보존 해부 조직 본래대로 마우스 비강 조직을 준비하는 효과적인 수동 발골 방법

안녕하세요, UMBC의 Dr.Wung Lynn 연구실의 David Dunton입니다. 이 영상에서는 해부학적 구조가 보존된 마우스 비강 조직을 준비하는 효과적인 기술을 소개합니다. 이 기술을 통해 호흡 및 후각, 상피 및 상피 하 조직을 포함하여 비강 조직의 거의 전체를 포함하는 단일 표본을 얻을 수 있습니다.

본 영상에서는 주 후각 상피의 말단과 같은 매우 섬세한 조직까지 보존하면서 비강 조직 주변의 다양한 안면골을 단계별로 제거하는 방법을 보여줍니다. 우리의 방법은 가혹한 화학적 처리를 피할 수 있고 20분에서 30분 이내에 골 제거를 완료할 수 있어 탈칼슘법에 비해 상당한 이점이 있습니다. 이 기술의 또 다른 장점은 마우스의 연령에 제한을 받지 않으며, 고정된 조직이나 신선한 조직 모두에 적용 가능하다는 점입니다.

이러한 장점들 덕분에 본 기술은 형태학적, 면역조직화학적 및 생리학적 연구에 이상적입니다. 여기 두개골과 코 뼈의 배측면을 나타낸 모식도를 보여드립니다. 본 영상에서는 코 뼈의 해부에 집중하여 설명하겠습니다.

이것은 두개골과 코 뼈의 복측면을 나타낸 모식도입니다. 상단에는 해부되지 않은 두개골과 코가, 하단에는 해부된 코가 배치된 배측도입니다. 현재 주후각상피의 말단 부위가 표시되어 있습니다.

여기에서는 배측면부터 시작하여 코의 뼈들을 보여줍니다. 이 부분은 관골판의 배측이며, 그 뒤로 관골궁이 이어집니다. 이것은 비골이며, 다음으로 보이는 것은 그 아래에 위치한 체판입니다.

가장 앞쪽에는 grunberg 신경절이 위치합니다. 외측 관점에서 보면, 인간의 후각 상피 비갑개를 덮고 있는 사골의 일부와 grunberg 신경절, 상악골, 그리고 앞쪽 절치를 확인할 수 있습니다. 복측 관점으로 전환하여 구치, 앞쪽 절치, 구개골 및 설골을 보여주었습니다.

코의 복측면을 확인하여 vulner bone 제거를 시작합니다. vulner bone을 제거하려면, 포셉을 사용하여 vulner bone의 길이를 따라 부러뜨린 다음, 하부 조직에 있는 RO nasal organ의 손상을 방지하기 위해 뼈 조각들을 밀어내어 제거합니다. 이 작업 시, 전치(front incisors)의 복측 부분을 부러뜨리기 위해 jurors를 사용하십시오.

클램핑 동작을 사용하여 앞니를 울머 뼈(ulmer bone)가 있는 방향으로 부러뜨립니다. 앞니를 부러뜨린 후, 포셉을 사용하여 조직에 연결된 나머지 뼈 파편들을 제거합니다. 상악골을 분리하기 위해 복측면부터 시작하여 관골궁(zygomatic arch) 바로 복측 부분의 상악골을 부러뜨립니다.

코 부분을 등쪽으로 뒤집고 관골궁 바로 앞쪽의 상악골을 절단합니다. 상악골을 느슨하게 하여 비골의 우측을 제거하려면, 비골 우측의 전두골 돌출부 잔여물을 깨끗이 제거하십시오. 이 작업에는 론저(Rongeur)를 사용합니다.

비판(cribriform plate)이 얇아 손상될 경우 코가 반으로 갈라질 수 있으므로, Ron-jurors를 사용할 때는 각별히 주의해야 합니다. 파손된 뼈를 위로 들어 올려 제거하십시오. 다음으로, 관골판(zygomatic plate)의 배측 부분을 하부 조직으로부터 멀어지도록 뒤집어 젖히십시오.

비골의 정중선을 따라 분리합니다. 포셉이나 지우개를 사용하여 포셉으로 뼈를 잡고, 위로 들어 올리면서 뼈를 좌우로 부드럽게 움직입니다. 뼈를 제거하는 동안 하부 조직이 손상되기 쉬우므로 이 과정은 매우 세심하게 수행해야 합니다. 뼈가 제거되면 이 정지 영상에 표시된 것처럼 하부 조직을 개별적으로 확인할 수 있습니다.

뼈를 제거하려면 포셉이나 가위를 사용하여 절단하십시오. 이제 전상악(anterior maxilla)을 제거하십시오. 아직 제거되지 않은 경우, 전상악은 이미 느슨해진 상태이므로 조직에 남아 있는 연결 부위를 끊어 제거합니다.

U 배측 관점에서 비골의 바로 왼쪽에 위치한 전두골을 제거하십시오. Ron jurors를 사용하여 전두골을 분쇄하십시오. raw jaws 또는 포셉을 사용하여 해당 전두골 조각을 제거할 수 있습니다.

이때 상악골을 느슨하게 할 수도 있지만, 반드시 필요한 과정은 아닙니다. 비골의 왼쪽 부분을 제거하려면, 포셉을 사용하여 비골을 주변의 여러 뼈로부터 조심스럽게 분리하십시오. 그런 다음 포셉으로 이 뼈를 잡고, 위로 들어 올리면서 뼈를 좌우로 부드럽게 움직여 비골을 하부 조직으로부터 분리하십시오.

