경골 신경 절개 - 마우스의 탈 신경에 의한 골격근의 위축에 대한 표준 모델

이 비디오의 전반적인 목표는 마우스의 골격근 위축에 대한 경골 신경 절개 모델을 시연하는 것입니다. 이것은 좌골 신경과 그 세 가지 가지, 즉 경골 신경, 실리 신경, 비골 신경을 분리함으로써 이루어집니다. 일단 분리되면 경골 신경이 절제됩니다.

탈신경 후 상처를 봉합하고 동물의 상태를 면밀히 모니터링합니다. 궁극적으로, 탈신경 후 근육 질량의 점진적인 감소를 보여주는 샘플이 얻어집니다. 탈신경작용 유도 골격근 위축의 경골 신경 절개 모델은 쥐에서 잘 검증된 모델에서 일반적으로 사용되며, 이는 좌골 신경 절제와 관련된 것보다 이환율이 훨씬 낮습니다.

이 모델을 마우스에 사용하기 위해 조정했으며, 여기에서 시연할 것입니다. 이를 통해 연구자는 유전자 조작 마우스의 존재를 이용하고 골격근 질량 조절에 중요한 단백질이 없는 상태에서 근육 위축 과정을 연구하면서 동물의 이환율을 최소화할 수 있습니다. 먼저 발가락 꼬집기로 적절한 마취를 확인한 후 마우스의 체중을 기록하고, 촉진으로 좌골 노치를 확인한 후 거기에서 무릎까지 측면 허벅지와 엉덩이를 면도합니다.

다음으로, 알코올과 프로 요오드를 반복적으로 바르는 것으로 해당 부위를 청소하십시오. 멸균 장갑을 낀 상태에서 작동 또는 해부 현미경 아래에 마우스를 옆으로 눕힙니다. 촉진으로 좌골 노치를 식별합니다.

좌골 노치에서 무릎까지 측면 허벅지 피부를 절개합니다. 피부를 부드럽게 벌립니다. 이두박근(biceps femoris muscle)은 피부 바로 아래 허벅지 외측의 편평한 표재성 근육(gumitial muscle)을 가는 가위를 사용하여 확인합니다.

따라 대퇴이두근을 분리하고 스프링 견인기를 삽입합니다. 좌골 신경과 그 가지를 노출시키기 위해 대퇴 이두근 바로 아래에 있는 좌골 신경을 확인하십시오. 특징적인 반짝이는 흰색으로 식별할 수 있으며 직경은 약 0.8mm입니다.

그것은 좌골 노치에서 무릎까지 이어지며 슬와골 포사 수준에서 경골 비골 및 삼 신경으로 분기됩니다. 초미세 집게와 스프링 마이크로 해부 가위로 비골 및 살 신경 가지에서 경골을 부드럽게 분리합니다. 경골 신경은 가장 큰 가지이며 일반적으로 중앙에 있습니다.

좌골 신경과 그 가지를 부드럽게 다루는 것이 이 절차의 성공에 필수적입니다. 염 신경 가지와 회음부 신경 가지가 손상되거나 늘어나지 않도록 주의하십시오. 이 가지가 손상되거나 늘어나면 목표물도 깨끗해집니다.

매우 정밀한 겸자를 가진 외부 adventitial 층에 다만 신경을 붙들고 신경을 느슨하게 유지하는 것은 2 4 주에 있는 예상되는 완전한 reation와 더불어, 15 초 동안 매우 정밀한 겸자로 경골 신경을 완전한 denervation를 위한 경골 신경을 분쇄할 것입니다 일시적인 denervation를 위한 신경 분쇄 및 견인 상해를 위한 제거. 마이크로 해부 가위로 경골 신경을 가능한 한 원위부로 절단합니다. 완전한 탈신경이 필요한 경우 슬와낭 혈관을 조심스럽게 피하십시오.

10T 나일론으로 이두박근 대퇴근의 전방 표면으로 전이된 경골 신경의 끝을 봉합하고 위장 및 가자미근의 비정상 재발을 방지하기 위해 5개의 T Vicryl로 대퇴이두근을 근사화합니다. 탈신경이 완료되면 5개의 Vicryl 봉합사로 피부를 닫습니다. 준비가 되면 흡입 마취제를 끄되 산소의 흐름을 유지하십시오.

