Name: 경골 신경 절개 - 마우스의 탈 신경에 의한 골격근의 위축에 대한 표준 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-03T19:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 50 s
Description: 학습하세요 마우스 경골 신경 절개를 통한 골격근 위축 연구 방법을. C57Black6 마우스에서 신경 손상 후 근육량 변화를 관찰하고 재현 가능한 실험 모델을 구축하는 기술을 습득하세요.

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이 작품은 CIHR 신경 근육 학 연구 협력 (-; JAEB에 90959 JNM)에서 교부금에 의해 지원되었다.

이전에이 모델을 사용하여, 연구자들은 몸을 관장하는 교육 기관의 동물 사용으로 수술 프로토콜에 대한 승인을받은이 있어야합니다. 모델은 연구 윤리위원회, 해밀턴 건강 과학 회사, McMaster 대학 (AUP # 10-04-24) 승인 및 동물 관리에 캐나다위원회의 권고에 따라 엄격 수행됩니다. 1. 마우스 준비 <ol><li> 마우스를 무게. 5 isoflurane을 % 또는 2 % 할로 탄으로 마취를 유도. 외과 의사를 보호하기 위해 마취의 청소 적절한 사용 회로 확인해야합니다. 2 ~ 3 분 후에는 동물의 호흡 속도가 느려집니다. 깜박 반사가없는 확인하고 수술 마취 (마우스에 의한 응답의 ie) 확인 발에서 인터 공백을 꼬집어. 수술 중 각막의 건조를 방지하기 위해 눈 안과 윤활제를 적용합니다. </li><li> 좌골의 측면 허벅지와 엉덩이를 면도무릎 노치와 proviodine으로 소독. 면도는 수술 부위의 적절한 시각화를 보장하기 위해 신경 박리와 절개의 간섭을 최소화하기 위해 절개 모발의 사이트에 무료로 유지됩니다. 우수하고 대퇴골 후방에있는 좌골 노치, 촉진하여 식별 할 수 있습니다. </li></ol> 2. 수술 절차 <ol><li> 2 % (할로 1 %)로 흡입 isoflurane을을 줄이고 운영 또는 해부 현미경 아래에서 옆으로 (위로 향하게 수술을위한면)에 마우스를 놓습니다. 3.5X 배율 성인 (20 ~ 25 g) 제품 마우스 만족하기 때문에 다른 방법으로 수술은 외과 루페을 수행 할 수 있습니다. </li><li> 멸균 장갑을 걸칠. 촉진하여 좌골 노치를 식별합니다. 좌골 노치에서 무릎 (약 1cm)의 측면 허벅지 메스, 절개 피부에 사용. </li><li> 부드럽게 피부를 확산. 대퇴 이두근 근육을 식별, 어느 측면 허벅지의 평평한 표면 근육이다바로 피부 아래에. 미세 가위를 사용하여, 근육 섬유를 따라 대퇴 이두근 근육을 분리하고 좌골 신경과 그 분지를 노출 스프링 견인기로 열기십시오. </li><li> 대퇴 이두근 근육에 즉시 깊은 좌골 신경을 식별합니다. 그것은 그것의 특성 빛나는 화이트 색상으로 식별 직경 약 0.8 mm입니다 수 있습니다. 그것은 오금의 수준에서, 경골 비골 및 비복 신경에 분기, 좌골 노치에서 무릎 실행합니다. </li><li> 부드럽게 미세 집게 봄 microdissecting 가위로 비골과 비복 신경 가지에서 경골을 분리합니다. 경골 신경 최대 규모의 지점이며 일반적으로 중앙이다. 그것은 가지를 분리하는 동안 신경을 분쇄하지 않는 것이 중요합니다. 미세 집게로 그냥 외부 adventicial 레이어에 신경을 들고, 및 신경 이완을 (가르쳤다) 유지, 신경 호감 및 견인 부상을 방지합니다. </li><li> 완전하고 지속적인 denervati에 대한에 신중 오금 혈관을 피하기 위해, 같은 원심 가능한 가위 microdissecting과 경골 신경을 잘라. 또는 2-4 주간 예상 완료 reinnervation에 일시적으로 탈 신경에 대해, 경골 신경이 단순히 절단하여 15 초 대신에 대한 미세 집게로 분쇄 할 수 있습니다. (말초 신경은 다음과 같은 부상을 자라게 및 대상 근육을 reinnervate 않습니다.) </li><li> 완전한 탈 신경이 필요한 경우, 비복근의 재 신경 분포 탈선을 방지하기 위해 5-0 Vicryl로 10-0 나일론을 다시 대략 대퇴 이두근과 대퇴 이두근 근육의 앞쪽 표면에 절단되어 경골 신경의 끝을 봉합하고 가자미근의 근육. </li><li> 실행 5-0 Vicryl 봉합사로 피부를 닫습니다. </li></ol> 3. 