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유전자 인코딩 분자 프로브는 G 단백질 결합 수용체를 연구하는
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JoVE Journal Biology
Genetically-encoded Molecular Probes to Study G Protein-coupled Receptors

유전자 인코딩 분자 프로브는 G 단백질 결합 수용체를 연구하는

Full Text
15,789 Views
16:16 min
September 13, 2013

DOI: 10.3791/50588-v

Saranga Naganathan1, Amy Grunbeck1, He Tian1, Thomas Huber1, Thomas P. Sakmar1

1Laboratory of Chemical Biology and Signal Transduction,The Rockefeller University

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

우리의 GPCR의 다양한 타겟 위치에 부 자연스러운 아미노산, P-아지도-L-페닐알라닌을 유전자 인코딩 및 다른 응용 프로그램에서 아지 그룹의 다양성을 보여줍니다. 이들은 GPCR의 리간드 결합 주머니에 잔류를 확인하는 대상으로 광 가교 기술 및 펩티드 에피토프 태그 또는 형광 프로브의 GPCR의 특정 사이트 bioorthogonal 수정이 (가) 있습니다.

다음 실험의 전반적인 목표는 신호 복합체의 구조적 및 동적 연구를 용이하게 하기 위해 표적 G-단백질 결합 수용체에 단일 정보 프로브를 도입하는 것입니다. 이는 비자연스러운 아미노산 zeto, phenylalanine 또는 zeto fee를 발현된 GPCR에 통합하기 위해 필요한 번역 기계를 발현하는 데 필요한 플라스미드로 세포를 transection함으로써 달성됩니다. 그런 다음 GPCR 제토 수수료 분산을 세 가지 다른 방법으로 적용하여 수용체의 구조와 기능을 조사할 수 있습니다.

첫째, 제토 수수료는 GPCR에서 광활성화 교차결합제로 사용되며, 이를 통해 삼중화 리간드의 결합 부위를 식별할 수 있습니다. 다음으로, 생체 직교 라벨링 화학 물질을 통해 GPCR에 펩타이드 접합 또는 형광 프로브를 부착하기 위해 zeto fee를 반응성 화학 물질로 사용할 수 있으며, 이는 살아있는 세포 및 생화학적 방법을 기반으로 한 GPCR의 표적 광 가교, 표적 에피토프 태깅 및 형광 라벨링에서 분자 프로브 zeto fee의 사용을 보여주는 결과를 얻습니다. 사진 친화성 리간드 또는 시스테인 라벨링의 사용과 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 표적 수용체의 알려진 위치에 생물학적으로 불활성이고 반응성이 높은 비천연 아미노산 P zeto 페놀 알라닌을 구체적으로 도입할 수 있는 유연성입니다.

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유전학 제 79 수용체 G는 - 단백질 결합 단백질 공학 신호 전달 생화학 부 자연스러운 아미노산 부위 특이 적 변이 G 단백질 결합 수용체를 대상으로 광 가교 bioorthogonal 라벨은 에피토프 태그를 대상으로

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