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DOI: 10.3791/50588-v
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우리의 GPCR의 다양한 타겟 위치에 부 자연스러운 아미노산, P-아지도-L-페닐알라닌을 유전자 인코딩 및 다른 응용 프로그램에서 아지 그룹의 다양성을 보여줍니다. 이들은 GPCR의 리간드 결합 주머니에 잔류를 확인하는 대상으로 광 가교 기술 및 펩티드 에피토프 태그 또는 형광 프로브의 GPCR의 특정 사이트 bioorthogonal 수정이 (가) 있습니다.
다음 실험의 전반적인 목표는 신호 복합체의 구조적 및 동적 연구를 용이하게 하기 위해 표적 G-단백질 결합 수용체에 단일 정보 프로브를 도입하는 것입니다. 이는 비자연스러운 아미노산 zeto, phenylalanine 또는 zeto fee를 발현된 GPCR에 통합하기 위해 필요한 번역 기계를 발현하는 데 필요한 플라스미드로 세포를 transection함으로써 달성됩니다. 그런 다음 GPCR 제토 수수료 분산을 세 가지 다른 방법으로 적용하여 수용체의 구조와 기능을 조사할 수 있습니다.
첫째, 제토 수수료는 GPCR에서 광활성화 교차결합제로 사용되며, 이를 통해 삼중화 리간드의 결합 부위를 식별할 수 있습니다. 다음으로, 생체 직교 라벨링 화학 물질을 통해 GPCR에 펩타이드 접합 또는 형광 프로브를 부착하기 위해 zeto fee를 반응성 화학 물질로 사용할 수 있으며, 이는 살아있는 세포 및 생화학적 방법을 기반으로 한 GPCR의 표적 광 가교, 표적 에피토프 태깅 및 형광 라벨링에서 분자 프로브 zeto fee의 사용을 보여주는 결과를 얻습니다. 사진 친화성 리간드 또는 시스테인 라벨링의 사용과 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 표적 수용체의 알려진 위치에 생물학적으로 불활성이고 반응성이 높은 비천연 아미노산 P zeto 페놀 알라닌을 구체적으로 도입할 수 있는 유연성입니다.
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