전립선 발암 및 양성 전립선 비대증의 평가를위한 신장 캡슐 Xenografting 및 피하 펠렛 주입

이 비디오에 설명된 기술은 발암 및 전립선의 양성 성장에 대한 호르몬 조절을 평가하는 실험에 유용합니다. 첫 번째 항소 프레스는 지속적인 투여를 허용하는 호르몬 펠릿을 만드는 데 사용됩니다. 다음으로, 둥근 끝이 있는 유리 피펫은 신장을 외부로 내민 후에 준비합니다.

피펫 팁은 이식편 삽입을 돕는 데 사용됩니다. 그런 다음 압축된 호르몬 펠릿을 피하에 이식합니다. 궁극적으로, 양성 조직 이종이식편의 성장에 대한 호르몬 치료의 효과를 보여주는 결과가 얻어집니다.

이 비디오에 제시된 기술은 수행이 간단하고 재현성이 있습니다. 이 방법은 양성 세포가 악성 종양으로 변형되는 데 호르몬이 어떻게 관여하는지, 전립선의 양성 성장이 호르몬에 의해 어떻게 조절되는지와 같은 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 의미는 양성 보철 증식증 및 전립선암에 대한 잠재적인 새로운 치료법 및 예방 전략으로 확장됩니다.

일반적으로 이 기술을 처음 접하는 개인은 신장 캡슐의 기술적 측면에 어려움을 겪을 것입니다. 이종 이식 펠릿은 적절한 보호 장비를 착용한 상태에서 화학 안전 후드에서 준비되어 교차 오염을 방지하기 위해 70% 에탄올로 펠릿 제조 장비를 철저히 청소하기 시작합니다. 다음으로, 원하는 양의 호르몬 분말의 무게를 측정하여 압착 중 손실을 수용하기 위해 약 5%의 추가 재료를 허용합니다.

일부 호르몬에는 결합제 또는 충전제가 필요하며, 이는 펠릿 제조업체 이전에 혼합됩니다. 여기서 에스트라디올은 콜레스테롤 충전제와 결합되어 25mg 펠릿을 만듭니다. 모든 것이 계량되고 결합되면 분말을 dset으로 옮깁니다.

염료를 프레스 아래에 놓고 레버를 아래로 단단히 눌러 펠릿을 압축합니다. 일정한 압력을 사용하여 일정한 표면적 대 부피 비율을 유지하십시오. 그런 다음 염료 홀더를 뒤집고 레버를 다시 아래로 눌러 펠릿을 분리합니다.

펠릿의 무결성을 검사하고 최종 질량이 원하는 범위 내에 있는지 확인합니다. 펠릿은 수술 전에 만들 수 있으며 적절한 보호구를 착용한 상태에서 사용되는 호르몬 또는 약물의 안정성에 따라 보관할 수 있습니다. 유리 페이스트리 피펫의 끝을 화염, 분젠 버너에 통과시켜 불로 광택이 나는 둥근 팁을 만듭니다.

핫스팟을 피하기 위해 피펫을 일정하고 약간 움직입니다. 다음으로, 피펫을 약 60도 각도로 화염에 넣어 곡선형의 둥근 팁을 만듭니다. 이 팁은 신장 캡슐 아래에 이식을 위한 주머니를 만드는 데 사용됩니다.

수술 절차를 시작하기 전에 필요한 모든 기구를 소독하고 작업 영역을 준비하십시오. 동물이 적절하게 마취되면 베타딘과 알코올을 반복적으로 사용하여 수술 부위를 소독합니다. 멸균 커튼을 해당 부위에 적용한 후 2-3cm 등쪽 정중선 절개를 수행합니다.

다음으로, 체벽에서 밑에 있는 진피를 분리합니다. 양측 이식의 경우 절개 부위의 양쪽을 분리하거나 편측 이식의 경우 한쪽만 분리합니다. 분리되면 마우스를 측면 위치에 놓고 근육 벽을 통해 신장 프로파일을 보면서 신장을 찾습니다.

엄지와 검지로 부드럽게 압력을 가하면 미세한 홍채 가위를 사용하여 내부 장기를 시각화하고 주요 혈관과 척추 신경을 피하는 데 도움이 될 수 있습니다. 척추와 평행하게 체벽을 1cm 절개합니다. 가위를 부드럽게 더 넓게 벌려 절개 부위를 1.5cm에서 2cm 정도로 넓힙니다.