수술 케어 게시 <ol><li> 흡입 마취제를 끄고 있지만 산소의 흐름을 유지한다. 피하 진통 buprinorphine (또는 대체) 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 더 깨끗하고 케이지에 마우스를 전송하지침구 마취에서 깨어있는 동안. ambulating까지 케이지 내에서 직접 관찰 아래 온난화 담요에 보관하십시오. </li><li> 충분한 부드러운 침구 연약한 바닥 케이지 전송 및 집 (하지 선). </li><li> 욕창 발 뒤꿈치 궤양이나 씹는 증거의 개발을위한 수술 상처 다리의 조건을 매일 수술 다리를 검사합니다. 사소한 문제는 국소 항생제 나 proviodine 등의 방부제로 관리 할 수​​ 있습니다. 동물의 안락사를 요구하는 엔드 포인트 지표는 체중 감소, 가난한자가 치료의 증거 (뻗치고 모피) 및 구부리고 자세입니다. 또한, 중상 중단 또는 국소 항생제로 1-2주에서 치료 또는 고통을 가지고 나타나지 않는 궤양 동물 희생해야한다. </li></ol> 4. Denervated 비복근과 가자미근 근육 수확 <ol><li> 원하는 수술 시점에서, CO 2 과다와 마우스와 희생의 무게. </li><li> 모두의 내측 측면을 면도수술 및 반대측 제어 다리와 알코올로 청소하십시오. 운영 또는 해부 현미경 마우스를 놓고, 또는 양자 택일 확대를위한 수술보기 루페를 사용합니다. </li><li> 수술 사지에 무릎 발목에서 메스와 원주 발목 주위와 내측 종아리 피부를 절개. 부드럽게 근육을 끄고 근위부 허벅지를 향해 집게로 피부를 잡아 당깁니다. 이 다리의 모든 근육을 노출합니다. 무릎에서 다리의 후방 측면의 발목을 실행하고 피부 바로 아래 자리 잡고 종아리 근육 인 비복근을 확인합니다. 무릎의 내측 측면의 비복근 근육 근위 대퇴 이두근 근육의 말초 삽입을 확인합니다. 의 말초 삽입시 대퇴 이두근 얇고 엷은 껍질 나타나는 비복근의 가장 근위부 위에 놓. 가위 무딘 끝 절개를 사용하여 부드럽게 가스 대퇴 이두근의 원심 삽입을 분리trocnemius 근육. </li><li> calcaneous으로는 말초 삽입시, 비복근 근육이 아킬레스 건에 테이퍼. 흰색과 힘찬 나타나는 아킬레스 건을 확인합니다. 보류 또는 비복근 근육을 분쇄 않도록주의하면서, 집게와 아킬레스 건을 잡고 가위를 사용하여 종골 삽입에서 아킬레스 건을 나눕니다. </li><li> 아직도 힘줄을 잡고 조심스럽게 무릎에서 그 기원으로 말초 삽입 (가자미근이 별도로 수확 할 수있다)에서, 깊은 가자미근 (깊은 적색) 떨어져 비복근 (엷은 홍색)를 들어 올립니다. </li><li> 가위를 사용하여 내측 및 외측 대퇴골 chondyles에서 비복근의 출처를 나누어 다리 해제 비복근을 해부하다. 근육이 매우 부드러운 견인이 프로세스를 용이하게합니다. 근육을 분쇄하지 않도록주의해야합니다. </li><li> 가자미근 지금 바로 비복근의 사이트에서 노골적으로 표시됩니다. 에 아킬레스의 힘줄의 삽입에서 가자미근을 들어 올려 그 또는후방 종아리에이긴. 가자미근이 실수 비복근 제기되는 경우, 조심스럽게 수확 한 시료에서 분리합니다. 비복근 (밝은 빨강)과 가자미근 (진한 빨강)의 색깔의 차이로 인해 수확 시편 쉽게 식별 남아 있습니다. </li><li> 정밀 저울에 별도로 근육 무게. </li><li> (이후 단백질 및 / 또는 RNA 추출을위한) 액체 질소 스냅 냉동, 수직 절반 근육을 분리하고, 조직학 (즉, 형태 학적 평가, immunohistology)에 대한 반 이소 펜탄 10 포르말린 %, 또는 냉동 고정에 하나 고정은 액체 질소로 냉각 원하는대로. </li><li> 제어 비복근과 가자미근의 근육을 수확하는 컨트롤 위의 단계 4.3, 유엔 운영 측면에서 반복합니다. </li></ol>

