Name: 에 대한 비 침습적 방법 현장에서 여성 미국의 바닷가에 연결 성공 (의 결정 Homarus의 americanus) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 18 s
Description: 배우세요 미국바닷가재(Homarus americanus) 암컷의 비침습적 교미 성공 평가 방법을. 현장에서 생식력 지표를 채취하여 어업 관리와 개체군 지속가능성을 평가하는 기술입니다.

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그들의 협력은 매우 평가된다 - 저자는 그 보트 우리가에서 샘플링 할 수 있던 모든 뉴 잉글랜드 상업 lobstermen에게 감사의 말씀을 전합니다. 또한, 우리는 리틀 베이 랍스터 회사 (뉴 잉턴, NH) 우리는 자신의 시설에서 샘플링을 수행 할 수 챔 플린의 요리 (포인트 주디스, RI)를 감사합니다. 다음 UNH 학생은이 연구를 통해 귀중한 도움을 제공 : 헤일리 화이트, 프랑소와 모리슨, 사라 Havener, 드라 Chaput, 월 그로스를. 이 프로젝트는 WHW (프로젝트 # 1 R/CFR-11)과 JSG에 UNH 해양 프로그램 그랜트 NH의 SeaGrant에서 교부금에 의해 지원되었다.

파트 A : 필드 샘플링 기술 1. 여성 측정 <ol><li> 암컷 랍스터 들어 갑 길이 (CL)와 캘리퍼스 쌍을 사용하여 가장 가까운 1.0 mm로 제 복근 세그먼트의 폭을 측정. NOTE : (암컷이 알을 수행) 복부의 폭 성적인 성숙의 지표이므로 제 복부 세그먼트가 측정된다. 또한다 (단계 1.2 참조) 이후 생식 단계와 이러한 데이터를 일치 탈피 스테이지를 확인하는 것이 바람직 할 수있다. </li><li> 복부 pleopods 중 하나 (바다 가재의 표준 방법론 프로토콜) 떨어져 작은 말단 부분을 클립 나중에 해부 현미경 9 볼 깨끗한 해수 pleopod을 저장합니다. 참고 :이 단계는 또한 여성은 자신의 알 (10)를 돌출 준비하고 표시하는 pleopods, 시멘트 샘의 존재를 발견 할 수 있다는 것입니다. </li></ol> 2. 바늘 INSErtion <ol><li> (18 G 표 1 참조) 주사기 바늘을 삽입 ~ 45 ° (그림 1) ~에서 꼬리쪽으로 기울어 진 정액 콘센트에 1cm. 참고 :이 전에 정액 소켓의 맨 아래에있는 정자의 높은 농도 (그림 1)에 도달하는 정자의 플러그를 통해 밀려으로 그대로 정자 플러그와 바다 가재에, 바늘, 삽입시 약간의 저항을 만날 수있다. 참고 : 플러그의 존재는 그 자체로, 바다 가재가 성관계를했다고 신뢰할 수있는 지표입니다. 어떤 동물에 spermatophore가 없을 가능성이 있기 때문에, 약간의 저항이있을 수 있으므로, spermatophore는 아직 플러그인으로 강화되지 않았거나 이미 계란 하나 이상의 클러치를 비옥하게하는 데 사용되었을 수 있습니다 작다. </li></ol><img alt="그림 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50498/50498fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50498/50498fig1.jpg" wid일 = &quot;600PX&quot;/&gt; 그림 1. 