진통제를 단독으로 투여한 후, 침구가 없는 따뜻하고 깨끗한 케이지에 쥐를 수용합니다. 보행할 때까지 마우스를 직접 관찰하십시오. 완전히 복구되면 마우스를 충분한 부드러운 침구가 있는 깨끗하고 단단한 바닥 케이지로 옮깁니다.

수술 중인 팔다리와 발을 매일 검사하여 욕창성 발뒤꿈치 궤양이 발생하거나 씹는 등의 징후가 있는지 검사하면 국소 항생제 또는 오딘과 같은 소독제로 경미한 문제를 관리할 수 있습니다. 동물의 안락사를 요구하는 종말점 지표는 체중 감소, 자기 관리 부족의 증거 및 구부정한 자세입니다. 또한, 1-2주간의 상처 치료로 치유되지 않는 상처 파열 또는 궤양이 있는 동물도 희생해야 합니다.

또한, 과도한 통증을 느끼는 동물은 수술 후 시점에서 분석을 위해 원하는 조직을 채취합니다. 안락사 후, 수술 및 반대쪽 대조 다리의 내측을 면도하고 해부 현미경으로 알코올로 세척한 다음 메스로 발목에서 무릎까지, 수술 사지의 발목 둘레를 둘레로 절개합니다. 그런 다음 근육에서 피부를 부드럽게 당겨 허벅지 쪽으로 근위시킵니다.

다리의 모든 근육을 노출시키려면 다리 뒤쪽에서 무릎에서 발목까지 이어지는 종아리 근육인 위근육을 확인하십시오. 다음으로, 무릎의 내측에서 위근에 근접한 대퇴 이두근의 원위 삽입을 찾습니다. 원위 삽입 부위에서 대퇴 이두박근은 얇고 막처럼 보이며 가위와 뭉툭한 끝 절개를 사용하여 위장의 가장 근위부 부분을 덮습니다.

대퇴이두근의 원위 삽입을 위장 근육에서 부드럽게 분리합니다. 종골에 원위 삽입을 추가하면 위장 근육이 아킬레스 건으로 가늘어집니다. 하얗고 삐죽삐죽 삐

집게로 아킬레스건을 잡습니다. 위 근육을 잡거나 짓누르지 않도록 주의하고 종골 삽입부에서 아킬레스건을 분리하지 않도록 주의합니다. 힘줄을 잡고 있는 가위를 사용하여 매우 부드러운 견인을 사용하여 원위 삽입부에서 무릎의 원점을 향해 더 깊은 빨간색 가자미에서 창백한 빨간색 위근을 부드럽게 들어 올립니다.

이 과정을 용이하게 하기 위해, 위장의 기원을 내측 및 외측 대퇴골 과두(medial and lateral femur condyles)와 분리하여 다리에서 위장을 해부합니다. 가위를 사용합니다. 근육이 부수지 않도록 주의하세요.

가자미줄은 이제 위장(gastros)의 시야 바로 아래에서 명확하게 볼 수 있습니다. 아킬레스건에 삽입된 수스를 종아리 뒤쪽의 원점까지 들어 올립니다. 제거한 후에는 정밀 저울에서 근육의 무게를 따로 잰다.

다음으로, 근육을 수직으로 나누어 절반은 급속 냉동 및 액체 질소를 위해, 절반은 조직학을 위해 나눕니다. 마지막으로, 대조군 위근과 가자미근을 수확하기 위해 등급이 지정되지 않은 대조군 쪽에서 이러한 절차를 반복합니다. 위근육은 1주, 2주 또는 4주에 탈신경화된 뒷다리와 반대쪽 대조군 뒷다리에서 채취하여 비율로 표현했습니다.

탈신경은 시간이 지남에 따라 근육량의 점진적인 감소를 유도했습니다. myo 섬유의 단면적은 여기에서 볼 수 있듯이 면역 염색 후 측정되었습니다. 빠른 트위치 유형 2 섬유는 갈색으로 얼룩지고 느린 트 위치 유형 1 섬유, 얼룩 흰색 유형 2는 빠릅니다.

트위치 섬유는 탈신경화된 근육의 단면적이 점진적으로 감소하는 것을 보여주었습니다. 4주 이상이 비디오를 시청한 후 마우스에서 경골 신경 절개를 수행할 수 있습니다. 이는 탈신경작용으로 인한 골격근 위축에 대한 재현 가능하고 견고하며 잘 검증된 모델을 제공합니다.