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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

탈 신경에 의한 근육 위축의 경골 신경 절개 모델 쥐에서 일반적으로 채택하고 잘 검증 된 모델입니다. 우리는 조사가 유전자 조작 생쥐의 존재를 활용하고 근육 질량 7,8의 규제에 중요한 단백질의 부재에서 생체 내에서 근육 위축의 과정을 연구 할 수 있도록 마우스의 사용이 모델을 채택했다. 비복근과 가자미근의 근육이 모델에 denervated 모두, 따라서 이후의 분자 분석을위한 우수한 품질의 mRNA와 단백질을 제공, 쉽고 빠르게 최소한의 처리를 해부 할 수 있습니다. 마찬가지로, 때문에 근육의 크기, 그들은 수반 조직 학적 및 형태 학적 분석에 같은 동물의 조직을 제공, 분할 할 수 있습니다. 뒷다리 기능 평가가 필요한 경우, 트랙 분석을 도보 순차적으로 수행 할 수 있습니다. 발은 잉크에 담근되고 마우스는 종이와 인클로저를 걸어된다하단. 지문의 특징을 신뢰성있게 측정 및 면적 특성은 기능적 근육 그룹에게 13,14을 반영 있기 때문에, 신경 근육 학 장애 및 보행 손상...

외상성 말초 신경 손상, 질병이나 약물의 개입에 의한 골격근 탈 신경, 근육의 자발적 수축 기능의 즉각적인 손실됩니다. 근육 병용 위축으로 시작하고 적시에 양질의 reinnervation 1,2가 발생했을 경우이 위축 가역적이다. reinnervation의 부재에서, 근섬유의 위축이 진행하고, 근육에 돌이킬 수없는 생물학적 변화는 근육의 섬유화 및 근섬유의 죽음으로 발생합니다. 여기에서 우리는 쥐의 경골 신경 절개 모형, 탈 신경 유도 된 근육의 위축과 섬유화의 모델을 보여줍니다. 이 모델은 비복근과 가자미근의 근육 생체 내에서 근육 위축의 기초, 생리 세포 및 분자 생물학적 메커니즘을 연구하는 과학자들 수 있습니다. 역사적 쥐에서 주로 사용하지만, 녹아웃 특히 유전자 변형 마우스 라인이 모델의 최근 응용 프로그램은 연구자가 자신의 역할을 평가할 수 있습니다생체 내 유도, 개발 및 유지 보수, 또는 양자 택일의 해상도, 근육 위축 및 섬유화에 대한 관심의 특정 단백질 (들). 경골 신경 쥐 뒷다리의 혼합 모터 감각 말초 신경이며, 좌골 신경의 세 단자 가지 중 하나입니다. 경골 신경의 절개 비복근, 가자미근과 plantaris 근육 (및 후방 경골근, 굴근 digitorum의 롱 및 굴근 hallicus의 롱 등 다리의 세 개의 작은 깊은 굴곡 근육) denervates, 그리고 쥐 3,4에서 잘 표준화되고 검증 된 모델입니다 . 비복근과 가자미근의 근육은 쉽게 경골 신경 절개, 고정 공부의 목적을 위해 근육 RNA와 단백질의 추출 냉동 근육 조직학과 근육 섬유 morphometrics, 또는 플래시의 평가를위한 처리, 예를 들면 게시, 연속 시간 지점에서 해부 할 수 있습니다 근육 위축을 조절하는 세포 신호 전달 네트워크. GAstrocnemius 근육이 혼합 된 섬유 형 근육 (유형 I 및 유형 II, 주로 유형 II 있지만)과 가자미근 근육함으로써 평가 5,6에 대한 빠르고 느린 모두 트 근육을 제공하는 타입 I 섬유의 큰 비율로 구성되어 있습니다. 