Name: 번역 상 혈관을 조성한 복합 동종 이식 (VCA) 연구를위한 수정 된 이소성 돼지 뒷다리 이식 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-14T08:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: 배우세요 수정된 이소성 돼지 뒷다리 이식 모델을 통해 혈관화된 골수를 보존한 채 면역조절 프로토콜의 면역학적 결과를 연구하는 방법을. 이 모델은 재건 이식 분야에서 만성 면역억제제 사용을 최소화하는 새로운 치료 전략 개발에 활용됩니다.

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Kakali 사카, 박사, Joani 크리스텐슨, BS, 케이트 Buretta, BS, 낸스 원, BS, 윌리엄 Lehao​​, MD, 요한나 Grahammer, 게오르그 Furtmüller, MD, 에린 라다 : 우리는이 프로젝트에 기여하기위한 다음과 같은 개인을 인정하고 싶습니다 MD, 모하메드 알 - 라칸 MD, 카림 Sarhane MD, SAAMI Khalifian, BS, 마오 치, 메릴랜드, 그리고 엔젤로 레토 바론 MD, VCA 연구소, 대한 성형 외과학 교실, 제니스 우비 교수, 메릴랜드의 존스 홉킨스 대학 의과 대학, 마크 피셔, MD, 피부과 및 병리학, 의학의 존스 홉킨스 대학 의과 대학, 수 Eller에서, 최소 침습 수술 교육 센터, 존스 홉킨스 의과 대학 및 청 웅 린, MD 장 궁 기념 병원, 린 커우, 대만의 부서. 자금 조달 : 재생 의학의 무력 연구소 (국방부 W81XWH-08-2-0032)