바늘 삽입 및 가재 정액 용기의보기. 정자 샘플을 추출하는 가재의 정액 소켓에 뭉툭한 팁 바늘을 삽입. 바늘의 각도와 깊이는 모두 일관된 샘플을 얻기에 중요합니다. 오른쪽 : 해부 및 수직으로 분할 된 정액 소켓의 전망. 정자는 용기의 바닥 (가장 깊은 지점)에 위치하는 동안 정자의 플러그는 콘센트의 위쪽이나 바깥 쪽 부분을 차지합니다. 그것은이 깊이 아래 샘플링 용기에 구멍과 혈액 오염 된 샘플을 초래할 수 있으므로주의하는 것이 중요합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50498/50498fig1highres.jpg" target="_blank">더 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . 3. 정자 플러그를 관통 <ol><li> 초기 삽입 후, (몸체 축에 수직 한) 거의 수직으로 바늘의 각도를 가파르게하고, 매우 천천히 작동하기 시작할아래 소켓에. </li><li> 끝이 꼬리를 향해 약간의 포인트가되어 있도록 각도로 기울어 진 바늘을 유지합니다. 그것이 결국 매트릭스에 침투 할 때까지이 경우 바늘 끝이 플러그의 상단을 압축한다. </li><li> 저항을 한 번 더 느껴질 때까지 천천히 아래로 바늘을 밀어 계속 -이 용기의 바닥과 샘플 촬영입니다. </li></ol> 4. 정자 제거 <ol><li> 용기의 바닥에서 샘플 (종종 솔리드 플러그 재료, 액체 정자와 다른 유체)를 제거하고 레이블이 2.0 ㎖의 플라스틱 튜브에 샘플을 입금. </li><li> 차가운 해수 ~ 0.1 ~ 0.5 ㎖로 용기를 세척합니다. </li><li> 같은 튜브에 유체 및 장소의 약 0.3 ML를 제거합니다. </li><li> 얼음에 저장 정자 샘플들이 실험실에서 검사 할 수있을 때까지. 파트 B : 실험실에서 정자 샘플의 시험 참고 : 개별 L의 정액 소켓에서 제거 샘플<html> obsters는 정자 세포가 존재 또는 부재되었는지 확인하기 위해 조사해야합니다. </li><li> 각 플라스틱 튜브, 커버 슬립 유리 슬라이드에 장소 및 복합 현미경으로 100 배의보기에서 ~ 유체의 50 μL를 제거합니다. </li><li> 로 샘플을 점수 : 부족한 다수의 또는 결석 정자 (이 연구는 실제 정자의 숫자, 그림 2의 양을하지 않았다). </li></ol><img alt="그림 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50498/50498fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50498/50498fig2.jpg" width="600px" /> 그림 2. 가재 정자 샘플 이미지. 40 배 배율로 복합 현미경으로 볼 때, 여성의 정액 콘센트에서 찍은 가재 정자 샘플의 이미지. 왼쪽의 이미지는 다른 (오른쪽) 스파 스 샘플 (스케일 바 = 10 ㎛)를 보여줍니다 동안 수많은 정자가 포함 된 샘플을 보여줍니다.. JPG &quot;대상 =&quot;_blank &quot;&gt; 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오.