경골 신경 절개 모델 (개월 주) 단기 (일) 7 및 장기 모두 4.8에서 탈 신경에 의한 근육 위축의 과정을 공부 적합합니다. 좌골 신경 절개 모델 (일반적으로 설치류에 사용되는 탈 신경에 의한 근육 위축의 두 번째 모델)과 대조적으로, 경골 신경 절개가 더 매력적인 모델을 만들고, 동물 덜 사망률을 유도합니다. 경골 신경의 절개가 좌골 신경의 비골과 비복 신경 분기는 그대로 유지하는 반면 좌골 신경의 절개 따라서 보존, 2 ambulate하는 동물의 능력을 저해, 다리 (무릎 아래)과 다리의 모든 근육을 denervates그들의 목표 근육과 감각 지역. 마우스 발바닥 플렉스 할 수 없습니다 또는 발 반전이지만, 쉽게 ambulate 할 수 있으며 무게는이를 크게 모델의 사망률을 감소, 양쪽 뒷다리에 동등하게 부담. 걷는 패턴을 평가하는 보행 분석 연구는 경골과 좌골 신경 손상에 따라 쥐에서 수행 공간과 무게를 베어링 더 경골 부상 9,10으로 유지되고 있음을 입증.되었습니다 연구 설계 3 필요한 경우, 또한, 경골 신경 절개 모델에서, 비골 신경은 나중에 지점에서 동원 할 수 있으며, 지연 reinnervation의 소스로 전송. 반면, 좌골 신경의 절개 모델에서 지연 reinnervation은 매우 크게 모델의 기술적 어려움을 증가하고 숙련 된 외과 의사에 그것의 사용을 제한, 좌골 신경 적자에 신경 이식의 사용을 필요로한다. 동안 경골 신경 절개 모델 연구이 innervates 경골 신경 및 종아리 근육을 모두 동물 수술 불임 수술 기법 연산자의 친숙 함을 equires 외과하지 않거나 매우 동물의 수술 경험이 개인이 쉽게이 모델을 마스터 할 수 있도록, 조작 쉽게 접근하고 식별 할 수 .

<table><tbody><tr><td colspan="4">Reagents and Materials</td></tr><tr><td>10-0 Nylon suture</td><td>Ethicon</td><td>2850G</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Vicryl suture</td><td>Ethicon</td><td>J553G</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Equipment</td></tr><tr><td>spring microdissecting scissors</td><td>Fine Surgical Tools</td><td>15021-15</td><td></td></tr><tr><td>Ultra fine popps</td><td>Fine Surgical 도구</td><td>11370-40</td><td></td></tr><tr><td>비잠금 마이크로 니들 홀더(드라이버)</td><td>미세 수술 도구</td><td>12076-12</td><td></td></tr><tr><td>스프링 견인</td>기 <td>미세 수술 도구</td><td>17000-02</td><td></td></tr></tbody></table>

경골 신경 절개 - 마우스의 탈 신경에 의한 골격근의 위축에 대한 표준 모델

Tibial Nerve Transection - A Standardized Model for Denervation-induced Skeletal Muscle Atrophy in Mice