이 비디오를 공개, 모든 동물의 절차는 존스 홉킨스 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인을 동물 프로토콜에 따라 수행 하였다. 1. 수술 전 계획 <ol><li> 우리는 MGH 한 남성 기증자가 두 여성받는 사람의 사지 (그림 1)를 제공하는 것을 특징으로 사지 동종 이식에 대한 우리의 번역 연구에서 미니 돼지 (15 ~ 20 킬로그램) 근친 MHC 정의 활용합니다. 수술 전 기증자와받는 사람 동물은 수의사에 의해 철저한 임상 평가를 받고있다. </li><li> 마취 및 허혈 시간을 최소화하기 위해, 도너 및받는 절차는 하나의 전용 대형 동물 수술실에서 세 작동 테이블에서 동시에 수행된다. 수술 팀뿐만 아니라 수의 직원들 사이 팀웍과 조화는이 절차의 전반적인 성공을 위해 중요하다. 수술 계획은 공식 회의 1의 수의학 팀과 논의수술 이전의 일 -2 주. </li><li> 터널 중심 정맥 카테터 (7 천을 더블 루멘 히 크먼 카테터) 이전에 면역 억제 약물 수준의 모니터링 및 면역 억제 및 / 또는 면역 조절 약물의 정맥 내 투여에 대한 이식을받는 사람 각각의 동물의 외부 또는 내부 경정맥에 배치됩니다. 이러한 카테터는 정맥 컷 다운 기술을 통해 직접 비전 아래에 배치하고 지느러미 목에 높은 종료 후방을 터널링하는 모노 필라멘트 비 흡수성 봉합사와 목 주위에 접착 붕대 랩을 사용하여 보안. </li><li> 수술 전 최소 12 시간을 NPO (더 단단한 음식을하지만 물 애드립 허용) 동물을 보관하십시오. </li><li> 수술 당일, 케타민 20 ㎎ / ㎏과 자일 라진 2 ㎎ / ㎏ IM과 진정 동물. </li><li> 적절한 크기의 기관 내 튜브를 삽입하고는 마취 기계와 인공 호흡기에 연결 (이소 플루 란 0.5 %에서 유지 관리) </li><li> 한계 귀 정맥에 정맥 카테터를 삽입하고 관리무게는 절차 전반에 걸쳐 0.9 %의 식염수를 기반으로. </li><li> 선제 진통제 (부 프레 노르 핀 0.02 ㎎ / ㎏의 IV)를 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 이전 기증자와받는 사람 동물 모두에 대한 초기 절개 예방 항생제 (세파 졸린 20 ~ 25 ㎎ / ㎏의 IV)를 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 받는 사람과 기증자 모두를위한 모든 절차에 무균 기술을 사용합니다. 이 멸균 가스 멸균 악기, 가면, 머리 모자, 불임 수술 가운 및 멸균 장갑의 사용을 포함한다. 어선과 절개의 면적을 면도하고 베타 딘 용액과 알콜을 번갈아 소독. </li></ol> 수술 중 감시 : <ol><li> 유도 및 삽관 후 산소 흡입 혼합물 0.5 %의 이소 플루 란 마취를 유지한다. </li><li> 심장 박동, 맥박 산소 측정기, ECG, 호 기말 이산화탄소 지속적으로 직장 온도를 모니터링하고 매 15 분을 기록합니다. </li><li> 베어 파수꾼 따뜻한 강제 공기 담요로 저체온증을 방지합니다. </li></ol><ol><li> 수술대에 누운 위치에 기증자의 동물을 배치하고 멸균 방식으로 드레이프. </li><li> anteromedial 피부에 구멍 선박을 식별하기 위해 가까운 적외선 레이저 혈관 조영술을 사용합니다. 말초 혈관 액세스를 통해 생리 식염수 2-5 ㎖에 희석 인도시 아닌 그린에서 약 0.06 ㎎ / ㎏을 주입한다. 약 10 초 후, 근적외선 기록 30 초 - 2 분을 수행합니다. 천공기를 식별하기 위해이 음반에서 비디오를 사용합니다. 퍼포 바탕으로, 모니터링을위한 피부의 면적 (약 100cm 2) 표시한다. </li><li> 피부 패들에 대한 표시와 연속성의 사타구니 피부 절개 (그림 2)를 만들기 위해 메스를 사용합니다. </li><li> 대퇴 혈관을 확인하고 suprageniculate 가지의 레벨과 근위 사타구니 인대의 수준에 원심을 분리. </li><li> preservin 동안 피부와 피하 조직을 해부하다G 피부 패의 영역입니다. 플랩 수확하는 동안 수축을 방지하기 위해 근육을 기초로, 피부의 가장자리를 봉합. </li><li> 단지 왕복 톱 (전기 펜 드라이브, 테스, 웨스트 체스터 PA)를 사용하여 눈꺼풀 판 위의 절골술을 수행합니다. </li><li> 전기 소를 사용하여 허벅지 근위부의 근육을 나눈다. </li><li> 혈관 척추 경에 osteomyocutaneous 플랩을 떠나 중간 축에서 대퇴골을 나눈다. 플랩은 피부 패들, 기본 허벅지 근육, 무릎 관절, 대퇴골 및 고유의 면역 기능을 그대로 혈관의 골수를 포함 경골 근위부가 포함되어 있습니다. </li><li> 골수 공간에 지혈을 달성하기 위해 뼈 왁스를 사용합니다. 부드러운 뼈는받는 사람에 대한 준비 ronjeurs를 사용하여 가장자리. </li><li> 받는 사람의 대퇴 혈관 (그림 3) 준비 될 때까지 혈관 척추 경에 관류 이식을 유지합니다. </li><li> 수신자 박리가 완료되면, 수 등으로 근위 대퇴 도너 혈관을 결찰ND 전에 이식에 히스티딘 - 트립토판 - 케 토그 루타 레이트 (HTK, Custodiol 뉴타운, PA)와 이식을 달이다. 참고 : 기증자 사지가 수신자의 왼쪽에 대한받는 사람 오른쪽 기증자 사지)의 오른쪽의 왼쪽 기증자 사지 즉,받는 사람의 반대쪽에 이식된다. </li><li> 즉시 100 ㎎ / ㎏의 IV 나트륨 펜토 바르 비탈을 사용하여 두 번째 뒷다리를 수확 후 기증자 돼지를 안락사. 죽음이 설정 프로토콜 당 수의 직원에 의해 확인된다. </li></ol> 4. 받는 절차 (뒷다리 동종 이식) <ol><li> 기증자 가지 수확하는 동안받는 선박의 준비를 할 수 있도록 즉시 초기 기증자 절개 한 후받는 사람의 유도 및 삽관을 시작합니다. 이것은 불필요한 대기 시간을 제거하고 기증자와받는 사람의 총 마취 시간이 줄어 듭니다. </li><li> 알로하는 운영 측면에서 30 ° 회전 동물 부정사의 위치를dorsolateral 측에서 서쪽으로 노출. </li><li> 사타구니 절개를하고 대퇴 혈관을 노출하며 suprageniculate 가지의 레벨과 근위 사타구니 인대의 수준에 원심을 분리. </li><li> 그라프 트 삽입에 대한 dorsolateral 복벽 (그림 4)에 사타구니에서 피하 주머니를 만듭니다. </li><li> 기증자 혈관을 결찰하고 HTK으로 이식을 세척하십시오. </li><li> 반전 방식으로 이식 삽입을 수행 피부 패들 쉽게 면역 서있는 위치에서 모니터링 및 (선박에 대한 긴장하지 않고 엔드 - 투 - 엔드 혈관 문합을 할 수 있도록 꼬리 쪽 직면 대퇴 혈관의 절단 끝을 허용하는 dorsolateral에 직면하고 있습니까 그림 5). </li><li> 가능하면 (크기 2.5 ~ 3.5 10 ~ 20 개 KG 동물에 적합) 정맥 문합을위한 혈관 결합 장치 (Synovis, 세인트 폴 MN)를 사용합니다. 종래의 방법에 비해이 크게 허혈 시간을 감소시킨다. </li><li> 동맥 anast를 수행9-0 봉합 (Synovis, 세인트 폴 MN)으로 기존의 봉합 기술을 사용하여 omoses </li><li> 혈관 개통 확인 후, 3-0 PDS 봉합 (그림 5)와 장소에 이식을 확보. 이식의 근육은 복부 벽의 근육을 봉합합니다. 그것은 해로운 수 있기 때문에 때 케이지 주위에 동물 이동합니다. 이식 근육은받는 사람의 허벅지 근육을 봉합하지 않아야 </li><li> 면역 감시를위한 dorsolateral 측 (그림 6)에 피부 패를 외면 화하다 3-0 Vicryl 피하 봉합하고 4-0 모노 필라멘트 흡수 중단 피부 봉합을 사용하여 인접한 피부를 봉합. </li><li> 3-0 Vicryl 피하 봉합하고 4-0 모노 필라멘트 흡수 중단 피부 봉합을 사용하여 레이어의 사타구니 피부를 닫습니다. </li><li> 수술 후 진통제의 50 ~ 100의 mcg / 시간 펜타닐 패치를 놓습니다. </li><li> 뒷다리 동종 이식 후에는 펜 한 번 깨어 자체에 편안하게 호흡에 동물을 반환합니다.</li>
</ol>

