정자 경쟁의 능력에 대한 평가의 차이 초파리

다음 실험의 전반적인 목표는 뚜렷한 유전자형을 가진 초파리, 멜라노가스터 수컷 간의 정자 경쟁 능력의 차이를 테스트하는 것입니다. 이것은 두 개의 다른 수컷과 짝짓기를 한 암컷에서 자손의 친자관계를 식별하는 가시적인 유전 마커를 추적함으로써 달성되며, 분석에서 유전자형은 암컷이 먼저 참조 수컷과 짝짓기를 한 다음 실험 수컷과 짝짓기를 할 수 있습니다. 실험 수컷에 의해 자손의 비율은 자손의 눈 색깔을 조사하여 추론됩니다.

그 결과는 실험용 남성 정자의 상대적 성능에 의한 경쟁 능력을 참조 남성 정자에 대한 간접적으로 비교합니다. 이러한 방법은 유전적 요인이 SPR 경쟁 능력에 미치는 영향을 평가하는 것과 같은 생물학 분야의 유전학 및 진화의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있으며, 이 절차는 우리 실험실의 S 및 학부생이 될 것임을 보여줍니다. 다음 프로토콜은 정자 운동성에 관여하는 단백질을 암호화하는 것으로 추정되는 sic이라는 유전적 요인의 분석을 보여줍니다.

각 바이알에 15-20개의 바이알을 설정하는 것으로 시작합니다. 미디어에 건조된 활성 효모 펠릿 몇 개를 가볍게 뿌립니다. ove 위치를 용이하게 합니다.

항상 옥수수 가루 효모 배지와 같은 신선한 영양 매체를 사용하십시오. 그런 다음 각 바이알에 8-10명의 암컷을 추가하되 그 이상은 하지 말고 5명의 수컷을 추가합니다. 성 식별은 몇 가지 형태학적 차이에 대한 육안 검사를 통해 달성할 수 있습니다.

바이알을 섭씨 25도에서 보관하고 성인은 최소 3-5일마다 새 바이알로 옮깁니다. 최상의 결과를 위해 격일로 성인을 옮기십시오. 자손을 수확하기 위해 바이알이 들어있는 난자를 보관하십시오.

필요한 바이알의 수는 연구에서 실험적인 남성 유형의 수와 통계적 검정력에 필요한 추정 개체 수에 따라 달라집니다. 부모가 바이알 밖으로 옮겨진 후 4-5일 후, 여러 번 접힌 종이를 배지에 삽입하여 바이알에서 번데기가 가능한 표면을 늘립니다. 바이알에 검게 변한 번데기가 보이면 검사합니다.

그 파리들은 십자가가 처음 세워진 후 11일에서 12일 후인 24시간 이내에 나타날 것입니다. 이 유리병에서 처녀 암컷과 순진한 수컷을 수확하기 시작하십시오. 아침에 가장 먼저 해야 할 일은, 밤새 출현한 파리를 버리는 것입니다.

그런 다음 하루에 한두 번 4-6시간 간격으로 바이알에서 파리를 채취하고 바이알에 이산화탄소를 주입하여 파리를 마취합니다. 그런 다음 파리를 아래로 탭하고 실체 현미경 아래에서 성교합니다. 원하는 파리를 성별과 표현형에 따라 다른 바이알에 넣고 바이알에 적절하게 라벨을 붙입니다.

바이알에 잠재적으로 10개 이상을 넣지 마십시오. 처녀 암컷은 파리에 12-12 밝은 어두운 주기를 설정하여 폐색 시간을 당신에게 유리하게 조절합니다. 오클루전의 최대 시간은 주관적인 새벽 1-2시간 후, 조명이 꺼지기 2시간 전에 발생합니다.

이 실험에는 두 가지 버전이 있습니다. 이를 공격 분석(Attack Assay) 및 방어 분석(Defense Assay)이라고 합니다. 이 섹션에서는 첫날 아침에 공격 분석을 수행하고 흡인기기를 사용하여 첫 번째 짝짓기를 설정하는 방법에 대해 설명합니다.

흡인기는 피펫 팁에 부착된 튜브 조각으로 구성되며, 팁에 흡인된 파리를 유지하는 바리케이드가 있습니다. 팁의 구멍이 넓어집니다. 파리의 경우 4일 또는 5일 된 처녀 암컷 10마리가 들어 있는 유리병을 설정합니다.