초기 절개 부위에 삽입한 후 신장 양쪽의 근육 벽 바깥쪽에 부드러운 압력을 가하여 신장을 외부로 내압합니다. 다음으로, 체벽에 놓일 외부 신장 아래의 피부 가장자리를 밀어 넣습니다. 다른 구조도 존재하는 경우, 신장이 외부로 돌출되어 있는 동안 부드럽게 집어넣을 수 있습니다.

멸균 식염수를 도포하여 신낭의 수분을 유지하십시오. 신장 캡슐을 부드럽게 들어 올려 2-4mm를 절개합니다. 절개 부위의 크기는 이식편의 크기에 따라 결정되지만 캡슐의 무결성을 유지하기 위해 최소화해야 합니다.

이전에 준비한 피펫의 둥글고 닫힌 끝을 신장 표면에 접하는 캡슐 아래에 삽입합니다. 삽입되면 신장이 손상되지 않도록 세심한 주의를 기울여 이식편을 위한 작은 주머니를 부드럽게 엽니다. 실질 조직 이식편은 외과적 절제 중에 얻은 신선한 전립선 조직으로 준비됩니다.

신장 캡슐의 절단된 가장자리를 들어 올리고 이식편을 주머니에 삽입합니다. 피펫 팁을 사용하여 여러 이식편을 신장 캡슐 아래에 놓고 신장 표면에 균일한 간격으로 배치할 수 있습니다. 이식이 완료되면 절개 부위의 근육 벽 측면을 부드럽게 들어 올려 신장을 체강으로 다시 교체합니다.

이식편이 캡슐 아래에서 미끄러지지 않도록 하십시오. 피하 펠릿 이식을 진행하기 전에 근육 벽을 봉합하기 위해 단일 봉합사를 사용합니다. 이식이 완료되면 두개골 방향으로 체벽에서 기저의 진피를 분리합니다.

호르몬 펠릿을 잡고 주머니를 만들기 위해 피부 절개 부위의 두개골 부분을 부드럽게 들어 올리고 곧은 톱니 모양의 집게로 부드럽게 펠릿을 목덜미에 삽입합니다. 톱니가 있는 집게를 사용하여 피부 가장자리를 정렬하고 절개 부위를 봉합하기 위해 2-3개의 수술 상처 클립을 적용합니다. 이 예시에서는 양성 전립선 비대증 환자의 1차 조직 이종이식편에 외인성 테스토스테론을 보충했습니다.

한 달 동안 화살촉은 이종 이식 위치를 나타냅니다. 신낭 이식은 호르몬 발암을 평가하는 데에도 사용할 수 있습니다. 여기서, 양성 전립선 상피와 유도성 비뇨생식기 기계(inductive urogenital mechy)를 포함하는 세포 재조합 물질은 치료되지 않은 마우스에서 양성 성장을 형성합니다.

이 예시에서는 4개월 동안 피하 테스토스테론과 에스트라디올 펠릿을 투여받은 숙주에서 동일한 이식편을 성장시켜 신낭을 침범하는 전립선 암종을 선택했습니다. 이 동영상을 시청한 후에는 압축 호르몬 펠릿을 제조하고 이식하는 방법, 수술을 위한 화염 광택 유리 피펫을 만드는 방법과 신장 캡슐 이종 이식편을 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 이 절차를 시도할 때 신낭을 부드럽게 다루고 수분을 유지하며 신장 실질이 손상되지 않도록 하는 것을 기억하는 것이 중요합니다.

R-N-A-D-N-A 또는 관심 단백질을 검출하기 위한 조직학, 면역조직화학 및 분자 기술과 같은 다른 방법을 수행할 수 있습니다. 이를 통해 관찰된 양성 또는 악성 성장의 특성을 더 잘 평가할 수 있습니다. 이러한 실험에 사용되는 호르몬은 잠재적으로 기형 유발 및 발암성일 수 있다는 것을 잊지 마십시오.

압축 호르몬 펠릿 제조업체는 항상 화학 안전 후드에서 수행해야 합니다. 이 비디오에 설명된 절차의 각 단계에 대해 항상 적절한 개인 보호 장비를 착용해야 합니다.