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<li>Wachtman, G. S., Wimmers, E. G., Gorantla, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biologicals+and+donor+bone+marrow+cells+for+targeted+immunomodulation+in+vascularized+composite+allotransplantation%3A+a+translational+trial+in+swine%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Biologicals and donor bone marrow cells for targeted immunomodulation in vascularized composite allotransplantation: a translational trial in swine.</a> Transplant Proc. 43, 3541-3544 (2011).</li>
</ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

역사적으로, 이소성 뒷다리 이식 프로토콜은 복부 복부 벽에 피부 패의 exteriorization을 포함 혈관은 엔드 - 투 - 사이드 방식으로 (Hettiarachty 2004) 문합 하였다. 그러나, 우리의 수정 방법, 반전 플랩 insetting 및 엔드 - 투 - 엔드 문합 더 옆으로 피부 패를 가져오고 따라서 동물의 서 위치에 면역 감시를 용이하게한다. 또한 근적외선 레이저 혈관 조영술을 사용하여 수랄 동맥의 식별 및 최대 관류의 영역은 피부 패의 신뢰성을 향상시킨다. 우리의 수정 된 기술로, 우리는 미세 혈관 문합에 관련된 기술적 오류를 최소화하기 위해 대퇴 혈관 사이의 엔드 - 투 - 엔드 문합을 수행 할 수 있습니다. 단단 문합술은 더 따뜻한 허혈 시간을 감소 정맥 문합을 위해 혈관 결합 장치 (Synovis 세인트 폴 MN)를 사용 할 수있었습니다. 우리의 경험에서, 허혈 시간은 더 예측했다커플 링 장치의 사용과 허혈 시간의 변화시기 수 직접 면역 학적 결과와...

