키거나 돌려 아이렛을 중앙에 맞추는 것부터 시작하십시오.중심이 맞으면 캐뉼라를 저장조에서 분리하고, 전진용 풋 페달을 밟아 전동 시린지 드라이버를 전진시켜 기포를 모두 밀어냅니다. 준비가 되면 이제 전동 시린지 드라이버를 후진 방향으로 구동하여 아이렛을 저장조로 흡입하기 시작합니다.마찬가지로, 이는 뒤쪽 풋 페달을 밟아 수행합니다. 아이렛들이 저장조 바닥에 모이는 경향이 있음에 유의하십시오. 그 다음 캐뉼라를 저장조에 다시 연결하고 저장조 밖으로 아이렛들을 배출하십시오.그 후, 아이렛(eyelet)이 저장조에서 빠져나와 튜빙 안에 밀착되어 유지되도록 캐뉼라 안으로 튜빙을 밀어 넣습니다. 전동 시린지 드라이버를 앞으로 작동시키면서 저장조를 가볍게 두드립니다. 아이렛이 캐뉼라 뒷부분으로 진입하기 시작할 때 튜빙 내에 얼마나 밀착되어 있는지 확인하십시오.이제 아이렛(eyelet)을 이식할 준비가 되었을 것입니다. NS 크기의 마우스를 패드 위에 놓고, 검지와 엄지로 머리 피부를 당겨 이식할 눈을 노출시키거나 돌출시킵니다. 이때 새 바늘을 메스처럼 사용하십시오.홍채와의 접촉 및 손상을 방지하기 위해 바늘의 사면(beveled end)이 아래를 향하도록 하여 눈에 접근합니다. 바늘 끝을 각막에 삽입하여 측면 절개를 실시합니다. 다음으로, 아이렛(eyelets)이 미리 장착된 캐뉼라를 절개창을 통해 내부 챔버로 삽입하고, 전동 시린지 드라이버를 전진시켜 아이렛을 챔버 내로 다시 주입하기 시작합니다.캐뉼라 내부에 갇힌 기포는 나중에 사라지므로 걱정하지 않아도 됩니다. 또한, 이 기포들은 챔버 밖으로 눈꺼풀이 역류하는 것을 최소화하거나 방지하는 천연 장벽 역할을 합니다. 천천히 조심스럽게 내부 챔버에서

transplantation-into-anterior-chamber-eye-for-longitudinal-non

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

서로 다른 유전 적 배경에서 개별 WT 망막 전구 세포의 실시간 추적은 신경 동안 셀이 아닌 자율적 인 신호의 기여도의 평가를 할 수 있습니다. 여기서, 배아 이식을 통한 생체 저속 촛점 촬상 유전자 녹다운, 키메라 세대의 조합이 목적을 위해 사용 하였다.

키메라 Zebrafish의 태아의 개별 망막 전구 세포의 형질 전환 유전자 발현의 생체 내 이미징에서 세포 비 자립적 영향을 연구하기 위해

망막 색소 상피 세포 건조 연령 관련 황 반 변성의 고급 형태에 대 한 세포 보충 치료 될 수 있습니다. 이 프로토콜 지리적 위축의 눈이 큰 모델 및 질병의이 모델에 인간 배아 줄기 세포 유래 망막 색소 상피 세포의 subretinal 이식의 생성을 설명합니다.

지리적 위축의 눈이 큰 모델에 인간 배아 줄기 세포 유래 망막 색소 상피 세포의 subretinal 이식

프로토콜의 목표는 레이저 스캐닝 현미경 마우스 눈의 앞쪽 챔버에 thymic 임 플 란 트에 의해 thymocytes의 경도 intravital 실시간 추적을 보여주는 것입니다. 각 막의 투명도는 이식의 vascularization 지속적으로 녹음 시 조 셀 모집 및 성숙한 T 세포 출구 수 있습니다.

레이저 스캐닝 현미경 검사 법에 의해 눈의 앞쪽 챔버에 Thymocytes의 비보에 추적 실시간

여기에 제시 라이브 마우스 안구 표면 이미징을위한 다광 현미경 플랫폼입니다. 형광 형질 전환 마우스는 안구 표면 내의 세포 핵, 세포 막, 신경 섬유 및 모세 혈관의 시각화를 가능하게합니다. 콜라주 구조에서 파생된 비선형 제2 고조파 생성 신호는 기질 아키텍처에 대한 라벨없는 이미징을 제공합니다.

마우스 각막과 결막의 라이브 이미징을 위한 맞춤형 다광현미경 플랫폼

생체 내 이미징은 건강 및 질병 생물학 연구를위한 강력한 도구입니다. 이 프로토콜은 표준 2 광자 현미경으로 마우스 망막의 경공 영상을 설명합니다. 또한 망막의 여러 세포 코호트를 형광으로 표지하는 다양한 생체 내 이미징 방법을 보여줍니다.

경동공 이광자 마우스 망막의 생체 내 이미징

이 프로토콜은 도립 컨포칼 현미경을 사용하여 생체 내 이미징을 단순화하는 새로운 도구를 제공합니다.

도립 컨포칼 현미경에서 상피 조직 역학의 장기 모니터링을 위한 간소화된 생체 내 이미징 접근 방식

여기에서는 쥐 눈의 전방에 생착된 간 스페로이드의 비침습적 in vivo 이미징을 허용하는 플랫폼에 대해 설명합니다. 워크플로우는 일차 간 세포에서 스페로이드를 생성하는 것부터 마우스 눈에 이식하고 컨포칼 현미경을 통해 세포 해상도로 생체 내 이미징을 수행하는 것까지 다양합니다.

쥐 눈의 전방에 생착된 간 회전 타원체의 In vivo 이미징

고주파 도플러 초음파는 지역 심근 기능을 평가하기위한 새로운 기술입니다. 이 작품은 심근 스트레인, 국소 빈혈 - reperfused (IR) murine 마음에 DP / DT 및 승모판 병리 현상의 반복 측정이 다양한 이미징 플랫폼의 응용을 보여주는 첫번째 증거를 제공합니다.

고주파 고해상도 Echocardiography : 국소 빈혈 - reperfused Murine 중심부에 심근 스트레인, 수축성 및 승모판 병리 현상의 비침습 반복 측정에 대한 최초의 증거

우리는 여기에서 비 침습적 18F-fluorodeoxyglucose와 양전자 방출 단층 촬영을 이용하여 급성 이식 거부 반응을 평가하기 위해 쥐의 신장 이식 모델을 제시한다.

쥐 신장 이식 후 급성 동종 이식 거부의 비 침습 이미징 사용<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG PET

우리는 산소 신진 대사의 색인을 예측할 수 뇌성 혈액 흐름 지수의 확산 상관 분광법 대책과 뇌성 헤모글로빈 산소의 주파수 영역에 가까운 적외선 분광 조치를 결합. 우리는 신생아 뇌의 건강과 발전을 평가하기 위해 침대 옆 심사 도구로이 법안의 유틸리티를 테스트.

유아의 뇌 신진 대사와 혈류 역학의 비 침습적 광학 측정

배우세요 생쥐 눈의 전방에 췌도 섬을 이식하고 공초점 현미경으로 장기간 비침습적 실시간 영상을 획득하는 방법을. 이 기술은 당뇨병 연구에서 이식 조직의 생존과 통합을 평가하는 데 활용됩니다.

길이, 비 침습적을위한 안구의 앞쪽 상공 회의소에 이식

더 많은 동영상 탐색