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</ol>

저자는 관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

이 비디오 및 종이 윤곽과 여성 가재 성공적 정합 한 경우를 결정하기위한 방법을 보여준다. 이러한 접근 방식은 사용자의 다양한 의해 바다 가재의 대규모 샘플링에 사용될 수있을만큼 간단하다. 이 방법은 짝짓기하는 동안 남성에서 여성 바닷가에 전달되는 정액 소켓에 spermatophore의 존재를 검출을 기반으로합니다. 이러한 spermatophores 부분적들이 리셉터클에 퇴적 직후 정자 마개로 경화되므로, 정자 플러그의 존재는 또한 메이팅 성공 나타낸다. 이 연구뿐만 아니라 후속 큰 연구에서, 정자 플러그의 대부분은 정자들을 11과 관련 있다고 결정 하였다. 플러그의 존재가 상대측 활동의 신뢰할 수있는 지표 인 반면 그러나, 그 부재는 아니다. 이 샘플링 방법론을 산란 여성 바다 가재의 능력에 부정적인 영향을 초래하는 경우에 우리는 완전히 확신 할 수는 없지만성공적으로 계란 클러치을 비옥 D, 손상이 spermatophore 또는 소켓도 최소화 될 것이라고...

<html> 미국 가재 (Homarus의 americanus)는 북대서양 (~ 390,000,000달러 상당의 2011 년 56,000 MT) 1에서 가장 생산적인 어업 중 하나입니다. 그러나, 자연 개체군에서이 종의 생식 역학에 대한 이해의 일반적인 부족이있다. 적극적 재생 참여 개인의 개수 및 크기 등의 생식 출력의보다 정확한 추정치를, 생성하는 콘텐츠 평가 프로세스를 향상시킬 수도있다. 가시가있는 가재 2, 꽃게 3, 킹 게 4, 돌 게 5, 스노우 게 예를 들어, 때문에 정자 제한에 자신의 모든 생식 잠재력을 달성하는 것을 방지하는 여성은 등 여러 가지 상업적으로 악용 해양 갑각류에 대한 우려로 확인되었다 6. 전반적인 목표는 정자의 제한뿐만 아니라 미국 가재 어업의 특정 지역의 요인이 될 수 있는지 확인하는 것입니다. NT &quot;&gt; (눈에 띄게 손상, 최근 압출 계란) ovigerous 여성 바닷가 재와 관련이없는 태그 연구를 수행하는 동안 바닷가에있는 잠재적 인 정자 제한 문제의 첫 번째 징후가 관찰되었다. ~이 동물의 15 %가 떨어졌다 지적 어부의 보고서를 탈환 그들의 계란 클러치 만 1-2개월 후. 작업 가설은 몇 가지 가재 기름지게되지 않았다 계란을 운반하고, 그 결과로, &#39;떨어졌다&#39;7. 후속 연구의 예비 자료는 사실을 확인했다였습니다 그 바다 가재 것 그들이 성공적으로 성관계를하지 않은이 미 수정 계란 만 ~ 1개월 8에 대해 실시하는 경우에도 알을 돌출. 따라서, 자연 인구에서 미 수정 난자를 운반하는 여성의 관찰 주어진, 우리는 정자 제한에 기여 될 수있는 정도를 결정하는 모색 성적 성숙 가재 의해 재생 준 최대 레벨.이 목표를 달성하기 위해, 기술은 spermato를 검출하기 위해 개발되었다phore는 짝짓기하는 동안 남성에 의해 증착. 이 논문 및 비디오 여성 가재의 짝짓기 성공을 판명 위해 개발 된 비 침습적, 간단한 방법을 설명합니다. 이 기술은 바다에서, 어느 연구 또는 상업적 어선을 타고 신속하고 안정적​​으로 이용 될 수있다. 이러한 샘플링 방법의 세부 사항뿐 아니라 몇몇 대표적인 결과는 기술의 애플리케이션을 예시하기 위해 제시된다.

<table><tbody><tr><td>캘리퍼스</td><td>Mitutoyo Digimatic</td><td>500-196-20</td><td>http://www.globalindustrial.com</td></tr><tr><td>3 ml Luer-Lok 주사기</td><td>Beckton-Dickinson</td><td>309585 www.bd.com</td><td></td></tr><tr><td>Monoject 알루미늄 허브 무딘 바늘, 18 G x 1</td><td>Webster 수의학</td><td>8881202348</td><td>www.mywebstervet.com</td></tr><tr><td>2.0 ml 플라스틱 보관 튜브</td><td>Eppendorf</td><td>wu-06333-72</td><td></td></tr><tr><td>http://www.coleparmer.com 얼음</td><td></td><td></td><td></td>이 있는 스티로폼 쿨러</tr><tr><td>복합 광학 현미경</td><td>Olympus</td><td>BH 시스템</td><td>http://www.olympusamerica.com</td></tr><tr><td>커버 슬립</td><td></td><td></td>이 있는 유리 측면 <td>75mm x 25mm, 일회용</td></tr><tr><td>팁</td><td></td><td></td><td></td>이 있는</tr> ~1mm 두께의 피펫</tbody></table>

에 대한 비 침습적 방법<em&gt; 현장에서</em&gt; 여성 미국의 바닷가에 연결 성공 (의 결정<em&gt; homarus의 americanus</em&gt;)

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters (Homarus americanus)