이러한 손과 얼굴 이식으로 혈관 복합 동종 이식 (VCA)는 현재 전 세계 12 수행 수많은 손과 얼굴을 이식 임상 현실이다. 초기 및 중간 결과가 유리한 높은 2를 장려하고 있다는 사실에도 불구하고, 만성 약제 면역 억제의 요구 사항은 광범위한 임상 적용을 제한하고 있습니다. 초 미세 수술 문합과 nonsuture 커프스 기술 13을 포함 VCA의 쥐 모델의 발전, 3 VCA의 동종면 응답의 더 나은 이해에 도로를 포장했다. 면역 프로토콜의 무수한 VCA 면역 메커니즘의 우리의 더 나은 이해를 바탕으로 임상 응용 프로그램에 대한 제안되었다하지만 그들은 인간 7에서의 성능을 합리적으로 예측 될 것이다 큰 동물 모델에서 유효성을 검사 할 필요가있다. 인간과 돼지의 장기 시스템 사이의 생리 학적 및 면역 학적 유사성을 바탕으로 <sup&gt; 06 돼지 VCA 모델 9 송곳니하는 신뢰성과 비용 효율적인 대안을 고려하고 비인간 영장류 모델 일 수있다. 이 문서는 VCA에 면역 관용을 유도하고 따라서 그 임상 적 적용을 확대하기위한 우리의 현재와 미래의 면역 전략을위한 기초 역할을 우리의 MHC 정의 돼지 이소성 뒷다리 이식 모델에서 사용하는 방법에 대한 자세한 개요를 제공합니다. 우리는 구체적으로 이식 관련 연구 11에서의 사용을 위해 돼지 백혈구 항원 유전자 좌에서 동형 접합체로 사육 잘 성격을 타고난 돼지를 사용합니다. 우리는 대퇴 혈관에 따라 혈관 o​​steomyocutaneous 플랩을 올립니다. 플랩은 대퇴골과 경골 근위부에서 그대로 혈관 골수가 포함되어 있습니다. anteromedial 허벅 다리 피부는 그래프트에 포함되어 있고 가장 면역 원성 성분 O의 면역 감시받는 동물의 dorsolateral 형태에 exteriorized된다F VCA. Dorsolateral 위치는 입장을 서서 앉아있는 임상 시험을 용이하게하고 또한 비교적 깨끗한 이식 피부를 유지합니다. Ustener 등. 비근 교계 농장 돼지 (15)에 반경 앞다리 osteomyocutaneous 플랩을 이식하여 VCA의 첫 번째 큰 동물 번역 모델 중 하나를 소개했다. 그룹은 높은 면역 원성 피부 성분을 포함 VCA의 급성 거부 상당한 약물 관련 합병증 및 부작용없이 지연 및 임상 관련 전략으로 치료 될 수 있다는 것을 처음으로 보여주기 위해이 모델을 이용했다. 이 연구에서 얻은 유리한 결과가 이후 인간의 재건 이식 약물 요법을 설계 기초 단계를 만들었습니다. 이러한 초기 돼지 VCA 모델은 피부, 근육, 뼈, 신경과가 같은 관절 cartilag 같은 전문 구조를 결여 선박의 거부 반응을 방지하기 위해 프로토콜을 개발하기에 적합했지만전자 및 관절의 활액 막. 후속 노력 이식 탈락 (14)를 방지하기 위해 전체 길이 캐스트 배치를 필요하게 동물의 중간 자리를 포함에 초점을 맞추고 있었다. 사지 이식의 모든 주요 구성 요소에 대한 거부 반응을 조사하기에 적합하지만,이 모델의 주요 한계 중 하나가 배치 캐스팅으로 인해 이식 후 외래 어려움이 있었다. 따라서, 이소성 돼지 사지 동종 이식 모델은 경골로 구성된, 비골, 무릎 관절, 대퇴골, 주변 근육과 피부 패들, 동물이 자유롭게 최소한의 morbidit 8 수술 후 ambulate을 허용하면서 주로 VCA의 면역 학적 측면을 연구하기 위해 만든 . 박사 데이비드 H. 삭스의 선구적인 작업을 통해 잘 특성화 SLA 정의 근친 돼지의 개발은 번역 VCA 연구의 새로운 시대로 이끌어 냈다. 작은 항원 불일치 설정, 매트에 이소성 뒷다리 이식 모델을 활용HES 등. (10)는 사이클로스포린 치료의 짧은 코스 근골격계 구성 요소의 무기한 생존을 보여 주었다. 치료하지 컨트롤에 비해 피부 성분 생존 그러나 만 연장시켰다. 이식 피부 성분의 손실은 표피 특히 절연 고도로 격렬한 면역 반응에 기인 하였다. 마찬가지로, T-세포 고갈, 사이클로스포린과는 근골격계 성분 및 피부 성분에 내성을 유발 사이토킨 동원 기증자의 말초 혈액 단핵 세포의 단기 과정과 완전히 일치하지 않는 돼지를 사용하는 것은 여전히 5를 거부 하였다. &#39;분할 허용&#39;이라고하는이 현상은 지금까지 수행 재건 이식의 대부분의 중요한 구성 요소 인 높은 면역 원성 피부 구성 요소에 더 큰 초점을 VCA 연구의 패러다임의 변화를 가져왔다. 이러한 변형 모델에서는, ligatin 의해 단단 문합술을 활용G받는 사람 대퇴 동맥 및 회전은 (그림 1) cephalad. 이것은 종래의 커플 링 장치의 사용을 허용하여 허혈 시간을 줄일뿐만 아니라, 문합 실패의 가능성을 감소 아닙니다. 우리는 담보 순환 네이티브 다리에 혈관을 제공하기에 충분했다 나타내는 우리의 수신자의 대퇴 동맥 결찰 다음 모든 허혈성 이벤트를 관찰하지 않았습니다. 또한이 개질 방법에서는 외부화 피부 성분은 내부 구멍 용기에 근거 동원되고 전통적인 모델 (10)의 복부 사타구니 위치 달리 (도 1) 측 방향으로 위치된다. 이것은 서 또는 동물의 앉은 자세에서 면역 감시의 이식을 쉽게 시각화 할 수 있습니다. 따라서, 신뢰성 및 재현성 대형 동물 모델은 VCA의 피부 성분 관용 유도 전략을 조사 및 신규 지점을 개발하는 것이 필수적이다이식 생존의 더 나은 예측을위한 oninvasive 면역 감시 전략.