경골 신경 절개 모델은 설치류에서 탈 신경에 의한 근육의 위축, 잘 용납 검증 및 재현성 모델입니다. 원래 개발 및 큰 크기로 인해 쥐에서 광범위하게 사용되지만, 생쥐의 경골 신경은 좌골 신경의 비골과 비복 신경 가지가 손상함으로써 유지 떠나는 쉽게 호감이나 절개하거나 조작 할 수있는 충분히 큰 그들의 목표 근육. 따라서,이 모델은 좌골 신경의 절개 모델보다 이환율과 보행의 장애를 유도하는 장점을 제공하고 또한 연구자들은 유전자 조작 생쥐의 근육 위축의 과정을 조절, 생리 세포 및 분자 생물학적 메커니즘을 연구 할 수 있습니다. 경골 신경 비복근, 가자미근과 plantaris 근육을 공급, 그래서 그 절개 빠른 트 유형 II 섬유 및 / 또는 속도가 느린 트 타입으로 구성 denervated 골격 근육의 연구를 허용 I섬유. 여기에서 우리는 C57Black6 마우스의 경골 신경 절개 모델을 보여줍니다. 우리는 파라핀 조직 학적 부분에 근육 무게와 섬유 유형별 단면적을 측정하여 1, 2에서 대표적인 근육으로 비복근 근육의 위축을 평가하고, 4 주 후 탈 신경은 빠른 트 마이 오신에 대한 면역 염색.

<html> 경골 신경 절개는 비복근, 가자미근과 종아리의 plantaris 근육을 denervates. 여기에 우리가 대표하는 근육으로, 비복근 근육 위축의 발전을 평가합니다. 비복근의 근육은 1, 2, 4 주 동안 denervated 2-3개월 이전 C57Black 6 마우스 (잭슨 연구소)에서 수확했다. 근육의 무게는 점차적으로 시간이 지남에 따라 유형 II 빠른 트 위치 근육 섬유 (그림 2)의 단면적 않습니다 (그림 1) 감소. 비복근은 혼합 섬유 형 근육 (I 및 유형 II)이지만, 탈 신경은 내가 II 섬유 11을 입력합니다 입력에서 섬유 형 스위치를 유도하고, 결과 유형의 적절한 수는 I 섬유는 측정 가능하고하지 않을 수 있습니다 강력한 통계 분석. 50657fig1.jpg &quot;/&gt; <stron...

경골 신경 절개 모델은 골격 근육 위축, 잘 용납 검증 및 재현성 모델입니다. 모델 수술 프로토콜은 C57Black6 마우스에 설명 설명된다.

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. ...