북서 대서양에서 가장 생산적인 어업 중 하나 임에도 불구하고, 많은 미국 가재의 자연 생식 역학에 대한 알 수없는 남아있다. 악용 갑각류 인구 (게, 가재)의 최근 작업은 성숙한 여성 인해 정액 제한에 자신의 모든 생식 잠재력을 달성 할 수없는 경우가 있습니다 것을 제안합니다. 미국 가재 어업의 다른 지역에서이 가능성을 검토하기 위해, 안전하고 비 침습적 인 방법은 바다에서 여성 가재 많은 수의 샘플링을 위해 개발되었습니다. 이 방법은 정자 플러그의 유무를 결정하고, 정자의 존재를 조사 할 수있는 샘플을 인출 한 여성의 정액 리셉터클에 무딘 팁 니들을 삽입하는 것을 포함한다. 대조군 연구의 시리즈는이 기술의 안정성을 테스트하는 도크와 연구실에서 수행 하였다. 이러한 노력은 294 여성 가재 확인을 위해 샘플링을 수반하는 존재의 오FA 정자 플러그는 신뢰할 수있는 용기 내에서 정자의 표시 따라서, 교배했다. 이 논문은 방법론과 샘플링 전체 여성의 하위 집합에서 얻은 결과를 자세히 설명합니다. 조지 은행과 케이프 앤, MA에서 샘플 (230) 여성 바다 가재 (크기 범위는 = 등딱지 길이 71~1백45밀리미터), 90.3 %는 정자에 긍정적이었다. 일부 여성에서 정자의 부재에 대한 잠재적 인 설명은 다음을 포함한다 : 미숙 (생리적 성숙의 부족), 계란의 클러치를 비옥하게하는 데 사용 된 후 정자 플러그의 고장, 짝짓기 활동의 부족. 조사는 여성 가재 메이팅 성공을 조사하기위한이 기술은 자연 인구 생식 활동을 문서화하는 분야에서 사용할 수있는 신뢰할 수있는 프록시임을 나타낸다.

<html> 여기에보고 된 데이터의 연안 및 해양 지역 모두에서 유래 여성 바다 가재의 하위 집합했다. 의 연안 그룹은 케이프 앤, 매사 추세 츠 근처의 연안 해역에서 캡처 시험을위한 실험실로 냉각기에 수송되었다 44 바다 가재로 구성되었다. 186 해상 바다 가재의 총 조지 은행에 캡처 뉴 햄프셔에서 상용 보유 시설에서 샘플링되었다. 정자 샘플은 전술 된 방법에 따라 모든 동물로부터 얻어지는 즉시 정자의 존재 유무에 대해 조사 하였다. 이 부분 집합의 모든 여성의 90.3 %의 총은 정액 용기에 정자를했다. 놀랍게도, 정자 부족이 사람들은 크기 범위의 작은 끝 (그림 3)에 필요하지 않았다. ighres.jpg &quot;SRC =&quot;/ files/ftp_upload/50498/50498fig3.jpg &quot;폭 =&q...

이러한 미국의 랍스터 어업으로 악용 갑각류 어업에 어업에 의한 변화는 잠재적 짝짓기 성공의 감소로 이어지는, 생식 역학에 영향을 미칠 수 있습니다. 이 연구의 목표는 생리 학적으로 또는 기능적으로 성숙 될 수 있습니다 여성의 바다 가재의 짝짓기 성공을 판명하기위한 비 침습적 방법을 개발하는 것이 었습니다.

에 대한 비 침습적 방법<em&gt; 현장에서</em&gt; 여성 미국의 바닷가에 연결 성공 (의 결정<em&gt; Homarus의 americanus</em&gt;)

Despite being one of the most productive fisheries in the Northwest Atlantic, much remains unknown about the natural reproductive dynamics of American ...