10명의 순진한 참조 수컷과 함께 5일 연속으로 매일 2-3개의 바이알을 설정했습니다. 각 바이알에 대해 파리가 2시간 동안 짝짓기를 하도록 한 다음 기준 수컷을 버리고 각 바이알에 V를 하나씩 라벨을 붙이는 흡인기를 사용하여 각 암컷을 새 바이알에 옮기고 암컷을 이틀 동안 바이알에 그대로 둡니다. 셋째 날에는 각 암컷에 대해 다른 유전자형의 순진한 수컷에게 두 번째 짝짓기를 설정합니다.

주관적인 해질녘 2시간 전에 흡인기(aspirator)를 사용하여 암컷을 동일한 유전자형을 가진 3일, 5일 또는 6일 된 실험 수컷이 있는 새 바이알로 옮깁니다. 바이알에 남성 유전자형을 표시하고 새 바이알에 V 2라는 라벨을 붙입니다. 다음 날 아침은 4일째입니다.

파리가 주관적으로 날아다니기 2시간 전, 새벽은 흡인기기를 사용하여 수컷을 버립니다. 여섯째 날에는 각 암컷을 V three라고 표시된 다른 새 바이알로 옮깁니다. 10일째 되는 날, 17일째 되는 날에 암컷을 버립니다.

자손의 V one 바이알을 검사합니다. 암컷이 참조 메일과 짝짓기를 할 때 처녀였는지 여부와 참조 메일과 짝짓기를 했는지 여부를 확인합니다. 같은 날, V 두 바이알에서 자손을 탄소로 파리를 두드려 검사합니다.

눈 색깔과 성별에 따라 정렬하십시오. 그런 다음 첫 번째와 두 번째 수컷이 낳은 자손 번호를 기록하십시오. 이 실험에서는 참조 또는 실험 남성이 인용한 대로 암컷 자손만 명확하게 할당할 수 있습니다.

다른 실험에서는 수컷 자손의 친자 관계를 결정하기 위해 다양한 유전 마커를 사용할 수도 있습니다. 검사한 자손은 버리고 V 두 바이알은 잠시 동안 보관하십시오. 20일째 검사, V 2 바이알에서 자손의 친자 관계를 두 번째로 기록하고 V 3 바이알에서 나온 자손의 1차 검사를 수행합니다.

그런 다음 3 일 후 23 일째에 V 3에서 출현 한 자손을 검사합니다. 다시 말하지만, 기록된 자손 수는 각 암컷에 대한 통계 패키지와 V 2 및 V 3의 수를 사용하여 쉽게 육안 검사와 효율적인 분석을 할 수 있도록 적절하게 구성되어야 합니다. 기준 수컷과 실험 수컷이 인용한 총 자손 수를 계산하려면 각 암컷에 대한 P 2 점수를 실험 수컷과 참조 수컷 모두의 자손에서 실험 수컷이 인용한 자손의 비율로 계산합니다.

일부 암컷은 분석에서 제외해야 합니다. 첫 번째는 자손이 없거나 매우 제한된 자손, 두 번째 암컷은 시술 중에 사망한 암컷, 세 번째는 두 수컷 중 한 명에 의해서만 성공적으로 수정되었습니다. P 두 값에서 통계적 차이를 찾습니다.

실험적 남성 유형 중에는 P 두 값 분포의 왜도와 분산과 평균 비율 간의 종속성을 기반으로 하는 모수 또는 비모수 테스트를 사용합니다. 데이터는 일반적으로 정규 분포를 따르지 않습니다. 각도 변환이라고도 하는 호 부호 변환은 학생의 T-테스트 또는 NOVA 테스트 전에 원래 P 두 값에 적용하거나 초파리 멜라노가스터를 사용한 WIL Coxin 두 가지 공격 실험과 같은 비모수 테스트를 사용할 수 있습니다.

실험 수컷은 기능적 ESIC 클러스터가 있는 경우와 없는 상태에서 수행되었습니다. 전체적으로 여성의 58%에서 83%가 정보를 제공했다. 기능적 배아형성 군집이 없는 수컷은 온전한 배변 군집이 있는 수컷에 비해 P 2 점수가 현저히 낮았습니다.

이는 SIC 클러스터가 정자의 경쟁 능력을 향상시킨다는 것을 나타냅니다. 이 비디오를 시청한 후에는 이중 짝짓기 실험을 수행하는 방법을 잘 이해하게 되어 돌연변이 수컷과 대조군 수컷 간의 정자 경쟁 능력의 차이를 감지할 수 있습니다.