이 동영상의 전반적인 목표는 마우스의 골격근 위축을 유도하는 경골신경 절단 모델을 시연하는 것입니다. 이는 좌골신경과 그 세 가지 분지인 경골신경, 비복신경 및 비골신경을 분리함으로써 이루어집니다. 분리가 완료되면 경골신경을 절단합니다.신경 절단 후 상처 부위를 봉합하고 동물의 상태를 면밀히 관찰합니다. 최종적으로, 신경 절단 후 근육량이 점진적으로 감소하는 샘플을 확보합니다. 골격근 위축을 유도하는 경골 신경 절단 모델은 쥐에서 널리 검증되어 흔히 사용되는 모델이며, 좌골 신경 절단과 관련된 모델보다 이환율이 훨씬 낮습니다.본 연구에서는 이 모델을 마우스에 적용하여 사용하였으며, 그 방법을 여기에서 설명하겠습니다. 이를 통해 연구자는 유전자 변형 마우스를 활용할 수 있으며, 동물에게 가해지는 질병 발생률을 최소화하면서 골격근량 조절에 중요한 단백질이 결핍된 상태에서 근위축 과정을 연구할 수 있습니다. 먼저, 발가락 꼬집기(toe pinch)를 통해 마취 상태가 적절한지 확인한 후 마우스의 체중을 측정하고, 촉진을 통해 좌골 절흔(sciatic notch)을 확인한 다음, 해당 부위부터 무릎까지의 외측 허벅지와 엉덩이 부위를 제모합니다.다음으로, 알코올과 포비돈 요오드를 반복적으로 도포하여 해당 부위를 세척합니다. 멸균 장갑을 착용한 상태에서 수술 현미경 또는 해부 현미경 아래에 마우스를 옆으로 눕혀 배치합니다. 촉진을 통해 좌골 절흔(sciatic notch)을 확인합니다.좌골 절흔에서 무릎까지 허벅지 외측의 피부를 절개합니다. 피부를 조심스럽게 벌립니다. 미세 가위를 사용하여 피부 바로 아래 허벅지 외측에 위치한 평평한 표층 근육인 대퇴이두근을 확인합니다.대퇴이두근을 근섬유 방향을 따라 절개하고 스프링 리트랙터를 삽입합니다. 좌골신경과 그 분지들을 노출시키기 위해, 대퇴이두근 바로 아래에서 좌골신경을 찾습니다. 좌골신경은 특유의 빛나는 흰색으로 식별할 수 있으며, 직경은 약 0.8 millimeters입니다.이 신경은 좌골절흔에서 무릎까지 뻗어 있으며, 오금 부위에서 경골신경, 비골신경 및 천골신경으로 분지됩니다. 초미세 핀셋과 스프링 마이크로 해부 가위를 사용하여 경골신경을 비골신경 및 천골신경 분지로부터 조심스럽게 분리하십시오. 경골신경은 가장 큰 분지이며 보통 중앙에 위치합니다.이 절차의 성공을 위해서는 좌골신경과 그 분지들을 조심스럽게 다루는 것이 필수적입니다. 외측족저신경 및 회음신경 분지가 손상되거나 늘어나지 않도록 주의하십시오. 이 분지들이 손상되거나 늘어나면 해당 표적 기관들 또한 탈신경될 것입니다.초미세 포셉으로 신경의 가장 바깥쪽 외막층만을 잡고 신경을 느슨하게 유지하면, 일시적 탈신경화 시 신경 압착 및 견인 손상을 방지할 수 있습니다. 2~4주 내에 완전한 회복이 예상되므로, 완전하고 지속적인 탈신경화를 위해 초미세 포셉으로 경골 신경을 15초 동안 압착합니다. 미세 절개 가위로 경골 신경을 가능한 한 원위부에서 절단합니다. 이때 완전한 탈신경화가 필요한 경우 오금혈관이 손상되지 않도록 주의하십시오.절단된 경골 신경의 끝단을 10-0 nylon으로 대퇴이두근의 전면에 봉합하고, 비복근과 가자미근의 비정상적인 재지배를 방지하기 위해 대퇴이두근을 5-0 Vicryl로 다시 근접 봉합합니다. 탈신경 과정이 완료되면, 연속 5-0 Vicryl 봉합사로 피부를 봉합합니다. 준비가 되면 흡입 마취제를 차단하되, 산소 공급은 유지합니다.진통제를 단독 투여한 후, 마우스를 베딩이 없는 따뜻하고 깨끗한 케이지에 수용합니다. 마우스가 스스로 움직일 수 있을 때까지 직접 관찰하며 유지합니다. 