미국 바닷가재는 캐나다 대서양 연안부터 뉴잉글랜드에 이르는 지리적 분포 범위 전역에서 상징적인 존재입니다. 많은 지역에서 이 종은 미국 동부에서 단일 종으로 운영되는 가장 큰 규모의 어업 대상 중 하나입니다. 이 어업의 지속적인 성공은 포란 개체군을 보존하기 위한 생물학적 제어를 포함하여 다양한 관리 조치 덕분인 것으로 평가됩니다.이러한 규정에는 최소 및 최대 크기 제한, 알을 품은 암컷에 대한 보호, 그리고 검증된 산란 개체로 간주되는 V-노치(v notched) 암컷의 포획 금지가 포함됩니다. 바닷가재 어업의 미래는 부분적으로 바닷가재 교배 시스템의 성공 여부에 달려 있는 새로운 가입자의 건강한 공급에 의존합니다. 그러나 전 세계의 다른 갑각류 어업과 마찬가지로, 이 어업의 심한 남획 특성은 이 종의 생식 역학에 영향을 미칠 수 있습니다.따라서, 본 연구의 목적은 성적으로 성숙한 암컷 바닷가재의 교미 성공 여부를 확인하기 위한 간단하고 비침습적인 방법을 개발하는 것이었습니다. 바닷가재의 성별은 왼쪽 이미지에서 볼 수 있듯이 복면을 통해 가장 잘 구별할 수 있으며, 암컷은 주로 평평하고 깃털 모양인 첫 번째 PLE pod 쌍이 특징입니다. 또한 암컷은 수컷이 전달한 정자를 저장하는 타원형의 정자 수용체를 가지고 있습니다.오른쪽에 수컷이 표시되어 있으며, 다소 원추형이며 딱딱한 첫 번째 쌍의 pleopod로 식별할 수 있습니다. 이 gonopod는 정포를 암컷의 정관 수납낭으로 전달하는 것을 돕습니다.또한, SPO 은유가 돌출되는 수컷의 생식공(gono pores)이 표시되어 있습니다. 구애 과정 동안 수컷과 암컷 바닷가재는 화학적 매개 통신과 굴 공유를 포함한 복잡한 행동을 보입니다. 굴 공유 행동은 암컷의 탈피 전후에 모두 발생하며, 이는 수컷에 의한 암컷 보호로 해석될 수 있습니다. 짝짓기는 일반적으로 암컷이 탈피한 후 1시간 이내에 일어나며 매우 짧은 시간 동안만 지속됩니다.수컷은 갓 탈피한 암컷을 등으로 돌려 정자를 수납낭으로 전달합니다. 암컷 바닷가재는 한 번의 교미로 얻은 정자를 2년 이상 저장할 수 있으며, 그 후 알 뭉치를 배출합니다. 알은 암컷 복부 아래쪽의 배다리에 부착됩니다.알의 발달은 일반적으로 9개월에서 11개월이 소요되며 해수 온도에 크게 의존합니다. 알은 봄과 여름에 플랑크톤 유생으로 부화하며, 여러 유생 단계를 거친 후 치어로 바닥에 안착합니다. 본 설명서에서 기술하는 방법은 상업

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Research

연구

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Environment

환경

이 비디오 프로토콜은 자웅동체 민물 달팽이 Lymnaea stagnalis를 사용하여 복족류에서 정액의 영향을 연구하는 방법을 보여줍니다.

복족류 연체 동물의 달걀 누워에 남성 액​​세서리 글 랜드 제품의 효과

이 프로토콜의 목표는 전체 마운트 현장 교잡 및 후속 사전 및 사후 교잡 처리를 준비하기 위해 Lymnaea stagnalis 배아 및 유충의 고처리량 캡슐화 해제를 위한 일련의 방법을 사용자에게 제공하는 것입니다.

전체 산<em&gt; 현장에서</em복족류 연체 동물 용&gt; 하이브리드 방법<em&gt; Lymnaea의 stagnalis</em

여기, 선물이 분리 하 고 특성 구조, 후 각 힘, 및 바다 lampreys의 상 상속 페로몬 화합물의 행동 응답 프로토콜.

