Live Imaging Assay for Assessing the Roles of Ca<sup>2+</sup> and Sphingomyelinase in the Repair of Pore-forming Toxin Wounds

Christina Tam; Andrew R. Flannery; Norma Andrews

doi:10.3791/50531

CA의 역할을 평가하기위한 영상 분석을 라이브 2 +와 Sphingomyelinase

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Biology

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Live Imaging Assay for Assessing the Roles of Ca²⁺ and Sphingomyelinase in the Repair of Pore-forming Toxin Wounds

CA의 역할을 평가하기위한 영상 분석을 라이브 2 +와 Sphingomyelinase

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18:25 min

August 25, 2013

DOI: 10.3791/50531-v

Christina Tam¹, Andrew R. Flannery¹, Norma Andrews¹

¹Department of Cell Biology and Molecular Genetics,University of Maryland

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

친 유성 염료 FM1-43에 노출 된 세포의 라이브 영상은 기공 형성 독소는 세포막에서 제거되는 반응 속도의 정밀한 결정을 허용한다. 이것은 CA에 대한 요구 ^{사항이 +,} sphingomyelinase 및 세포막 수리 및 다른 인자를 평가하는 데 사용될 수있는 민감한 분석이다.

이 절차의 전반적인 목표는 생세포 이미징에서 친유성 염료 FM 1 43을 활용하여 원형질막에서 성능이 좋지 않은 독소 제거의 정확한 동역학을 측정하는 것입니다. 이것은 먼저 섭씨 4도에서 독소를 사전 결합함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 접시를 가열된 현미경 스테이지로 옮기고 세포를 시각화할 수 있는 초점면을 찾는 것입니다.

그런 다음 적절한 예열 매체를 추가하고 즉시 이미징을 시작합니다. 마지막 단계는 세포 내 FM 1 43 형광을 분석하고 정량화하는 것입니다. 궁극적으로 이 민감한 분석은 칼슘, fingal, myelin 및 기타 원형질막 복구에 대한 요구 사항을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

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