하부 조직이 뼈에서 분리됨에 따라, 때로는 측면 시야를 통해 뼈에 연결된 조직을 확인할 수 있습니다. 포셉을 사용하여 뼈에 연결된 조직을 조심스럽게 분리한 다음, 가위나 포셉을 사용하여 비골을 제거하십시오. 코의 왼쪽 전상악골 또한 오른쪽 전상악골을 제거할 때와 동일한 기술을 사용하여 제거하십시오.

다음 단계는 코 왼쪽의 관골판(zygomatic plate)을 제거하는 것입니다. 관골판과 하부 조직이 여전히 일부 부착되어 있을 수 있으며, 이 경우 핀셋을 사용하여 관골판의 등쪽 부분을 부드럽게 집어 느슨하게 만들 수 있습니다. 코의 배쪽 면을 확인하십시오.

어금니와 구개골을 식별하기 위해, 어금니 또는 구개골 중 하나를 제거할 수 있습니다. 먼저, 이것은 코의 측면 모습이며, 이 뷰에서는 코 오른쪽의 어금니를 제거하는 과정을 보여줍니다. 상악골 오른쪽이 제거된 URS를 사용하여 구개골을 제거합니다.

다음으로, 남은 상악골과 구치부를 부수고 구개골이나 상악골에서 큰 뼈 파편을 모두 제거합니다. 비상피 쪽으로 돌출된 남은 사골 조각들을 부수어 제거합니다. 미세 핀셋을 뼈 아래에 놓고 뼈를 위로 들어 올려 하부 조직으로부터 분리합니다.

또는 여기에서 보여주는 것처럼 Rogers를 사용하여 뼈를 부러뜨린 다음, 미세 핀셋을 사용하여 뼈를 아래쪽 조직에서 분리하십시오. 이것이 사람 후각 상피의 비갑개 모습입니다. 비갑개 뼈가 제거되면, 이 뼈가 제거될 것입니다.

다음으로, 비골의 외측 및 내측에 위치한 이 뼈를 론저(rongeurs)를 사용하여 제거합니다. 이 단계에서는 체판(cribriform plate)이 손상되지 않도록 주의하십시오. 뼈가 부러지면 핀셋을 사용하여 해당 뼈를 제거합니다.

다음은 코 부분의 모습입니다. 이 뼈를 제거한 후, 마지막으로 확인해야 할 부위는 V nasal organ 주변입니다. 이번 해부 과정에서 지금 막 제거하고 있는 V nasal organ의 쌍을 이룬 관들을 분리하는 뼈가 있기 때문입니다.

본 영상은 저희의 기술을 사용하여 해부한 코의 배측 시점입니다. 다음으로, 코의 다양한 측면을 보여주기 위해 코를 회전시켰습니다. 배측면, 이어서 코 왼쪽의 측면, 그리고 복측면의 모습입니다.

이제 저희의 기술을 사용하여 완전히 박리된 코의 특징을 비강 배측부터 시작하여 상세히 보여드리겠습니다. 먼저 보여드릴 부분은 주 후각 상피의 비갑개입니다. 비골 아래의 조직에 기포가 존재하며, 이 기포들은 시료를 측면에서 진공 흡입하여 제거합니다.

사람 후각 상피의 온전한 비갑개를 보여줍니다. 비갑개 내부에 기포가 존재함에 유의하십시오. 선 조직은 비갑개의 앞쪽에 위치하며, 이 측면 관찰 시점에서는 호흡 상피가 보입니다.

복측 관점에서 보면 취약한 비기관이 보입니다. 이 사진은 해부 기술의 확장 사례로, 하나의 표본에서 뇌의 후각구와 코를 함께 제거한 모습을 보여줍니다. 절편 제작을 위해 조직을 준비하려면, 먼저 플라스틱 몰드를 가져와 최적 절단 온도 매질(OCT compound)로 채웁니다.

관심 조직을 채워진 몰드에 넣고, 플라스틱 웨이 디쉬(way dish) 위에 실리콘 그리스로 그린 원 안에 몰드를 배치합니다. 진공 밀봉을 위해 실리콘 그리스 원 위에 플라스크를 올려놓습니다. 본 실험실에서는 흐르는 물을 이용해 진공 상태를 만듭니다. 물이 흐르면서 진공이 형성되면, 조직 내의 기포가 제거됩니다.

물을 끄고 튜브를 분리하여 진공 상태를 해제합니다. 다음으로 플라스틱 몰드를 꺼냅니다. 여기서는 조직을 동결시키기 전에 원하는 방향으로 위치를 조정하고 있습니다.

저희 실험실에서는 조직을 급속 동결하기 위해 드라이아이스를 사용합니다. 다음은 저희의 해부 기술을 이용하여 코를 절단하고 뉴트럴 레드로 염색한 대표적인 결과입니다. 이것은 주 비갑개의 상피, 선 조직 및 호흡 상피를 보여주는 수평 단면입니다.

두 번째 단면은 주 후각 상피의 비갑개에서 나타나는 복잡한 접힘 패턴을 보여주는 관상 단면입니다. 본 영상에서는 코의 뼈를 수동으로 제거하여 면역 조직 화학적 또는 생리학적 연구의 형태학적 분석에 이상적인 표본을 얻는 기술을 소개합니다.