<table><tbody><tr><td colspan="4">REAGENTS</td></tr><tr><td>HTK</td><td>보관</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">EQUIPMENT</td></tr><tr><td>Electric Pen Drive</td><td>Synthes, Westchester PA</td><td>05.001.011</td><td>왕복 톱</td></tr><tr><td>혈관 결합 장치</td><td>Synovis, Newtown PA</td><td>21003B</td><td></td></tr></tbody></table>

번역 상 혈관을 조성한 복합 동종 이식 (vca) 연구를위한 수정 된 이소성 돼지 뒷다리 이식 모델

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Research

이러한 손과 얼굴 이식으로 혈관 복합 동종 이식 (VCA)는 복잡한 근골격계 외상과 파괴적인 조직 손실에 대한 가능한 치료 옵션을 나타냅니다. 유리한 매우 고무적인 초기 및 중간 기능적 결과에도 불구하고, VCA의 높은 면역 원성 피부 구성 요소와 만성 다중 약물 면역 억제의 잠재적 인 부작용의 거부는 VCA의 광범위한 임상 응용 프로그램을 방해하는 것을 계속한다. 따라서,이 신규 한 분야의 연구는 VCA의 고유 면역 학적 기능과 관련된 병진 연구에 집중하고 장기적인 면역 억제에 대한 필요성없이 VCA는 다음의 면역 조절과 관용 유도를위한 신규 한 면역 전략을 개발해야한다. 이 문서에서는 MHC 정의 돼지 이소성 뒷다리 동종 이식에 osteomyocutaneous 플랩으로 구성되어 VCA의 신뢰성과 재현성 번역 큰 동물 모델에 대해 설명합니다. 브리EFLY, 잘 혈관이 피부 패드는 근적외선 레이저 혈관 조영술을 사용하여 anteromedial 허벅지 지역에서 발견된다. 기본 근육, 무릎 관절, 대퇴골 및 경골 근위부는 대퇴 혈관 척추 경에 수확된다. 이 동종은 VCA와 독특한 면역 특권 기능을 가진 혈관 골수 이식을 모두 고려 될 수있다. 이식은 면역 모니터링 dorsolateral 지역에 exteriorized 피부 구성 요소를받는 동물의 피하 복부 주머니에 이식된다. 세 수술 팀함으로써이 모델의 효율을 개선하고 실험 프로토콜의 혼란 변수를 감소 마취 및 허혈 시간을 줄이기 위해 잘 조화 된 방식으로 동시에 작동한다. 이 모델은 줄이고 잠재적으로 VCA 만성 다중 약물 면역 억제에 대한 필요성을 제거하기위한 미래의 치료 전략을위한 기반 역할을합니다.

스물 넷 SLA 정의 돼지 이소성 뒷다리 이식은 78 분 (: 62-94 분 거리)의 평균 허혈 시간에 우리의 수정 기술을 사용하여 수행 하였다. 이식 인세와 dorsolateral 피부 노 위치는 모든 동물에 어려움없이 달성했다. 근적외선 레이저 혈관 조영술은 모든받는 사람에 우수한 이식 관류을 보여 주었다. 지난 12 정맥 문합이 혈관 커플 링 장치를 사용하여 수행하는 동안 초기 열두 정맥 문합 봉합사는 종래 기술을 사용하여 수행 하였다. 정맥 혈전 즉시 시술 후 확인되었을 때 기존의 봉합 기술을 가진 동물은 reanastomosis이 필요합니다. 관련 합병증은 커플 링 장치와 함께 수행되는 문합에서 관찰되지 않았다. 받는 사람 동물 또는 기증자의 골수 (BM) 주입 및 공동 자극 봉쇄하지 않고 타 크롤리 무스의 단독 요법의 단기 과정 (30 일)을 받았다. 덱사메타손 투여가 목표 레벨을 달성하도록 조정했다<html> 15 NG / ML. 짧은 코스 타 크롤리 무스는 치료되지 않는 동물 컨트롤을 역임했습니다. 공동 자극 봉...