완전히 회복되면, 부드러운 베딩이 충분히 깔린 깨끗한 바닥면이 평평한 케이지로 마우스를 옮깁니다.수술한 사지와 발을 매일 검사하여 압박성 뒤꿈치 궤양의 발생이나 씹은 흔적이 있는지 확인하십시오. 사소한 문제는 포비돈과 같은 국소 항생제나 소독제로 관리할 수 있습니다. 안락사가 필요한 종료 지점 지표는 체중 감소, 자기 관리 부족의 증거 및 구부정한 자세입니다. 또한, 상처 파열이나 궤양이 발생하여 1~2주간의 상처 치료 후에도 치유되지 않는 동물 역시 희생시켜야 합니다.또한, 과도한 통증을 느끼는 동물은 안락사 시킵니다. 수술 후 시점에서 분석을 위해 필요한 조직을 수집합니다. 안락사 후, 수술측과 반대측 대조군 다리 모두의 내측을 면도하고 알코올로 세척합니다. 해부 현미경 하에서, 수술측 다리의 발목부터 무릎까지, 그리고 발목 주변을 원형으로 메스로 절개하여 종아리 내측 피부를 엽니다. 이어서, 피부를 근육에서 조심스럽게 분리하여 허벅지 방향(근위부)으로 당겨 벗겨냅니다.다리의 모든 근육을 노출시키려면, 무릎에서 발목까지 다리의 후면에 위치한 종아리 근육인 gastro muscle을 확인하십시오. 다음으로, gastro muscle의 근위측이자 무릎 내측에 위치한 biceps femoris muscle의 원위부 정지점을 찾으십시오. biceps femoris는 원위부 정지점에서 얇은 막 형태로 나타나며 가위와 둔단 박리를 통해 gastro muscle의 가장 근위부 부분을 덮고 있는 것을 확인할 수 있습니다.대퇴이두근의 원위부 부착부를 가스트로근(gastros muscle)으로부터 조심스럽게 분리합니다. 대퇴이두근의 원위부 부착부는 종골에 연결되어 있으며, 가스트로근은 아킬레스건으로 가늘어집니다. 하얗고 힘줄 모양으로 보이는 아킬레스건을 확인합니다.포셉으로 아킬레스건을 잡습니다. 비복근을 잡거나 압착하지 않도록 주의하며, 아킬레스건을 종골 부착 부위에서 분리합니다. 가위를 사용하여 건을 잡은 상태에서, 아주 부드럽게 견인하며 원위부 부착 부위부터 무릎의 기시부 방향으로 옅은 붉은색의 비복근을 더 짙은 붉은색의 가자미근으로부터 조심스럽게 들어 올려 분리합니다.과정을 용이하게 하기 위해, 가위로 가스트로크네미우스의 기시부를 내측 및 외측 대퇴골 과에서 분리하여 다리에서 가스트로크네미우스를 절제하십시오. 이때 근육이 짓눌리지 않도록 주의하십시오.이제 비복근 바로 아래에서 가자미근이 뚜렷하게 보일 것입니다. 가자미근을 아킬레스건 부착부에서 종아리 뒤쪽 기시부까지 들어 올리십시오. 적출 후, 정밀 저울을 사용하여 각 근육의 무게를 개별적으로 측정하십시오.다음으로, 근육을 수직으로 이분하여 절반은 급속 냉동 및 액체 질소 보관용으로, 나머지 절반은 조직학 분석용으로 나눕니다. 마지막으로, 이러한 절차를 대조군인 반대편 측에 동일하게 반복하여 대조군 비복근과 가재미근을 채취합니다. 비복근은 탈신경된 뒷다리와 반대편 대조군 뒷다리에서 1주, 2주 또는 4주 후에 채취하였으며, 그 결과는 비율로 표시하였습니다.신경차단은 시간이 경과함에 따라 점진적인 근육량 감소를 유도했습니다. 여기에서 보이는 것과 같이 면역 염색 후 근섬유의 단면적을 측정했습니다. 속근 제2형 섬유는 갈색으로 염색되며, 지근 제1형 섬유는 흰색으로 염색됩니다.탈신경된 근육에서 수축 섬유의 단면적이 점진적으로 감소하는 것이 확인되었습니다. 4주에 걸쳐. 이 비디오를 시청한 후에는 생쥐의 경골 신경 절단술을 수행할 수 있어야 합니다. 이는 탈신경으로 유도된 골격근 위축의 재현 가능하고 강력하며 충분히 검증된 모델을 제공합니다.