생물 검정 기반 분류를 사용 하 여 바다 심고 페로몬의 식별

여기 우리는 개별적으로 시간의 긴 기간 동안 동물을 추적 하는 프로토콜을 제시. 컴퓨터 비전 사례 연구, 집, 하는 방법에 정보를 제공 하는 동시에로 랍 스타의 그룹을 사용 하 여 수동으로 생성 된 태그의 집합을 식별 하는 방법을 조작 및 표시는 랍 스타를 사용 합니다.

Cohoused 수 중 동물의 장기 비디오 추적: 노르웨이 가재 (Nephrops norvegicus)의 매일 운동 활동의 사례 연구

이 프로토콜에서 근 친 십자가 실시 하 고 그 십자가의 성공을 평가 하기 위한 메서드가 개미 Vollenhovia emeryi에 대 한 설명 합니다. 이러한 프로토콜은 실험 Hymenoptera에 섹스 결정 시스템의 유전 기초를 이해 하기 위한 중요 합니다.

유도 및 개미, Vollenhovia Emeryi 를 사용 하 여 근 친 십자가의 평가

이 문서에서는 청소년 태평양 심고에 미국 장 어 마이크로 음향 태그를 이식 하는 절차를 보여 줍니다. 우리의 응용 실험실 실험, 음향 태그의 수영 능력과 생존 또는 최소한의 태그 손실에 명백한 효력 없이 성공적으로 심은 수 있다는 표시를 기반으로 합니다.

청소년 태평양 심고와 미국 장 어에 새로운 마이크로 음향 태그의 주입

우리는 여섯 번째 기본 날개 깃털의 착색과 패턴에 따라 시각적으로 로거 헤드 스리크의 성별을 특성화하는 프로토콜을 제시한다.

시각적으로 섹스 로거 헤드 슈리크(라니우스 루도비키아누스)깃털 착색과 패턴을 사용하여

정자는 성공적으로 난 모 세포를 비료를 통해 이동 해야 합니다. 여기에서, 우리는 C에서 정자 이동 측정에 대 한 분석을 설명 합니다 .  이 분석은 결합 후 자 궁 내 정자 분포에 대 한 정량적 데이터 뿐만 아니라 속도, 방향 속도 및 반전 주파수를 제공 할 수 있습니다.

정자 지도 및 운동 성 아닌 간 남녀 양성 생식 기관에서 측정

민물 홍합 보존은 종의 생식 패턴과 과정을 모니터링하는 데 달려 있습니다. 이 연구는 아가미 내용물 샘플링, 애벌레 개발 특성화 및 수집된 데이터에 대한 디지털 저장소제공을 위한 비치명적인 프로토콜을 표준화합니다. 이 프로토콜 데이터베이스 패키지는 홍합 연구원이 임페실 종의 회복에 중요한 도구가 될 것입니다.

민물 홍합의 생식 상태 및 애벌레 개발을 특성화하기위한 비 치명적인 방법 표준화 (비발비아 : 유니온니다)

열 도전 중 심박수를 측정하면 급성 환경 변화의 결과로 생물의 생리적 반응에 대한 통찰력을 제공합니다. 모델 유기체로 미국 랍스터(Homarus americanus)를사용하여,이 프로토콜은 후기 무척추 동물에서 심장 박동을 측정하기 위해 상대적으로 비 침습적이고 비치명적인 접근법으로 임피던스 폐포의 사용을 설명합니다.

후기 무척추 동물에서 심박수의 최소 침습 측정을 위한 임피던스 폐색술

여기에서 우리는 모델 유기체 C. elegans를 사용하여 배아 생존력과 생산된 배아(새끼)의 총 수를 결정하는 일반적인 방법을 제시합니다.

Caenorhabditis elegans의 배아 생존력 및 무리 크기 측정

배우세요 미국바닷가재(Homarus americanus) 암컷의 비침습적 교미 성공 평가 방법을. 현장에서 생식력 지표를 채취하여 어업 관리와 개체군 지속가능성을 평가하는 기술입니다.

에 대한 비 침습적 방법

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