혈관 복합 Allotransplantations (VCA)는 임상 현실이되었다. 그러나, VCA의 다양한 임상 적 적용은 만성 다중 약물의 면역 억제로 제한됩니다. 저자는 최소화하거나 잠재적 VCA에서 면역 억제의 필요성을 제거 할 수 신규 면역 전략을 번역하는 신뢰성 있고 재현 가능한 대형 동물 모델을 제시한다.

번역 상 혈관을 조성한 복합 동종 이식 (VCA) 연구를위한 수정 된 이소성 돼지 뒷다리 이식 모델

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma ...

다음 실험의 전반적인 목표는 임상적으로 유의미한 면역 조절 프로토콜의 면역학적 결과를 연구하기 위해, 온전한 혈관화 골수를 포함하는 신뢰할 수 있고 재현 가능한 대동물 후지 이식 중개 모델을 구축하는 것입니다. 이를 위해 먼저 혈관화 복합 동종 이식(VCA)의 피부 성분과 혈관화 골수의 독특한 면역학적 특성을 연구하기 위한 골근피판을 채취합니다. 다음으로, 동종 이식편을 복벽 피하 포켓에 이식하며, 이를 통해 수혜 동물의 이동 능력을 저해하지 않으면서 기술적으로 실행 가능한 모델을 구현합니다.그 후, 동물이 서 있는 자세에서 직접 시각적 검사를 통해 이식편을 관찰할 수 있도록 피부 성분을 복측 외측 복벽으로 외재화합니다. 결과적으로 이는 세포 기반 치료 및 생물학적 제제를 이용한 임상적으로 유의미한 면역 조절 프로토콜을 테스트하기 위한 신뢰할 수 있고 재현 가능한 모델임을 보여줍니다. 기존의 canine 및 비인간 영장류 VCA 모델과 비교하여 이 기술의 주요 장점은 비용 효율성이 더 높고 인수공통 감염 위험이 가장 낮으며, SLA가 정의된 공여자 및 수혜자 계통이 존재한다는 점입니다.이 방법은 혈관화된 골수의 고유한 면역 특권적 특성과 관련된 재건 이식 분야의 핵심 질문들에 답하는 데 도움을 줄 수 있으며, 면역 억제를 최소화하는 임상적으로 유효한 면역 조절 프로토콜 개발의 토대를 마련할 것입니다. 연구진은 약 20년 전 사지 동종 이식편의 다양한 구성 요소에 대한 면역원성을 테스트하고 분할 내성(split tolerance) 현상을 입증함으로써 이 이식 모델에 대한 아이디어를 처음으로 개발했습니다. 동종 이식 사지를 적출하기 전, 공여 돼지를 진정시키고 인공호흡기에 연결하여 시술 전 과정 동안 isof, fluorine 및 산소를 공급합니다.수술 부위를 제모, 세척 및 소독한 후, 공여 동물을 수술대 위에 앙와위로 눕히고 멸균 드레이프로 덮습니다. 다음으로, 근적외선 레이저 혈관조영술을 사용하여 중간 피부로 연결되는 천공지를 확인합니다. 그 후, 말초 혈관 통로를 통해 식염수에 희석한 인도시아닌 그린을 주입합니다.약 10초 후, 30초에서 2분 동안 근적외선 기록을 수행합니다. 그런 다음 확인된 천공지를 바탕으로, 추후 면역 모니터링에 사용할 피부 패들을 위한 피부 영역을 표시합니다. 안검 및 발가락 꼬집 반사를 통해 동물의 마취 깊이를 확인한 후, 메스를 사용하여 표시된 영역을 따라 서혜부 피부 절개를 실시합니다. 피부 패들을 위해 피부 영역을 보존하면서 피부와 피하 조직을 박리합니다.플랩 채취 시 수축을 방지하기 위해 피부 가장자리를 하부 근육에 봉합합니다. 그런 다음 대퇴 혈관을 확인하고 서혜인대 수준의 근위부까지 분리합니다. 피부 패들 수준까지 원위부 분지들을 결찰하여 4 cm의 최적 길이를 확보하고, 왕복 톱을 사용하여 발목 관절 바로 윗부분에서 골절단술을 시행합니다.그 다음 전기소작기를 사용하여 근위부 허벅지의 근육을 분리합니다. 공여자의 대퇴골 간부 중간 지점에서 절단하여, 혈관화된 피부 패들이 포함된 골근피판을 형성합니다. 이 피판은 피부 패들 하부의 허벅지 근육, 대퇴골 하단 및 무릎 관절, 경골 상단, 그리고 결과적으로 손상되지 않은 혈관화된 골수를 포함합니다.독특한 면역학적 특성을 고려하여, 수혜자의 대퇴 혈관이 준비될 때까지 공여 이식편을 혈관 경(vascular pedicle)을 통해 계속 관류하십시오. 