Metabolic Labeling and Membrane Fractionation for Comparative Proteomic Analysis of <em>Arabidopsis thaliana</em> Suspension Cell Cultures

Witold G. Szymanski; Sylwia Kierszniowska; Waltraud X. Schulze

doi:10.3791/50535

비교 단백체 분석을위한 신진 대사 라벨링 및 막 분별 애기 장대 서스펜션 세포 배양

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Biology

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Metabolic Labeling and Membrane Fractionation for Comparative Proteomic Analysis of Arabidopsis thaliana Suspension Cell Cultures

비교 단백체 분석을위한 신진 대사 라벨링 및 막 분별 애기 장대 서스펜션 세포 배양

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11:44 min

September 28, 2013

DOI: 10.3791/50535-v

Witold G. Szymanski¹, Sylwia Kierszniowska¹, Waltraud X. Schulze^1,2

¹Signaling Proteomics,Max Plank Institute of Molecular Plant Physiology, ²Department of Plant Systems Biology,University of Hohenheim

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

여기에서 우리는 완전히 ¹⁵ N 표시 애기 장대 세포 배양 레이블의 혼합물에 따라 세제 저항하고 세제 용해 막에 식물 세포막의 분별과 생체 내에서 강력한 방법을 설명합니다. 절차는 시그널링 프로세스를 이해하기 위해, 비교 단백체 연구에 적용된다.

다음 실험의 전반적인 목표는 서로 다른 멤브레인 하위 구획을 분리하고 이들의 차등 단백질 구성을 연구하는 것입니다. 이는 처리의 분화를 허용하기 위해 다양한 조건에서 세포의 안정적인 동위원소 표지를 통해 달성됩니다. 질량 분석 분석에서는 두 번째 단계로 두 가지 처리의 세포 물질이 혼합되어 공동 처리를 보장하고 시료 간 변동을 줄입니다.

다음으로 원형질막 하위 구획은 정제되고 자당에 의해 멸균되고 풍부하며 멸균된 고갈된 하위 구획으로 분리됩니다. 구배 원심분리 결과는 정량적 질량 분석법의 데이터를 기반으로 다양한 처리에서 하위 구획의 차등 단백질 풍부도를 보여주는 결과를 얻습니다. 웨스턴 블로팅(Western blotting)과 같은 기존 방법에 비해 이 프로토콜의 주요 장점은 수천 개의 단백질의 하위 구획 분포를 정량적으로 기록하여 신호 전달 과정에 대한 새로운 후보를 발견할 수 있다는 것입니다.

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