tibial-nerve-transection-standardized-model-for-denervation-induced

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

용서해주 신경 부상 동물 모델은 나머지 sural 신경은 그대로두고, tibial 및 일반 peroneal 신경 가지를 lesioning하여 좌골 신경의 부분 denervation 다음과 주변 neuropathic 고통의 마우스 모델로 여기에 설명되어 있습니다. 기계 allodynia 인한 행동 수정은 폰 프라이 필라멘트에 의해 계량입니다.

마우스에서 유도된 기계 Allodynia의 겪었던 신경 상해 (스니) 모델

출처: Brakkee, E. M., et al. Surgery and Behavioral Testing in the Tibial Neuroma Transposition Model in Rats. J. Vis. 특급 (2023). 이 비디오는 쥐 경골 신경종 전위(TNT) 모델을 생성하는 절차를 보여줍니다. 마취된 쥐의 뒷다리에 있는 경골 신경을 노출시킨 후 신경을 절제합니다. 다음으로, 피하 터널을 만들고 절단된 신경을 터널에 꿰매어 제자리에 봉합합니다. 재신경 형성을 위한 표적이 없는 경우, 절단된 신경에서 무질서하게 형성된 축삭 파생물이 신경종을 형성하며, 이는 통각(유해) 수용기를 자극하여 신경병성 통증을 유발합니다.

경골 신경종 전위의 쥐 모델 생성

마우스의 안면 신경을 절개하거나 으깬 축삭 절개술을 수행하는 방법을 자세히 설명하는 수술 프로토콜을 제시합니다. 안면 신경 축삭 절개술은 신경 손상에 대한 생리적 반응을 연구하고 치료 기술을 테스트하는 데 사용할 수 있습니다.

마우스의 얼굴 신경 Axotomy : 부상으로 운동 신경 응답을 연구하는 모델

모터 회복의 평가는 실험적인 말초 신경 연구에서 벤치마크 결과 측정으로 남아 있습니다. 쥐의 티볼리스 전방 근육의 동면 파탄력 측정은 경련성 신경 결함의 재구성 후 기능적 결과를 평가하는 귀중한 도구입니다. 방법과 뉘앙스는이 문서에 자세히 설명되어 있습니다.

쥐의 티비아리스 전방 근육의 최대 동면 성 파타닉 힘 측정

무릎 근간근의 정량화는 노화, 질병, 부상 및 재활에 대한 기능적 적응을 이해하는 것이 필수적입니다. 생체 무릎 확장 이소메트릭 피크 파타닉 토크에서 반복적으로 측정하는 새로운 방법을 제시합니다.

마우스에서 무릎 엑스텐서 근육 기능의 생체 측정

수정된 수술은 생쥐 또는 쥐 보존 신경 손상 모델에 대한 단순화된 방법으로, 일반 비골 신경과 천성 신경을 모두 손상시키기 위해 한 번의 결찰과 한 번의 절개만으로 됩니다.

마우스의 신경병증성 통증에 대한 수정된 보존 신경 손상 수술 모델

이 프로토콜은 경골 신경의 병변과 근위 신경 말단이 피하 경골 전치 또는 측면 위치로 전이되는 것을 수반하는 경골 신경종 전이 모델을 설명합니다. 신경종 통증 및 족저통각과민의 행동 검사는 Von Frey 모노필라멘트를 사용하여 정량화됩니다.

쥐의 경골 신경종 전위 모델의 수술 및 행동 테스트

이 프로토콜은 쥐에서 무릎 아래 절단을 수행하는 방법과 즉시 표적 근육 재신경 운동(iTMR)을 수행하여 절단 관련 통증 치료 및 예방 전략을 조사하고 절단과 관련된 통증 메커니즘을 더 잘 이해하기 위한 방법을 시연합니다.

쥐 무릎 아래 절단 모델 및 즉각적인 표적 근육 재신경

이 프로토콜은 인간 신경종 통증을 모방하고 외과적 치료를 평가하기 위해 감각 신경을 사용하는 재현 가능한 쥐 모델을 제시하여 중개 신경종 연구를 위한 귀중한 도구를 제공합니다.

복재 신경을 통한 표적 근육 재신경 분포를 사용하여 신경종 통증 치료 옵션을 연구하기 위한 새로운 외과적 설치류 모델

절연 골격근의 묘 - 기계 분석

학습하세요 마우스 경골 신경 절개를 통한 골격근 위축 연구 방법을. C57Black6 마우스에서 신경 손상 후 근육량 변화를 관찰하고 재현 가능한 실험 모델을 구축하는 기술을 습득하세요.

경골 신경 절개 - 마우스의 탈 신경에 의한 골격근의 위축에 대한 표준 모델

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