공여체 절개가 시작된 직후, 수혜자 돼지를 인공호흡기에 연결하고 공여체 돼지에서 시연한 것과 같이 이소플루란(isof fluorine) 마취를 시작하십시오. 식염수 주입을 위해 카테터를 삽입하고, 선제적 부프레노르핀 및 예방적 항생제를 투여하십시오.동물을 배측 외측 표면이 잘 노출되도록 앙와위로 배치하고 마취 수준을 확인합니다. 다음으로, 서혜부를 절개하여 대퇴 혈관을 노출시키고, 서혜 인대 높이를 기준으로 원위 및 근위 방향으로 3~4cm 정도 혈관을 분리합니다. 그런 다음, 이식물을 삽입하기 위해 서혜부부터 복벽의 배측 외측까지 피하 포켓을 만듭니다.이제 공여 혈관을 결찰하고, 히스티딘, 트립토판 케토글루타레이트 또는 HTK 용액을 사용하여 이식 조직을 세척합니다. 만약 이것이 공여자의 최종 적출 단계라면, 이식 삽입을 수행하기 위해 동물 실험 프로토콜에 따라 즉시 동물을 안락사시킵니다. 혈관 커플링 장치를 사용하여 혈관에 장력이 가해지지 않은 상태에서 문합이 가능하도록, 대퇴부 절단단이 적절히 향하도록 반전된 형태로 배치합니다.가능한 경우, 정맥 문합술을 준비하십시오. 해당 장치는 허혈 시간을 현저히 단축해 줄 것입니다. 그 다음, 8-0 봉합사와 일반적인 봉합 기법을 사용하여 혈관의 개통성이 확인된 후 동맥 문합술을 시행하십시오.면역 모니터링을 위해 이식편 근육을 수혜자의 복벽 근육에 봉합하여 이식편을 고정하는 데 3개의 OPDS 봉합사를 사용합니다. 배외측의 피부 패들을 외부로 노출시킵니다. 그 다음 3-0 Vicryl 봉합사를 사용하여 심부층을 봉합하고, 4-0 단사 흡수성 단속 봉합사로 조직을 수혜자의 피부에 봉합합니다.마지막으로, 3-0 Vicryl subcutaneous sutures를 사용하여 서혜부 피부를 층별로 봉합한 후, 4-0 단필라멘트 흡수성 봉합사로 피부를 단순 결절 봉합합니다. 수술 후 통증 관리를 위해, 동물이 깨어나고 스스로 편안하게 호흡할 수 있게 되면 50 µg/hr 펜타닐 패치를 부착합니다.동물을 우리로 돌려보내고 자유롭게 사료를 먹고 물을 마시게 합니다. 처음 24시간 동안은 4시간마다, 그 이후에는 하루에 두 번 동물의 통증이나 고통 징후를 관찰합니다. 수정된 기술을 사용하여 19건의 MHC 정의 돼지 이종 후지 이식을 수행했습니다.이러한 이식은 VCA에서 면역 관용을 유도하기 위한 치료 전략을 개발하는 것을 목표로 수행되었습니다. 이 모델은 장기 거부 반응이 나타나는 VCA의 면역 관용을 위한 새로운 치료 전략 개발에 성공적으로 활용되었으며, 무이식 생존 대조군은 기존의 면역 억제제를 중단했을 때 이식편 거부가 가속화되는 것을 보여주었습니다. 이 절차에 숙달되면, 적절하게 수행했을 때 공여체 사지당 1~2시간, 수혜체 시술당 2~3시간 정도 소요됩니다. 이 절차를 시도할 때, 공여체의 반대측 사지를 수혜체의 복벽 포켓에 이식하여 오른쪽 사지는 왼쪽 서혜부에, 왼쪽 사지는 오른쪽 서혜부에 이식하도록 배치하는 것이 중요합니다.이 기술은 재건 이식 분야의 연구자들이 평생 지속되는 면역 억제제 투여 필요성을 최소화하고, 결과적으로 이 혁신적인 치료 방식의 위험 대비 이익 균형을 개선할 수 있는 새로운 면역 조절 프로토콜을 탐구할 수 있는 길을 열어주었습니다. 이 영상을 시청하고 나면, 혈관화된 골수가 온전하게 포함된 이종 뒷다리 이식의 기술적 측면을 충분히 이해하게 될 것입니다. 신뢰할 수 있고 재현 가능한 이 사지 이식 모델은 만성적인 다제 면역 억제제 사용의 필요성을 최소화하거나 잠재적으로 제거할 수 있는 새로운 면역 조절 프로토콜 개발의 토대가 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

고형 장기 및 혈관 복합 동종 이식을 결합하기 위해 경추 비봉합 커프 기술을 사용하여 마우스에서 새로운 이종성 흉벽, 흉선 및 심장 이식 모델을 설명합니다.

마우스의 소설 미세 수술 이소성 모델, 욕실 공산권 가슴 벽, 흉선, 및 심장 이식

슈퍼 미세 혈관 문합을위한 비 봉합 커프 기술을 적용 마우스에서 소성을 뒷다리 이식이 새로운 모델은, 혈관 복합 동종 이식 (VCA)에 관한 생체 역학적 면역 학적 연구를위한 강력한 도구를 제공합니다.

마우스에서 소성을 뒷다리 이식

현재 어떤 종류 vascularized 복합 allotransplantation의 긴-장기-면역 억제, 어려운 생활을 경계 표시에 대 한 지원에 따라 달라 집니다. 선물이 새로운 돼지 tibial VCA 모델 뼈 VCA를 공부 하 고 장기 면역 변조 없이 뼈 생존을 유지 하기 위해 수술 신생의 사용 방법을 설명 하는 데 사용할 수 있습니다.

돼지 Tibial Allotransplantation 외과 신생: 새로운 큰 동물 뼈 나가도록 복합 Allotransplantation 모델

혈관 화 된 복합 알로이 식은 이식 받는 사람에 게 생명을 바꾸는 혜택을 제공 하지만, 이식 거부와 레이의 생물학적 원인은 제대로 이해 되지 않습니다. 여기에 제시 된 설치류 수술 모델은 재현 가능 하 고 임상적으로 관련 된 모델을 제공 하 여 연구원 들이 그 발생을 막기 위해 거부 사건과 잠재적인 치료 전략을 평가할 수 있도록 합니다.

변형 된 이종 성 복합체 동종 요법 연구에 대 한 쥐에서 변성 이성애 자 골 진 피부 플랩 모델

이 프로토콜은 면역학 및 기능 적 회복의 동시 연구를 향해 기어드 혈관 복합 동종 이식 (VCA)의 견고하고 재현 가능한 모델을 제시한다. 손 바느질 혈관 아나토모와 신경 응착오른쪽 중간 허벅지 뒷다리 직교 이식에 세심한 기술에 투자 된 시간은 기능적 회복을 연구 할 수있는 능력을 산출한다.

다음 단계: 쥐의 기능적 회복을 극대화하기 위한 신경 응복 성 직교 힌지 이식 모델

이 논문은 쥐에 있는 부분이성 골균 플랩 이식 프로토콜 및 중간 후속에 있는 그것의 잠재적인 결과를 제시합니다.

쥐의 부분 이종화 힌드래그 이식 모델

본 프로토콜은 돼지 근막-피부 피판 모델과 혈관화된 복합 조직 연구에서의 잠재적 용도를 설명합니다.

혈관화된 복합 동종이식편 생명공학 연구를 위한 신뢰할 수 있는 돼지 근막-피부 피판 모델

우리는 이종 소성 후다리에서 목으로의 혈관 형성 종합 동체이식 마우스 모델을 제시합니다. 이 초미세수술 프로토콜은 0.3-0.5mm 혈관 문합을 포함하며, 나일론 필라멘트 유도와 정맥 커핑을 통합합니다. 이 연구는 관성 합성 동체 이식에서 내성, 허혈-재관류 손상, 면역학적 기전에 관한 번역 연구를 위한 신뢰할 수 있는 기반을 제공합니다.

쥐에서의 이소성 하지에서 목으로의 이식: 혈관 복합 동체이식의 초미세수술 모델

기증자 적출 및 수혜자 혈관 문합을 위한 단순화된 방법을 포함하여 마우스의 심장 이종성 이식을 위한 미세 수술 절차를 위한 기술이 시연됩니다.

이소성 마우스 심장 장기 이식에 대한 수정 방법

원고는 마우스에 이소성 심장 이식을 수행하는 데 필요한 단계를 설명합니다.

쥐 이소성 심장 이식 기술

배우세요 수정된 이소성 돼지 뒷다리 이식 모델을 통해 혈관화된 골수를 보존한 채 면역조절 프로토콜의 면역학적 결과를 연구하는 방법을. 이 모델은 재건 이식 분야에서 만성 면역억제제 사용을 최소화하는 새로운 치료 전략 개발에 활용됩니다.

번역 상 혈관을 조성한 복합 동종 이식 (VCA) 연구를위한 수정 된 이소성 돼지 뒷다리 이식 모델

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